Tamoxifen对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的探讨Tamoxifen对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响,阐明其可能的神经保护机制。方法采用改良Allen法建立大鼠脊髓挫伤模型,并将大鼠随机分为假手术组、对照组和干预组,采用免疫荧光染色和TUNEL双标技术检测各组神经元的凋亡变化。结果假手术组中神经元凋亡数目较少,脊髓损伤后损伤灶周边凋亡的神经元数目明显增多(P<0.01),给予Tamoxifen干预后神经元凋亡显著降低(P<0.05)。结论Tamoxifen可以减轻大鼠脊髓损伤后的神经元凋亡,从而发挥神经保护作用。     

外源性血管内皮生长因子对大鼠损伤脊髓神经元的作用

目的研究外源性血管内皮生长因子(VEGF)局部应用对大鼠脊髓损伤(SCI)后脊髓灰质神经元的作用。方法采用改良Allen氏重量打击法建立大鼠急性SCI模型,将72只模型大鼠随机分为VEGF治疗组〔人工基底膜(Matrigel蛋白胶)10μL+重组人VEGF1650.2μg〕、基底膜对照组(Matrigel蛋白胶10μL)和空白对照组(生理盐水10μL)3组,分别经蛛网膜下腔给药。于SCI后1、2、3、4周分别观察模型鼠脊髓横切面灰质神经元数量、神经元截面积和尼氏体密度恢复情况。结果 SCI后1~4周VEGF治疗组脊髓横切面灰质神经元数量(分别为76.34±6.25、108.25±11.74、144.33±13.22、165.96±18.11)和神经元截面积〔分别为(177.87±14.42)(、229.63±21.74)(、340.55±32.66)(、390.30±46.19)μm2〕均高于同期基底膜对照组〔神经元数量分别为40.89±7.20、50.61±13.11、59.78±9.46、80.13±10.84,神经元截面积分别为(108.98±15.03)(、148.53±18.38)、(163.22±16.77)(、208.87±29.58)μm2〕和空白对照组〔神经元数量分别为37.66±6.69、52.36±5.17、60.58±9.13、78.56±13.56,神经元截面积分别为(114.55±14.22)(、139.24±15.17)、(157.11±20.26)(、185.23±21.65)μm2〕(P<0.01,P<0.05)。SCI后1周时VEGF治疗组神经元尼氏体密度(0.2089±0.0210)与基底膜对照组(0.2012±0.0145)、空白对照组(0.1982±0.0106)比较差异均无统计学意义(P>0.05),SCI后2、3、4周,VEGF治疗组尼氏体密度(分别为0.2489±0.0217、0.2908±0.0327、0.3508±0.0362)亦大于基底膜对照组(分别为0.2198±0.0214、0.2406±0.0198、0.2605±0.0322)和空白对照组(分别为0.2044±0.0231、0.2356±0.0311、0.2582±0.0245)(均P<0.05)。两对照组各指标均无统计学差异。结论局部应用外源性VEGF可能对SCI后大鼠脊髓灰质神经元具有保护作用。     

脊髓损伤后神经元的再生与修复

由脊髓损伤所导致的神经功能缺失的不可逆转性，主要是因为损伤的神经元难以再生。中枢神经系统神经纤维再生的细胞生物学研究已成为当今的研究热点。随着对调节神经纤维再生机制的逐步了解，各种新技术如生物化学、分子生物学、细胞和组织培养技术以及神经解剖示踪方法的产生和应用，使我们对神经元的细微结构有了更深入的了解。近年来，学者把研究的焦点集中到影响神经组织的环境因素上。现已有大量事实证明，损伤的神经组织周围细胞环境的失衡是影响中枢神经组织再生的主要原因之一。本文对当今成熟脊髓神经细胞再生的研究现状做一综述。     

大鼠脊髓腹侧损伤脊髓组织血流量变化

用氢清除法测定大鼠腹侧脊髓损伤灰、白质血流量均显著降低,但以灰质更为明显(P<0.05)。邻近损伤节段 T_13血流量虽有所下降、但不如损伤段 T_12明显。脊髓损伤后1小时血流量下降非常显著(P<0.001)。3小时有所恢复、6小时又呈持续下降趋势。提示:脊髓损伤后脊髓组织血流量变化可能是继发性损伤的主要原因之一,对指导临床治疗有其一定意义。     

