高效液相色谱法测定草酸钙结石大鼠尿中草酸含量

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠尿液中草酸含量。方法 将SPF级雄性健康Wistar大鼠24只采用随机数字表法分为空白对照组(n=12)和乙二醇组(n=12)。空白对照组给予去离子水喂养,每天以1 ml生理盐水灌胃;乙二醇组给予1%乙二醇自由饮水喂养,每天2%氯化铵2 ml灌胃。造模28 d后收集两组大鼠24 h尿液,采用HPLC法测定尿中草酸含量,并与铬酸钾氧化甲基红催化光度法的结果进行比较。HPLC法采用色谱柱Aglient 5TC-C₁₈(250×4.6 mm,5 μm),以甲醇(0.1 mol/L)、醋酸铵水溶液(15∶85)为流动相,流速为1.2 ml/min,紫外检测波长为314 nm,柱温20 ℃。结果 大鼠尿液中高、低浓度草酸标准曲线分别为y=5909.1x+378730,R²=0.9984和y=7810.5x-16635,R²=0.9967;最低检测浓度为5 μg/ml,大鼠尿液中草酸高浓度线性范围为62.50~2000.00 μg/ml,低浓度线性范围为6.25~100.00 μg/ml。平均回收率为95.1%,日内及日间精密度分别为3.4%~10.8%和3.8%~9.4%。HPLC法和铬酸钾氧化甲基红催化光度法均显示乙二醇组大鼠尿草酸浓度和24 h尿草酸含量显著高于空白对照组[尿草酸浓度:(736.35±254.52)μg/ml比(51.56±36.34)μg/ml,(687.35±234.53)μg/ml比(50.24±42.34)μg/ml;24 h尿草酸含量:(11.23±4.12)mg比(0.87±0.45)mg,(9.89±3.55)mg比(0.77±0.65)mg;P均＜0.01];两种方法检测出的尿草酸浓度和24 h尿草酸含量差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论 HPLC法简单快速、回收率高、精密度好,与铬酸钾氧化甲基红催化光度法检测结果一致,适用于大鼠尿中草酸含量的测定。     

菊糖对大鼠肠源性高草酸尿症的疗效

目的 观察菊糖对大鼠肠源性高草酸尿症的疗效。方法 实验1:健康雄性 SD 大鼠24只,分别在第1、2、3天给予无草酸饲料、草酸含量为74.82 mg/100 g饲料、草酸含量为74.82 mg/100 g饲料,并在第3天另外给予每只大鼠2 g菊糖,检测大鼠每天的24 h尿量、尿草酸浓度、尿肌酐浓度,并计算24 h尿草酸总排泄量。实验2:健康雄性SD大鼠24只,随机分成对照组和实验组,每组12只,均给予草酸含量为74.82 mg/100 g的高草酸饲料,实验组大鼠另给予2 g菊糖,检测并计算出两组大鼠的24 h尿草酸总排泄量。结果 实验1:时间因素对24 h尿草酸总排泄量有显著影响(F=11.481,P=0.035),第2天大鼠的24 h尿草酸总排泄量明显高于第1天(P=0.026)和第3天(P=0.037),第3天也明显高于第1天(P=0.004)。实验2:实验组大鼠24 h尿草酸总排泄量明显低于对照组(P=0.011)。结论 菊糖对大鼠高草酸尿症可能有潜在治疗价值。     

金钱草总黄酮提取液抑制大鼠草酸钙结石形成机制的研究

目的探讨金钱草总黄酮提取液抑制大鼠草酸钙结石形成机制的研究。方法常规饲养大鼠1周,采用乙二醇饮水和氯化铵灌胃造模草酸钙结石大鼠模型,将30只SD大鼠随机分为空白对照组(A组)、草酸钙结石模型组(B组)和金钱草总黄酮组(C组)。给药4周后收集各组大鼠24 h尿液,检测尿p H值及24 h尿钙、尿草酸、尿酸、尿葡胺聚糖和尿凝血酶原片段-1的含量。结果金钱草总黄酮组大鼠24 h尿量较草酸钙结石模型组增加,差异有统计学意义(P0.05),与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。金钱草总黄酮组大鼠与草酸钙结石模型组大鼠比较,其24 h尿钙和尿草酸含量均降低,而尿凝血酶原片段-1的含量增加,差异均有统计学意义(P0.05)。而三组间尿p H值、尿酸经比较均无明显差异(P0.05)。结论金钱草总黄酮提取液可能通过增加大鼠24 h尿量,降低尿液中成石因子-尿钙和尿草酸的含量,增加尿液中抑石因子-尿凝血酶原片段-1含量,从而抑制草酸钙结石的形成。     

