微小RNA-132转染对体内外肝癌生长和凋亡的作用

目的 观察转染微小RNA-132(miR-132)对体内外人肝癌细胞株MHCC97H生长和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例肝癌组织及癌旁正常组织中miR-132的表达,CCK-8法、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验和TUNEL实验检验转染miR-132后对体内外MHCC97H细胞生长和凋亡的作用,Western blot法检测体外MHCC97H细胞中p-AKT、Survivin和Caspase 3蛋白的表达,免疫组织化学法检测体内肿瘤组织中Ki-67、Survivin和Caspase 3的表达。结果 miR-132在肝癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.05)。在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞増殖明显被抑制,G₀/G₁期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,凋亡细胞显著增加(P均＜0.05)。转染组细胞中Survivin和p-AKT的表达下调,Caspase 3的表达上调,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05)。在体内实验中,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制,凋亡肿瘤细胞明显增加,Survivin和Ki-67蛋白表达下调,而Caspase 3表达增加(P均＜0.05)。结论 转染miR-132对体内外肝癌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,miR-132有望成为肝癌治疗的新靶点。     

肝癌患者组织及血清微小RNA-24和微小RNA-629的表达水平及其临床意义

目的探讨肝癌患者组织及血清微小RNA(miR)-24及miR-629的表达水平及其临床意义。方法将67例肝癌患者、31例慢性乙型病毒性肝炎或者乙肝相关性肝硬化患者及46例健康人员,分别设为肝癌组、乙肝组及正常对照组。检测肝癌组癌组织及癌旁正常组织、3组血清标本中miR-24、miR-629的表达水平。分析肝癌组患者血清miR-24、miR-629的表达水平与临床病理指标的相关性。结果肝癌组织中的miR-629及miR-24相对表达水平均高于正常组织(均P<0.05)。正常对照组、乙肝组、肝癌组的血清miR-24、miR-629相对表达水平依次升高(均P<0.05)。肝癌患者miR-629与miR-24的表达水平与血管侵犯情况以及肿瘤分化程度呈正相关(均P<0.05)。结论肝癌患者癌组织及血清中的miR-629、miR-24的表达水平均上调,这可能在肝癌的发生以及慢性肝炎的恶性转化过程中起到重要作用。血清miR-24和miR-629水平的检测或有助于评估肝癌患者的病情。     

微小RNA-195通过靶向BIRC5调控肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:探讨微小RNA-195(miR-195)对肝癌Hep3B细胞凋亡的影响,并探索其下游靶基因。方法:采用MTT实验、流式细胞仪检测miR-195对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。构建双荧光素酶报告基因质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证靶标分子。采用RNA干扰技术检测沉默BIRC5对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。结果:与miR-ctrl组相比,miR-195过表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-195可靶向作用BIRC5,沉默BIRC5可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。结论:miR-195可通过靶向调控BIRC5抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。BIRC5可能是肝癌靶向治疗的重要靶标。     

微小RNA-132对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究miRNA-132对白血病细胞株K562增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 应用LipofectamineTM 2000转染K562细胞,实时荧光定量PCR检测转染后miRNA-132的表达。CCK-8及流式细胞术检测转染后对K562细胞增殖及凋亡的影响。Western Blot法分别检测SRIT1及P53的表达量变化。结果 miRNA-132在正常细胞中的表达明显低于在K562细胞株中的表达,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组miRNA-132的表达量明显升高。转染miRNA-132 mimics后,K562细胞增殖能力减弱,凋亡率明显增加。与空白对照组和miRNA-132-NC组相比,miRNA-132高表达后,转染组的SIRT1蛋白表达量明显降低,P53蛋白表达量明显升高。结论 高表达的miRNA-132对白血病K562细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与其增强SIRT1、P53的活性有关。     

