以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值

目的 评价以CFP10／ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点(ELISPOT)技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。方法 选取2012年5月至2013年12月广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科和南方医科大学南方医院脊柱骨科收治的疑似脊柱结核患者91例,根据临床和细菌性诊断结果分为脊柱结核组(n=52)和对照组(n=39)。采用ELISPOT试验检测脊柱结核组和对照组外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞的数量。患者同时接受结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体检测、病灶病理学检查、抗酸杆菌涂片和病灶结核分枝杆菌培养,比较不同检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,分析不同检测结果的一致性。结果 52例脊柱结核患者中共47例接受病灶活检穿刺病理检查,其中41例病理证实为结核。ELISPOT试验在脊柱结核诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为82.7%、87.2%、89.6%和79.1%;PPD皮肤试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为61.5%、46.2%、60.4%和47.4%;血清抗结核抗体试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.8%、61.5%、65.9%和51.1%。在脊柱结核患者中,ELISPOT试验的阳性率显著高于PPD皮肤试验(82.7%比61.5%,χ²=5.786,P=0.016)和血清抗结核抗体试验(82.7%比55.8%,χ²=8.847,P=0.003),与病理学检查比较差异无统计学意义(82.7%比87.2%,χ²=0.396,P=0.529)。ELISPOT试验与病理学检查一致性较好(87.2%,κ=0.498,P=0.001)。结论 以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的ELISPOT法应用于脊柱结核诊断有良好的敏感性和特异性,可作为脊柱结核感染辅助诊断的有效方法。     

结核感染T细胞斑点试验对脊柱结核的辅助诊断价值

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对脊柱结核的辅助诊断价值。方法：回顾性分析87例拟诊为脊柱结核患者进行全血T-SPOT.TB试验及结核菌素纯蛋白衍生物试验（TB-PPD）结果。结果：脊柱结核组50例中T-SPOT.TB试验阳性41例,敏感性为82.0％,PPD检测阳性32例,敏感性为64.0％,两者比较差异有统计学意义（χ2=4.48,P<0.05）。T-SPOT.TB试验特异性为91.9%;PPD试验特异性为59.5%,两者比较差异有统计学意义（χ2=8.64,P<0.05）,T-SPOT.TB试验在敏感性、特异性上均明显优于常规PPD试验。结论：T-SPOT.TB检测技术快速敏感,对早期脊柱结核有辅助诊断价值。     

结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白的原核表达、纯化及ELISPOT检测方法的建立与应用

以结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白原核表达、纯化体系为基础,建立稳定的ELISPOT方法;检测164份疑似结核患者标本的外周血ELISPOT,与临床诊断及T-SPOT·TB结果对比. 表达所得重组蛋白浓度和纯度如下:CFP10 为0. 5 mg/ml,84%;ESAT6为4 mg/ml,98%. ELISPOT方法最佳实验条件为每孔细胞密度2 × 105/孔,CFP10、ESAT6蛋白抗原浓度分别为10 μg/孔,细胞孵育时间20 h. ELISPOT的灵敏度与特异度分别为88. 50%、82. 35%,检测结果与 T-SPOT·TB 方法结果一致(χ2 =0. 57).     

结核分枝杆菌三种特异性抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。     

重组融合蛋白CFP10-ESAT6在结核病血清学诊断中的初步应用

目的探讨结核分枝杆菌重组融合蛋白CFP 10-ESAT 6用于结核病血清学诊断的价值。方法分别用CFP 10-ESAT 6、ESAT 6和PPD检测220例确诊的结核病患者血清、30例非结核病呼吸系统疾病患者血清和50例健康人血清。结果rCFP 10-ESAT 6、rESAT 6和PPD检测的敏感性分别为45%、25%和57%;特异性分别为93%、95%和75%。rCFP 10-ESAT 6的敏感性高于rESAT 6,特异性高于PPD（P〈0.05）。结论rCFP 10-ESAT 6应用于结核病血清学诊断具有较好的敏感性和很高的特异性,对于结核病的诊断有很好的应用价值。     

