基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。     

SDF-1α/CXCR4轴通过诱导胰腺癌上皮-间充质转化促进肿瘤迁移和侵袭

目的:探讨SDF-1α/CXCR4轴对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测4种胰腺癌细胞株CXCR4 mRNA的表达。Transwell实验检测外源性SDF-1α及其受体CXCR4靶向抑制剂AMD3100对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。MTS法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞活力的影响。Western blot法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关标志物表达的影响。结果:(1) 4种胰腺癌细胞株均不同程度地表达CXCR4 mRNA,其中PANC-1细胞株表达量最高。(2)外源性SDF-1α可增强PANC-1细胞的迁移和侵袭能力,该作用可被AMD3100所阻断。(3)外源性SDF-1α处理PANC-1细胞72 h可增强细胞活力,该作用可被AMD3100阻断。(4)外源性SDF-1α通过上调SNAIL和TWIST促使PANC-1细胞发生EMT,该作用可被AMD3100所阻断。结论:SDF-1/CXCR4轴通过促进胰腺癌细胞发生EMT而促进肿瘤迁移和侵袭。     

灯盏花乙素调节SDF-1/CXCR4轴保护脓毒症大鼠心肌损伤

目的 探讨灯盏花乙素调节SDF-1/CXCR4信号通路对脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法将SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量灯盏花乙素组、高剂量灯盏花乙素组、高剂量灯盏花乙素+AMD3100(CXCR4抑制剂)组,每组12只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型;血液生化分析仪检测心肌损伤标志物血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌肌钙蛋白（cTnI）水平;ELISA法检测大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化;商品化试剂盒检测GSH、SOD、MDA水平;Western blot检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax、SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织有严重损伤,血清CK、LDH、cTnI、IL-6、IL-1β和TNF-α水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织MDA水平、Bax蛋白水平显著升高,心肌组织GSH、SOD水平、Bcl-2、SDF-1、CXCR4蛋白水平显著降低（P<0.05）;与模型组相比,低、高剂量灯盏花乙素组大鼠心肌组织损伤显著减轻,血清CK、LDH...     

SDF-1/CXCR4轴活化诱导内皮祖细胞增殖、迁移及管型形成

目的观察趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成的作用。方法用免疫细胞化学检测内皮祖细胞SDF-1和CXCR4表达;用MTT法、Millicell趋化法及Matrigel体外三维成型法分别检测不同浓度的趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成。并应用CXCR4受体抑制剂AMD3100观察上述指标的变化。结果免疫细胞化学显示内皮祖细胞表达SDF-1和CXCR4蛋白。SDF-1可促进内皮祖细胞的增殖、迁移和体外小管样结构的形成。AMD3100可抑制SDF-1的诱导作用。结论SDF-1/CXCR4轴在内皮祖细胞参与血管新生中可能发挥重要作用。     

白藜芦醇对新生大鼠神经元缺血缺氧时SDF-1/CXCR4通路抗凋亡作用的调控机制

目的:探究白藜芦醇(RSV)对缺血缺氧诱导的新生大鼠脑神经元凋亡及基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的作用和机制。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,给予氧糖剥夺(OGD)模拟新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)模型。首先将细胞随机分成4组:对照(control)组、HIE组、HIE+RSV低剂量(10μmol/L)组和HIE+RSV高剂量(50μmol/L)组。OGD处理2 h后加入相应剂量的RSV继续培养24 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白及SDF-1和CXCR4的蛋白表达水平,real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。然后使用CXCR4抑制剂AMD3100与RSV共同处理OGO损伤的细胞24h,检测SDF-1/CXCR4通路阻断后RSV对细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:RSV能够抑制OGD诱导的神经元凋亡,下调活化的caspase-3和细胞色素C的水平,上调Bcl-2/Bax比值(P0.05)。与对照组相比,OGD导致SDF-1和CXCR4表达增加;与模型组相比,RSV能够上调SDF-1和CXCR4的表达(P0.05);使用AMD3100阻断SDF-1/CXCR4通路减弱了RSV抑制OGD诱导的细胞凋亡的作用。结论:RSV可抑制缺血缺氧诱导的新生大鼠神经元凋亡,其机制可能是通过上调SDF-1/CXCR4通路发挥作用的。     