微小RNA-144上调Rb抑制骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡

目的探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响。方法运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144片段作为阴性对照组。实时定量PCR检测miR-144表达水平。DAPI染色观察miR-144对细胞形态的影响,用MTT检测细胞增殖,Annexin/PI双染确定细胞凋亡比例。免疫印迹检测PTEN以及Rb等抑癌基因编码蛋白和凋亡相关蛋白表达情况。结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(1128.54±738.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P<0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,miR-144组细胞数量明显减少,增殖受抑制,流式细胞检测显示,细胞凋亡率明显增加。免疫印迹检测显示,Rb和PTEN表达水平有所增加,而凋亡相关的Caspase-3活化,线粒体膜上Cyto C释放。而阴性对照组与空白对照组以上数值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论合成的miR-144片段(miR-144 mimic)能顺利进入细胞并上调miR-144的表达,对骨肉瘤细胞都有一定程度的抑制作用,并有浓度依赖性,对MG-63的抑制效果最强,并通过活化Caspase-3促进凋亡,上调PTEN和Rb的表达实现对细胞的抑制作用。未来可以基于miR-144进行骨肉瘤治疗的短核苷酸类药物开发。     

微小RNA-451对结肠癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究微小RNA-451(miR-451)对结肠癌细胞系SW480侵袭能力的影响.方法 用荧光染料标记的siRNA片段转染,优化转染条件,观察转染效率;通过化学方法合成miR-451 mimics,以脂质体包裹转染SW480细胞,并设单独脂质体转染组、无关序列转染组、未处理组(对照组),采用细胞计数试剂盒-8检测miR-451对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-451对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-451对细胞侵袭能力的影响.结果 化学合成的miR-451 mimics(100 nM)转染对结肠癌细胞系SW480的增殖和凋亡无明显影响,但对SW480的侵袭能力有抑制作用.结论 转染miR-451 mimics能抑制结肠癌细胞系SW480的侵袭能力.     

微小RNA-320a通过靶向FoxM1调控肝癌细胞迁移

目的：探讨微小RNA-320a (miR-320a)在肝癌细胞中对癌基因FoxM1的靶向调控作用以及对肝癌细胞迁移能力的影响,为肝癌治疗提供新的靶点。方法通过信息学工具网站http：//www.microRNA.org找到可能靶向调控FoxM1表达的微小RNA;利用蛋白印记和双荧光素酶报告基因试验验证miR-320a对FoxM1的调控作用;采用Transwell小室分析miR-320a和FoxM1对肝癌细胞迁移的影响。结果信息学分析表明,miR-320a在FoxM1的3'端非翻译区存在2个潜在结合位点。蛋白印迹实验显示miR-320a降低FoxM1在肝癌细胞中的蛋白水平,双荧光素酶报告基因试验显示miR-320a可以调控FoxM1表达。miR-320a类似物对FoxM1表达有下调作用（P<0.01）,miR-320a抑制物对FoxM1表达有上调作用（P<0.05）。Transwell试验表明miR-320a类似物可抑制肝癌细胞株Huh7、HCC-LM3的迁移能力,miR-320a抑制物可增加Huh7、HCC-LM3的迁移能力。当使用小干扰RNA下调FoxM1在这些细胞株中的表达后,miR-320a类似物和miR-320a抑制物对肝癌细胞迁移能力的调控作用明显减弱。结论 miR-320a有抑制肝癌细胞迁移的作用,这种抑制作用是通过靶向调控癌基因FoxM1来实现的。     

微小RNA-4530通过靶向TRIB1抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨微小RNA(miRNA)-4530在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响.方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4530在人正常肝细胞(LO2)和肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7)的表达;转染miR-4530的模拟物,构建miR-4530过表达的Hep3B...     

多囊卵巢综合征外周血中miR-132和SMAD4的表达对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨多囊卵巢综合征（PCOS）外周血中miR-132和SMAD4的表达水平及对卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法：收集2019年5月—2021年3月接受治疗的PCOS患者（PCOS组,85例）,同时期来院就诊的月经规律的健康女性40名设为对照组。采用全自动生化分析仪检测黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雄烯二酮和卵泡刺激素（FSH）的水平,qRT-PCR检测miR-132、SMAD4 mRNA相对表达水平,分析以上指标在两组间的差异及PCOS组中miR-132和SMAD4的相关性。分别将siNC质粒、si-miR-132质粒、miR-NC质粒、SMAD4 mimic质粒和SMAD4 mimic+miR-132 mimic质粒转至KGN细胞中,MTT和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡。双荧光素酶报告实验检测miR-132和SMAD4靶向关系。结果：PCOS组LH、T、雄烯二酮和miR-132相对表达水平高于对照组,FSH和SMAD4 mRNA相对表达水平低于对照组（t=3.618、4.253、15.412、30.921、5.207、24.194,均P<0.05）。PCOS...     