高效液相色谱法测定SHR尿液中犬尿喹啉酸含量的变化

目的 建立高效液相色谱荧光法测定尿液中犬尿喹啉酸(KYNA)含量的方法,观察不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)及其正常对照大鼠(WKY)的尿KYNA含量变化.方法 高效液相色谱荧光法采用的色谱柱为ODS色谱柱,流动相为10mmol/L醋酸钠缓冲液(pH4.5)和乙腈(体积95:5),激发波344 nm,发射波398nm.选择4周龄WKY大鼠和SHR各4只、16周龄WKY大鼠和SHR各6只检测24h尿液中的KYNA含量,并进行统计学分析.KYNA浓度检测的线性范围0.220～33.000nmol/mL(R2=0.999 1),回收率为(90.37±8.47)%,日内差异为4.70%～9.40%,日间差异为5.20%～7.50%.4周龄WKY组24h尿KYNA含量为(41.251±22.663)μg/24h尿,SHR组为(35.387±10.814)μg/24h尿,两组问无统计学差异(P＜0.05);16周龄SHR尿KYNA含量为(39.511±15.985)μg/24h尿,较WKY组(90.690±42.189)μg/24h尿明显降低(P＜0.05).结论 高效液相色谱荧光方法具有灵敏、稳定、特异性高等特点,可用于临床检测尿KYNA.成年SHR尿KYNA含量较WKY大鼠减少,提示可能与高血压的发生发展有关.     

高效液相色谱法测定SHR尿液中犬尿喹啉酸含量的变化

目的建立高效液相色谱荧光法测定尿液中犬尿喹啉酸(KYNA)含量的方法,观察不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)及其正常对照大鼠(WKY)的尿KYNA含量变化。方法高效液相色谱荧光法采用的色谱柱为ODS色谱柱,流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH4.5)和乙腈(体积95∶5),激发波344 nm,发射波398 nm。选择4周龄WKY大鼠和SHR各4只、16周龄WKY大鼠和SHR各6只检测24 h尿液中的KYNA含量,并进行统计学分析。结果KYNA浓度检测的线性范围0.220-33.000nmol/mL(R2=0.999 1),回收率为(90.37±8.47)%,日内差异为4.70%~9.40%,日间差异为5.20%~7.50%。4周龄WKY组24 h尿KYNA含量为(41.251±22.663)μg/24 h尿,SHR组为(35.387±10.814)μg/24 h尿,两组间无统计学差异(P<0.05);16周龄SHR尿KYNA含量为(39.511±15.985)μg/24 h尿,较WKY组(90.690±42.189)μg/24 h尿明显降低(P<0.05)。结论高效液相色谱荧光方法具有灵敏、稳定、特异性高等特点,可用于临床检测尿KYNA。成年SHR尿KYNA含量较WKY大鼠减少,提示可能与高血压的发生发展有关。     

泽泻活性成分对结石模型大鼠肾结石形成和bikunin表达的影响

目的 研究中药泽泻活性成分对结石模型大鼠肾结石形成和bikunin表达的影响,以探讨泽泻防治草酸钙尿石症的作用机理。方法 分离提取泽泻的化学活性成分,制作大鼠肾草酸钙结石模型。将30只Wistar大鼠随机分成对照组、结石模型组、泽泻组,每组10只大鼠。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测大鼠肾组织bikunin mRNA的表达水平、镜下观察肾组织草酸钙晶体分布,同时检测大鼠血生化、肾钙含量、24 h尿钙和尿草酸的分泌量。结果(1)泽泻组大鼠肾组织草酸钙晶体分布、血生化等指标均明显低于结石组。(2)泽泻组和成石组大鼠肾组织bikunin的相对表达水平分别为0.53±0.17,0.71±0.25、肾钙含量分别为4.70 mg/g±0.08 mg/g,9.49 mg/g±0.45 mg/g、24 h尿钙分泌量分别为37μmol±2μmol,62μmol±2μmol,各组间差异均有显著意义(P<0.05)。结论 泽泻活性成分能下调bikunin在结石大鼠肾组织的表达,减少肾组织草酸钙晶体的形成,从而抑制大鼠肾结石形成。     

