血管活性肠肽对人脐静脉内皮细胞Ca~(2+)及其膜通道的调控

目的　观察血管活性肽 (VIP)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)膜上Ca2 + 通道及胞浆内游离Ca2 +([Ca2 + ]i)的调控作用。方法　应用共聚焦激光扫描显微术 (CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体外培养HU VEC胞浆内 [Ca2 + ]i、膜上Ca2 + 通道开放情况进行观察。结果　VIP促使HUVEC胞膜上Ca2 + 通过道的开放概率和胞浆内 [Ca2 + ]i 均明显升高。结论　IVP对HUVEC胞浆内 [Ca2 + ]i的调节可能除通过细胞内储存的Ca2 +释放外还依赖细胞膜上Ca2 + 通道开放 ,从而达到其调节效应     

生长抑素对人脐静脉内皮细胞Ca2+及其膜通道的调控研究

目的观察生长抑素(SOM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)膜上Ca2+通道及胞浆内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的调控作用.方法应用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体培养HUVEC胞浆内[Ca2+]i、膜上Ca2+通道开放情况进行观察.结果SOM促使HUVEC胞浆内[Ca2+]i明显升高.胞膜上Ca2+通道的开放出现1～2 min的潜伏期后也开放但其开放概率明显降低.结论SOM对HUVEC胞浆内[Ca2+]i的调节可能首先通过细胞内储存的Ca2+释放及稍后的细胞膜上Ca2+通道开放,从而达到其调节效应.     

生长抑素对人脐静脉内皮细胞Ca2+及其膜通道的调控研究

目的：观察生长抑素(SOM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)膜上Ca2 通道及脑浆内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的调控作用。方法：应用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体培养HUVEC脑浆内[Ca2 ]i、膜上Ca2 通道开放情况进行观察。结果：SOM促使HUVEC脑浆内[Ca2 ]i明显升高。胞膜上Ca2 通道的开放出现l-2min的潜伏期后也开放但其开放概率明显降低。结论：SOM对HUVEC脑浆内[Ca2 ]i的调节可能首先通过细胞内储存的Ca2 释放及稍后的细胞膜上Ca2 通道开放，从而达到其调节效应。     

人脐静脉内皮细胞膜上钙和钾离子通道

目的：观察体外培养人脐静脉内皮细胞膜上钙离子（Ｃａ＾２＋）通道和Ｃａ＾２＋激活的钾离子（ｋｃａ）通道。方法：膜片钳单通道记录技术。结果：体外培养人脐静脉内皮细胞上含有Ｃａ＾２＋通道和Ｋｃａ通道,但其通道分布概率和开放概率均不高．结论：人脐静脉内皮细胞作为一种非兴奋性细胞。其细胞膜上含有的Ｃａ＾２＋通道和Ｌｃａ通道,对细胞浆内Ｃａ＾２＋浓度的维持、Ｃａ＾２＋补充来源和细胞电位的维持等均具有重要意义,     

补体膜攻击复合物刺激血管内皮细胞胞浆游离钙离子浓度的变化

目的 在单个细胞水平，观测亚溶破补体膜攻击复合物（MAC）诱导的血管内皮细胞[Ca^2 ]i的动态变化。方法 将原代培养的人脐静脉内皮细胞，以Fluo-4/AM(1-6μmol/L）和0.02%PluronicF-127进行细胞钙荧光指示剂负载后，于0℃组装亚溶破剂量的MAC，在37℃条件下，以LSCM实时监测MAC沉积引起的胞浆钙荧光强度的变化。结果 MAC沉积后，多数细胞的钙荧光强度迅速增强，以后随时间的推移，升高的钙荧光逐渐下降，直至恢复至静息水平，定量分析选定的胞浆区域钙荧光强度的变化发现，不同细胞在[Ca^2 ]i的变化高度，持续时间和胞内钙振荡 的特征等方面存在异质性。结论 MAC沉积到内皮细胞表面后，可诱导胞浆游离钙离子的浓度增高，且不同细胞[Ca^2 ]i的变化存在明显的异质性。     