微小RNA-27a-3p在肝癌细胞增殖与凋亡中的表达

目的探讨微小RNA-27a-3p在肝癌细胞增殖与凋亡中的表达。方法回顾性分析2015年3月至2016年6月期间于我院接受治疗的69例肝癌患者的临床资料,随访3年后,分析是否发生复发患者肝癌细胞内微小RNA-27a-3p的表达情况。结果经3年随访发现,复发患者有23例,未复发患者有46例;经检测,复发组患者微小RNA-27a-3p表达水平为(0.26±0.13),显著低于未复发组的(0.62±035),差异有统计学意义(P<0.05);微小RNA-27a-3p表达水平用于预测肝癌患者术后复发风险评估的ROC曲线下面积:AUC=0.948,在微小RNA-27a-3p表达水平临界值为0.375时,可以获得最为理想的敏感度及特异度,分别为:0.913、0.717。结论微小RNA-27a-3p在肝癌未复发组患者体内表达水平较高,临床可通过提高肝癌患者微小RNA-27a-3p水平,降低肝癌复发率。     

微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用

目的:探讨微小RNA(miR)-21在乳腺癌细胞(MCF7)中的作用。方法:对MCF7细胞转染miR-21,采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4(PDCD4)表达;用噻唑蓝(MTT)比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖;流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果:经免疫组织化学检测,转染组未见染色,对照组细胞胞质呈棕褐色,转染组PDCD4的表达明显低于对照组,MTT法检测转染组细胞活力增加(P0.05)。转染组的凋亡率为(3.14±0.24)%,明显低于空白组、空质粒组的(8.04±0.02)%、(9.41±0.53)%,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:PDCD4是miR-21的靶基因之一,miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

原发性肝细胞癌患者血清中微小RNA-21、微小RNA-122和微小RNA-145的表达及临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者血清中微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-122(miR-122)和微小RNA-145(miR-145)的表达及临床意义。方法选择2014年9月至2016年9月铜川矿务局中心医院收治的HCC患者100例为HCC组,并选择体检健康者100例作为对照组。采用实时定量荧光聚合酶链反应检测血清中miR-21、miR-122和miR-145的表达水平,分析miR-21、miR-122和miR-145的表达水平与HCC患者临床特征的关系。结果HCC组患者血清中miR-21、miR-122表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-145表达水平显著低于对照组(P<0.05)。HCC患者血清中miR-21、miR-122和miR-145表达水平与组织分化程度、临床分期、肿瘤大小及肝硬化有显著相关性(P<0.05),与性别、年龄、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗体无显著相关性(P>0.05)。与高分化和中分化程度、临床分期低、肿瘤直径<5 cm和无肝硬化的患者相比,低分化程度、临床分期高、肿瘤直径≥5 cm和有肝硬化的患者血清中miR-21和miR-122表达显著升高,miR-145表达显著降低(P<0.05)。手术后HCC患者血清中miR-21、miR-122表达水平显著低于手术前,miR-145表达水平显著高于手术前(P<0.05)。结论 miR-21和miR-122表达上调及miR-145表达下调可能与HCC的发生、发展有关,联合检测血清中miR-21、miR-122和miR-145表达对HCC的诊断和病情评估具有重要意义。     

微小RNA-200a在肝癌中的表达及其功能

目的观察miR-200a在肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的表达,以及对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、周期和侵袭能力的影响。方法运用荧光定量PCR检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的miR-200a的表达量。运用MTT法、流式细胞仪和Transwell试验分析miR-200a对细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果肝癌细胞HepG2中miR-200a表达水平为正常肝细胞4.79倍,癌细胞中miR-200a表达明显高于正常细胞(P<0.01)。在72 h浓度为150 nmol/L时,miR-200a对肝癌细胞增殖的促进作用最明显,促进率为38.40%。与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(57.13±0.02)%,S期无明显减少(26.55±0.8)%,早期凋亡细胞比例未见明显升高(0.5±0.06)%(P>0.05)。Transw ell实验结果显示100 nmol/L miR-200a mimics实验组相对穿出小室膜肿瘤细胞数为(0.348+0.005 657),与空对照组(0.296±0.006 364),负对照组(0.287±0.005 364)差异明显(P<0.05)。结论 miR-200a在肝癌细胞株中异常表达,癌细胞中的表达明显高于正常细胞,miR-200a对肝癌细胞株的增殖和侵袭能力有着明显的促进作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着原癌基因的角色。     

