酸枣仁提取物对睡眠剥夺大鼠免疫功能的影响

目的:探讨酸枣仁提取物对睡眠剥夺大鼠免疫功能的影响。方法:30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、实验组,每组各10只。除对照组外,其余两组采用多平台水环境法建立睡眠剥夺动物模型,建模同时实验组给予酸枣仁提取物,模型组与对照组给予等量生理盐水。计算大鼠脾脏指数、胸腺指数,采用MMT法评价脾淋巴细胞活性和NK细胞活性。通过旷场实验测定大鼠行为学。测定外周血CD4~+、CD8~+ T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+。采用ELISA测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-2、IL-6水平。结果:与模型组相比,实验组大鼠旷场实验水平和垂直得分、脾脏指数、胸腺指数、T淋巴细胞活性显著升高;CD4~+T淋巴细胞比例和CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值显著升高,CD8~+T淋巴细胞比例显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6水平均显著下降(P0.05)。结论:酸枣仁提取物能够缓解睡眠剥夺引起的焦虑行为,通过调节T淋巴细胞亚群平衡,抑制血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6炎症因子释放,改善免疫功能。     

程氏蠲痹汤加减方降低佐剂性关节炎大鼠外周血T细胞cAMP水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值

目的探讨程氏蠲痹汤加减方(CJBD)对佐剂性关节炎(AA)大鼠T淋巴细胞中的环腺苷酸(c AMP)水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值的影响。方法将成年雄性SD大鼠分为正常对照组、AA组、CJBD组和雷公藤多苷片(TGT)组。用吹风冷水和Freund完全佐剂制备大鼠风寒湿痹AA模型,对照组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予对应药品,持续7 d。各组大鼠经眼眶取血,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选技术分选T淋巴细胞,应用c AMP检测试剂盒检测各组T淋巴细胞的c AMP水平,用流式细胞术检测各组大鼠外周血T细胞中的CD4~+和CD8~+T细胞数,计算CD4~+/CD8~+T细胞比值。结果与正常对照组比较,CJBD组大鼠T淋巴细胞的c AMP表达水平显著降低,TGT组的c AMP含量与正常对照组无显著性差异;CJBD组的CD4~+/CD8~+T细胞比值显著降低。结论 CJBD可降低AA大鼠T淋巴细胞c AMP的水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值。     

过表达IDO可增强大鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用

探讨过表达IDO的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)免疫抑制调节作用机制。通过慢病毒转染体系构建过表达IDO大鼠BMSC并加入基因开启剂。采用体外共培养方式共分12组,检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62、Treg、CD4、CD8表达;利用液相芯片检测IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的变化情况。结果显示各组与DC单独培养48h后,共培养组中过表达IDO-BMSC+DC培养组中DC表达CD40、CD86、CD80、MHCII、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的,而CD274的表达是升高的,说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用;各组与T细胞单独培养48h后,共培养组中过表达IDO-BMSC+T细胞培养组中T细胞中Treg数量是升高的,CD4+T细胞的变化无明显规律性,但CD8+T细胞是降低的,说明过表达IDO-BMSC可调节CD8+T细胞并可以促进Treg的表达;当将各组BMSC+DC+T细胞培养48h后,可见:共培养组中悬浮细胞表达CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的,而CD274是升高的,再次说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用,而Treg数量增加,CD4+T细胞的变化无明显规律性,但CD8+T细胞是降低的,再次说明IDO能调节CD8+T细胞并可促进Treg的表达;各组培养48h后的上清液进行液相芯片检测,可见IDO-BMSC+DC+T细胞培养组上清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18减低,IL-10、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达量升高。综上,过表达IDO的BMSC可以通过有效调节DC、T细胞水平及细胞因子分泌,从多免疫途径进行免疫抑制调节。     

