乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子表达及凋亡细胞数的影响

目的探讨乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子(AIF)表达及凋亡细胞数的影响。方法 54只SD大鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注组(对照组)、脑缺血-再灌注+乌司他丁治疗组(治疗组)。采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。治疗组再灌注时,腹腔注射乌司他丁2万U/kg。采用免疫组化法检测大鼠脑组织细胞色素C表达,采用逆转录(RT)-PCR法检测大鼠脑组织AIF表达,采用原位末端标记法检测大鼠脑组织凋亡细胞数。结果对照组和治疗组大鼠脑组织皮质区细胞色素C、AIF的表达及凋亡细胞数均明显高于假手术组(均P<0.05),但治疗组大鼠脑组织皮质区细胞色素C、AIF的表达及凋亡细胞数明显低于对照组(均P<0.05)。结论乌司他丁抑制细胞凋亡可能与下调脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、AIF的表达,减轻线粒体损伤,抑制线粒体通路的凋亡途径有关。     

硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的研究硫辛酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,进一步探讨其机制。方法 54只雄性清洁SD大鼠按照随机原则平均分成3组:假手术组(18只)、脑缺血再灌注组(对照组18只)、脑缺血再灌注+硫辛酸治疗组(治疗组18只)。大鼠大脑中动脉局灶性缺血2 h(MCAO),再灌注24 h。治疗组在再灌注同时经颈外静脉给予硫辛酸20 mg/kg,假手术组和对照组给予相同体积的溶媒。采用TTC染色法检测大鼠脑组织梗死体积;采用RT-PCR法检测大鼠脑组织TNF-α的表达;采用TUNEL法检测大鼠脑组织凋亡细胞数。结果与假手术组相比,对照组和治疗组大鼠脑组织梗死体积,TNF-α的表达和凋亡细胞数均明显增加(均P0.05)。与对照组相比,治疗组大鼠脑组织梗死体积,TNF-α的表达以及凋亡细胞数均明显减少(均P0.05)。结论我们的研究结果表明,硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,可能机制为减轻脑缺血再灌注引起的炎症反应和细胞凋亡。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑Caspase-3与细胞色素C表达的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、G-CSF治疗组,每组12只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于脑缺血2 h再灌注0 h及24 h给予G-CSF治疗组G-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,给予假手术组和缺血再灌注组等量生理盐水。采用Longa评分法进行神经功能评分,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织细胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平,应用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,TTC染色检测脑梗死体积。结果假手术组大鼠未发现脑梗死病灶,细胞色素C和Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞亦少见。G-CSF治疗组细胞色素C、Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞数均较缺血再灌注组明显减少(P<0.01);缺血再灌注组和G-CSF治疗组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但G-CSF治疗组梗死灶较缺血再灌注组明显缩小(P<0.01),神经功能明显改善。结论 G-CSF对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能通过阻断线粒体/细胞色素C途径抑制细胞凋亡。     

自由基清除剂预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的探讨自由基清除剂依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及其相关蛋白Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、依达拉奉预处理组,每组15只。采用线栓法制作大鼠缺血2h再灌注24h模型。预处理组大鼠建模前12h腹腔注射依达拉奉(3mg/kg),对照组给予等容量生理盐水。再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、HSP70蛋白表达,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组和对照组大鼠缺血周围脑组织中凋亡细胞和Bcl-2、Bax及HSP70阳性细胞数比假手术组均明显增加(P<0.01);与对照组比较,其凋亡细胞和Bax阳性细胞数均明显减少(P<0.01),而Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显增加(P<0.01)。结论细胞凋亡在缺血再灌注损伤中起着重要作用;依达拉奉可能通过上调Bcl-2、HSP70蛋白表达、下调Bax蛋白表达减轻大鼠脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤耐受性,从而起到神经保护作用。     

骨髓基质细胞源神经干细胞对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及相关蛋白表达的动态影响

目的探讨骨髓基质细胞源神经干细胞对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。32只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血骨髓基质细胞移植组和缺血骨髓基质细胞源神经干细胞移植组。分别在移植后7d和14d行脑灌注固定取材,应用免疫组化染色及原位细胞凋亡检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数。结果缺血移植组各时点的凋亡细胞数均少于缺血对照组(P<0.01),缺血移植14d组凋亡细胞数明显少于缺血移植7d组(P<0.01),骨髓基质细胞源神经干细胞移植组凋亡细胞明显少于骨髓基质细胞移植组(P<0.05)。缺血移植组Bcl-2表达显著高于缺血对照组(P<0.01)。缺血移植组Bax蛋白表达明显低于缺血对照组(P<0.01)。结论骨髓基质细胞源神经干细胞可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12表达的影响