新风胶囊通过抑制miR-155/NF-κB信号通路改善强直性脊柱炎活动期患者高凝状态

目的新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)活动期患者miR-155、核因子κB(NF-κB)信号通路、高凝状态的影响,探讨其可能的机制。方法采用随机数字表法将56例AS活动期患者分为新风胶囊组(XFC组)和柳氮磺吡啶组(SASP组)。实时荧光定量PCR检测miR-155。反转录PCR检测核因子κB激活蛋白1(Act1)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA的水平,Western blot法检测NF-κB P65、NF-κB P50蛋白表达,ELISA检测血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素F1(6-keto-PGF1)、血小板颗粒膜蛋白(GMP140)、血小板活化因子(PAF)、纤溶酶原激活抑制剂(PAI-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-17。同时评价XFC对AS患者临床疗效。结果 XFC组Bath AS疾病活动指数50%达标率(BASDAI50)显著高于SASP组。与SASP组治疗后相比,XFC组治疗后血小板(PLT)、纤维蛋白原(FBG)、D-D二聚体(D-D)、TXB2、GMP140、PAF、PAI-2、IL-17、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、视觉模拟评分(VAS)、Bath AS疾病活动指数(BASDAI)、Bath AS功能指数(BASFI)、Bath AS总体指数(BAS-G)降低更明显,且其可明显升高6-keto-PGF1、IL-4、IL-10;与SASP治疗后相比,XFC治疗后IKKβ、IκBα、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA及NF-κB P65、NF-κB P50蛋白、miR-155表达水平更低。结论 XFC能有效改善AS活动期患者的高凝状态,可能与抑制miR-155、抑制NF-κB信号通路活化有关。     

脑梗死后骨髓极小胚胎样干细胞的动员及募集作用

 摘要：目的 探讨G-GSF和AMD3100对小鼠急性脑梗死后骨髓来源的极小胚胎样干细胞（VSEL-SCs）的动员、募集及其作用机制。方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,腹腔内分别注射G-GSF、CXCR4特异性拮抗剂(AMD3100)及G-CSF联合AMD3100,观察术后神经功能评分,流式细胞分析计数各组动员到外周血中的VSEL-SCs数量;ELISA方法分析术后血浆及缺血侧脑组织中SDF-1水平的动态变化,免疫组化观察缺血半暗带的SDF-l阳性细胞。结果 术后神经功能评分,与对照组相比,G-CSF组评分明显降低（P<0.05）,AMD3100组无统计学意义;各组动员到外周血的VSEL-SCs含量均高于对照组,具有统计学意义;血浆SDF-1的浓度,G-CSF组在72h、108h时高于对照组(P<0.05）,但在24h、72h、108h时均低于AMD3100组和G-CSF+AMD3100组（P<0.05）,血浆SDF-1浓度水平与动员到外周血的VSELs数量成正相关;脑组织的SDF-1浓度,G-CSF组、G-CSF+AMD3100组均高于对照组（P<0.05）,AMD3100组与对照组相比无统计学意义;脑组织免疫组化中,G-CSF组和G-CSF+AMD3100组SDF-1阳性细胞多于对照组。结论 G-GSF和AMD3100能使大量的VSEL-SCs从骨髓动员到外周血中,G-CSF对缺血脑组织的保护作用,可能在于能够使缺血半暗带的SDF-1表达增加,并通过CXCR4/SDF-1轴的趋化作用,使募集到梗死区域的CXCR4+细胞增多来实现的。     

