分析染色体畸变人外周血淋巴细胞培养时间的探讨

本文对人外周血中淋巴细胞培养时间进行了研究,在动态观察中外周血的淋巴细胞36小时开始出现分裂相、40小时达第一次高峰,分裂指数为7.2％,分裂细胞全部为M_1期。52小时M_2细胞相达51.3％,M_3细胞相为0.3％。40小时淋巴细胞培养的分裂相10例均值为9.08％,分裂相中的中期为74.0％,全部为M_1细胞相,因而质量完全符合需要,故40小时培养的人外周血淋巴细胞实验法是分析染色体畸变的较好的方法。     

两株转移能力不同的小鼠腹水型肝癌(H_(22))某些生物学特性的比较研究

本实验从肿瘤移植成活率、淋巴道转移率、细胞形态学、染色体组成、细胞电泳率等方面在两种不同品系的小鼠之间观察并比较了小鼠腹水型肝癌H_(22)和H_(22)/F_(20)的上述生物学特性及差别。光镜和透射电镜的观察结果提示,H_(22)和H_(22)/F_(20)瘤细胞是来源于上皮组织、分化较低的恶性肿瘤。肿瘤移植成活率和淋巴道转移率的比较观察表明,H_(22)/F_(20)瘤细胞的移植成活率和淋巴道转移率均高于H_(22)瘤细胞。染色体的分析显示H_(22)和H_(22)/F_(20)瘤细胞不仅干系细胞的众数不同(H_(22)为44,H_(22)/F_(20)为43),而且二者的标记染色体的数目及形态也有差别。细胞电泳率的测定结果表明,H_(22)/F_(20)瘤细胞的电泳率显著低于H_(22)细胞。本文讨论了H_(22)和H_(22)/F_(20)瘤细胞的上述表型差别与淋巴道转移率增高之间的可能关系,以及宿主和环境的选择作用对H_(22)瘤细胞的影响。     

BABL/C×C57BL/6杂交F1代小鼠H22肝癌实体瘤模型的建立

目的探讨H22细胞在BABL/C×C57BL/6杂交F1代小鼠的成瘤性,为研究移植物抗肿瘤效应和移植物抗宿主病提供实验对象。方法BABL/C来源的H22肝癌细胞接种于杂交F1小鼠皮下,观察成瘤状况,并用流式细胞仪检测H22细胞的主要组织相容抗原复合物分子。结果每只F1小鼠接种2×106个H22细胞时,成瘤率为100%,无自发缓解;接种第14天,肿瘤体积的变异系数23%~34%;H22细胞的H-2Kd表达率(75.70±9.32)%。结论H22细胞可成功地接种于F1小鼠皮下成瘤,建立杂交F1代实体瘤动物模型。     

白纹伊蚊(Aedes albopictus)细胞株的建立及其特征

从白纹伊蚊(Aedes albopictus)初孵幼虫组织建立三个细胞株。其中两个作过系统研究,目前为止传至21、34、44代次。细胞类型以多边形上皮细胞为主(约占90％)掺杂极少数的梭形细胞、双核细胞。细胞生长迅速而恒定,对数期二倍增长时间均为11小时,接种6天细胞能增殖至原来的10倍左右。细胞接种后2小时贴壁,8小时少量分裂,24小时分裂数达高峰。细胞核学特征以二倍体为主(占74—90％)。三个细胞株冷冻贮存于液氮(-196℃)中,一年后仍有94％能复活。对细胞株作外来因子检查,结果阴性。初步试验证明细胞系对六种病毒有敏感性。     

