Expression of FGF10 and FGFR2Ⅲb in development of mouse kindey

目的 观察FGF10及其受体FGFR2Ⅲb在小鼠肾脏发生发育中的表达和分布,探讨其在肾脏发生发育中的作用.方法 选取胚龄12、14、16及18 d和出生后1、7、14、21及42 d小鼠肾组织,用免疫组织化学和Western blot,检测FGF10和FGFR2Ⅲb的表达.结果 胚龄12 d组FGF10及FGFR2Ⅲb开始在输尿管芽微弱表达;随着肾脏发育成熟,FGF10及FGFR2Ⅲb主要表达于远端小管和集合管;FGF10在近曲小管表达,近直小管无表达;FGFR 2Ⅲb在近端小管无阳性表达;生后肾组织及发育各阶段肾小体未见FGF10及FGFR2Ⅲb表达.Western blot显示随着胚(日)龄的增加,FGF10及FGFR2Ⅲb在肾脏的表达量先增后减.结论 FGF10和FGFR2Ⅲb在肾脏发生发育过程中发挥重要作用.     

Slit2在小鼠肾脏发育过程中的表达

目的观察并检测Slit2在小鼠肾脏发生发育过程中的定位和表达变化,探索Slit2对肾脏发生发育的调节作用。方法分别选取胚龄(E)12、14、16、18天胎鼠和生后(N)1、7、14、21、40天仔鼠,每组随机选取10只。胚龄12天取全胚,其余各组胎鼠或小鼠剖腹取肾脏,制备石蜡切片和提取蛋白。通过免疫组织化学技术系统观察小鼠肾脏Slit2的表达和定位;通过蛋白印迹技术检测各组小鼠肾脏Slit2的表达变化。结果Slit2在胚龄12天肾脏的生肾区即开始表达。其中,Slit2在输尿管芽明显表达,在生后肾组织中仅在输尿管芽周围的间充质聚集部位表达,其余部位并无广泛表达。随着肾脏的发育,Slit2在肾小体发育的逗号小体阶段、S小体阶段有较强的表达,在Ⅲ期肾小体阶段,Ⅳ期肾小体阶段及成熟肾小体阶段有微弱的表达。在肾脏早期髓质出现后,Slit2在近端小管、远端小管和集合管均有表达。Slit2表达量从胚龄14天到胚龄16天轻度增加,从胚龄16天到生后40天逐渐减少。结论 Slit2在发育各阶段的肾小体、发育及成熟期的泌尿小管中均有表达,提示其对肾小体和泌尿小管的发育可能具有重要的作用。     

血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾脏发育中的表达

目的观察小鼠肾脏发育中血管紧张素Ⅱ受体1(AngiotensinⅡreceptor type1,AT_1)和受体2 (AT_2)的表达特征,探讨小鼠肾脏发育过程中AT_1和AT_2的作用及相互关系。方法应用免疫组织化学技术、免疫印迹法(Western blot)并结合体视学方法检测胚龄12、14、15、16、18d及生后日龄1、3d小鼠肾脏发育中AT_1和AT_2的表达。结果AT_1和AT_2均首先出现在输尿管芽,然后出现在肾小管,生后表达逐渐减弱。早期肾小体内AT_2丰富表达,随着肾小体的成熟表达量逐渐降低。结论在小鼠肾脏发育中,AT_1可能与输尿管芽分支不断延长以及肾小管的增殖密切相关,AT_2可能与输尿管芽和肾小体的相互诱导相关。     

小鼠肾小体的生长曲线

目的:探讨小鼠肾脏发生发育过程中肾小体体积的增长规律。方法：光镜下应用体视学方法对生前和生后小鼠肾脏中各发育阶段的肾小体体积进行测量。结果：胚龄14d时，逗号小体和S小体出现，生后7d消失。胚龄16d时，Ⅲ、Ⅳ期肾小体出现，其体积从胚龄16d到生后40d大约增大70倍。结论：小鼠肾小体于胚龄14d发生，从生后7d到生后40d体积增长迅速。     