新风胶囊对干燥综合征患者高凝状态的改善作用及其对细胞因子NF-κB信号通路的影响

目的观察干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)患者凝血参数及细胞因子、NF-кB信号通路蛋白、实验室指标的变化,探讨新风胶囊(Xinfeng Capsule,XFC)改善SS患者高凝状态的机制。方法将66例SS患者随机分为研究组和对照组各33例,分别予XFC和硫酸羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)治疗。另选20名健康者作为正常对照组。酶联免疫吸附法检测IL-4、IL-1β、TNF-α、IL-10、p65、p50、IκBα;实时荧光定量检测p65、p50、IκBαm RNA表达量,免疫印迹法检测p65、p50蛋白表达;并测定凝血指标及相关实验室指标。结果与NC组比较,SS组D-D、FIB明显升高,唾液流率、泪膜破裂时间及IL-4、IL-10表达明显降低,角膜染色评分及IL-1β、TNF-α、P50、P65、IκBα、hs-CRP、ESR显著升高(P0.05或P0.01);相关性显示SS患者的凝血指标与细胞因子、NF-κB通路以及临床症状体征、疾病活动性指标等呈明显相关性;药物干预后,2组凝血参数、临床症状和实验室指标均有所改善;与HCQ组比较,XFC组有效率和总有效率显著高于HCQ组,且在改善患者静态唾液流率、泪膜破裂时间、双眼染色评分,降低FIB、D-D、P50、P65,ESR、Hs-CRP水平,上调TNF-α、IL-1β,下调IL-4、IL-10方面明显优于HCQ组(P0.05或P0.01)。结论 XFC可通过平衡细胞因子的表达,抑制NF-κB信号通路的活化,降低对血管内皮细胞的损伤,从而改善SS患者高凝状态。     

IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡能力的影响北大核心CSCD

目的:探究过表达IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡的影响与机制。方法:免疫组织化学染色(IHC)检测乳腺癌与癌旁正常乳腺组织CXCR4与其配体CXCL12表达,并分析其相关性;Western blot检测CXCR4在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中的表达;采用慢病毒稳转技术在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达IL-24,免疫荧光显微镜、RT-PCR和ELISA检测感染效率;将细胞分为5组:LV-IL-24组(感染过表达IL-24慢病毒)、LV-NC组(感染阴性对照慢病毒)、AMD3100组(采用CXCR4/CXCL12轴阻滞剂AMD3100进行培养)、LV-IL-24+AMD3100组(采用AMD3100进行培养的感染过表达IL-24慢病毒的细胞)、阴性对照组(正常培养的MDAMB-231细胞);Transwell、划痕实验和Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测上述各组细胞侵袭、迁移及凋亡;Western blot检测各组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平及凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达。结果:CXCR4与CXCL12在乳腺癌组织中的表达均显著高于正常乳腺组织,且二者表达呈正相关;与MCF-10A细胞相比,CXCR4在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453及MDA-MB-231中表达明显增加(P<0.05),以MDA-MB-231最为显著(P<0.01)。转染过表达IL-24的慢病毒后,MDA-MB-231细胞IL-24 mRNA与蛋白表达均显著增加(P<0.05);与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞侵袭、迁移能力均显著降低(P<0.05),而凋亡率明显提高(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),而凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达明显增加(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01)。结论:乳腺癌细胞中过表达IL-24可抑制CXCR4表达,通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力,促进其凋亡,联合使用CXCR4/CXCL12阻滞剂AMD3100可显著提高IL-24的上述抑癌效应。     

新风胶囊通过抑制miR-155/SOCS1/NF-κB通路降低干燥综合征患者血液高凝状态

目的探讨新风胶囊(XFC)改善干燥综合征(SS)患者高凝状态与miR-155/细胞因子信号传送阻抑物(SOCS1)/核因子κB(NF-κB)信号转导通路的关系。方法将66例SS患者随机分为XFC治疗组和硫酸羟氯喹(HCQ)治疗对照组各33例,分别予XFC及HCQ治疗。另选20名健康者作为正常对照组。全自动凝血仪测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIG)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D);ELISA检测外周血血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、P50、P65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)水平;同时采用实时荧光定量PCR检测p65、p50、IκBαmRNA水平;一步法荧光定量PCR反应测定miR-155含量;Western blot法检测P65、P50、SOCS1蛋白水平;魏氏法测定血沉(ESR);全自动生化分析仪测定超敏C反应蛋白(hs-CRP)。结果与NC组比较,SS患者凝血参数D-D、FIB明显升高;SS患者外周血miR-155、IL-1β、TNF-α、P50、P65、IκBα及炎症指标hs-CRP、ESR水平明显升高;IL-4、IL-10水平明显降低;凝血参数与细胞因子、NF-κB信号转导通路及炎症指标明显相关。药物干预后,两组凝血参数和相关实验室指标均有部分改善;与对照组比较,XFC组有效率显著高于HCQ组,且在降低FIB、D-D、miR-155、TNF-α、IL-1β、P50、P65、ESR、hs-CRP水平,增加SOCS1,IL-4、IL-10水平方面明显优于HCQ组。结论 XFC能有效降低SS患者血液高凝状态,其机制与抑制miR-155/SOCS1/NF-κB信号通路有关。     