流行性出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

用流行性出血热病毒(EHFV)陈株血凝素(HAN)免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤生长孔率为60％,阳性率为22％,三次克隆化培养阳性率达100％,通过筛选建立一株杂交瘤细胞1H8。其腹水单克隆抗体(McAb)的间接免疫荧光滴度为1:16×10~4,其血凝抑制滴度为1:5120。经染色体核型分析,1H8杂交细胞染色体为85—105条,每个细胞均含1—2条中着丝点标记染色体。经琼脂双扩散试验,1H8McAb属IgG2b亚类。该McAb与17株不同来源的EHFV都有免疫荧光反应,且对5株不同来源的EHFV—HAN具有血凝抑制活性。故1H8为血凝抑制抗体。这说明17株EHFV都具有血凝素抗原决定簇,但是1H8McAb对它们具有不同的活性。     

五倍子酸对小鼠胃癌MFC和肝癌H22细胞增殖的抑制作用

目的:研究五倍子酸(GA)对小鼠胃癌MFC细胞及小鼠肝癌H22细胞增殖的影响。方法:分别用3.125、6.250、12.500、25.000、50.000和100.000mg/L的GA处理MFC和H22细胞48h后,应用MTT法检测细胞的增殖抑制率;分别以6.25、12.50和25.00mg/L的GA作用MFC和H22细胞48h后,应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;建立移植性H22和MFC荷瘤小鼠模型,分别给予0.50、0.25和0.20g/kgGA、环磷酰和生理盐水10d后计算抑瘤率。结果:GA呈剂量依赖性抑制MFC及H22细胞增殖(F=70.845、145.444,P<0.001)。GA使MFC细胞和H22细胞均阻滞在G0/G1期(F=80.432、42.903,P<0.001),各组MFC细胞凋亡率差异有统计学意义(F=45.831,P<0.001)。不同剂量GA对荷MFC和H22瘤小鼠的抑瘤率差异有统计学意义(F=206.264、110.906,P<0.001)。结论:GA具有较好的抑制MFC和H22细胞增殖的作用。     

小鼠肝癌H22细胞克隆株的选择及其细胞特性比较

目的 对武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H22细胞(武汉H22)进行克隆培养,并研究克隆细胞的特性。方法 用有限稀释法对武汉H22细胞进行克隆,从中筛出12株细胞。应用SDS-PAGE电泳、流式细胞仪、免疫组化等方法,对它们的染色体数目、DNA含量、蛋白质分布、镜下细胞面积等方面,进行了比较。结果 12株克隆细胞染色体数目为41-45条;DNA含量、蛋白质分布比原瘤株更加集中;H2E10克隆株的镜下细胞面积与其他瘤株显著不同。结论 H22细胞克隆株之间的某些细胞特性不同,但保持了原瘤株的基本特性,且其染色体、蛋白质分布比原瘤株更加集中。     

L1210细胞系克隆株的某些细胞学特性比较

目的 对L1210细胞系进行细胞克隆,筛选出生长旺盛的细胞克隆,对不同克隆细胞及原代细胞的某些细胞学特性进行比较研究。方法 扫描电镜观察细胞表面结构;用流式细胞仪测定细胞DNA含量;免疫组化染色法测定细胞蛋白质的分布。结果 扫描电镜观察细胞表面结构,克隆株L289、L2H7、L2H8、L3B12及L3E11都有大量微嵴、微皱褶,但疏密程度不同;L2C9的微嵴和微皱褶较为粗大且有丰富的微绒毛;L3F9细胞表面有大量的突起。克隆细胞株DNA含量从小到大依次为L2H7、L3F9(8．3pg)、L2H8(8．5pg)、L2C9(8．6pg)、L3B12(8．7pg)、L2B9(8．9pg)及L3E11(9．0pg);原代细胞DAN含量为8．8pg。克隆细胞染色体数目分别为48,58,64,66,62,63,58条,最少为48条(L2B9),最多为66条(L3B12);原代细胞染色体数目从12～78条不等,主流染色体为62～63条,所占比例为21．6％。免疫组化染色结果显示,不同克隆细胞与10种抗体反应阳性率及阳性反应程度不同;且克隆细胞反应阳性率普遍高于原代细胞。结论 不同克隆细胞之间某些细胞学特性有差别,说明原代L1210细胞间已有明显异质性;克隆细胞较原代细胞的均一性好。     