特发性高草酸尿大鼠模型的建立

目的 建立特发性高草酸尿(IH)的大鼠模型.方法 将第1代72只SD大鼠(雌雄各半)分别置于大鼠代谢笼中,在适应饮食5 d后收集连续2 d的24 h尿,用离子色谱仪测定24 h尿草酸排泄量.将第1代大鼠中尿草酸排泄量最高的3只雄鼠与6只雌鼠进行交配,按同样的方法检测其子代(作为近交系)的24 h尿草酸排泄量,再选择尿草酸排泄量最高的3只雄鼠与6只雌鼠进行交配.依此类推,连续对每代大鼠进行检测、筛选和近交传代至第5代.结果 根据第1代大鼠的检测值确定大鼠24 h尿草酸排泄量的正常值范围(x ±2s):雄性为(4.82±2.94) mg;雌性为(5.21±3.26) mg.第5代近交系大鼠24 h尿草酸排泄量(x ±s):雄性为(12.54±2.46) mg (n=16);雌性为(13.51±2.63) mg (n=16).将24 h尿草酸排泄量高于正常值范围且在2.5倍以内的大鼠定义为IH大鼠,则在第5代近交系大鼠中,雌、雄性IH大鼠的出现率均超过90%.结论 该实验建立的IH大鼠模型可稳定传代,可用于IH的病因学研究.     

HPLC法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量的方法学评价及临床应用

【目的】建立高效液相色谱法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量,并应用于临床。【方法】采用LC—C18（250mm×4．6mm,5μm）色谱柱;LC—C18（4．6mm×12．5mm,5μm）为预柱;流动相为0．25％磷酸二氢钾（含2．5mmol／L四丁基硫酸氢铵和2．65×10^-5mol／L乙胺四乙酸二钠,pH2．0）;检测波长210nm,流速1．0ml／min;柱温25℃;进样量20μl。72例草酸钙结石患者及40例健康志愿者,分为一水草酸钙组（40例）、二水草酸钙组（32例）和对照组（40例）,收集上述112例24h尿液处理后取上清液进行HPLC分析,测得尿中草酸和枸橼酸含量后进行统计学分析。【结果】草酸与枸橼酸的标准曲线分别为：Aoxa=12528．4Coxa-641．9（r=0．9990,n=5）和Acit=1607．5Ccit-13．8（r=0．9990,n=5）;最低检测限分别为0．4μg／ml和0．8μg／ml;线性范围分别为1．563～100μg／ml和3．125—200μg/ml;平均回收率分别为96．6％和95．7％;日内及日间精密度RSD分别小于13．5％和8．3％。二水草酸钙组结石患者的尿草酸高于一水草酸钙组和对照组（P〈0．05）,一水草酸钙组患者的尿枸橼酸低于二水草酸钙组和对照组（P〈0．05）。【结论】高效液相色谱法用于检测人24h尿液中的草酸和枸橼酸,方法简单,灵敏。对临床草酸钙结石患者尿液中草酸和枸橼酸测定结果统计发现一水草酸钙结石的形成与结石抑制物枸橼酸的缺乏有关,二水草酸钙结石的形成与高尿草酸有关。     