CD161~+调节性T细胞降低风湿性心脏病大鼠瓣膜损伤的作用及机制

目的探讨CD161~+调节性T细胞(Treg)降低风湿性心脏病大鼠瓣膜损伤的作用及机制。方法流式细胞术分选CD161~-和CD161~+ Treg并进行培养, ELISA检测Treg培养上清液白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的含量; A组溶血性链球菌悬液与Freund完全佐剂混合后建立风湿性心脏病大鼠模型,分为对照组、 CD161~- Treg组、 CD161~+ Treg组。处理1周后,收集大鼠的心脏血和二尖瓣瓣膜。流式细胞术检测心脏血单个核细胞滤泡辅助性T(Tfh)细胞、 B细胞和浆细胞比例, HE染色检测瓣膜组织病理变化,免疫组织化学染色法检测瓣膜组织中B细胞和浆细胞数目, ELISA检测血清IL-21水平。结果 CD161~+ Treg分泌IL-10和TGF-β的能力显著高于CD161~-Treg。与注射CD161~- Treg的大鼠相比,注射CD161~+Treg能够显著降低瓣膜组织损伤,减少瓣膜组织B细胞和浆细胞的比例;且CD161~+Treg注射能够减少大鼠血液中Tfh细胞、 B细胞和浆细胞的比例,血清中IL-21含量降低。结论 CD161~+Treg通过抑制Tfh细胞和B细胞增殖分化,降低风湿性心脏病的瓣膜损伤。     

黄芩苷通过PI3K/Akt/mTOR通路参与子痫前期 大鼠免疫状态及炎症反应的调控及机制

目的：研究黄芩苷对子痫前期大鼠免疫状态及炎症反应的调控机制及PI3K/Akt/mTOR 信号通路的影响。 方法：雌性大鼠随机分为对照组、模型组和处理组。处理组和模型组大鼠妊娠13~21 d 时给予L- 精氨酸甲酯,治 疗组大鼠于妊娠17~21 d 时给予黄芩苷注射液,对照组和模型组大鼠具给予等量的生理盐水,3 组均持续给药至 妊娠21 d。妊娠21 d 时,采用电脑尾袖式血压计测定各组大鼠血压;采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清中 尿素氮（BUN）水平;测定大鼠血清中和胎盘中炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β 和肿瘤坏死因子-α（TNF-α） 水平;采用蛋白免疫印迹法测定大鼠胎盘组织中Akt 和mTOR 蛋白含量、尿蛋白水平和炎症介质NF-κB和IκB-α 蛋白表达水平;采用RT-qPCR 法测定大鼠胎盘组织中α7nAChR RNA表达水平;采用流式细胞仪测定各组大鼠全 血中T 淋巴细胞的比例。结果：模型组大鼠舒张压、收缩压、BUN和尿蛋白水平显著高于对照组,处理组舒张 压、收缩压、BUN和尿蛋白水平与模型组相比均显著降低;模型组大鼠IL-6、IL-1β 和TNF-α 水平显著高于对照 组,处理组IL-6、IL-1β 和TNF-α 水平与模型组相比均显著降低;模型组大鼠Akt 和mTOR 蛋白表达水平显著低 于对照组,处理组Akt 和mTOR 蛋白表达水平与模型组相比均显著升高;模型组大鼠NF-κB和IκB-α 蛋白表达水 平显著高于对照组,处理组NF-κB和IκB-α 蛋白表达水平与模型组相比均显著降低;模型组与对照组胎盘组织中 α7nAChR RNA表达水平相当,处理组大鼠胎盘组织中α7nAChR RNA表达水平显著高于模型组和对照组;模型 组大鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ 水平均显著高于对照组,CD8+ 水平显著低于对照组;处理组大鼠与模型组相比, CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ 水平均显著降低,CD8+ 水平显著升高。结论：黄芩苷可以通过促进PI3K/Akt/mTOR 信 号通路抑制机体炎症反应,改善机体免疫功能。     

卡介苗多糖核酸对哮喘大鼠淋巴液和血液CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的影响

目的:探讨卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对哮喘大鼠淋巴液和血液调节性T细胞数量及功能的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组、哮喘组和BCG-PSN组,分别收集不同时间点大鼠淋巴液和血液,采用流式细胞仪(FCM)检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测淋巴液和血浆白介素10(IL-10)和转录生长因子β1(TGF-β1)浓度。结果:各组在各时间点其淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率、IL-10水平均较血液明显升高。哮喘组大鼠淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率、IL-10、TGF-β1浓度均较对照组显著降低(P0.05)。BCG-PSN组淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和IL-10水平较哮喘组明显升高(P0.05),与对照组比较无显著性差异;而TGF-β水平在48小时较对照组和哮喘组明显升高(P0.05)。结论:哮喘大鼠淋巴液和血液存在明显CD4+CD25+Foxp3+Treg数量及功能不足。BCG-PSN可能通过增加哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量及其产生IL-10和TGF-β水平,增强免疫抑制效应,从而发挥抑制哮喘炎症的作用。     