榆栀止血颗粒减轻宫腔粘连大鼠子宫内膜纤维化

目的 探讨榆栀止血颗粒对宫腔粘连大鼠基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)轴及内膜纤维化的影响。方法 将大鼠随机分成假手术组、模型组(建立宫腔粘连大鼠模型)、榆栀止血颗粒低、中、高剂量组,分别灌胃给予30、60和120 mg/kg, 1次/d,连续21 d。末次灌胃24 h后,试剂盒检测血清中白介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α),转化生长因子β1(TGF-β1)水平;HE染色和Masson染色检测大鼠子宫内膜腺体数量和间质纤维化程度;蛋白免疫印迹法检测SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠子宫组织结构破坏,腺体数量减少,纤维化增生,可见大量炎性细胞浸润,血清IL-6、TNF-α、TGF-β1水平显著升高(P<0.05),子宫组织中SDF-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组相比,榆栀止血颗粒低、中、高剂量组的腺体数量依次增多,纤维化程度减弱,炎性细胞减少,血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1水平显著降低(P<0.05),子宫中SDF-1蛋白表达显著降低(P<0.05),且均呈剂量...     

SDF-1/CXCR4增强骨髓间质干细胞的造血支持作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXCR4在骨髓间质干细胞(MSCs)支持CD34 造血干/祖细胞(HSPCs)扩增中的作用。方法在长期培养基(LTC)中,以大鼠骨髓MSCs作为饲养层体外扩增骨髓CD34 细胞,每周分别加入SDF-1、SDF-1抗体或CXCR4抗体至5周。计算CD34 细胞数和集落形成细胞(CFC)数,以评价造血支持功能。为评估SDF-1/CXCR4对CD34 细胞增殖周期的影响,进行了杀伤试验以计算增殖指数。流式细胞术检测MSCs和CD34 细胞中SDF-1与CXCR4的表达;ELISA检测MSCs和CD34 细胞培养基中SDF-1的含量。结果CD34 细胞数、CFC数和增殖指数在加入SDF-1后明显增加(P<0.01),加入SDF-1抗体或CXCR4抗体后明显减少(分别为P<0.05,P<0.01)。CD34 细胞表面表达CXCR4,MSCs则不表达;MSCs细胞内表达SDF-1,而CD34 细胞不表达。在MSCs培养基中检测到SDF-1,在CD34 细胞培养基中未发现。结论SDF-1/CXCR4在骨髓MSCs支持HSPCs扩增中起重要作用。     

基质细胞衍生因子-1对表皮干细胞的促增殖作用

目的了解基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在体外对表皮干细胞(ESCs)生长增殖的促进作用,为创面促愈药物研发提供理论依据。方法体外分离、培养ESCs,通过ESCs的免疫组化、免疫荧光染色对ESCs进行鉴定;RT-PCR检测ESCs中基质细胞衍生因子-1受体(CXCR4)基因的表达;取培养至第三代的ESCs分组,通过台盼蓝拒染实验、Edu标记法观察在不同剂量SDF-1的刺激作用和CXCR4拮抗剂存在下,A～E组及A’～E’组间ESCs生长增殖的差异。结果应用特制的ESCs培养基能培养出活力强、纯度高的ESCs;培养的ESCs表达K19、CD29、integrinα6,不表达CD71;CXCR4基因在ESCs中阳性表达;体外细胞实验证实SDF-1对ESCs有促进增殖作用,SDF-1浓度为100μg/L时作用最强,差异有统计学意义(P<0.01);CXCR4拮抗剂AMD3100存在时,SDF-1对ESCs的促增殖作用失效。结论 SDF-1对体外培养扩增的ESCs有促进增殖作用;SDF-1合理应用,有可能在皮肤治疗中发挥促愈作用。     

SDF-1α对海马神经元突起延伸和增殖的影响(英文)