肠源性高草酸尿大鼠模型的建立

目的：建立肠源性高草酸尿的大鼠模型。方法随机选取30只雌性SD大鼠置于大鼠代谢笼中适应性喂养7 d之后收集24 h尿,记录尿量,采用离子色谱仪测定其草酸浓度,计算正常大鼠在该条件下24 h尿草酸排泄量。菠菜汁灌胃处理大鼠,再测定灌胃后24 h尿草酸排泄量。对比灌胃菠菜汁前后,大鼠24 h尿草酸排泄量的差别;分组对照实验,随机选取20只雌性SD大鼠,随机分成A组和B组,B组灌胃菠菜汁,A组灌胃等量纯净水,其他条件相同,比较两组24 h尿草酸排泄量。结果反复测定,正常大鼠灌胃菠菜汁前24 h尿草酸排泄量为（0.53±0.18） mg,灌胃菠菜汁后第1天为（1.93±0.36） mg,第3天为（1.85±0.38） mg,第7天为（2.03±0.39） mg;A组（0.44±0.12） mg,B组（1.68±0.38） mg。结论大鼠在灌胃菠菜汁之后其尿液24 h草酸排泄量明显增加,大概增加3~4倍,说明每天对大鼠进行定量定浓度的菠菜汁灌胃,可以使其保持长期的高草酸尿状态,该方法建立的肠源性高草酸尿大鼠模型简便可行,可广泛用于其他方面的研究。     

两种草酸钙结石大鼠模型的比较研究

目的 比较乙二醇法与草酸铵法大鼠草酸钙结石模型的肾脏病理改变及功能损害情况,探讨两种草酸钙结石模型的选择与应用。方法 36只SPF级雄性健康Wistar大鼠随机分为空白对照组、乙二醇组和草酸铵组(n=12)。乙二醇组大鼠给予1%乙二醇自由饮水和每日2%氯化铵2 m L灌胃,草酸铵组大鼠给予5%草酸铵饲料。造模后,检测各组大鼠血尿素氮(UN)、血清肌酐(Cr)及血清钙(Ca2+)、磷(P)和镁(Mg2+)含量,24 h尿草酸、Ca2+、P和Mg2+含量;显微镜下观察肾组织切片中草酸钙结晶沉积及病理变化。结果 乙二醇组和草酸铵组大鼠的尿草酸、Ca2+及P含量明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.01)。两种方法复制大鼠草酸钙结石模型的成石效果均较显著、稳定,但大鼠肾脏病理改变及功能损害程度的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 与乙二醇法造模比较,草酸铵法造模致大鼠肾脏病理改变及肾损害较严重,更适合应用于结石病致肾功能受损的研究。     

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织megsin表达的影响

目的 探讨氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织megsin表达的影响.方法 选择18只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,体质量为240～280 g.按随机数字表将大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)及氟伐他汀治疗组(DF组),各6只.DC组和DF组大鼠用链脲佐菌素制备糖尿病模型.然后DF组大鼠给予氟伐他汀2 mg·kg-1·d-1灌胃,NC组和DC组大鼠仅给予等量自来水灌胃.制模成功后第6周末,收集24 h尿液、血清及肾脏组织标本,测定血清总胆固醇、三酰甘油、24 h尿清蛋白水平,计算肾肥大指数(肾重/体质量)、血肌酐清除率和尿清蛋白排泄率,并制备肾组织石蜡切片进行免疫组化和过碘酸血夫(PAS)染色,观察megsin、Ⅳ型胶原和层黏连蛋白表达.结果 NC组大鼠血糖、总胆固醇、三酰甘油水平、肥大指数、肌酐清除率、尿清蛋白排泄率及肾组织megsin、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白水平[分别为(5.7±0.8)mmol/L、(1.78±0.30)mmol/L、(1.0±0.7)mmol/L、(3.4±0.5)mg/g、(1.63±0.51)ml·min-1·kg-1、(2.1±0.6)μg/24 h、(4.6±1.2)、(4.7±0.9)、(8.5±1.3)]与DC组[分别为(19.7±2.5)mmol/L、(8.61±0.85)mmol/L、(4.5±0.7)mmol/L、(7.7±1.3)mg/g、(5.31±0.38)ml·min-1·kg-1、(9.7±1.2)μg/24 h、(19.5±0.9)、(19.6±0.6)、(25.3±1.5)]、DF组[分别为(19.8±1.3)mmol/L、(3.80±0.79)mmol/L、(2.4±0.5)mmol/L、(5.2±0.5)mg/g、(2.97±0.18)ml·min-1·kg-1、(5.9±1.0)μg/24 h、(14.2±1.0)、(14.8±1.1)、(17.8±1.0)]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);DC组大鼠总胆固醇、三酰甘油、肥大指数、肌酐清除率、尿清蛋白排泄率及肾组织megsin、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白水平与DF组比较,差异亦均有统计学意义(P＜0.05).PAS染色显示,DC组大鼠肾小球系膜增生明显;DF组与DC组相比,大鼠肾小球系膜增生减轻.结论 糖尿病大鼠肾组织中megsin表达增强,氟伐他汀可通过抑制megsin表达来发挥肾脏保护作用.     