血管紧张素Ⅱ受体1在胚胎及生后小鼠肾的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1(AngiotensinⅡreceptor type1,AT1R)在小鼠早期肾脏发育中的表达及其与肾脏发育的关系。方法采用免疫组织化学方法和免疫印迹法(W estern b lot)检测胚龄14、15、16、18d及生后日龄1、3d小鼠肾脏发育中AT1R的表达。结果胚龄14 d,AT1R在输尿管芽中有少量表达,胚龄15 d时AT1R表达达到高峰,从胚龄16天开始AT1R在输尿管芽及其分支表达明显减弱,而较多出现在皮质肾小管,胚龄18 d时,只有微量表达。AT1R在小鼠后肾发生发育中的表达具有一定的时空顺序,最先出现在输尿管芽,然后是肾小管及肾小球。结论AT1R与输尿管芽分支不断延长以及肾小球和肾小管的增殖和分化密切相关。     

小鼠发育期卵巢成纤维细胞生长因子10的表达

目的 研究小鼠卵巢发育期成纤维细胞生长因子10(FGF10)的表达. 方法 分离孕E14.5、E16.5、E18.5、生后第1天和3周龄小鼠卵巢,每组实验动物6只,应用免疫组织化学技术研究FGF10蛋白在卵巢中的表达;3周龄小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48h后,再注射人绒毛膜促性腺激素(hCG),hCG注射后3h提取总mRNA,应用RT-PCR技术研究卵巢中FGF10、黄体生成素受体(LHR)、成纤维细胞生长因子7(FGF7)和成纤维细胞生长因子受体2Ⅲb(FGFR2Ⅲb)基因的表达变化. 结果 FGF10蛋白表达于卵母细胞,并且FGF10在生后第1天小鼠的卵母细胞上表达最强;两种促性腺激素处理后,FGF10 mRNA 与对照组相比表达下降,LHR mRNA表达升高,FGF7和FGFR2Ⅲb mRNA表达不变. 结论 FGF10蛋白特异表达于小鼠卵母细胞膜,促性腺激素影响卵巢FGF10 mRNA的表达,推测FGF10可能参与调控小鼠卵母细胞的生长和卵泡发育.     

小鼠肾小体的形态发生

目的 探讨小鼠肾小体形态的发生规律。方法 应用光镜、电镜技术并结合体视学方法和图像分析技术对生前和生后小鼠肾脏中各发育阶段的肾小体进行形态学观察和立体计量学的测量。结果 可见肾小体发育的4个阶段,胚龄14d时,Ⅰ、Ⅱ期肾小体出现,生后7d消失。胚龄16d时,Ⅲ、Ⅳ期肾小体出现,其体积从胚龄16d到生后4JDd增大约70倍,数目从胚龄16d到生后7d增加约20倍,生后7d后基本恒定。结论 小鼠肾小体于胚龄14d发生,生后7d前增殖明显,生后7d后不再增殖,肾小体的发育以单个体积迅速增大为特点。     

成纤维细胞生长因子受体1,2在小鼠肾发育中的动态表达

背景：在肾发育过程中，成纤维细胞生长因子受体1,2的时空表达仍是一个有争议的问题，且其与肾脏发育的关系尚不清楚。目的：观察成纤维细胞生长因子受体1,2在小鼠肾发育过程中的动态表达，探求它们与肾发生发育的关系。方法：培育不同发育阶段的胎鼠(E12,14,16,18 d)和仔鼠(N1,3,7,14,24,40 d)，应用免疫组织化学技术观察成纤维细胞生长因子受体1,2在不同肾组织中的时空表达，结合体视学和Western blot对它们的表达进行定量分析。结果与结论：(1)免疫组化显示：在E12 d时，成纤维细胞生长因子受体1主要定位在输尿管芽尖端的生后肾组织，随后表达在各期未成熟的肾小体、部分远曲小管和毛细血管袢，反应部位主要集中在生肾区；而成纤维细胞生长因子受体2开始即在输尿管芽和生后肾组织中均有表达，随着后肾发育，定位于未发育成熟的各期肾小体、远端小管、集合管和髓袢细段，成熟肾小体表达微弱；(2)体视学和Western blot检测显示：成纤维细胞生长因子受体1在生前表达较高，出生后逐渐下降，N7 d后表达很低；成纤维细胞生长因子受体2在肾脏的表达随着胚(日)龄的增加而升高，N7 d后...     