目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变化;并采用阻断剂AMD3100阻断CXCR4受体,观察其对细胞的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光细胞化学方法显示SDF-1α和CXCR4主要表达在体外培养的海马神经元的胞膜和胞浆;不同浓度的SDF-1α改变了细胞的形态,促进了突起延伸;AMD3100则抑制了细胞突起增长;流式细胞仪检测显示SDF-1α减少了细胞凋亡。结论:SDF-1α可影响海马神经元突起延伸和凋亡效应,该机制可能与受体CXCR4有关。     

黄芪甲苷对EPCs中SDF-1α/CXCR4的调控作用

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对内皮祖细胞(EPCs)中CXC趋化因子受体4(CXCR4)和基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的调控作用及其作用机制。方法:体外培养大鼠骨髓源性EPCs,观察应用AS-IV及CXCR4的特异性阻断剂AMD3100后EPCs的增殖、黏附、迁移、凋亡和管状结构形成能力的变化,并分析AS-IV对EPCs中SDF-1α及CXCR4的mRNA和蛋白,以及p-CXCR4蛋白水平变化的影响。结果:AS-IV可以显著提升EPCs的增殖、黏附、迁移和管状结构形成能力,减轻EPCs的凋亡,上调EPCs中SDF-1α和CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白的水平(P0.05);AMD3100可以阻断AS-IV对CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白水平的上调作用,但不影响AS-IV对SDF-1α的mRNA和蛋白水平的上调作用。结论:AS-IV可能通过调控EPCs中SDF-1α/CXCR4的表达而增强EPCs的生物学作用。     

新风胶囊通过BTLA-HVEM诱导Treg免疫耐受改善膝骨关节炎大鼠心肺功能

目的:观察膝骨关节炎(KOA)大鼠心肺功能的变化及新风胶囊(XFC)对其影响,探讨可能的分子机制.方法:按随机数字表将40只大鼠随机分为正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,氨基葡萄糖对照(GS)组,XFC组,每组10只.除NC组外,采用关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸方法复制成KOA大鼠模型,造模后第14天开始给药.NC组及MC组均给予生理盐水,剂量为0.01 g/kg,其余2组分别给予GS、XFC混悬液,剂量分别为0.098 g/kg、0.375 g/kg.采用超声诊断仪检测大鼠心功能,动物肺功能仪检测大鼠肺功能,ELISA法检测BTLA、HVEM、IL-17、IL-4、TGF-β1;流式细胞术检测大鼠外周血CD4+ CD25+Treg、CD4+ CD25+Foxp3+ Treg的表达.结果:与NC组比较,MC组体质量、E、E/A、FVC、FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+Treg明显降低,TGF-β1、IL-17明显升高(P＜0.01或P＜0.05).与MC组比较,各组大鼠体质量,心功能参数E峰、E/A,肺功能参数FEV1、FEF5O、FEF75、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg明显升高,关节软骨Mankin评分、心系数、肺系数、TGF-β1、IL-17明显降低(P＜0.01或P＜0.05);与GS组相比,XFC组体质量、Treg升高最为明显(P＜0.01或P＜O.05).结论:新风胶囊改善KOA大鼠关节软骨Mankin评分,改善其心肺功能,其机制可能是促进BTLA-HVEM负调共刺激信号作用,诱导Treg免疫耐受,上调IL-4表达,下调IL-17、TGF-β1表达,抑制异常免疫炎症反应.     