大鼠实验性脊髓损伤后胶质瘢痕分布规律研究

目的观察慢性脊髓损伤胶质瘢痕形成的时间与空间分布特征。方法应用Allen′s法建立大鼠脊髓打击伤模型,通过神经功能评分、体感及运动诱发电位、组织病理学及免疫荧光双标记方法确定胶质瘢痕形成时间及分布。结果神经功能评分、诱发电位、组织病理学显示伤后4周进入相对稳定状态,伤后4周损伤区形成空洞,胶质瘢痕位于空洞壁。结论脊髓损伤后4周进入慢性期,研究伤后脊髓空洞及胶质瘢痕形态,为判断切除胶质瘢痕的界限提供形态学依据。     

大鼠脊髓损伤后Nogo-A表达变化的免疫组织化学研究

目的观察大鼠脊髓损伤后不同时间点Nogo—A蛋白在脊髓的表达变化。方法大鼠分脊髓损伤组、假手术组和正常对照组。损伤动物存活1d、3d、7d后，分别进行Nogo—A抗体的免疫组织化学染色。结果损伤部位的灰质神经元和白质少突胶质细胞均呈明显的Nogo—A免疫阳性反应，随着损伤后存活时间的延长，两者的阳性反应细胞相对染色强度及数量均逐渐下降。结论脊髓损伤后，Nogo—A在灰质神经元有表达，其表达相对强度和表达细胞数量先明显增加，随后逐渐减少，与少突胶质细胞的表达变化相似。     

脊髓损伤继发骨质疏松大鼠椎骨的力学变化

背景：脊髓损伤造成下肢肌肉萎缩,久之引起骨质疏松,为了解脊髓损伤继发骨质疏松的发病机制,有必要对脊髓损伤继发骨质疏松动物模型骨进行生物力学性质研究。 目的：观察脊髓损伤所导致骨的力学变化。 方法：选用Wistar雄性大鼠66只,随机分为空白组和模型组。模型组大鼠于T10椎体水平剪开椎板损伤脊髓。损伤后11周解剖取大鼠L1~4椎骨,进行压缩实验、取L1~4椎骨进行扭转、冲击实验。 结果与结论：模型组压缩实验最大载荷、最大应力、最大应变,扭转实验最大转矩、最大扭转角、最大切应力,冲击实验最大冲击功、最大冲击韧性均小于空白组(P < 0.05),说明脊髓损伤继发大鼠骨质疏松后大鼠椎骨压缩、扭转、冲击力学特性发生改变。     

实验性大鼠脊髓损伤模型的制备及研究进展

正近年来,我国经济发展不断加快,其中脊髓损伤(SCI)的发病率越来越高,且可能带来严重的并发症及严重症状,自主神经功能障碍是常见的并发症,现阶段还无有效的方法或特效药治疗脊髓损伤患者,治疗措施的效用也较有限,很难达到预期效果。神经功能在经历了SCI过后恢复的难度较大,究其根源,其中一个重要的方面就是损伤区微环境能够形成大规模的抑制因子,从而对轴突生长带来明显的抑制作用。目前,国内外学术界已经提出了多种脊髓损伤模型,如     

