Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的 探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法 右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型；用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力；应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响；应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果 Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍；AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高，而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

Aβ25-35注射诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化

目的　观察大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 5后 ,神经元ser199/ser2 0 2、ser396、thr2 31等位点tau蛋白磷酸化的水平以及糖原合成激酶 3β(GSK 3β)的活性变化 ,探讨Aβ2 5 3 5与tau蛋白异常磷酸化的关系及机制。方法　应用脑立体定向技术给成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 55nmol,术后 14d ,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变 ,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术观察大鼠海马tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的表达水平 ,免疫蛋白印迹技术检测海马GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平变化。 结果　凝聚态Aβ2 5 3 5组神经元纤维走行紊乱、增粗、肿胀 ,密集成宽带状 ,轴突深染。海马神经元tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的阳性表达数 (分别为 38 2± 5 9,10 7 6± 8 4 ,78 4± 3 7)明显高于正常组和生理盐水组 (P <0 0 1) ,GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平亦明显高于正常组和生理盐水组。 结论　海马背侧注射Aβ2 5 3 5可通过激活GSK 3β诱导tau蛋白发生异常磷酸化。     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型;用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响;应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍;AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高,而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

阿尔茨海默病海马CA1区p75NTR和磷酸化tau蛋白神经元的定量观察

目的观察阿尔茨海默病(AD)海马CA1区p5NTR的表达与磷酸化tau蛋白的关系.方法利用组织化学和免疫细胞化学方法分析由荷兰脑库提供的10例女性AD患者及年龄、性别等与之匹配的10例健康意外死亡对照者的脑组织标本海马CA1区神经元总数、p75NTR神经元数目的差异及AD患者p75NTR和Alz-50共存.结果AD患者海马CA1区神经元总数明显低于对照组,但p75NTR神经元占总神经元的百分比明显高于对照组(P值分别为0.0002、0.001);AD海马CA1区Alz-50阳性神经元(个/mm2)为87.5±29.2,p75NTR和Alz-50双标神经元为76.4±26.6,后者占前者的百分比为86.6%±5.0%,二者在CA1区的分布呈正相关(r=0.79、P=0.006).结论AD患者海马CA1区p75NTR主要产生死亡信号,参与AD神经病理的形成.     

17β-雌二醇对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经突触可塑性的影响

目的探讨突触可塑性在17p雌二醇改善血管性痴呆（VD）大鼠认知功能障碍中所起的作用。方法选用〉16月龄雄性Wistar大鼠,应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练,将达到标准者随机分为3组：（1）假手术（Sham）组;（2）VD组;（3）VD＋雌二醇腹部皮下注射（E）组。应用免疫组织化学染色及RT—PCR的方法,检测大鼠海马CA1区微管相关蛋白2（MAP-2）和突触素（SYN）蛋白含量和mRNA表达水平的改变。结果术后60d,E组和VD组MAP-2和SYN表达均有下降,但VD组下降更为明显。结论17β-雌二醇相对增加VD大鼠海马CA1区MAP-2、SYN蛋白含量和mRNA的表达。提示相对增加与突触可塑性相关的MAP-2、SYN蛋白含量和mRNA的表达,可能是雌二醇改善VD认知功能障碍的机制之一。     

tau蛋白和磷酸化tau蛋白对神经系统疾病的影响

tau蛋白是一种神经元微管相关蛋白,参与轴突微管组装的调节。其磷酸化水平的增高与多种神经退行性疾病息息相关,如阿尔茨海默病、帕金森病、额颞叶痴呆、亨廷顿病,等。有研究表明其与脑血管病的发生发展密不可分。而昼夜节律作为维持机体日常生命活动以及体内稳态的重要调节器,受昼夜节律因子的调节,其紊乱可诱发神经退行性疾病相关致病蛋白的积累和相关致病激素的异常分泌,从而加剧疾病的进展。文中主要围绕磷酸化tau蛋白和昼夜节律对神经系统疾病的影响进行论述。     

β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景：通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。 目的：观察β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396] 、Tau[pS262] 及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396] 和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25~35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25~35的作用。提示β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。     