姜黄素干预对乙二醇诱导的大鼠肾草酸钙结石形成的影响

目的 研究姜黄素对乙二醇诱导的大鼠肾草酸钙结石形成的影响.方法 32只Wistar大鼠分为单纯诱石组(1％乙二醇自由饮用诱导肾草酸钙结石形成)、诱石+姜黄素干预组(1％乙二醇自由饮用+20 mg·kg-1·d-1姜黄素灌胃)、单纯姜黄素组(去离子水自由饮用+ 20 mg· kg-1·d-1姜黄素灌胃)和空白对照组(去离子水自由饮用),每组8只.于实验前和实验结束时(分组处理后4周末),分别检测大鼠血、尿离子钙和镁浓度、尿草酸、尿枸橼酸及血清肌酐浓度;处死大鼠后取肾脏组织,检测肾脏组织丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;HE染色观察肾脏组织草酸钙结晶形成情况;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡.结果 与空白对照组比较,单纯姜黄素组大鼠尿草酸、肾小管上皮细胞凋亡指数、肾脏组织MDA含量和血清肌酐水平轻度升高,尿镁离子浓度、尿枸橼酸盐含量和肾脏组织T-SOD活性轻度降低.与单纯诱石组比较,诱石+姜黄素干预组大鼠尿草酸、肾小管上皮细胞凋亡指数、肾脏组织MDA含量明显下降,尿镁离子浓度、尿枸橼酸盐含量、肾脏组织T-SOD活性显著升高,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对正常饮食大鼠具有轻微的诱发肾草酸钙结石的作用,但可明显抑制乙二醇诱导的大鼠肾结石生成.     

牛奶灌胃减轻大鼠急性百草枯中毒肺损伤的实验研究

目的探讨牛奶灌胃对大鼠百草枯中毒肺损伤的治疗效果。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组,其中5只为空白对照组,牛奶实验组及生理盐水对照组各20只。百草枯染毒后1 h进行干预,染毒后3、6、24、48 h(每个时间点5只)处死大鼠,取肺组织进行组织切片,血液送检分析百草枯浓度。结果中毒后3、6、24和48 h牛奶实验组大鼠血浆百草枯浓度[(0.544±0.037)μg/ml、(0.460±0.047)μg/ml、(0.374±0.032)μg/ml和(0.126±0.031)μg/ml]低于生理盐水对照组[(3.592±0.164)μg/ml、(3.054±0.165)μg/ml、(2.350±0.184)μg/ml和(0.736±0.080)μg/ml](均P0.05)。组织病理学结果提示牛奶实验组大鼠肺组织的炎症细胞浸润、肺充血水肿及肺实变等损伤情况较生理盐水对照组明显减轻。结论牛奶灌胃可降低百草枯中毒大鼠的血浆百草枯浓度,减轻肺组织损伤。     