生长抑素对人脐静脉张力的调节及其局部来源

目的　观察生长抑素（ＳＯＭ）是否和如何参与对人脐静脉（ＨＵＶ）张力的调节及是否存在ＨＵＶ 局部来源的ＳＯＭ。　方法　应用机械电换能器记录ＳＯＭ 对ＨＵＶ张力的影响及应用原位杂交（ＩＳＨ）技术观察体外培养人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）是否表达ＳＯＭ 的ｍ ＲＮＡ。　结果　当存在ＨＵＶＥＣ时,ＳＯＭ 使ＨＵＶ明显舒张;不存在ＨＵＶＥＣ时,ＳＯＭ 并不使ＨＵＶ明显舒张。原位杂交显示体外培养ＨＵＶＥＣ出现ＳＯＭ ｍ ＲＮＡ的阳性信号,其阳性百分率受血管活性多肽（ＶＰｓ）的调节。　结论　ＨＵＶＥＣ具有合成ＳＯＭ 的能力并成为ＨＵＶ 局部ＳＯＭ 的一个重要来源,ＳＯＭ 参与了对ＨＵＶ 张力的局部调节作用（ＨＵＶＥＣ依赖性舒张ＨＵＶ）,并可能存在自身反馈机制。     

重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞PCNA表达的影响

目的研究重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响。方法从脐静脉体外分离培养HUVEC，采用细胞培养及免疫组织化学方法检测不同剂量rHuEP0（10U／ml、20U／ml、40U／m1）对HUVEC增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。结果对组照及10U／ml、20U／ml、40U／mlrHuEP0实验组内皮细胞PCNA阳性表达百分率分别为（31±3）％、（40±5）％、（68±6）％和（65±5）％，与对照组相比，rHuEPO作用后内皮细胞PCNA表达明显增强（P〈0．05），且随rHuEPO剂量提高作用增强，呈剂量效应关系。结论rHuEP0可促进体外培养内皮细胞增殖。     

激活素受体样激酶1促进人脐静脉内皮细胞增殖和迁徙

目的： 研究激活素受体样激酶1（ALK1）对人脐静脉内皮细胞的作用。 方法： 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），RT-PCR分析ALK1和ALK5在HUVEC激活状态下表达的变化。脂质体转染pcDNA3.1+ALK1到HUVECs，流式细胞仪检测HUVECs增殖的改变，boyden小室检测ALK1对HUVECs迁徙的影响。 结果： ALK1在HUVEC安静状态高表达，ALK1能促进HUVECs的增殖和迁徙。 结论： ALK1通过促进内皮细胞的增殖和迁徙在血管重塑中发挥作用。     

MAPK和Ca2+通路对介导弱氧修饰LDL增强HUVEC PAI-1活性

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂（PAI－1）活性的影响及促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联反应及第二信使Ca^2 在其中使用。用mmLDL作用于传代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC），发色底物法检测PAI－1活性的变化，用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化。结果显示，几种不同浓度的mmLDL(12.5-200mg/L)作用HUVEC 12h,PAI-1活性显著增加。PD98059（60μmol/L)能阻断mmLDL对PAI－活性的诱导反应。mmLDL(50mg/L)能显著诱导HUVEC胞内游离钙离子浓度增高。表明mmLDL作用HUVEC能诱导PAI－1活性明显增加，MAPK级联反应和胞内Ca^2 可能起到重要作用。     

脑热清对小鼠的腹腔巨噬细胞内游离钙及活性氧的作用

目的：实时监测脑热清口服液（NRQ）对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧（ROS）游离钙（[Ca^2＋]i）的作用。方法：取小鼠腹腔巨噬细胞，原代培养24小时，分别以荧光探针二氯荧光素二酯（H2 DCFDA）和Fluo-3-AM标记细胞内ROS及[Ca^2＋]i，并用EDTA和维拉帕米螫合细胞外钙，阻断细胞膜钙离子通道，通过激光共聚焦显微系统动态观察NRQ的作用。     