新风胶囊治疗对强直性脊柱炎患者BTLA~+T细胞数量和氧化应激的影响

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(TAOC)的变化及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将140例AS患者随机等分为XFC组(3粒/次,tid)和柳氮磺吡啶(SASP)组(4片/次,bid);连续治疗3个月。60例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测患者外周血BTLA表达频率及活化水平;采用ELISA检测2组血清中氧化应激指标(ROS、RNS、MDA、SOD、CAT、TAOC)和白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用魏氏法检测血沉(ESR);采用日立7060型全自动生化分析仪检测高敏C反应蛋白(Hs-CRP)。结果 XFC组临床疗效显著优于SASP组,具有统计学意义(P0.01)。与健康对照组相比,AS患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞BTLA的水平显著降低(P0.01或P0.05);与对照组相比,AS患者SOD、CAT、TAOC值均显著降低,ROS、RNS、MDA值显著升高(P0.01或P0.05);与对照组相比,AS患者血清IL-1β、TNF-α和ESR、Hs-CRP值显著升高(P0.01),IL-4、IL-10水平显著降低(P0.01或P0.05)。与治疗前相比,2组治疗后外周血BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞、SOD、TAOC、IL-4,SF-36量表生理机能(PF)、社会功能(SF)、生理职能(RP)、情感职能(RE)、躯体疼痛(BP)、精神健康(MH)、活力(VT)以及一般健康状况(GH)八个维度积分均显著升高,ROS、MDA、TNF-α、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G均显著降低(P0.01或P0.05)。XFC组与SASP组相比,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA表达水平与SOD、RP、BP、SF、RE呈正相关;BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞与ROS、MDA、IL-1β、TNF-α、ESR、VAS、BASDAI呈明显负相关,与TAOC、IL-4、IL-10呈正相关;BTLA+CD3+T细胞与RNS、Hs-CRP、BASFI呈明显负相关;BTLA+CD4+T细胞与CAT呈正相关。结论 XFC能增强AS患者外周血BTLA表达,负性调节T细胞的激活与增殖。     

SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromalcell-derivedfactor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(ratmesenchymalstemcells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Westernblotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Westernblotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Westernblotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6h及12h的rMSCsCXCR4mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/LSDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5mg/LAMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。     

DHA对糖尿病认知障碍大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4通路的影响

目的:研究DHA对糖尿病认知障碍大鼠空间学习记忆的作用,探讨DHA对糖尿病大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4表达的影响。方法:采用SD大鼠,随机分为对照组、对照+DHA组、糖尿病组和糖尿病+DHA组,以高脂膳食加小剂量链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,ELISA法、PCR法检测海马神经元SDF-1、TNF-α含量,免疫组化法检测CXCR4受体表达情况,Western Blot法检测海马神经元JNK磷酸化水平。结果:DHA可在一定程度上改善糖尿病大鼠学习记忆能力。糖尿病大鼠海马神经元TNF-α和p-JNK水平升高,SDF-1水平明显降低,CXCR4受体阳性神经元数量明显减少。DHA抑制TNF-α和JNK磷酸化,增加CXCR4的表达,升高SDF-1的含量。结论:DHA可减轻糖尿病大鼠的认知损伤,其机制可能与提高SDF-1水平,抑制海马神经元JNK磷酸化,降低炎性因子水平有关。     

新风胶囊通过抑制TGF-β1-ERK1信号通路保护干燥综合症模型大鼠肺功能

目的 考察新风胶囊对干燥综合征模型大鼠肺功能的作用,及其对TGF-β1-ERK1信号通路的影响.方法 将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和羟氯喹(HCQ)组、白芍总苷(TGP)组、新风胶囊(XFC)治疗组,每组10只,除正常对照组外,采用完全弗氏佐剂+同种鼠颌下腺抗原诱导方法,向每只大鼠两后足跖部注射与弗氏完全佐剂充分乳化后的颌下腺蛋白混合抗原0.2 mL诱发大鼠干燥综合征模型.用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,检测各组大鼠饮水量及体质量的变化、采用免疫组化法ERK1、TGF-β1的表达,采用ELISA法检测血清细胞因子(IL-17、IL-4)的变化.结果 与正常对照组(NC)比较,模型对照组(MC)大鼠体质量、血清IL-4明显降低,饮水量、颌下腺/肺指数、颌下腺病理评分、ERK1、TGF-β1积分及IL-17升高(P＜0.01或P＜0.05),肺功能参数降低(P＜0.01或P＜0.05);与MC组比较,XFC组体质量、肺功能参数50％肺活量的最大呼气流量(FEF50)、最大呼气中段流量(MMF)升高,IL-4表达升高,饮水量、颌下腺/肺指数、颌下腺病理评分、血清IL-17的表达、ERK1、TGF-β1积分降低(P＜0.01或P＜0.05).与HCQ组相比,XFC组体质量、IL-17明显降低(P＜0.01),FEF25、FEF75、MMF升高(P＜0.01或P＜0.05);与TGP组比较,XFC组肺指数、IL-17降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 SS大鼠存在肺功能下降,可能与TGF-β1-ERK1信号通路活化相关.中药XFC能够下调TGF-β1、抑制ERK1磷酸化、降低免疫炎症反应、改善肺功能.