松果菊苷通过调控JAK1/STAT3信号通路改善老年心肌梗死大鼠的免疫功能

目的探讨松果菊苷通过调控JAK1/STAT3信号通路改善老年心肌梗死大鼠免疫功能紊乱的机制。方法以SD大鼠为研究对象,分为假手术组(sham组)、心肌梗死组(MI组)、松果菊苷低剂量组(ECH-L组,25 mg/kg)和松果菊苷高剂量组(ECH-H组,50 mg/kg),通过永久性结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死(MI)模型,松果菊苷经过腹腔注射给药;HE染色观察大鼠心肌组织病理变化;Masson染色观察大鼠心肌组织梗死面积;流式细胞术检测大鼠外周血中T淋巴细胞亚群水平;ELISA检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平;半自动化分析仪测定大鼠血清心肌酶谱的表达情况;Western blot法检测pJAK1、p-STAT3蛋白表达水平。结果松果菊苷能明显减少大鼠心肌中的中性粒细胞数量,减少大鼠心肌组织梗死面积(P0.05);MI组中CD4~+的水平、CD4~+/CD8~+比值高于sham组(均P0.01),CD8~+的水平低于sham组(P0.01);ECH-L组和ECH-H组中CD4~+的水平、CD4~+/CD8~+比值低于MI组(均P0.05),CD8~+的水平高于MI组(P0.05);与sham组比较,MI组大鼠血清中心肌酶(AST、LDH、CK-MB)和炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达水平显著上调(均P0.001),ECH-L组和ECH-H组大鼠血清中心肌酶和炎症因子的表达水平下调(均P0.05);与sham组比较,MI组大鼠心肌组织中p-JAK1、p-STAT3蛋白表达上调(均P0.001),ECH-L组和ECH-H组大鼠心肌组织中p-JAK1、p-STAT3蛋白表达较MI组下调(P0.05,P0.01)。结论松果菊苷通过调控JAK1/STAT3信号通路减少大鼠心肌组织梗死区炎性细胞浸润、梗死面积,减轻炎症反应,改善免疫功能紊乱、心肌受损情况,从而维护心功能正常。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。     

重组hIL-10 对AA 大鼠T 淋巴细胞及IL-17A 的影响研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测T淋巴细胞亚群及IL-17A水平的变化情况,研究重组hIL-10及其联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:用IL-10、MTX以及IL-10+MTX处理AA大鼠模型,用流式细胞仪测定各组大鼠血液中CD4~+T细胞与CD8~+T细胞比值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-17A的含量。结果:各治疗组CD4~+淋巴细胞总数与CD4~+/CD8~+值不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P0.05)。各治疗组IL-17A水平有不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P0.05),联合组与IL-10组比较有显著性差异(P0.05)。结论:重组hIL-10能下调AA大鼠血液中CD4~+T细胞的数量及CD4~+/CD8~+比值,降低血清中IL-17A水平,联合组较IL-10组对血清中IL-17A影响更显著,提示重组hIL-10联合MTX在治疗类风湿关节炎中能更好地发挥作用。     

哮喘和免疫耐受大鼠淋巴液中Treg变化及其功能状态的实验研究

观察CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞、IL-10、TGF-β在哮喘和免疫耐受大鼠淋巴液与血液中的水平,探讨其与哮喘及免疫耐受的关系。建立大鼠哮喘和免疫耐受模型,收集激发后0 h、24 h、48 h淋巴液、血液中淋巴细胞,采用流式细胞术检测淋巴液及血液中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞百分率;采用ELISA方法检测血浆及淋巴液中IL-10、TGF-β水平。结果显示,哮喘组淋巴液和血液的CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度在各时间点均低于对照组和耐受组(P0.05);哮喘组和耐受组淋巴液中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞百分率水平、IL-10浓度在不同时间点均高于血液水平(P0.05),而TGF-β浓度则低于血液水平(P0.05);耐受组淋巴液和血液中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度与对照组相比无显著性差异(P0.05)。说明哮喘大鼠淋巴液中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数量以及功能失调,且淋巴液中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞水平显著高于其血液水平,而建立免疫耐受后大鼠淋巴液及血液中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数量升高,说明通过免疫耐受可以避免哮喘发病或减轻症状,推测通过建立免疫耐受可能成为一种治疗哮喘的有效途径。     