骆驼蓬总碱软胶囊对S180肉瘤和H22肝癌细胞体内增殖生长的影响

目的 观察骆驼蓬总碱软胶囊对移植型鼠源S180内瘤和H22肝癌细胞在荷瘤动物体内生长增殖的影响.方法 通过对昆明种受试小鼠右腋皮下接种S180肉瘤和H22肝癌细胞,分别建立体内两种不同移植型肿瘤病理模型,观察骆驼蓬总碱软胶囊在浓度为60 mg/kg、30 mg/kg及15 mg/kg连续ig给药10 d,对荷瘤小鼠体内瘤细胞裂殖生长增重的抑瘤作用及对脾脏指数、胸腺指数的影响.结果 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源移植型S180肉瘤细胞在三批次荷瘤小鼠体内的增殖生长均具有明显的抑制作用,抑瘤率在25.44％～48.81％之间,剂量组30 mg/kg抑瘤作用相对较好;对移植型H22肝癌细胞在三批次荷瘤小鼠体内的抑瘤率在21.91％～28.23％之间,剂量组60mg/kg抗癌作用相对较好;且显示对两种不同荷瘤小鼠的脾脏指数、胸腺指数均未见有显著性异常影响.结论 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源S180内瘤细胞和H22肝癌细胞在荷瘤小鼠体内增殖生长均具有较好的抑瘤作用,且对荷瘤小鼠免疫器官亦未见有明显异常性毒性损伤的影响.     

Hca—F25/L不同转移力细胞克隆的筛选及其特性

通过软琼脂克隆法及有限稀释法,从(Hca-F25/L)细胞系中分离出五株不同转移力的克隆细胞,它们的共同特点是:均沿淋巴系统转移,仅有极少数(1.88%)同时伴有肺转移;五株克隆及其亲代对角蛋白单抗(HK2)均呈现阳性,提示尽管它们分化很低,但仍保持了上皮组织的特性;经染色体分析证实,每一克隆内同一核型的细胞占绝大多数,它们和亲代有相同的四个标记染色体,表明它们之间有“血缘”关系。它们的不同之处表现在:在615小鼠体内均能致瘤(100%),但在淋巴结中的转移率及其转移程度有很大的差别,其中一株高转移细胞系(78.6%—89.4%),三株中转移细胞系(33.3%—66.6%),一株低转移细胞系(15%～15.4%);五株克隆及其亲代的干系核型也各不相同;在细胞形态上和细胞电泳率方面,高、低转移细胞系与亲代细胞系三者之间有明显的差别。本文较确切地证明了 Hca 瘤株在转移表型和核型上的异质性。同时,也补充和发展了 H22/Hca 肿瘤系统。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的 观察塞来昔布对肝癌增殖的抑制作用.方法 以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究对象,四唑氮蓝还原法(MTT)观察不同浓度和作用时间的塞来昔布对细胞增殖的抑制作用,流式细胞技术检测细胞周期,并用小鼠肝癌细胞株H22建立昆明鼠移植瘤模型,观察塞来昔布对移植瘤生长的抑制效果.结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞SMMC-7721生长有显著的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性;塞来昔布(40 μmol/L)作用于SMMC-7721细胞36h后,G1期细胞比率由44.7%上升至49.9%,S G2/M期细胞比率由55.4%下降至50.1%,细胞增殖受抑制.在体动物实验表明,塞来昔布对移植瘤的生长和局部转移有显著的抑制效果.结论 环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对不同来源的肝癌细胞株均有增殖抑制作用,可能是预防和治疗肝癌的重要候选药物之一.     