经颅电刺激对阿尔兹海默病大鼠学习记忆能力和海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达情况的影响

目的探讨经颅电刺激对阿尔兹海默病(Alzeheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力和海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠,随机分为:正常组、假手术组、模型组及经颅电刺激2 w、4 w、6 w组。采用大鼠侧脑室注射Aβ25-35凝聚态β-淀粉样肽,同时腹腔注射D-半乳糖的方法,建立AD动物模型。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习、记忆能力,HE染色,观察海马CA_1区形态学结构,免疫组化测定海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达情况。结果 (1)Morris水迷宫实验大鼠测试学习和记忆能力,经颅电刺激2 w组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05),经颅电刺激4 w组、6 w组与模型组比较,逃避潜伏期成绩均好于模型组,差异有统计学意义(P0.05);(2)随电刺激时间延长,经颅电刺激各组磷酸化tau蛋白量逐渐降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论经颅电刺激能够改善阿尔兹海默病大鼠的学习记忆能力,机制可能与下调海马CA_1区磷酸化tau蛋白表达有关,对细胞的重塑有积极影响,远期效果有待进一步研究。     

海马内注射纤丝状Aβ42诱导tau异常磷酸化的研究

目的　观察海马内注射纤丝状Aβ42 后神经元Ser 2 0 2位点磷酸化的tau蛋白 (PS2 0 2 tau)的表达 ,探讨Aβ42 与tau蛋白超磷酸化的关系。方法　应用立体定向技术对老年大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42 ,采用免疫组织化学染色方法 ,显示PS2 0 2 tau的表达情况 ,并进行图像分析。结果　纤丝状Aβ42 注射组双侧海马PS2 0 2 tau的表达明显高于正常组和双蒸水注射组 ,两侧海马PS2 0 2 tau的表达没有明显差异。结论　纤丝状Aβ42 能使PS2 0 2 tau的表达增加 ,提示它具有诱导tau蛋白超磷酸化的效应。     

β淀粉样蛋白25-35诱导皮质神经元tau蛋白过度磷酸化

目前阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)研究仍缺乏理想的动物模型,细胞模型通过复制AD的某些分子生化改变,可用于研究AD的发病机制和筛选治疗药物。脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的大量沉积和tau蛋白过度磷酸化是AD的两大主要分子生化改变。淀粉样瀑布学说认为Aβ可直接诱导神经元tau     

海马注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病大鼠模型的实验研究

目的：海马注射β-淀粉样蛋白（Aβ）建立阿尔茨海默病（AD）大鼠模型，并进行初步评价。方法：应用凝聚态Aβ1-40进行大鼠右侧海马齿状回（DG）背侧细胞带微量注射，2周后从学州记忆、海马组织病理和异常磷酸化tau蛋白表达的变化3个方面评价大鼠模型。结果：Aβ1-40注射后大鼠Morris水迷宫学习记忆能力明显受损（P〈0．01）；注射区内DG背侧细胞带神经元丢失（P〈0．01）；注射侧海乌内Aβ沉积；海马神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达显著增加（P〈0．01）。结论：凝聚态Aβ1-40海马注射具有明确的在体神经毒性作用，可导致大鼠认知功能下降以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达，可成功建立AD大鼠模型。     

Aβ40诱导SD大鼠海马细胞凋亡相关蛋白p53的表达

目的探讨β淀粉样蛋白40(Aβ40)诱导凋亡相关蛋白p53蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系。方法实验组将Aβ40立体定向微注射至双侧大鼠海马的CA1、CA2-CA3区诱发其沉积．对照组注射等容量的生理盐水。通过p53单克隆抗体免疫组化法观察凋亡相关蛋白p53的表达，并通过原位TdT末端标记(TUNEL)法、透射式电镜法观察了Aβ40的脑内致凋亡效应。结果术后3d、7d的实验组大鼠切片上可见海马区明显的p53蛋白的表达，生理盐水对照组大鼠的相应切片检测未见p53蛋白的表达；术后3d、7d的TUNEL染色切片上可见海马区明显棕褐色阳性着染的凋亡细胞，生理盐水对照组的大鼠海马切片上未见TUNEL染色阳性的凋亡细胞；术后3d、7d的透射式电镜观察发现．实验组大鼠组织切片上可见明显的细胞凋亡征象，凋亡细胞的核染色质呈现环状、凝块状或星月状小体(凋亡小体)．对照组未见明显的细胞凋亡征象。结论实验结果提示，Aβ40可诱导p53蛋白的表达，p53蛋白可能参与了大鼠海马神经细胞的凋亡活动。     