目的探讨尤瑞克林(urokallikrein)对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,caspase-12)表达的影响及其对糖尿病合并急性脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护机制。方法将82只雄性SD大鼠随机分为假手术组(10只)、缺血组(36只)和尤瑞克林组(36只)。以无菌链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,采用Zea-Longa法制作大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,比较各组大鼠脑缺血2h再灌注12、24、48h神经功能评分、缺血半暗带细胞凋亡数目及caspase-12表达的差异。结果与假手术组比较,缺血组和尤瑞克林组大鼠脑缺血再灌注12、24、48h神经功能评分、细胞凋亡数及caspase-12表达水平均升高(均P0.05),而尤瑞克林组神经功能评分、细胞凋亡数及caspase-12表达水平低于缺血组(均P0.05)。结论尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用可能通过下调caspase-12表达而实现。     

pHGF对脑缺血再灌注大鼠bc1-2、p53表达的影响

目的 探讨促肝细胞生长因子(pHGF)对脑缺血再灌注损伤神经元的抗凋亡作用及机制.方法 36只健康雄性Wistar大鼠,随机分为缺血对照组和pHGF治疗组,再随机分为再灌注6h、12h、24h组3个亚组.采用动脉线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,于各观察时间点处死大鼠取脑组织制切片,应用TUNEL法和免疫组化法检测神经元凋亡及bc1-2、p53蛋白表达情况.结果 各观察时间点,pHGF治疗组凋亡细胞数及p53蛋白阳性细胞数较缺血对照组明显减少(P＜0.05),pHGF治疗组bcl-2蛋白阳性细胞数较缺血对照组明显增多(P＜0.01).结论 pHGF具有抑制脑缺血再灌注损伤神经元凋亡的作用,其作用机制与调节bc1-2、p53蛋白表达有关.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层p-JNK表达及神经细胞凋亡的影响

目的研究活化的c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达和垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）的影响、抑制细胞凋亡的机制。方法制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。72只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、PACAP治疗组。缺血开始时治疗组静脉注射PACAP 2．5μg。再灌注后各时间点处死取脑,进行HE染色、p-JNK免疫组化染色和TUNEL法检测神经元凋亡。结果不同时间点PACAP组神经细胞缺血性损伤较缺血再灌注对照组减轻。缺血再灌注对照组p-JNK分别在2、48h成2次表达高峰,凋亡细胞较多;PACAP组再灌注后pJNK表达下降,凋亡细胞减少。结论PACAP对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,可抑制细胞凋亡．部分依赖于其可下调p—JNK表达。     

乌司他丁对糖尿病大鼠局灶性脑缺血的脑保护作用

目的探讨乌司他丁对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 (1)应用高剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作实验型2型糖尿病大鼠模型。(2)非糖尿病大鼠(n=30)和糖尿病大鼠(n=60)均制作大脑中动脉脑缺血模型。制模后局部大脑中动脉缺血30min后,再给予乌司他丁及24h再灌注。其中30只糖尿病大鼠在MCAO成功30min后,立即给予乌司他丁(100mg/kg,腹腔)。PCR检测凋亡诱导因子(AIF)评估细胞凋亡,免疫组化方法检测细胞色素C。结果乌司他丁治疗后糖尿病大鼠的凋亡相关蛋白和细胞色素C较无药物治疗的明显减低(P<0.05)。糖尿病合并MCAO大鼠的凋亡相关蛋白和细胞色素C较单纯的MCAO大鼠明显增加(P<0.05)。结论乌司他丁可能通过减少凋亡诱导因子、细胞色素C而改善糖尿病大鼠的脑缺血再灌注损伤。     

人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型.60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(6只),假手术组(6只),缺血对照组(24只)和移植治疗组(24只);后2组又分为再灌注7 d、14 d、21 d、28 d组(各6只).体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞.造模成功后24h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源的神经干细胞悬液(细胞浓度为2×106/ml),缺血对照组经尾静脉注射生理盐水,假手术组不做任何处理.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2、Bax表达.结果 与缺血对照组比较,移植治疗组各时间点的细胞凋亡数均明显减少(均P＜0.01),Bcl-2阳性细胞数明显增高(均P＜0.01),Bax阳性细胞数明显减少(P＜0.05～0.01).结论 人脂肪组织来源的神经干细胞可能通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,减少局灶性脑缺血细胞凋亡;对脑缺血再灌注损伤后的神经细胞起保护作用.     