γ-干扰素释放试验(TB-IGRA)在结核性腹膜炎诊断中的价值

【】 目的 探讨γ-干扰素体外释放试验对诊断结核性腹膜炎的应用价值。方法 回顾性分析2013年3月至2014年9月用γ-干扰素释放试验检测21例诊断为结核性腹膜炎的结果。结果21例结核性腹膜炎患者中,结核感染T细胞阳性47.6%(10/21),阴性52.4%(11/21)。结核抗体阳性23.8%(5/21),阴性76.2%(16/21)。其中合并肺结核13例患者中阳性61.5%(8/13),肠结核4例患者中阳性75.9%(3/4),HIV感染患者结核感染T细胞阴性。IGRA检测以此诊断结核性腹膜炎的敏感性为47.6%,特异性为93.3%,阳性预测值为83.3%,阴性预测值为71.8%。结核T细胞、结核抗体、腹水ADA在结核性腹膜炎中比较(χ₂=2.592,P=0.107)。结论γ-干扰素释放试验在结核性腹膜炎的诊断敏感性不高,仅对TBP诊断有一定的参考价值,需结合其他手段综合起来进行诊断。     

脊柱结核影像学表现及实验室检测分析

目的分析脊柱结核患者的影像学及实验室检查特点。方法收集新乡医学院第一附属医院(河南省结核病医院)骨外科2015年5月至2016年6月收治的经病理学和细菌学检查确诊为脊柱结核的患者65例,所有患者均接受X线、CT、MRI检查以及血沉、C反应蛋白、结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体、结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)等实验室检查。收集每例患者的基本临床信息、影像学资料及实验室化验结果,分析并比较各种检测方法对脊柱结核的诊断价值。结果 65例患者中,60例在3种影像学检查中均表现出椎间隙狭窄征象,占92.3%;23例患者X线显示有不同程度的后凸畸形,占35.4%;53例患者CT显示有死骨形成,占81.5%;64例患者MRI表现出椎间盘受累,占98.5%;54例MRI表现出椎旁脓肿征象,占83.1%。PPD皮肤试验、血清抗结核抗体、T-SPOT.TB的阳性率分别为61.5%、41.5%、86.1%。T-SPOT.TB的阳性率高于PPD皮肤实验(P<0.05)和血清抗结核抗体(P<0.05)。结论脊柱结核的3种影像学表现各具特点,3种影像学检查结合起来更有助于脊柱结核的诊断。与传统的结核病检测方法相比,T-SPOT.TB具有较高的敏感性,可以作为脊柱结核的辅助诊断方法。     

两种γ-干扰素释放试验方法对结核性胸膜炎诊断价值的探讨

目的:探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和全血)-干扰素释放试验(QFT-GIT)在结核性胸膜炎诊断中的临床价值。方法:对90例结核性胸膜炎患者与50例非结核性胸膜炎患者外周血分别用ELISPOT和QFT-GIT两种γ-干扰素释放试验进行检测,分析两种检测方法对结核性胸膜炎的准确性、敏感性、特异性、阳性预测值以及阴性预测值。结果:ELISPOT检测和QFT-GIT检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值比较均无统计学差异(P>0.05),而ELISPOT检测的准确性明显大于QFT-GIT检测,比较有显著性差异(P<0.05)。结论:ELISPOT和QFTGIT两种γ-干扰素释放试验用于结核性胸膜炎均有较好的诊断结果,但ELISPOT的准确性更高,且成本低。     

抗结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片的临床应用

目的验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值.方法结核病人和正常对照的血清经芯片识别仪和ELISA同时检测,分析其敏感性、特异性和总符合率. 结果结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断指数分别为69.91%、84.85%、90.80%、55.56%和154.76%.而ELISA法检测的敏感性、特异性分别为66.81%和86.14%.两检测的总符合率为81.04%.检测结果间差异无显性(x^2=1.5,P＞0.05).结论芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求,具有简便、快速和单人份操作的优点,可用于临床辅助诊断结核病人.     