雷公藤多甙对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子和磷酸化tau蛋白表达的影响

目的 探讨雷公藤多甙(TWP)对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化tau蛋白表达的影响.方法 105只SD大鼠随机分为正常对照组、TWP对照组、假手术组、低灌注模型组、生理盐水组、TWP低剂量组和TWP高剂量组.采用永久性结扎双侧颈总动脉建立慢性脑低灌注模型;TWP低、高剂量组及生理盐水组分别予以TWP 10 mg/(kg·d)、30 mg/(kg·d)及生理盐水连续灌胃;TWP对照组予以TWP 30 mg/(kg·d)连续灌胃.用免疫组化染色法测定实验开始后1个月、2个月和3个月时各组大鼠海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达.结果 1个月、2个月时,生理盐水组和低灌注模型组海马CA1区VEGF表达较正常对照组、TWP对照组和假手术组明显增高(均P<0.05),TWP高、低剂量组VEGF表达较生理盐水组和低灌注模型组明显增高(均P<0.05);3个月时各组间表达差异无统计学意义.1个月时各组间磷酸化tau蛋白表达差异无统计学意义;2个月、3个月时,TWP高、低剂量组磷酸化tau蛋白表达水平较正常对照组、TWP对照组和假手术组明显增高(均P<0.05),较生理盐水组和低灌注模型组明显降低(均P<0.05).结论 TWP能促进慢性脑低灌注大鼠海马CA1区VEGF表达,抑制磷酸化tau蛋白表达.     

海马内注射纤丝状Aβ42诱导tau异常磷酸化的研究

目的观察海马内注射纤丝状Aβ42后神经元Ser 202位点磷酸化的tau蛋白(PS202-tau)的表达,探讨Aβ42与tau蛋白超磷酸化的关系.方法应用立体定向技术对老年大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42,采用免疫组织化学染色方法,显示PS202-tau的表达情况,并进行图像分析.结果纤丝状Aβ42注射组双侧海马PS202-tau的表达明显高于正常组和双蒸水注射组,两侧海马PS202-tau的表达没有明显差异.结论纤丝状Aβ42能使PS202-tau的表达增加,提示它具有诱导tau蛋白超磷酸化的效应.     

海马注射β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆及局部神经元的损伤作用

目的 探讨β淀粉样蛋白海马内注射的神经毒性,并对应用此方法建立阿尔茨海默病（ＡＤ）的动物模型进行初步评价。     

大鼠海马注射溶血磷脂酸诱导tau蛋白高度磷酸化和凋亡研究

目的研究溶血磷脂酸(LPA)在大鼠体内对海马神经细胞tau蛋白磷酸化水平的影响和诱导神经细胞凋亡的细胞毒性作用.方法将72只SD大鼠分为实验组(n=32)、实验对照组(n=32)和对照组(n=8),利用脑立体定位技术在大鼠双侧海马微量注射溶血磷脂酸、溶剂,于注射后12、24、48和72 h各不同时间点采用免疫组化方法测定该区域神经细胞中ser202位点磷酸化tau蛋白(PS202-tau)的表达,TUNEL技术检测细胞凋亡.结果实验组LPA注射后24 h海马CA4区神经细胞中PS202-tau阳性表达到达高峰,阳性表达高于对照组和实验对照组(P＜0.05).LPA注射后48 h TUNEL阳性细胞数达高峰,每个视野中阳性细胞数多于对照组和实验对照组(P＜0.05).结论LPA在动物整体水平可诱导大鼠海马神经细胞tau蛋白高度磷酸化,并导致神经细胞发生凋亡.     