δ阿片受体激动剂在全脑缺血再灌注损伤中的神经保护机制

目的观察δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡细胞及磷酸化p38表达的影响,探讨DADLE在全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡中的脑保护机制。方法采用二血管加低血压阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=10),模型组(n=10),治疗组(再按DADLE静脉注射不同剂量分为3个亚组2 mg组、3 mg组、5 mg组,n=10),TUNEL法检测凋亡细胞,Western blot检测神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)蛋白的表达。结果 DADLE可显著减少大鼠缺血神经元细胞凋亡,与假手术组比较,缺血后大鼠神经元磷酸化p38 MAPK表达水平增加(P0.05),与模型组比较,治疗组各组磷酸化p38 MAPK表达水平有所降低(LSD-t值依次为0.61、1.61、1.8,P0.05),且其作用呈剂量依赖性。结论δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,抑制磷酸化p38 MAPK的表达,减少细胞凋亡是其脑保护作用机制之一。     

人尿激肽原酶对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 研究人尿激肽原酶(HUK)对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注(FCIR)损伤后细胞凋亡数量及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2联合X蛋白(Bax)蛋白表达的影响.方法 84只雄性SD大鼠分为假手术组(12只)、脑缺血再灌注(IR)组(36只)、HUK处理组(36只),IR组和HUK处理组剩余大鼠又按照再灌注时间6 h、12 h、24 h、72 h、168 h分为5个亚组(均为6只).建立大鼠大脑中动脉FCIR模型.假手术组、IR组及HUK处理组中各取6只SD大鼠用于测定梗死体积,其余大鼠用于观察神经功能缺陷评分、TIJNEL法及免疫组化检测凋亡细胞数量及凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 HUK处理组神经功能缺陷评分、梗死灶体积、除168 h亚组外的各时 间点的凋亡细胞数及Bax蛋白表达均显著少于IR组(P＜0.05),除168 h亚组外的各时间点的Bcl-2蛋白表达均显著高于IR组(P＜0.05).结论 HUK对FCIR后的脑组织起保护作用,其机制可能为损伤后3 d内通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡.     

亚硒酸钠对脑缺血再灌注损伤大鼠HIF-1α表达的影响

目的 研究亚硒酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经细胞凋亡的保护作用及其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 48只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)及亚硒酸钠治疗组,每组16只,采用线栓法建立脑缺血再灌注模型,治疗组于再灌注后给予亚硒酸钠0.625 mg/(kg·d)腹腔注射7 d.各组大鼠经组织处理后用亚甲兰尼氏体染色及TUNEL染色,分别观察大鼠海马CA1区神经元存活和凋亡情况,Western Blot实验测定缺血组织HIF-1α水平的表达.结果 脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元数目明显减少,凋亡细胞明显增加(P<0.001),亚硒酸钠治疗后海马神经细胞存活数目明显增多,凋亡细胞明显减少(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠海马HIF-1α水平表达明显增加(P<0.01),而经亚硒酸钠治疗后大鼠海马HIF-1α水平表达较模型组明显降低(P＜0.05).结论 亚硒酸钠可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡,同时能抑制组织HIF-1α的过度表达.     

重组人生长激素对脑缺血/再灌注损伤细胞凋亡及Nestin表达的影响

目的观察重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对脑缺血/再灌注(ischemia-reperfu-sion,I/R)损伤后神经元细胞凋亡及Nestin表达的影响。方法54只SD雄性大鼠随机分成3组:假手术组、对照组(脑缺血/再灌注+生理盐水组)、治疗组(脑缺血/再灌注+重组人生长激素),每组18只。应用线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,大脑中动脉缺血2h,分别在再灌注7d、14d、21d后处死,采用TUNEL法,免疫组织化学法检测顶叶皮质内7d、14d、21d的神经元凋亡和巢蛋白(Nestin)的表达。结果应用重组人生长激素干预后顶叶皮质在7d、14d、21d神经元凋亡数较大鼠对照组明显减少,Nestin的表达显著增加。结论rhGH的神经保护作用可能与抑制缺血神经元细胞凋亡和上调Nestin的表达有关。     