酶联免疫斑点试验在骨关节结核中的辅助诊断价值

目的探讨评价酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在骨关节结核病中的辅助诊断价值。方法对骨关节结核病组30例和对照组21例患者,应用ELISPOT试验检测结核菌特异性6kD早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和10kD培养滤过蛋白(CFP-10)刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞。同时对关节穿刺液或手术标本进行涂片、培养、聚合酶链反应(PCR)检测结核菌特异DNA以及病理检查诊断。结果骨关节结核病患者中ELISPOT检测敏感性为96.7%(29/30),特异性为76.2%(16/21),阳性预测值、阴性预测值和阳性似然比分别为85.3%、94.2%和2.86。抗酸杆菌涂片、结核菌培养、PCR和病理诊断的敏感性分别为23.3%(7/30),30.0%(9/30),46.7%(14/30)和93.3%(28/30)。结论 ELISPOT检测方法在骨关节结核病中具有一定的辅助诊断价值,其敏感性明显高于临床常规检测方法。     

ELISA法检测血清TB4抗体对结核病的诊断价值

目的 评价结核分支杆菌H37RV多肽(TB4)抗体对结核病的诊断价值.方法 采用结核分支杆菌多肽(TB4)为包被抗原,应用ELISA法检测69例临床诊断为肺结核患者、45例支气管炎患者、70例健康体检者血清抗结核抗体水平,计算诊断试验的相关指标.结果 TB4抗原以ELISA法检测结核病的敏感性为76.8%、特异性为95.7%、阳性预测值为91.4%、阴性预测值为87.3%、准确率为88.6%.结论 以TB4为抗原,采用ELISA法检测血清抗结核抗体,可用于临床结核病的辅助诊断.     

结核抗体检测的免疫学诊断价值

目的:研究结核分枝杆菌血清学抗体在结核病免疫学诊断中的价值。方法:收集2009年8月~2010年8月经临床确诊为肺结核的患者510例血清标本,其中有痰菌阳性肺结核患者的78例,痰涂片阴性的肺结核患者432例,还收集了肺部肿瘤患者50例血清标本、肺部除结核、肿瘤外的其他疾病血清标本30例、体检合格的健康人血清标本100例。通过斑点免疫胶体金渗滤技术(DZGFA)的方法检测结核分枝杆菌抗体的特异性。结果:用迪比多胶体金法检测结核抗体的敏感性为79.0%(403/510),检测特异性95.0%(171/180),阳性预测值97.8%,阴性预测值为61.5%,诊断指标为174.0%。结论:用迪比多胶体金法检测结核患者血清中的结核抗体,有良好的敏感性和特异性,其对结核病尤其是菌阴性肺结核的血清学诊断是一种切实可行的有效方法。     

结核病患者结核抗体检测的诊断价值探讨

目的探讨结核抗体对结核病患者的诊断价值。方法选取患者150例,包括确诊结核病40例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其结核抗体,用临床流行病学方法分别计算结核抗体检测对结核病诊断的敏感性、特异性、似然比、预测值及不同患病率下的验后概率。结果通过该实验得出结核病诊断的敏感性和特异性分别为54.98%和89.01%,阳性和阴性似然比分别为5.476和0.512,阳性预测值为66.12%,阴性预测值为84.98%。结论结核抗体检测对结核病患者的诊断价值有限,临床医师应谨慎对待结核抗体检测阳性结果,其诊断价值与所处医院患者结核病患病率有关。     

快速试剂盒诊断细菌性阴道病

目的探讨蛋白水解酶快速反应试剂盒在细菌性阴道病诊断中的应用价值。方法应用广州泉池医疗器械公司生产的BV快速诊断试剂盒对女性阴道分泌物进行检测。同时用Amsel’s法作金标准。结果以Amsel's法为标准,快速法敏感性94.8%,特异性95.1%,阳性预测值87.2%。阴性预测值91.2%,阳性检出率显著高于Amsel's法(χ2=10.1,P<0.05)。结论该方法可作为独立诊断指标,适合作常规检查使用,建议推广。     