Isolation and characterization of clonal cell lines with different metastatic capacity from hepato-carcinoma in mice

By means of soft agar colonization and limiting dilution, 5 clonal cells with different metastatic capacity, [one with high metastatic rate (78.6-89.4%), three moderate (33.3-66.6%) and one low (15-15.4%)], were separated from Hca-F25/L cell line. Their common features were: All clones metastasize to lymphatic system except a small percentage (1.88%) associated with lung metastasis; five clones as well as their parents all reacted with Keratin monoclonal antibody (HK2), which indicated the epithelial character with poor differentiation; Cells of each clone have highly identical karyotype. Five clone lines have similar marker chromosomes (M1, M2, M3, M4) with different stem line karyotypes. We also found different features of five cell lines in pathomorphological indicators and cell electrophoresis rate. Our results indicated that the Hca-F25/L strain is heterogeneous in phenotype and karyotype.     

高/低侵袭转移性肺癌干细胞模型的建立

目的以人肺癌NCI-H446细胞为研究对象,建立一种高/低侵袭性肺癌干细胞(high/low invasion lung tumor stemcells,H/L-ILTSCs)模型,并鉴定其生物学特性。方法首先,利用transwell小室迁移实验分离高/低迁移性NCI-H446细胞。取高/低迁移性NCI-H446细胞采用transwell小室侵袭实验分离高/低侵袭转移性NCI-H446细胞。然后,以CD133、CD44为肺癌干细胞(lung tumor stem cells,LTSCs)表面标志,采用磁珠分选法分离NCI-H446细胞H/L-ILTSCs并进行纯度鉴定。最后,采用MTT法、transwell侵袭及免疫缺陷动物成瘤等实验,检测H-ILTSCs、L-ILTSCs及NCI-H446细胞的生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力。结果 H-ILTSCs生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力均高于L-ILTSCs及NCI-H446细胞,而L-ILTSCs与NCI-H446无显著差别。结论人肺癌细胞NCI-H446中可以分离和富集H/L-ILTSCs,且二者存在着干性差别。     

1种阿霉素新型前体药物的抗肿瘤活性作用研究

目的考察新合成目标前体药物N-苄氧羰基-丙氨酰-丙氨酰-天冬酰-阿霉素在体外对肿瘤细胞增殖的影响,建立合理的前体药物体外抗肿瘤的评价方法。方法分别采用MCF-7和Caski2种肿瘤细胞株．前药处理48h及72h后,分别通过MTr法对常氧及低氧诱导培养的细胞进行检测。结果常氧培养条件下,测得目标前药对MCF．7和Caski细胞株的半数抑制浓度IC50分别大于（137．92＋6．68）μmol／L和（25．3±4．12）μmol／L．其对2种细胞株的增殖抑制作用较原药分别降低了54倍及40倍以上。低氧诱导培养条件下,目标前药对Caski细胞株半数抑制浓度,C。为（12．6±4．30）μmol／L,其对Caski细胞株的增殖抑制作用较原药降低了49倍：而与常氧培养下相比,其对Caski细胞株的增殖抑制作用提高了2倍。结论N-苄氧羰基-丙氨酰-丙氨酰-天冬酰-阿霉素与阿霉素相比对体外培养的肿瘤细胞增殖抑制作用明显降低。初步达到了通过化学修饰降低细胞毒性的作用。     

3种常用抗癌药物对宫颈癌Hela细胞和肿瘤干细胞抑制作用研究

目的:探讨3种常用抗肿瘤药物对宫颈癌Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率。方法:采用无血清悬浮培养法从宫颈癌Hela细胞中分离出Hela肿瘤干细胞,鉴定后研究丝裂霉素、顺铂和紫杉醇等3种抗癌药物对Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率并进行比较。结果:不同质量浓度的3种抗肿瘤药物对肿瘤细胞和肿瘤干细胞均有抑制作用,且呈剂量依赖性(r=0.944,P<0.05)。在最高终浓度40 mg/L时,丝裂霉素对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制率分别为(88.75±2.59)%和(38.95±5.37)%;顺铂的抑制率分别为(92.28±1.57)%和(52.68±3.55)%;紫杉醇的抑制率分别为(75.22±0.99)%和(36.71±2.42)%。结论:3种药物对肿瘤干细胞的抑制率均明显低于肿瘤细胞的抑制率(P<0.05);比较发现对于肿瘤细胞和肿瘤干细胞,顺铂抑制率均最高,其次是丝裂霉素,紫杉醇的抑制率最低(P<0.05),说明宫颈癌肿瘤干细胞对目前常用的3种治疗药物有不同程度的耐受。     

ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达及意义

目的:探讨ABCG2在不同微环境下在肾上腺皮质癌细胞中的表达和意义.方法:利用SW-13细胞株建立体内及体外微环境模型,流式细胞技术检测ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌组织及细胞中的表达情况.结果:ABCG2在裸鼠转移淋巴结中的表达率[(5.41±2.57)%]明显高于标准培养基[(1.04±1.01)%]、干细胞...     

B16M高低转移株的筛选及其生物学异质性的分析

目的 筛选B16M高低转移株,以探讨B16M的转移异质性及机制.方法 通过B16M自发肺转移模型筛选出转移性能不同的细胞株,并用实验性和自发性肿瘤转移模型验证其在体内生长、转移性. 通过细胞增殖、3H-TdR参入实验、流式细胞技术、细胞侵袭离散实验研究了高、低转移B16M细胞株体外增殖能力、侵袭能力以及对离散因子的反应的差异,Western印迹实验研究细胞c-met表达及活化水平. 结果在所筛选出的3株可疑高转移B16M细胞株中,H3 B16M细胞接种于同系C57BL/6小鼠体内所形成的原发瘤重量、实验和自发性肺转移结节数明显高于其他细胞株;该细胞株增殖能力、侵袭性及对离散因子的反应能力的也明显高于其他细胞株.c-met表达及磷酸化水平也升高.结论成功的筛选出B16M 高、低转移细胞株,两者在细胞增殖、侵袭能力、离散能力等方面有差别.这种差异可能与c-met有关.     

大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD~(133)肿瘤干细胞增殖的影响

目的:探讨大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD133肿瘤干细胞增殖的影响。方法:取对数生长期的肝癌SMMC7721细胞,分别加入不同浓度的大豆黄酮,在24、48和72 h的时间点上,用MTT法测定大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞的抑制生长率。另外,将培养的细胞与CD133蛋白荧光素一抗标记混合,37℃孵育反应20 min,在525 nm波长下进行流式细胞仪检测。结果:大豆黄酮对于肝癌SMMC7721细胞在24、48和72 h内均有明显的抑制作用,并且抑制率随浓度的增加而增加。经大豆黄酮处理24 h后,CD133肿瘤干细胞的数量也显著减少。结论:大豆黄酮不仅具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,而且也具有抑制CD133肿瘤干细胞增殖的作用。     

涎腺腺样囊性癌单细胞增殖的实验研究

目的探讨腺样囊性癌肺高转移细胞株（ACC—M）肿瘤干细胞存在的可能性,并为今后关于其肿瘤干细胞生物学特性的研究提供一定的理论依据和实验数据。方法采用单细胞体外培养的方法了解ACC—M的分裂和增殖的特点。结果在单细胞体外培养6d后,ACC—M单细胞只有23．64％的细胞存活,其中仅有8．62％持续分裂、增殖。结论ACC—M肿瘤细胞存在肿瘤干细胞,并不是所有的ACC-M细胞都能克隆增殖,只有一小部分细胞能不断地分裂增殖,大多数细胞最终死亡或凋亡。     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L（GH0组）、5μg/L（GH5组）、25μg/L（GH25组）、50μg/L（GH50组）、100μg/L（GH100组）和500μg/L（GH500组）的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加（P〈0.05）;GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）,Bax mRNA和蛋白表达显著降低（P〈0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.05）。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。