加味黄风汤对糖尿病肾病模型大鼠肾组织8-OHdG表达的影响

目的观察加味黄风汤对糖尿病肾病模型大鼠肾脏8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达水平的影响。方法 40只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型组、加味黄风汤低、高剂量组,各10只,除空白对照组外其余组大鼠均经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模,8周后检测24h尿微量白蛋白,检测血清肌酐及血糖水平,肾组织病理切片光镜及电镜检查,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肾组织8-OHdG表达水平,化学发光法(Luminescence)检测大鼠肾组织腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平。结果模型组大鼠24h尿微量白蛋白较空白对照组增加[(1702.06±659.75)μg比(503.03±320.16)μg,P0.05],肾脏病理可见肾小球肥大,系膜基质增生,基底膜增厚及足细胞足突融合,模型组大鼠肾组织8-OHdG表达水平较空白对照组增加[(795.23±185.73)ng/mL比(600.79±159.54)ng/mL,P0.05)],肾组织ATP水平较空白对照组下降[(0.27±0.17)pmol/mg比(0.72±0.14)pmol/mg,P0.05)]。治疗8周后加味黄风汤低、高剂量组糖尿病肾病模型大鼠24h尿微量白蛋白水平明显下降[(783.34±326.11)μg比(1567.46±621.97)μg,(610.99±325.54)μg比(1610.34±695.64)μg,P0.05];血糖水平明显下降[(24.31±1.90)mmol/L比(29.19±1.88)mmol/L,(23.97±2.73)mmol/L比(30.56±1.88)mmol/L,P0.05];光镜下肾小球肥大、系膜基质增生减轻;电镜下足细胞足突融合、基底膜增厚情况都有所改善。加味黄风汤低、高剂量组较模型组肾组织8-OHdG表达水平均有所下降[(695.49±159.76)ng/mL、(610.61±71.43)ng/mL比(795.23±185.73)ng/mL,P0.05]。高剂量组肾组织8-OHdG表达水平低于低剂量组,但二者差异无统计学意义[(610.61±71.43)ng/mL比(695.49±159.76)ng/mL,P0.05]。加味黄风汤低、高剂量组较模型组肾组织ATP表达水平均有所上升[(0.39±0.15)pmol/mg、(0.52±0.14)pmol/mg比(0.27±0.17)pmol/mg,P0.05]。高剂量组ATP表达水平高于低剂量组,但二者差异无统计学意义[(0.52±0.14)pmol/mg比(0.39±0.15)pmol/mg,P0.05]。结论糖尿病肾病模型大鼠肾组织8-OHdG表达明显上升,ATP表达水平下降,出现蛋白尿,足细胞损伤。加味黄风汤可下调糖尿病肾病模型大鼠肾组织8-OHdG表达水平,提高肾组织ATP水平,减轻蛋白尿水平,改善血糖,保护肾功能。     

尿足细胞标志蛋白Podocalyxin检测在糖尿病肾脏损害程度评估中的意义

目的探讨尿液足细胞表面标志蛋白Podocalyxin(PCX)检测在糖尿病肾脏损害程度评估中的意义。方法选取97例2型糖尿病患者及30例健康体检者(正常对照组)。按照尿清蛋白排泄率(UAER)及血清肌酐(SCr)水平,将97例糖尿病患者分为4组:Ⅰ组,UAER<30 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,27例;Ⅱ组,UAER为30～299 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,29例;Ⅲ组,UAER≥300 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,22例;Ⅳ组,UAER≥300mg/24 h,SCr>135μmol/L,19例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测5组受检者尿液中PCX水平,分析尿液中PCX与UAER、尿蛋白定量的关系。结果与正常对照组比较,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组糖尿病患者糖化血红蛋白(HbA1c)、尿中PCX、UAER显著升高(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组SCr、尿蛋白定量亦显著升高(P<0.05);且随着糖尿病肾病的进展,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组尿液中PCX分别为(5.8±1.0)μg/L、(15.3±4.3)μg/L、(28.9±9.0)μg/L和(23.3±10.6)μg/L,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析显示,尿液中PCX与UAER、尿蛋白定量均呈正相关(r值分别为0.78和0.58,P均<0.01)。结论尿液PCX检测可反映糖尿病肾病的进展。     