大鼠脊髓完全性损伤模型的建立

背景：建立有效的完全性脊髓损伤动物模型是深入研究脊髓损伤的前提,只有建立标准的、可重复性高的实验动物模型才能择优选出治疗脊髓损伤的可行方案。 目的：实验拟建立一种稳定的大鼠完全性脊髓损伤动物模型。 设计、时间及地点：对照观察动物实验,于2007-11/2008-10在石河子大学药学院动物试验中心完成。 材料：30只健康Wistar大鼠随机分成假手术组6只、实验组24只。 方法：显露实验组大鼠T8~T12棘突及椎板,切除T9~10棘突及椎板,暴露相应脊髓段作为损伤区,采用大鼠脑定位仪自主设计改良Allen模型打击装置,予15 g×20 cm=2.94×10-2N 重力打击大鼠T10节段脊髓,动物模型保证硬脊膜完整。假手术组仅同法暴露相应脊髓段,但不做打击。 主要观察指标：造模后2,4,8周以斜板试验及BBB评分观察大鼠双后肢运动功能,以苏木精-伊红染色观察大鼠脊髓组织的变化。 结果：假手术组大鼠苏醒后能站立行走,斜板试验角度均大于70°,BBB评分21分,脊髓结构正常。实验组大鼠造模后双下肢全瘫,2只大鼠表现为痉挛性瘫痪,5只大鼠表现出不同程度的自残现象。造模后2,4,8周斜板试验角度均小于30°,BBB评分均少于10分,随时间延长,部分大鼠可见后肢刺激性反射,但无主动性功能活动,局部脊髓结构破坏严重。 结论：以2.94×10-2N 重力打击大鼠脊髓可保证硬脊膜的完整,并获得稳定的完全性脊髓损伤动物模型。     

Baclofen对大鼠脊髓薄片胶状质神经元的抑制作用

用脊髓薄片全细胞电压钳法观察激活γ－氨基丁酸Ｂ亚型受体（ＧＡＢＡＢR)对大鼠脊髓背角胶状质（ＳＧ）神经元活动的影响,选择性ＧＡＢＡＢＲ激动剂baclofen减少所有被记录ＳＧ神经元（n＝１５）的微小兴奋性突触后电流（mEPSGs）的发放频率。同时引起一缓慢的抑制性（外向）膜电流并伴有膜电导增加,细胞内电泳Ｇ蛋白偶联受体抑制剂（ＧＤＰ－β－Ｓ）抑制被钳制神经元的Ｇ蛋白偶联受体后,baclofen引起的缓慢外向电流被抑制,但对mEPSC频率的减低作用依然存在。结果提示脊髓内baclofen敏感的ＧＡＢＡＢ受体被激活后直接引起ＳＧ神经元超极化并能减少突触前递质的释放。     

急性大鼠脊髓损伤模型的建立与评估

目的探查大鼠椎骨解剖学特点,为制作大鼠脊髓损伤模型定位提供参考和解剖学依据;建立一种更可靠的急性大鼠脊髓损伤模型。方法将10只体重为200~250 g Wistar大鼠脊柱区进行解剖,对椎骨位置和形态特点进行观察。另取36只成年雌性Wistar大鼠随机分成3组,每组12只:脊髓损伤(SCI)组、假手术组、正常组。各组定期行为学观察(BBB评分),术后30 d进行组织学观察和神经电生理检测。结果第9、10、11胸椎棘突之间距离最为靠近;第一腰椎棘突与脊柱两侧银白色腱膜第一个相交接处对应。HE染色:SCI组可见组织结构不完整,损伤区可见大片坏死灶。BBB评分:SCI组术后第2周开始恢复,最终BBB评分未超过6分。神经电生理(SEP,MEP)检测:SCI组可以明显看到SEP与MEP的峰-峰值急剧降低,且潜伏期明显延长。结论本实验模型制作方法操作简便、重复性好,是较为理想的方法,为大鼠脊髓损伤模型的制作提供了解剖学依据和有力保证。     

促红细胞生成素治疗大鼠急性脊髓损伤的Meta分析

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。方法 计算机检索PubMed、Embase、Cochrane及中国生物医学数据库、维普信息数据库、中国知网及万方数据库,检索时限为数据库建库至2018年2月。采用Stata12.0软件进行Meta分析。结果 共纳入16个随机对照研究,包含303只大鼠,其中EPO组152只,对照组151只。Meta分析结果表明,EPO治疗后1、2、3、4、8周,大鼠BBB评分明显高于对照组（P<0.05）,6周时差异无统计学意义（P>0.05）。结论 EPO能促进脊髓损伤大鼠的运动功能恢复。     