微小RNA-7/124/155在帕金森病中的研究进展

帕金森病(PD)是继阿尔茨海默病之后的全球第二大神经退行性疾病,具有高发病率及高致残率,早期症状不典型,常与正常的老化或其他疾病表现类似,容易漏诊和误诊,严重影响该病的诊治,加重患病人群的生活负担。微小RNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA,通过结合信使RNA进行转录后调节,具有高度保守、短小、简单易获取等特点,并且可以在外周体液中稳定存在,已经被作为多种疾病的生物标志物。最新研究表明,miRNA在PD的发生发展中起重要作用。本文综述近年来国内外学者对miR-7/124/155这三种研究相对成熟的miRNA在PD中的研究进展,旨在为阐明PD的发病机制、指导PD的诊断及治疗提供参考。     

狼疮性肾炎患者血清微小RNA-146a和微小RNA-155水平及其预测病情活动的效能

目的 探讨狼疮性肾炎(LN)患者血清微小RNA(miRNA)-146a、miRNA-155水平及其预测病情活动的效能.方法 将122例LN患者根据系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)分为LN活动组(65例)与LN稳定组(57例),另选取48例健康志愿者为对照组.比较3组间血清miRNA-146a、miRNA-1...     

微RNA-132在神经病理性疼痛中的研究进展

神经病理性疼痛(NPP)是目前临床诊疗工作面临的巨大挑战。其由疾病或者损伤累及躯体感觉系统而引起,典型的临床表现可为自发痛、诱发痛、痛觉过敏及痛觉超敏。微RNA(miRNA/miR)在NPP的发生、发展中具有重要作用。其中,miR-132作为人体比较稳定的miRNA,在与神经相关的组织中广泛存在。miR-132是神经营养的重要调节剂,与树突的形成和神经可塑性有关。它通过作用于甲基Cp G结合蛋白2,影响脑源性神经营养因子的表达,参与NPP的发生和发展。因此,研究miR-132在NPP中的作用,能为今后的临床治疗提供新的生物标志物和基因治疗靶点。     

微小RNA-100在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-100(microRNA-100,miRNA-100)在胃癌患者组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:提取50例胃癌及其癌旁非肿瘤组织标本的总RNA,采用TaqMan探针实时荧光定量PCR方法检测miRNA-100的表达量;并分析其与肿瘤分化程度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系.结果:胃癌及配对癌旁非肿瘤组织中miRNA-100的相对表达量分别为1.31±0.69和0.74±0.36,差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中miRNA-100的表达在年龄、性别、肿块大小、肿块位置、分化程度、淋巴结转移以及TNM分期中差异均无统计学意义(P>0.05).结论:miRNA-100在胃癌中的异常表达可能与胃癌的发生有关.     

微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的 研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法 选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。 结果 qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133b mimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133b inhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs 21、45、69、93和117 h后,与阴性对照组相比,miR-133b mimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133b inhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagen Ⅲ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagen Ⅲ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133b mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133b mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论 miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。     

微小RNA-1180转染对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾癌细胞系786-O和ACHN生长的影响.方法 肾癌细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组.实时定量(qRT)-PCR检测p21 mRNA的表达变化.Western blot检测p21、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达变化.流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,使用多靶扫描法(MTS)和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,转染miR-1180后786-O和ACHN细胞中p21 mR-NA水平分别上调2.54倍(P＜0.01)和2.49倍(P＜0.01).p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调.FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在Go/G1期.MTS结果显示,与dsControl组相比,转染miR-1180后,两种肾癌细胞活力明显降低.集落形成实验显示,miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低.结论 miR-1180能显著激活肾癌细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾癌细胞786-O和ACHN的生长.