溃疡性结肠炎相关性结直肠癌大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度的关系

为探讨溃疡性结肠炎相关性结直肠癌(ulcerative colitis-associated colorectal cancer,UC-CRC)大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系,建立UC-CRC大鼠模型,于第14、16、18周分批处死,观察各组结肠组织病理学变化情况,并比较血清、结肠组织中Th2细胞因子IL-4、Th1细胞因子IFN-γ水平及结肠组织中CD4~+IL-4~+占比、CD4~+IFN-γ~+占比、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+、MVD,分析MVD与IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4的相关性。结果显示,模型组大鼠建模后状态逐渐变差,持续2周后好转;模型组结肠细胞有明显的病理学变化;与对照组比较,模型组各时刻血清和组织中IL-4水平、CD4~+IL-4~+占比、MVD较高,IFN-γ水平、CD4~+IFN-γ~+占比、IFN-γ/IL-4、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+较低(P0.05);模型组血清和组织中IL-4水平、CD4~+IL-4~+占比、MVD均随时间的延长呈升高趋势(P0.05),IFN-γ水平、CD4~+IFN-γ~+占比、IFN-γ/IL-4、CD4~+IFN-γ~+/CD4~+IL-4~+均随时间的延长呈下降趋势(P0.05),而对照组上述指标变化均不显著(P 0.05);不同时刻MVD与血清及组织中IL-4水平呈正相关(P0.05),与IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4均呈负相关(P0.05)。提示UC-CRC大鼠Th1/Th2平衡向Th2漂移,MVD与Th2细胞因子呈正相关,与Th1细胞因子呈负相关,MVD与Th1/Th2漂移关系密切。     

四嗪二甲酰胺抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的 研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对植物血凝素(PHA)刺激的T淋巴细胞体外活化的影响,初步探讨其免疫抑制作用.方法 从健康人外周血分离淋巴细胞,经PHA刺激诱导淋巴细胞活化,ZGDHu-1单独或联合环孢霉素A(CSA)作用24 h、48 h,检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况.采用流式细胞仪检测CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+、CD8~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、CD8~+ Fas~+.用Annexin V/PI染色结合流式细胞术,分析淋巴细胞早期凋亡.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清IL-2和转化生长因子-β1(TGF-β1).结果 ZGDHu-1能明显降低PHA活化的CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、Annexin V~+/PI~-,并降低活化T淋巴细胞的IL-2分泌及促进TGF-β1的分泌,联合CSA应用效果更明显.结论 ZGDHu-1能抑制T淋巴细胞活化,降低T淋巴细胞凋亡,和CSA联合具有一定的协同效应.     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌保护作用及机制

目的探讨替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌的保护作用及细胞因子机制。方法30只雄性SD大鼠随机分为三组：正常对照组（C组）10只,糖尿病模型组（D组）10只,替米沙坦组（T组）10只,各组大鼠均在12周末结束实验。免疫组化方法检测心肌组织中TGF-β1,HGF蛋白及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达。电镜观察左室心肌。结果与C组比较,D组心肌细胞内线粒体数目增多,肌原纤维灶性变性、溶解,肌原纤维间间隙增宽。与D组相比,T组心肌细胞内线粒体数目减少,肌原纤维灶性变性、溶解减轻。与C组比较,D组,T组TGF-β1,HGF,CollagenI和CollagenⅢ表达均显著升高（P〈0.01）。与D组相比,T组TGF-β1,CollagenI和CollagenⅢ表达均低于D组（P〈0.05）;T组HGF蛋白表达显著高于D组（P〈0.01）。结论替米沙坦能够改善糖尿病大鼠心肌超微结构,可能与降低心肌中TGF-β1蛋白,升高HGF蛋白表达有关。     

自发性高血压大鼠外周血CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比率增加且连接子蛋白40(Cx40)和炎症因子水平升高

目的探讨连接子蛋白40(Cx40)与自发性高血压大鼠(SHR)外周血CD4~+T细胞和CD8~+T淋巴细胞亚群及炎症因子之间的关系。方法采用流式细胞术检测Wistar京都(WKy)大鼠和SHR外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞及其表面Cx40的表达;采用ELISA检测炎症因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-6表达。结果 SHR收缩压显著高于WKy大鼠,SHR外周血CD4~+T细胞百分率、CD4~+/CD8~+T细胞比率显著高于WKy大鼠,而CD8~+T细胞百分率显著低于WKy大鼠;SHR血清IL-2、IL-4、IL-6水平均显著高于WKy大鼠,IFN-γ无明显差异;SHR外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞中Cx40表达均显著高于WKy大鼠。结论 SHR外周血CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比率增加,且Cx40和IL-2、IL-4、IL-6水平明显升高。     