甘草酸二铵对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨甘草酸二铵对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用。方法 将30只雄性SD大鼠（体重为250~300 g）随机分为假手术组、甘草酸二铵组、模型组,每组10只。采用可逆性大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。采用Zea-Longa评分评估大鼠神经功能。运用尼氏体染色检测大鼠海马组织尼氏小体数量,免疫组化法检测大鼠海马组织Akt、caspase-3阳性细胞数量。结果 术后24 h甘草酸二铵组和模型组大鼠Zea-Longa评分明显高于假手术组（P<0.05）;造模后3 d,甘草酸二铵组神经功能较模型组明显改善（P<0.05）。甘草酸二铵组海马组织尼氏小体数量和Akt阳性细胞数量较模型组明显增加,而caspase-3阳性细胞数量较模型组明显减少（P<0.05）。结论 甘草酸二铵可通过Akt/caspase-3途径减轻脑缺血-再灌注损伤大鼠细胞凋亡,发挥对大鼠缺血-再灌注损伤的保护作用。     

人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠VEGF表达影响的研究

目的 探讨人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用随机数字表法将56只雄性SD大鼠分为假手术组(8只)、生理盐水组(24只)、人尿激肽原酶组(24只),其中生理盐水组、人尿激肽原酶组依据再灌注后不同取材时间又分为6 h,12 h,24 h,72 h,7 d五个亚组.采用线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用神经功能评分、TTC染色、脑梗死体积测定、光镜检测等方法对不同组大鼠予以评价.采用免疫组化技术观察缺血再灌注不同时间点大鼠脑组织梗死中心区及半影区VEGF表达变化情况.结果 人尿激肽原酶组大鼠神经功能评分低于生理盐水组大鼠(P<0.05);24 h脑梗死体积测定,人尿激肽原酶组平均值为(53 261.96±7 326.75)μm3,生理盐水组平均值为(92 715.84±13 755.44)μm3,差异有统计学意义(P<0.05);人尿激肽原酶组VEGF表达在不同时间点均明显强于生理盐水组(P<0.05).结论 人尿激肽原酶能减轻脑缺血再灌注模型大鼠的神经功能损伤程度,减少脑梗死体积,促进VEGF的表达,具有脑缺血后神经保护作用.     

高压氧对大鼠颅脑爆震伤后皮层脑组织自噬与凋亡变化的影响

目的 观察高压氧治疗颅脑爆震伤后大鼠皮层脑组织自噬与凋亡表达的变化,探讨高压氧对脑细胞自噬和凋亡表达的影响及其意义. 方法 SD大鼠54只按照随机数字表法分为对照组(n=6)、爆震伤组(n=24)及爆震伤后高压氧治疗组(治疗组,n=24),对照组不进行致伤,爆震伤组和治疗组用600 mg TNT电雷管在大鼠头部正上方垂直距离12 cm处爆炸致伤,爆震伤组伤后不做任何治疗,治疗组分别于伤后3 h、22h及以后每天同一时间行高压氧处理,爆震伤组和治疗组分别于6 h、24 h、3 d、7 d采用RT-PCR和Western blotting检测皮层脑组织中Beclin-1和caspase-3的表达情况. 结果 与对照组相比,爆震伤组及治疗组各个时间点的Beclin-1和caspase-3表达均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);同一时间点上,治疗组中Beclin-1和caspase-3表达则较爆震伤组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 高压氧降低脑细胞的自噬和凋亡表达,此可能是其治疗颅脑损伤的机制之一.     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注后GFAP和细胞凋亡的影响

目的 研究银杏叶提取物(EGb761)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和星形胶质细胞表达的变化.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、EGb761干预组,线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO),原位末端标记(TUNEL)法观察神经细胞的凋亡情况,免疫组化法观测星形胶质细胞的表达.结果 与单纯缺血...     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的 观察亚低温对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响.方法 制作SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型,分亚低温治疗组和对照组,组织原位凋亡检测法检测亚低温治疗期间第24、48、72小时,以及复温后第24、48、72、96和120小时的细胞凋亡情况,RT-PCR方法检测所有观察时间点促凋亡基因Caspase、Fas和凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA表达水平.结果 亚低温治疗组脑组织的细胞凋亡数量在亚低温治疗期间的三个检测时间点均少于对照组(P＜0.05),复温以后逐渐增加,至复温后第72小时及以后细胞凋亡数量与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);促凋亡基因Caspase、Fas和凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA表达水平在亚低温治疗期间均低于对照组(P＜o.05),复温后出现mRNA表达的同向性升高,复温72 h及以后接近对照组(P＞0.05).结论 亚低温可明显减缓脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡进程,但在其复温后凋亡速度迅速回升.因此,应积极争取亚低温治疗时间窗,同步进行神经细胞救治.