大鼠脊髓损伤模型建立及神经源性肠功能障碍的初步评价

目的 探讨建立大鼠脊髓损伤模型的方法,并初步评价神经源性肠功能障碍的发生、发展及变化规律。方法 56只大鼠随机分为脊髓损伤组（n=40）、假手术组（n=8）和正常组（n=8）,其中脊髓损伤组再根据损伤后时间分为伤后1 d组、3 d组、7 d组、14 d组、28 d组等5个亚组,每亚组8只。假手术组和正常组合称为非脊髓损伤组。采用自制改良Allen脊髓撞击器造成脊髓不完全性损伤,假手术组只暴露硬膜囊。采用肠道推进试验、粪便粒数及粪便含水率测定来评价脊髓损伤后肠功能情况。结果 与非脊髓损伤组相比,脊髓损伤组结肠推进率明显降低（P<0.05）;而且,脊髓损伤后1 d组结肠推进率降低最明显（P<0.05）。与非脊髓损伤组相比,脊髓损伤组粪便粒数明显增多（P<0.05）;而且,脊髓损伤后1 d组粪便粒数最多（P<0.05）。与非脊髓损伤组相比,脊髓损伤组粪便含水率明显降低（P<0.05）;而且,脊髓损伤后1 d组粪便含水率降低最明显（P<0.05）。结论 采用自制改良Allen脊髓撞击器能成功复制大鼠不完全性脊髓损伤模型;大鼠脊髓损伤后出现神经源性肠功能障碍,损伤后急性期（伤后1 d）尤为显著,随后逐渐改善。     

脊髓损伤的基础研究现状与展望

脊髓损伤最常见的原因是交通意外或坠落伤,近年来,我国脊髓损伤患者有不断增多的趋势.众所周知,脊髓损伤大多后果严重,致残率和致死率都非常高.尽管基础研究和医学技术在飞速发展,但目前脊髓损伤的治疗效果仍不理想,一个重要的原因在于脊髓的受伤机制极为复杂,人们对它的认识还有待进一步深入,更为理想的治疗方法也需要我们去积极探索.因此,加强脊髓损伤的基础研究,从动物模型的建立到受伤机制的分析,以及各种治疗方法的使用效果比较,都非常重要和有意义.     

大鼠脊髓损伤后巢蛋白表达

目的探讨成年大鼠脊髓损伤后损伤区局部巢蛋白（nestin）的表达及意义。方法应用Allen＇s法建立大鼠脊髓拟伤模型，行为学评分采用BBB评分（Basso，Beattie＆Bresnahan locomotor rating scale，BBB scale），观察局部病理组织学改变及用免疫荧光组织化学方法检测局部脊髓在不同时段nestin的阳性表达变化。结果伤后1w BBB评分最低，随后增加，到4w以后达到最高并进入平台期。常规病理学检查显示拟伤模型类似于临床常见的脊髓损伤。损伤后1W，可见损伤区附近nestin表达升高，2W达高峰，4W后nestin表达明显下调。结论脊髓损伤可诱导损伤区周围短暂的nestin阳性表达，后者可能存在脊髓损伤后的再生与修复中起重要作用。     

Abnormal spontaneous potentials in distal muscles in animal models of spinal cord injury

Spontaneous potentials in skeletal muscle distal to human spinal cord injury (SCI) have been reported in the literature. Two animal models of SCI were studied for the presence of similar potentials. Six rats and two cats with surgical transections of the thoracic spinal cord were followed for 4-6 weeks with serial electromyography. As a control for the effects of anesthesia and serial testing, three intact rats were anesthetized and tested weekly for 4 weeks. In rats with spinal cord transection, spontaneous potentials emerged 4-7 days after surgery and persisted for the duration of the study (28-32 days). Spontaneous potentials were absent in controls at all timepoints. In cats, spontaneous potentials were observed 8 days postinjury and gradually diminished, starting at 2 weeks. Spontaneous potentials therefore occur after SCI in animals as well as in humans. The utilization of animal models will facilitate the understanding of alterations that occur distal to spinal cord lesions and affect the function of lower motor neurons, leading to peripheral denervation after SCI.     