富氢水对高草酸尿所致大鼠肾小管上皮损伤的保护作用研究

目的 观察高草酸尿对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及富氢水对该影响的作用.方法 56只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(饮用去离子水,去离子水灌喂)、单纯诱石组(饮用1％乙二醇溶液,去离子水灌喂)、单纯富氧水对照组(饮用去离子水,氧化还原电位- 140 mV的高浓度富氢水灌喂)、氢氧化镁对照组(饮用1％乙二醇溶液,氢氧化镁溶液灌喂)以及高、中、低浓度富氢水干预组(饮用1％乙二醇溶液,氧化还原电位- 140 mV、- 110 mV或- 60 mV的富氢水灌喂),每组8只,连续处理4周.测定各组大鼠24 h尿草酸浓度,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡指数(AI),测定肾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 单纯诱石组、氢氧化镁对照组和高、中、低浓度富氢水干预组24h尿草酸浓度均显著高于空白对照组和单纯富氢水对照组(P＜0.05).单纯诱石组肾小管上皮细胞AI显著高于空白对照组(P＜0.05),高、中、低浓度富氢水干预组肾小管上皮细胞AI分别为单纯诱石组的46.8％、60.0％、92.6％,呈显著量效关系(r=-0.724,P ＜0.05).富氢水浓度与肾组织SOD活性呈显著正相关(r =0.683,P＜0.05),与肾组织MDA含量呈显著负相关(r=-0.736,P＜0.05).结论 高草酸尿可造成肾小管上皮细胞凋亡增加,富氢水对此有显著的保护性作用.     

枸杞对大鼠肾草酸钙结石生成的干预效果及其机制

目的 研究枸杞对大鼠肾草酸钙结石生成的干预效果及可能机制.方法 Wistar大鼠根据诱石方式(吸烟或饮用乙二醇或两者联合)、枸杞浸泡剂干预与否以及干预浓度(10%或25%)进行分组,设立空白对照组,每组10只.分组处理40 d后,收集24 h尿液并采集肾组织样本.检测尿液中钙、草酸及枸橼酸浓度;观察各组大鼠肾小管草酸钙结晶沉积情况并进行等级评分;检测肾组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;TUNEL染色观察肾小管细胞凋亡并计算凋亡指数.结果 吸烟联合乙二醇诱石组尿钙浓度明显高于空白对照组(P<0.01);单纯饮用乙二醇和吸烟联合乙二醇诱石组大鼠肾小管草酸钙结晶评分、肾组织MDA含量及肾小管上皮细胞凋亡指数均高于空白对照组,而尿液中枸橼酸浓度和肾组织T-SOD活性均低于空白对照组.10%和25%枸杞浸泡剂干预可显著降低吸烟联合乙二醇诱石组大鼠尿钙浓度(P<0.01);同时使单纯饮用乙二醇和吸烟联合乙二醇诱石组大鼠肾小管草酸钙结晶评分、肾组织MDA含量及肾小管上皮细胞凋亡指数下降,而尿液中枸橼酸浓度和肾组织T-SOD活性升高.枸杞浸泡剂两种浓度间未见明显量效关系.结论 枸杞能有效抑制吸烟和(或)乙二醇诱导的大鼠肾草酸钙结石的生成,其机制可能与降低肾组织内自由基水平,抑制肾小管上皮细胞凋亡,以及减少尿液中促石成分而增加抑石成分有关.     

氟西汀对慢性应激大鼠血清皮质醇、肿瘤坏死因子-α、胃黏膜细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 研究氟西汀对慢性应激大鼠血清皮质醇、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、胃黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 将青年雄性Wistar大鼠24只随机分为对照组、应激组、氟西汀组各8只.应激组和氟西汀组大鼠每笼1只喂养,实验第1-21天,接受各种不同的应激.氟西汀组大鼠每天给予氟西汀水溶液灌胃.对照组大鼠群养不给任何刺激.实验第22天杀死所有大鼠,检测血清皮质醇、TNF-α浓度;用免疫组化法检测胃黏膜蛋白ICAM-1表达,进行图像分析,测定光密度平均值.结果 应激组大鼠与对照组比较,血清皮质醇含量[(77.12±9.76)μg/ml,(44.96±6.25)μg/ml,t=7.85,P<0.01]、TNF-α含量[(69.66±6.68)pg/ml,(39.21±3.57)pg/ml,t=11.37,P<0.01]、胃黏膜ICAM-1表达的光密度平均值[(53.87±6.84),(30.26±3.68),t=8.59,P<0.01]有明显增高;与应激组比较,氟西汀组大鼠血清皮质醇含量[(58.82±6.56)μg/ml,t=4.40,P<0.01]、TNF-α含量[(50.18±3.23)pg/ml,t=7.43.P<0.01]、胃黏膜ICAM-1表达的光密度平均值(36.61±4.39,t=6.00,P<0.01)明显下降.结论 慢性应激可引起大鼠血清皮质醇、TNF-α含量增高,胃黏膜ICAM-1过表达,而氟西汀可以部分的逆转这些改变.     