Bcl-2在小鼠肾脏发生发育中的表达

目的 探讨小鼠肾脏发育过程中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达. 方法 选取胚龄16(E16d)、18d和出生后1d(P1d)、3、5、7d、14和21d的昆明小白鼠共54只,应用免疫组织化学技术并结合体视学分析方法,观察小鼠肾脏不同发育时期树脂切片上Bcl-2的表达. 结果 在小鼠肾脏发育过程中,Bcl-2的阳性表达主要出现在近端小管,从E18 d到P1 d,Bcl-2阳性表达肾小管面数密度的增长速度最快,在P7d之后,Bcl-2阳性表达肾小管面数密度的增长速度的变化不大. 结论 在肾的早期发育过程中,Bcl-2主要影响了近端小管的存活或死亡.     

细胞内吞受体megalin 和cubilin在胚胎期小鼠肾的表达

目的 研究细胞内吞受体megalin和cubilin在胚胎发生发育小鼠肾的表达,及其与肾小管发生发育的相关性. 方法 采用免疫组织化学方法 检测不同胚龄小鼠肾(每组5只)megalin和cubilin的表达.同时,结合透射电镜观察肾近端小管与细胞内吞功能相关的细胞器的发育变化. 结果 胚龄9.5d时,megalin和cubilin表达于中肾管及中肾小管上皮细胞游离面.胚龄11d至18d,两受体表达于输尿管芽上皮细胞游离面,在S小体期肾小管近腔面呈弱阳性表达,肾小管胞内吞体及溶酶体少见,微绒毛稀疏.随着近髓肾单位细胞内吞体及微绒毛发育成熟,两受体表达局限于近端小管近腔面及刷状缘. 结论 megalin和cubilin 在胚胎肾发生发育中,从表达在分化早期所有小管近腔面胞质,到局限于成熟期近端小管游离面刷状缘,提示两受体协同重吸收功能是随着近端小管上皮细胞的发育而逐渐形成的.     

成纤维细胞生长因子受体-1、2和3在昆明小鼠卵母细胞和植入前胚中的表达与分布

目的:观察成纤维细胞生长因子受体(FGFR)-1、2和3在昆明小鼠卵母细胞和植入前胚中的表达和分布,为进一步探讨成纤维细胞生长因子(FGF)对昆明小鼠卵母细胞和植入前胚发育的影响提供实验依据.方法:逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫荧光细胞化学显色和共聚焦扫描显微镜观察.结果:RT-PCR检测显示,FGFR1、FGFR2和FGFR3 mRNA在昆明小鼠卵母细胞和植入前胚均有表达;免疫荧光细胞化学显色、共聚焦扫描显微镜观察显示FGFR1、FGFR3免疫阳性反应见于卵母细胞和植入前胚胞质周边,靠近细胞膜;FGFR2阳性反应较均匀分布于卵母细胞和植入前胚的胞质.结论:FGFR1、FGFR2、FGFR3在小鼠卵母细胞和植入前胚发育的不同阶段都有表达,可能介导FGF调节小鼠卵母细胞和植入前胚的发育.     

血管生成素-1及其受体Tie-2在小鼠肾发育中的表达

目的:观察血管生成素-1(Ang-1)及其受体Tie-2在小鼠肾发育过程中的表达特征、作用及相互关系.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测胚龄14、16、18 d胎鼠和生后1、3、7、14、21、42 d仔鼠Ang-1和Tie-2的表达.结果:Ang-1在胚龄14 d胎鼠肾的未分化间充质细胞中呈微弱表达,随着胚(日)龄的增加,表达逐渐增强,主要分布在肾小体,间质血管以及肾小管中.Tie-2于胚龄14 d首先出现在肾间质,以后随着肾的发育,出现在肾小体以及间质血管中.结论:Ang-1和Tie-2在小鼠肾发育过程中,对肾小体毛细血管的形成、间质血管的发育及血管稳定性的维持均发挥着重要作用.     