Human umbilical cord blood stem cells upregulate matrix metalloproteinase-2 in rats after spinal cord injury

Matrix metalloproteinases (MMPs) are a large family of proteolytic enzymes involved in inflammation, wound healing and other pathological processes after neurological disorders. MMP-2 promotes functional recovery after spinal cord injury (SCI) by regulating the formation of a glial scar. In the present study, we aimed to investigate the expression and/or activity of several MMPs, after SCI and human umbilical cord blood mesenchymal stem cell (hUCB) treatment in rats with a special emphasis on MMP-2. Treatment with hUCB after SCI altered the expression of several MMPs in rats. MMP-2 is upregulated after hUCB treatment in spinal cord injured rats and in spinal neurons injured either with staurosporine or hydrogen peroxide. Further, hUCB induced upregulation of MMP-2 reduced formation of the glial scar at the site of injury along with reduced immunoreactivity to chondroitin sulfate proteoglycans. Blockade of MMP-2 activity in hUCB cocultured injured spinal neurons reduced the protection offered by hUCB which indicated the involvement of MMP-2 in the neuroprotection offered by hUCB. Based on these results, we conclude that hUCB treatment after SCI upregulates MMP-2 levels and reduces the formation of the glial scar thereby creating an environment suitable for endogenous repair mechanisms.     

大鼠脊髓半横断损伤后神经营养因子bFGF、GDNF的表达变化

目的探讨脊髓半横断损伤后早期不同时间碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达变化. 方法在成年SD大鼠脊髓T9～T10间半横断,取损伤位点尾侧段T10节段制作冰冻切片,运用bFGF、GDNF兔抗血清以免疫组化亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(ABC法)染色.观察并计数腹角bFGF、GDNF的阳性神经元数.结果 bFGF、GDNF主要分布于正常大鼠脊髓腹角神经元细胞浆,损伤后腹角bFGF、GDNF阳性神经元数在3 d组(n=6)、7 d组(n=6)、21 d组(n=6)均较假手术组(n=6)明显增加(P<0.01),bFGF阳性神经元数在术后3 d时达高峰,随伤后时间的延长进行性减少(P<0.01).而GDNF阳性神经元数在术后7 d时达高峰,3 d组与21 d组比较没有显著差异.结论脊髓半横断损伤(hSCI)后bFGF、GDNF表达明显增加,提示它们可能在hSCI早期修复中发挥作用.     

Presence of binucleate neurons in the spinal cord of young and senile rats

The presence of binucleate cells constitutes a normal feature of some animal tissues but is rare in the normal brain and has not been documented in the spinal cord. We assessed different segments of the rat spinal cord in order to determine the frequency and distribution of binucleate neurons in this structure as well as the impact of aging on this neuronal population. Young (4–5 months) and senile (32 months) female Sprague–Dawley rats were used. Sections from cervical, thoracic and lumbar segments were histochemically and immunohistochemically (NeuN) stained and the frequency and distribution of binucleate neurons was determined by manual counting. The frequency of binucleate neurons in all of the analysed segments was comparable between young and senile animals. Binucleate neurons were particularly frequent in the C5 and C6 segments. The overall distribution of binucleate neurons in the different laminae assessed was, Lm-III = 19%; Lm-VI = 17%; Lm-VII = 39%; LmVIII = 8%; Lm-IX = 11%; Lm-X = 6%, and was comparable between young and senile rats. We conclude that binucleate neurons occur as a normal feature of the rat spinal cord and that their frequency and distribution does not change with aging.     

慢性渐进性压迫对大鼠行为功能及脊髓运动神经递质表达的影响

目的 :观察脊髓慢性受压后实验动物的行为功能与运动神经递质表达的变化情况。方法 :采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型 ,观察联合行为评分 (CBS) ,常规病理及免疫组化检测胆碱乙酰转移酶 (ChAT)的变化。结果 :免疫组织化学染色显示 ,在正常大鼠脊髓前角运动神经元及大小神经元ChAT均表达阳性 ,脊髓损伤后ChAT阳性细胞数减少 ,CBS升高 ,二者具有相关关系。结论 :脊髓受压抑制大鼠脊髓神经元合成ChAT ,从而影响实验动物的行为功能