雌激素及褪黑素对β-淀粉样蛋白诱导的大鼠海马的神经损害的影响

阿尔茨海默病 (ＡＤ)为中枢神经系统弥漫性病变 ,主要累及海马等脑区 ,发病原因学说不一 ,多认为 β 淀粉样蛋白(Ａβ)沉积可能是所有因素导致ＡＤ发病的共同途径。人类流行病学调查和小规模的临床试验提示雌激素 (Ｅ )、褪黑素(ＭＴ)分别可改善ＡＤ病情 ,我们探讨在体情况下Ｅ、ＭＴ单独及联合作用对Ａβ神经毒性的影响。材料和方法 :雌性ＳＤ大鼠 4 2只 ,鼠龄 5 2周 ,饲养 2 8周 ,使成老年鼠。随机将动物分为假手术、生理盐水 (ＮＳ)对照、健康 +Ａβ、雌二醇 (Ｅ2 ) +Ａβ、ＭＴ +Ａβ、Ｅ2 +ＭＴ +Ａβ 6组 ,每组 7只。立体定向仪下将体…     

阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中tau蛋白及β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对诊断阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的早期诊断价值,寻找AD理想的生物学标志.方法 采用酶联免疫吸附法检测36例AD、24例血管性痴呆患者(vascular dementia,VD)和26名正常对照者(对照组)CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的变化.结果 CSF中tau蛋白平均浓度:AD组(336±126)ng/L,VD组(183±96)ng/L,对照组(98±54)ng/L,AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CSF中Aβ1-42平均浓度:AD组(341β113)ng/L,VD组(457±132)ng/L,对照组(502±167)ng/L,AD组CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组.差异有显著性意义(P<0.05).结论 脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化,不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性,而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标.     

β-淀粉样蛋白25-35杏仁核注射对大鼠空间学习记忆及海马突触素表达的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）杏仁核注射所造痴呆模型大鼠海马突触素的改变及其与空间学习记忆力的关系。方法雄性Sprague-Dawley大鼠24只，随机分为正常对照组、假手术组（颅内注射5．0nmol 0．1％三氟乙酸）、痴呆模型组（颅内注射5．0nmol Aβ25-35），每组各8只。采用杏仁核注射Aβ25-35的方法建立大鼠痴呆模型；通过Morris水迷宫测试观察大鼠空间学习记忆能力的改变；应用免疫组织化学染色测定模型大鼠海马突触素表达的水平。结果大鼠痴呆模型建立6周后，痴呆模型组大鼠存在明显的空间学习记忆力障碍，为期6d水迷宫测试的平均潜伏期均明显长于正常对照组及假手术组，其中第4～6天与正常对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组织化学染色，痴呆模型组大鼠海马突触索表达的阳性数及着色密度均明显少于正常对照组及假手术组，其中与正常对照组的差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论Aβ25-35杏仁核注射所造痴呆模型的大鼠海马突触数量明显减少，其空间学习记忆力功能障碍可能与突触的减少有关。     

NGF和MK801对Aβ25-35诱导海马细胞损伤的干预作用

目的 探讨神经生长因子（NGF）和MK801对Aβ25－35的细胞毒性的干预作用。方法 将培养7天的3天内新生大鼠海马细胞分别加入NGF（10ng/ml)、MK801（10μg/ml)、等体积培养液前后，加入b-淀粉样蛋白25－35（Aβ25－35，10μg/ml)，采用β－tublin、MAP2免疫组化鉴定是否为结构完整的海马神经元，MTT检测细胞活力，以及ChAT免疫组化检测免疫阳性细胞数目。结果 β－tublin、MAP2免疫组化证实所培养的为特异性结构完整的海马神经元。MTT及免疫组化检测显示Aβ25－35导致细胞活力显降低及ChAT免疫阳性细胞明显减少，NGF、MK801可有效预防Aβ25－35诱导的神经毒作用（P＜0．01），以及可轻度改善Aβ25－35诱导的神经毒作用，但无统计学意义（P＞0．05）。结论 NGF和MK801能有效地阻和轻度地修复Ab25-35诱致的海马细胞损伤，对阿尔茨海默病的防治提供了一定的实验依据。