P>小鼠肾发育过程中输尿管芽与肾单位关系的计量学分析/P>

目的 观察小鼠肾发育过程中输尿管芽(UB)生长方式及其与诱导产生的肾单位数目之间的变化规律. 方法 应用免疫组织化学技术结合体视学方法,对不同胚(日)龄小鼠输尿管芽发育及肾单位数目进行系统观察和定量分析. 结果 免疫组织化学结果显示.胚龄12d时,输尿管芽及其分支出现,输尿管芽是以二叉分支方式生长;胚龄14d,输尿管芽诱导的肾单位出现;胚龄16d至生后5d,输尿管芽不断分支,输尿管芽尖数目及肾单位数目不断增加;生后7d,输尿管芽消失,肾单位数目固定.体视学测量结果显示,胚龄14d至胚龄18d,每个输尿管芽尖可诱导1个肾单位发生;生后1d至生后5d,每个输尿管芽尖可诱导4个肾单位发生.在整个肾发育过程中,输尿管芽可发生10～11次分支. 结论 肾单位数目与输尿管芽分支程度成正比,但两者之间的比例关系不固定.     

内皮型一氧化氮合酶和神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾发育过程中的表达

目的:观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)在胚胎小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨它们在小鼠发育早期肾组织中的作用.方法:选取胚龄(E)13、14、15、16、18d及新生组(P)0d小鼠,应用免疫组织化学方法显色进行图像分析;用免疫印迹法测定各组小鼠肾组织中的eNOS以及nNOS的含量.结果:免疫组织化学显色显示,eNOS阳性表达最早出现于E14d的生肾区;E16d时在生肾区表达减弱,近端小管呈强阳性;P0d时远端小管可见弱表达,集合管也有一定程度表达,致密斑无表达.nNOS在E13d时即表达于皮质输尿管芽;E16d时近端小管弱表达,远端小管强表达;P0d时在远端小管和致密斑强表达,近端小管弱表达,集合管无表达.图像分析和免疫印迹法结果显示,eNOS和nNOS在E14d含量较少,随后逐渐增多,至P0d达到高峰.结论:在胚胎小鼠肾发育过程中,eNOS和nNOS的表达有一定的时空顺序,它们对肾组织的发育及形成起一定的作用.     

靶向bFGF与FGFR1Ⅲc结合位点的单克隆抗体制备及其生物学活性研究

目的 针对碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)与成纤维生长因子受体1c(FGFR1Ⅲc)的结合位点,制备鼠抗人b FGF单克隆抗体并研究其生物学活性。方法 用重组表达的人b FGF免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏常规融合制备杂交瘤细胞,通过间接和竞争ELISA筛选出与FGFR1Ⅲc有共同结合位点的抗b FGF单抗。制备小鼠腹水并利用Protein G亲和柱纯化腹水单抗,SDSPAGE鉴定纯化产物;间接ELISA测定单抗亚类、亲和常数,竞争ELISA测定抗体IC50;Western blot和免疫荧光对单抗的生物学活性初步鉴定;CCK-8法检测单抗对肺癌细胞株LL/2的增殖抑制活性。结果 筛选出了2株稳定表达b FGF抗体的细胞株Mab E12和Mab D9,竞争ELISA测得其IC50分别为1.564和1.96μg/ml,免疫球蛋白分类两者均为Ig G1,间接ELISA测得Mab E12的亲和常数为5.66×108L/mol;Western blot和免疫荧光表明该抗体能与LL/2细胞内天然合成的b FGF相结合,并对其增殖产生了较明显的抑制作用。结论 成功建立了1株能特异性识别b FGF-FGFR1Ⅲc合位点的单抗,能有效的中和b FGF对肺癌细胞株LL/2促增殖作用,为研究肿瘤治疗途径奠定了基础。     