结核蛋白芯片联合PPD检测对痰菌阴性肺结核的诊断价值

目的观察结核蛋白芯片和结核菌素纯蛋白衍生物(purifiedproteiderivative,PPD)实验对痰结核分枝杆菌阴性肺结核(菌阴肺结核)的诊断价值。方法采用结核蛋白芯片和PPD实验,检测53例痰菌阴性活动性肺结核和40例非结核性肺部疾病患者,观察两种方法检测的灵敏性、特异性、检测的一致性和联合检测阳性率。结果结核蛋白芯片诊断痰菌阴性肺结核的敏感性和特异性分别为62.3%、87.5%,敏感性明显高于PPD试验(41.5%),特异性无明显差异;两种方法检测一致率为69.8%;两种检测方法联用阳性检出率为88.7%,高于单独应用任一方法。结论结核蛋白芯片检测对痰菌阴性活动性肺结核病人具有较好的诊断价值,联用PPD检测可提高痰菌阴性肺结核患者检出率。     

流式细胞仪检测HLA—B27在脊柱关节病诊断中的应用价值

目的 评价流式细胞仪检测人类白细胞抗原-B27（HLA-B27）在脊柱关节病诊断中的应用价值.方法 入选的脊柱关节病（SpAs）患者248例[其中强直性脊柱炎（AS）148例,未分化脊柱关节病（USpA）48例,反应性关节炎（ReA）31例,幼年脊柱关节病（JSpA）12例,银屑病关节病（PsA）6例,炎性肠病性关节病（EA）3例];同时抽取非脊柱关节病患者204例作为对照.452例患者均进行流式细胞仪检测HLA-B27.结果 HLA-B27对SpAs的敏感性为85.1%,特异性为94.1%,阳性预测值为94.6%,阴性预测值为83.8%;对AS的敏感性为93.2%,特异性为94.1%,阳性预测值为94.5%,阴性预测值为92.7%;对USpA的敏感性为77.1%,特异性为94.1%,阳性预测值为92.5%,阴性预测值为81.3%;对ReA的敏感性为71.0%,特异性为94.1%,阳性预测值为91.7%,阴性预测值为78.0%.结论 流式细胞仪检测HLA-B27对SpAs、AS、USpA、ReA有很高的敏感性、特异性和阳性预测值和阴性预测值,对早期SpAs、AS、USpA、ReA的诊断有重要的应用价值.     

4种靶特异性抗体检测对肺结核的临床诊断价值

目的:探讨4种靶特异性抗原结核抗体对肺结核的临床诊断价值。方法:选取分别含LAM、38ku/16ku蛋白、纯化BCG蛋白、人型PPD的4种结核抗体检测试剂盒,对110例肺结核、100例对照标本进行测定,运用卡方(χ2)检验,比较各组间敏感性、特异性的差异。结果:LAM-IgG、38ku/16ku-IgG、BCG-IgG和PPD-IgG的敏感性分别为74.5%、70.9%、80.0%和83.6%;特异性分别为91.0%、99.0%、93.0%和84.0%;痰菌阳性的阳性检出率分别为85.7%、88.6%、91.4%和91.4%;痰菌阴性的阳性检出率分别为69.3%、62.7%、74.7%和80.0%。结论:4种靶特异性抗原结核抗体对肺结核诊断的敏感性无显著差异,特异性存在非常显著的差异;以PPD为靶抗原的国产结核抗体试剂盒价格低廉,有很高的敏感性和较高的特异性,适宜推广使用。     