米诺环素对糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞极化的影响

目的:研究米诺环素对糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞极化的影响。方法:27只成年雄性SD大鼠分为对照组(control)、糖尿病组(DM)、米诺环素处理组(minocyline),利用腹腔注射链脲菌素(STZ)方法制备糖尿病大鼠模型,检测大鼠的血糖及体重变化,免疫荧光染色检测大鼠脊髓Iba-1的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脊髓肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素10(IL-10)的水平变化,Western Blot检测大鼠脊髓CD68、精氨酸酶-1(Arg-1)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:STZ注射成功制备了糖尿病大鼠模型;免疫组化染色显示糖尿病模型大鼠脊髓Iba-1阳性细胞增多;ELISA检测结果显示糖尿病组大鼠脊髓组织中M1型小胶质细胞特异性细胞因子(TNF-α和IL-6)水平增加,米诺环素处理组大鼠脊髓组织中M2型小胶质细胞特异性细胞因子(TGF-β和IL-10)水平增加;Western Blot结果显示STZ组大鼠脊髓CD68表达上调,MAG和MBP表达降低,而米诺环素治疗组Arg-1、MAG和MBP表达均增加。结论:糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞被激活,米诺环素处理可促使小胶质细胞向M2表型转化并促进髓鞘再生。     

哮喘大鼠淋巴液与血液CD4~+CD25~+Treg及IL-10、TGF-β水平比较和地塞米松干预的影响

目的:观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、IL-10、TGF-β在哮喘大鼠淋巴液与血液中的水平,以及地塞米松干预的影响,探讨其与哮喘发病的关系。方法:建立大鼠哮喘模型,收集激发后0、24、48 h淋巴液、血液中淋巴细胞,采用流式细胞术(FCM)检测淋巴液及血液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率;采用ELISA方法检测血浆及淋巴液中IL-10、TGF-β水平。结果:哮喘组淋巴液和血液的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度在各时间点均低于对照组和治疗组(P0.05);哮喘组淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、IL-10浓度在不同时间点均高于血液水平(P0.05),而TGF-β浓度则低于血液水平(P0.05);治疗组淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度与对照组相比无显著性差异(P0.05)。结论:哮喘大鼠淋巴液中存在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量以及功能失调,且淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平显著高于其血液水平,地塞米松可能通过影响CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量以及功能而发挥治疗作用。     

连翘酯苷A对溃疡性结肠炎模型大鼠免疫功能的影响

目的:研究连翘酯苷A对溃疡性结肠炎大鼠免疫功能的影响,并探讨其相关作用机制。方法:将健康SD大鼠随机分为5组:对照组(不做任何处理,正常喂养)、模型组(建立溃疡性结肠炎大鼠模型)及连翘酯苷A低、中、高剂量组(分别给予模型大鼠5 mg/kg、20 mg/kg和80 mg/kg连翘酯苷A灌胃)。比色法检测大鼠结肠组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)和IL-4含量;还测定脾脏指数和胸腺指数,外周血单个核细胞(PBMC)中CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞百分比,血清IgA和IgG水平,以及血清补体C3和C4水平。结果:模型组大鼠结肠组织出现明显炎症和溃疡,提示造模成功;与模型组比较,连翘酯苷A各剂量组大鼠结肠炎症和溃疡明显减轻,其中高剂量组效果最好。与对照组比较,模型组大鼠脾脏指数和胸腺指数降低(P0. 05),结肠组织中MDA含量增多(P0. 05),SOD活性降低(P0. 05),PBMC中CD3~+、CD4~+和CD8~+水平及CD4~+/CD8~+比值降低(P0. 05),血清补体C3和C4水平及IL-4含量降低(P0. 05),血清IgA、IgG、TNF-α和IL-2含量升高(P0. 05);与模型组比较,连翘酯苷A各剂量组大鼠脾脏指数和胸腺指数升高(P0. 05),结肠组织中MDA含量降低(P0. 05),SOD活性增强(P0. 05),PBMC中CD3~+、CD4~+和CD8~+水平及CD4~+/CD8~+比值升高,血清补体C3和C4水平及IL-4含量升高(P0. 05),血清IgA、IgG、TNF-α和IL-2含量降低(P0. 05),均呈剂量依赖性变化。结论:连翘酯苷A能有效减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠病变,其作用机制与增强氧自由基清除力、抑制炎症反应和增强免疫功能有关。     