转化生长因子βⅡ型受体在小鼠肾发育中的表达

目的:观察转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨转化生长因子β(TGF-β)与肾发育的关系。方法:采用免疫组织化学法、体视学和免疫印迹法测定不同胚龄(E)12、14、16和18d及生后日龄(P)1、3、7、14、21、28和42d小鼠肾内TβRⅡ的表达及其含量变化。结果:免疫组织化学结果显示TβRⅡ在各期肾小体、肾小管及集合管内均有表达,但在各期近端小管强烈表达,各期集合管表达较强,而各期肾小体、远端小管内表达较弱。体视学测量结果显示TβRⅡ在各期肾小体、肾小管及集合管的表达量均逐渐增加。免疫印迹结果显示TGF-βRⅡ随着肾的发育其表达量逐渐增加。结论:TGF-β可能对肾各结构的发育以及成熟肾各结构的维持起重要作用,尤其在近端小管的发育方面作用更为显著。     

小鼠肾脏发育中的细胞凋亡

目的：研究小鼠肾脏发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点,方法：应用光镜、电镜技术和TUNEL法分别对不同胚龄、生后日龄小鼠肾脏细胞凋亡进行了观察。结果：皮质凋亡细胞多出现在生肾区S小体之间和是肾小体内,凋亡高峰期在胚龄14－18d之间,髓质凋亡细胞出现在肾小鼠管上皮内,凋亡高峰期在生后7d 左右。超微结构观察可见皮质和髓质凋亡细胞主要表现为核固缩,染色质凝集,细胞皱缩。皮质和髓质凋亡细胞结局为,被邻近细胞吞噬,或脱落到肾小管腔内,结论：小鼠肾脏发育过程中确有细胞凋亡;皮质中细胞凋亡与生肾区的出现和肾小体发育完善有关,髓质中细胞凋亡与髓质中肾小管和集合小0管的有发育完善有关。     

NGF和bFGF及其受体在金黄地鼠神经管的定位

用免疫组织化学和免疫电镜方法研究了神经生长因子 (NGF)和碱性成纤维细胞因子 (b FGF)及其受体 (Trk A、FGFR)在金黄地鼠神经管发育中的定位分布。结果显示 :NGF和 b FGF的表达时序不同 ,但与各自受体的表达时序基本一致 ,其定位相似。受精后第 8d即出现 b FGF阳性细胞 ,NGF于第 9d出现 ,随着胚龄增加 ,免疫阳性着色逐渐增强 ,二者均定位于神经细胞胞质、神经管内界膜、外界膜 ,脊索和脊神经节细胞胞质中 ,b FGF还分布于神经细胞核。第 8d可检测到少量散在的 FGFR金标颗粒 ,Trk A于第 9d出现 ,随着胚胎的发育 ,金标颗粒逐渐增多 ,主要定位于细胞膜、胞质的基质、内质网、核膜及胞核中。上述结果表明 ,NGF、b FGF及其受体在金黄地鼠胚神经管形成和分化中按着一定的时序出现于细胞的一定部位     

水通道蛋白2、 3、 4在小鼠肾集合管发育中的表达

目的:观察水通道蛋白(AQP)-2、 3、 4在小鼠肾集合管发育中的表达,探讨其与集合管发育的关系及作用.方法:免疫组织化学技术结合体视学方法半定量检测AQP-2、 AQP-3及AQP-4的表达.结果:AQP-2从胚龄17d开始表达在集合管主细胞游离面细胞膜,到生后1d其阳性表达的游离面细胞膜面密度值逐渐增加,此后无明显变化;AQP-3、 AQP-4在胚龄14d集合管侧基底细胞膜(基底膜和侧膜)可见微弱表达,并随胚龄的增长而增加,到生后1d达最高,以后无明显变化.结论:AQP对小鼠出生前后肾水平衡具有重要的调节作用,其AQP-2的作用发生在出生后,而AQP-3、 AQP-4的作用发生在出生前.     

水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

目的观察水通道蛋白-2（AQP-2）和水通道蛋白-4（AQP-4）在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着13龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。