酶联免疫斑点检测和结核菌素试验在初治肺结核中的辅助诊断价值

目的 比较酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和结核菌素试验(TST),探讨ELISPOT在初治肺结核中的辅助诊断价值.方法 选取初治肺结核123例和非结核疾病病例102例作为结核组和对照组,应用6 kD早期分泌靶向抗原/10 kD培养滤过蛋白融合蛋白(ESAT-6/CFP-10)作为抗原对受试者外周血单个核细胞进行ELISPOT(即ESAT-6/CFP-10-ELISPOT),检测斑点形成细胞(SFCs)的数量;同时对受试者行TST.结果 结核组ESAT-6/CFP-10-ELISPOT形成的SFCs数显著高于对照组(P=0.000).结核组中ESAT-6/CFP-10-ELISPOT的敏感度91.1%(111/123)、特异度80.4%(82/102)、阳性似然比4.60、阴性似然比0.12、阳性预测值0.85、阴性预测值0.87,TST的敏感度65.6%(59/90)、特异度45.1%(46/102)、阳性似然比1.31、阴性似然比0.76、阳性预测值0.51、阴性预测值0.60.ESAT-6/CFP-10-ELLS-POT的敏感度和特异度显著高于TST(均P=0.000).菌阳肺结核组和菌阴肺结核组间ESAT-6/CFP-10-ELLSPOT形成SFCs数量差异无显著性(P=0.166),两组ESAT-6/CFP-10-ELISPOT的敏感度分别为91.8%(67/73)和88.0%(44/50),二者比较差异无显著性(P=0.448).结论 ESAT-6/CFP-10-ELISPOT有可能作为辅助诊断初治肺结核的较为准确方法,并为菌阴肺结核提供一定的诊断依据,但诊断的特异度可能受结核潜伏感染影响.TST对初治肺结核的诊断价值较小.     

抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片研究

目的　建立检测结核分枝杆菌多抗原IgG抗体的蛋白芯片检测系统 ,并验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值。　方法　采用棋盘滴定法标定检测结核菌抗体的包被蛋白及金标记二抗的最低工作浓度 ,建立完整的检测系统。结核病人和正常对照者的血清经芯片识别仪和DIGFA法试剂同时检测 ,计算敏感性、特异性和总符合率。　结果　结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为76 74% (3 5 3 /4 60 )、81 70 %、5 6 48%、91 90 %和 15 8 44 %。而DIGFA法检测的敏感性、特异性分别为 68 3 1% (2 91/4 2 6)和 72 2 %。两者检测的总符合率为 85 2 1%。检测结果间无显著性差异 (χ2 =6,P >0 0 5 )。全部检测过程只需 5min。　结论　芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求 ,具有简便、快速和单人份操作的优点 ,可用于临床快速诊断结核病。     

γ-干扰素释放试验在肺结核和肺外结核诊断中的应用

目的:探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在肺结核和肺外结核诊断中的应用价值。方法:收集273例结核病患者与45例健康体检者肝素钠抗凝全血,采用国产IGRA试剂检测其血浆γ-干扰素含量,同时与结核菌素皮肤试验(TST)结果进行平行分析比较;采用抗酸染色(AFB染色)法对结核病患者痰液标本进行染色。结果:国产的IGRA试剂和TST实验的敏感性分别为85.35%和72.53%,特异性分别为86.54%和53.33%,阳性预测值分别为97.08%和90.41%,阴性预测值分别为52.94%和24.24%,准确性分别为85.22%和69.81%。两种方法对肺结核的检出率分别为85.71%(180/210)和74.76%(157/210),二者相比较,差异有统计学意义(χ2=7.943,P<0.01);两种方法对肺外结核的检出率分别为84.13%(53/63)和68.25%(43/63),二者相比较,差异也有统计学意义(χ2=4.375,P=0.036);但两种方法各自对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异。210例肺结核患者中AFB阳性73例,AFB阴性者137例,其中AFB阳性肺结核患者中IGRA阳性率为89.04%(65/73),AFB阴性肺结核患者阳性率为83.94%(115/137);肺外结核63例患者AFB均阴性,IGRA阳性率为84.13%(53/63)。结论:IGRA比TST对诊断结核病有较高的敏感性与特异性,尤其是对AFB阴性的肺结核和肺外结核有80%以上的检出率,有很好的临床应用前景。