PGC-1α在海人酸(KA)诱导培养大鼠海马神经元氧化应激损伤中的作用

 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator,PGC)-1α 在海人酸(kainic acid,KA)诱导的培养大鼠海马神经元氧化应激及神经损伤中的作用。方法 离体培养大鼠海马神经元,采用电穿孔基因转染技术分别转染PGC-1α shRNA质粒和空载体质粒。培养7 天后,用KA刺激上述海马神经元24 h,检测转染空载体质粒海马神经元(空白对照组,n=10)、KA刺激的转染PGC-1α shRNA质粒(实验组,n=11)和KA刺激的空载体质粒海马神经元(KA对照组,n=10)的谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性变化。FJB染色检测KA刺激24 h后实验组和KA对照组培养大鼠海马神经元神经损伤情况。结果 KA刺激24 h,培养的大鼠海马神经元GSH含量和SOD活性分别为(5.74±0.54) μmol·L-1·μg-1 protein和(10.57±1.25) U/mg protein,较空白对照组显著降低［(9.38±0.72) μmol·L-1·μg-1 protein,P<0.01;(23.12±3.23) U/mg protein,P<0.01］;LDH活性为(2.21±0.18) mmol NADH,H+/min/100 mg protein,较空白对照组海马神经元显著增高［(1.29±0.09) mmol NADH,H+/min/100 mg protein,P<0.01］。转染PGC-1α shRNA质粒组,KA刺激24 h海马神经元GSH含量和SOD活性分别为(3.37±0.42) μmol·L-1·μg-1 protein和(4.54±0.91) U/mg protein,较KA对照组海马神经元明显降低(P均<0.05);LDH活性为(2.74±0.19) mol/NADH+/min/mg protein,较KA对照组海马神经元显著增加(P<0.01)。FJB染色显示转染PGC 1α shRNA质粒组,KA刺激24h培养大鼠海马神经元损伤较KA对照组明显增加(P<0.05)。结论 PGC-1α基因下调加重KA刺激后培养大鼠海马神经元损伤,可能与其加重氧化应激损伤有关。     

急性肺栓塞大鼠肺泡灌洗液磷脂变化

目的探讨急性肺栓塞大鼠肺泡灌洗液总磷脂及大小聚集体的变化。方法雄性SD大鼠24只随机分为对照组、栓塞24h组、栓塞2周组,每组8只;以明胶海绵溶液经颈静脉注入制备大鼠肺栓塞模型,经右心导管测定肺动脉压、心率、呼吸频率,并行动脉血气分析。上述3组大鼠分别于术后2周、24h、2周时处死,取肺组织制备病理切片,HE染色光镜下观察肺组织病理变化;留取肺泡灌洗液行总磷脂及大小聚集体测定。结果对照组、栓塞24h组、栓塞2周组大鼠肺动脉平均压分别为(14.2±4.1)mmHg、(26.1±7.5)mmHg、(29.0±8.2)mmHg,肺栓塞后大鼠肺动脉压升高(F=3.09,P<0.05);动脉血氧分压分别为(94.1±8.8)mmHg、(80.5±5.8)mmHg、(73.4±14.3)mmHg(F=1.25,P<0.05)。实验大鼠肺组织病理切片光镜检查,栓塞24h组可见肺组织多个血管腔有明胶海绵栓塞,栓塞2周组栓子基本溶解。对照组、栓塞24h组、栓塞2周组肺泡灌洗液总磷脂水平分别为(374.17±36.55)mg/100ml、(311.67±48.56)mg/100ml、(325.52±52.16)mg/100ml(F=2.41,P<0.05);大聚集体水平分别是(286.11±20.48)mg/100ml、(211.47±40.56)mg/100ml、(234.37±75.32)mg/100ml(F=1.92,P<0.05);小聚集体水平分别是(208.00±22.36)mg/100ml、(236.71±40.15)mg/100ml、(245.83±34.23)mg/100ml(F=1.83,P>0.05)。结论大鼠急性肺栓塞后肺泡灌洗液总磷脂及大聚集体水平显著降低在肺肺栓塞后血氧过少中起重要作用。