体外诱导人脐静脉间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下分离的间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可能性,以期为脐静脉MSCs的神经移植提供理论依据。通过在无菌条件下收集正常足月剖宫产新生儿脐带并对脐静脉进行胶原酶消化,将获取的内皮及内皮下贴壁细胞进行培养。经传代培养及免疫细胞化学鉴定后,取第2代细胞用β-巯基乙醇和二甲基亚砜诱导其向神经元方向分化,并以免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果表明脐静脉经胶原酶消化后的贴壁细胞主要表现为间充质样细胞和内皮细胞;传2代后,间充质样细胞可得到纯化和扩增。免疫细胞化学染色显示诱导前细胞不表达血管性血友病因子(vWF),诱导后MSCs表达巢蛋白(nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE),而不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。以上结果提示,来源于脐静脉内皮及内皮下的MSCs在体外可以培养、扩增,并具备在诱导剂的作用下向神经元样细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源。     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、iNOS mRNA表达的影响

目的：观察脂多糖（LPS）对人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、iNOSmRNA表达的影响，在分子水平上进一步探讨LPS影响人脐静脉内皮细胞分泌ET-1、NO的机制。方法：选用体外培养的第3代人脐静脉内皮细胞，以100 μg/L浓度的LPS与之共孵育6 h。提取总RNA，运用半定量RT-RCR的方法，对ET-1、eNOS、iNOS mRNA的表达情况进行分析。结果：ET-1的灰度比值分别为：正常对照组0.82，LPS组1.32；eNOS的灰度比值分别为：正常对照组1.20，LPS组0.65；iNOS组的灰度比值分别为：正常对照组0.20，LPS组0.19。结论：低浓度的LPS对人脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA的表达有促进作用，对eNOS mRNA的表达有抑制作用，对iNOS mRNA的表达则无显著作用。     

Angiotensin II regulates endothelial cell migration through calcium influx via T-type calcium channel in human umbilical vein endothelial cells

Aim: The T-type calcium channel is expressed in vascular endothelial cells, but its role in endothelial cell function is yet to be elucidated. We analysed the endothelial functional role of T-type calcium channel-dependent calcium under angiotensin II (Ang II) stimulation. Methods: Human umbilical vein endothelial cells were co-incubated with hormone at 10⁻⁷ m and either Efonidipine 10⁻⁵ m or Verapamil 10⁻⁵ m or Mibefradil 10⁻⁵ m or Wortmannin 10⁻⁶ m . The contribution of Ang II receptors was evaluated using PD123319 10⁻⁷ m and ZD 7155 10⁻⁷ m . The calcium ion concentration was observed using Fluo-3 acetossimetil ester. The cells were observed after 3, 6, 9 and 12 h. Results: The microfluorescence method points out that Ang II induces intracellular calcium modulation in time by distinct mechanisms. AT2 receptor blockade is necessary to observe significant increase in [Ca²⁺]_i levels. Pre-treatment with Mibefradil abolishes Ang II -induced cell migration. Conclusions: Our data show that Ang II, via AT1 receptor, modulates calcium concentration involving T-type calcium channel and L-type calcium channel but only the calcium influx via T-type calcium channels regulates endothelial cell migration which is essential for angiogenesis.     