芬戈莫德对卒中后抑郁大鼠的治疗作用

目的:观察芬戈莫德(FTY720)对卒中后抑郁(PSD)大鼠的治疗效果并初步探索其作用机制。方法:50只SD大鼠依照随机对照方法分为5组,分别为假手术组(sham)、卒中组(MCAO)、卒中后抑郁组(PSD)、氟西汀治疗组(PSD+FLU)以及芬戈莫德治疗组(PSD+FTY)。采取大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,联合慢性不可预见的温和性应激(CUMS)及孤养法建立PSD模型。记录大鼠每周体重,运用敞箱实验和糖水偏好实验评估大鼠的行为学表现; HE染色观察大鼠海马组织形态; ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量; Western Blot检测大鼠海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;流式细胞术检测大鼠外周血T细胞亚群水平。结果:与sham组和MCAO组相比,PSD组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著减低(P 0.05),HE染色显示海马组织CA1和CA3区呈现细胞萎缩和数量减少等现象,大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著增高(P 0.05),大鼠外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞的数量升高(P0.05);与PSD组相比,PSD+FTY组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著升高(P 0.05); HE染色显示海马组织CA1和CA3区细胞损伤现象减少;大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著降低(P 0.05);大鼠外周血CD3~+、CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T细胞的数量均显著减低(P 0.05)。结论:FTY720能够有效改善海马组织损伤进而缓解PSD大鼠的抑郁行为,其机制可能是降低外周血T细胞数量从而进一步降低了血清及海马组织中IL-1β、IL-6与TNF-α水平。     

丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响

目的探讨丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞(Treg)与淋巴细胞亚群分布的影响及临床意义。方法流式细胞术检测40例川崎病患儿和30例体检健康儿童外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞的表达水平以及108例川崎病患儿和41例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群分布。ELISA法检测川崎病患儿血浆中TGF-β1浓度。108例川崎病患儿中有30例收集到对应的丙种球蛋白(IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg、TGF-β1及淋巴细胞亚群在川崎病患儿丙种球蛋白(IVIG)治疗前后表达水平的差异。结果与健康体检组相比,川崎病患儿CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显降低,外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显降低,CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显增高,差异均有统计学意义(均P0.01)。与IVIG治疗前相比,川崎病患儿IVIG治疗后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显增高(均P0.05),外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显增高(均P0.05),CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显降低(均P0.05)。治疗后患儿外周血CD4~+CD25~+Treg水平、血浆TGF-β1浓度及淋巴细胞亚群表达水平与健康对照相比无差异(P0.05)。结论 Treg细胞与淋巴细胞比例失常是导致儿童川崎病免疫紊乱的重要原因。检测CD4~+CD25~+调节T细胞及淋巴细胞亚群分布对评估川崎病患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

Tfh及IL-2与IL-17在老年2型糖尿病患者外周血中的变化及其临床意义

探讨老年2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞的数量变化以及IL-2和IL-17等细胞因子含量差异并与患者血糖水平做相关性分析。采用流式细胞仪检测100例老年T2DM患者外周血CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞水平并与150例老年非糖尿病患者进行比较。分析淋巴细胞亚群与患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2h血糖(2hour plasma glucose,2hPG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1C)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(homeostasis model assessment beta,HOMA-β)之间的相关性;采用ELISA方法检测外周血IL-2和IL-17水平。老年T2DM患者外周血中CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD4~+T细胞/CD8~+T细胞的比值以及NK细胞均低于健康对照组,并与血糖呈负相关。老年T2DM患者外周血Tfh、CD8~+T细胞以及IL-17水平均高于健康对照组。老年T2DM的发病机制可能是随着年龄增高与长期高血糖导致免疫功能异常,外周血CD4~+T细胞/CD8~+T细胞水平下降以及Tfh和IL-17水平增高进一步加剧了细胞和体液免疫调节紊乱,致使胰岛细胞不断被破坏。