The expression of E-selectin and chemokines in the cultured human lymphatic endothelium with lipopolysaccharides

This study investigated the expression of selectins and chemokines in cultured human lymphatic endothelial cells stimulated with lipopolysaccharides. In microarray, vascular cell adhesion molecule-1 and intercellular adhesion molecule-1 gene expressions in the lymphatic endothelium with lipopolysaccharides did not change at 0.5 h but increased two- to three-fold at 12 h, whereas E-selectin increased 10-fold at 0.5 h and 68-fold at 12 h compared with untreated cells. The E-selectin mRNA and protein increased in the lymphatic endothelial cells with lipopolysaccharides at more than two-fold levels compared with human umbilical vein endothelial cells. Induction of Cys-Cys chemokine ligand 2, 3, 5, 7, 8 and 20 mRNAs in the lymphatic endothelial cells with lipopolysaccharides was detected in microarray and real-time PCR. The Cys-Cys chemokine ligand 2, 5 and 20 mRNA amounts in cells with high concentration lipopolysaccharides were larger in the lymphatic endothelial cells than in human umbilical vein endothelial cells. The Cys-Cys chemokine ligand 3 and 8 mRNAs were not detected in human umbilical vein endothelial cells. Induction of Cys-X-Cys chemokine ligand 1, 3, 5, 6 and 8 mRNAs was detected in the lymphatic endothelial cells with lipopolysaccharides. The Cys-X-Cys chemokine ligand 3, 5 and 8 mRNA amounts in cells with high concentration lipopolysaccharides were larger in the lymphatic endothelial cells than in human umbilical vein endothelial cells. In conclusion, it was demonstrated that the cultured human lymphatic endothelial cells express E-selectin and phagocyte-attractive chemokine genes.     

胰蛋白酶消化法体外培养和鉴定人脐静脉血管内皮细胞*☆

背景：体外建立稳定可靠的人脐静脉血管内皮细胞模型,目前培养方法缺乏统一的标准。 目的：探索脐静脉内皮细胞的体外培养的方法。 方法：采用2.5 g/L胰蛋白酶和0.02%EDTA消化、分离、体外原代培养及消化传代脐静脉内皮细胞,简化完全培养液组分(不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子),当原代培养细胞80%以上汇合,根据细胞特有的形态学特征和Ⅷ因子进行内皮细胞的鉴定。 结果与结论：种植在培养瓶中的内皮细胞2 h贴壁生长,24 h换液后内皮细胞80%融合,细胞状态好,内皮细胞呈单层铺路石样外观,经过镜下观察和Ⅷ因子相关抗原鉴定证明是脐静脉内皮细胞。证实用胰蛋白酶灌注脐静脉是一种简单、实用的获得人脐静脉血管内皮细胞的方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型。关键词：人脐静脉;血管内皮细胞;细胞培养;形态学;鉴定 缩略语注释：HUVECs: human umbilical vein endothelial cells,人脐静脉血管内皮细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.008     

复方丹参滴丸对人血管内皮细胞功能及形态保护作用的研究

目的： 观察复方丹参滴丸对细菌内毒素（LPS）所致人血管内皮细胞功能及形态结构损伤的作用。 方法： 人脐静脉内皮细胞培养，建立脂多糖损伤模型（以10 mg/L的LPS培养液培养细胞12 h），按分组分别把不同浓度的丹参滴丸（1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L、0.1 g/L）于损伤前、损伤后加入，分别进行细胞活力、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、内皮素（ET-1）、细胞内钙浓度的测定及倒置显微镜、倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜、透射电镜等形态学指标观察。 结果： 损伤后给不同浓度丹参滴丸对LPS所致人血管内皮细胞损伤均有明显减轻（P<0.05）。其中0.5 g/L作用最为突出(P<0.01)。损伤前给药只有浓度0.5 g/L、0.25 g/L对LPS所致内皮细胞损伤有明显减轻(P<0.05)，而高浓度(1 g/L)、低浓度(0.1 g/L)虽亦有减轻，但无统计学意义(P>0.05)。损伤前、后分别给予不同浓度滴丸后，LPS所致血管内皮细胞形态结构损伤均有明显减轻。 结论： 丹参滴丸对血管内皮细胞具明显保护作用。