ERK1/2通路在缺血预处理大鼠大脑皮质的表达和作用

目的 探讨ERK1/2在大鼠脑缺血预处理中的表达及作用.方法 采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,随机分为假预处理组( Sham)和预处理组(BIP),各组又分4个亚组,每亚组6只动物.其中3个亚组分别于预处理或假预处理后15min、2h、24h用Western blot检测大脑皮质ERK1/2的表达.另外1个亚组在预处理或假预处理后24h栓塞左大脑中动脉2h,24h后行神经功能缺损评分,TTC染色法测脑梗死体积.结果 预处理后15min、2h大脑皮质p-ERK1/2表达较强,与假预处理组相比有统计学意义(P＜0.05),预处理后24h大脑皮质p-ERK1/2表达回落,与假预处理组相比无统计学差别(P＞0.05).两组预处理或假预处理后15min、2h、24h大脑皮质总ERK1/2表达无变化,组间相比无统计学差别(P＞0.05);与假预处理组相比,预处理显著减少大脑中动脉栓塞导致的脑梗死体积(P＜0.05).预处理减少神经功能缺损.结论 脑缺血预处理可能通过增强大脑皮质ERK1/2活性而保护皮质,减少脑梗死体积及神经功能缺损.     

抑制ERK1/2对大鼠弥漫性脑损伤后细胞凋亡的影响

目的 探讨抑制细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）对大鼠弥漫性脑损伤（DBI）后脑组织细胞凋亡的影响。方法 按随机数字表法将228只成年SD大鼠随机分为假手术组（n=12）、DBI组（n=72）、阻滞剂组（n=72）、对照组（n=72）,后三组按动物处死时间分为30 min、3 h、24 h、48 h、72 h和7 d六个亚组,每亚组12只。参照Mamarou自由落体方法制作重型DBI模型。阻滞剂组损伤后尾静脉注射ERK1/2特异性阻滞剂U0126（0.05 mg/kg）,对照组注射等量溶剂二甲基亚砜。免疫印迹法法检测脑组织磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达水平,免疫组化法检测Caspase-3表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 伤后30 min,脑组织pERK1/2表达水平显著增高（P<0.05）,并持续高水平表达至72 h,伤后7 d与假手术组无统计学差异（P>0.05）。伤后3 h,脑组织Caspase-3表达水平和细胞凋亡率均明显增高,72 h达到高峰,伤后7 d仍明显高于假手术组（P<0.05）。伤后30 min、3 h、24 h、48 h、72 h和7 d,阻滞剂组脑组织Caspase-3表达水平和细胞凋亡率均明显低于DBI组和对照组（P<0.05）,而DBI组和对照组均无统计学差异（P>0.05）。结论 阻滞ERK1/2通路,可显著抑制DBI大鼠脑组织Caspase-3的表达,降低细胞凋亡率。     

缺血后适应脑保护作用的研究进展

缺血后适应是缺氧耐受现象的一种,被认为可以明显减轻缺血/再灌注损伤。在适当的时机给予适当强度的后适应,可以明显缩小脑梗死的体积,减轻迟发性的神经元的凋亡,明显改善缺血后的神经功能。后适应对神经系统的保护机制可能与提高脑组织的抗氧化能力,促进脑组织内某些蛋白的合成有关系。由于后适应干预的时间是发生在缺血事件发生以后,这就为治疗缺血性脑血管病临床应用提供了可能性。     

神经妥乐平通过Nrf2/HO-1/NQO1通路发挥对帕金森病大鼠的神经保护作用

目的 探讨神经妥乐平对帕金森病(PD)大鼠的神经保护作用及其相关机制.方法 SD大鼠分为对照组、PD组(PD造模)、神经妥乐平低剂量组(PD造模+腹腔注射0.6 Nu·kg-1神经妥乐平溶液)、神经妥乐平高剂量组(PD造模+腹腔注射1.2 Nu·kg-1 神经妥乐平溶液)和通路抑制组(PD造模+腹腔注射1.2 Nu·k...     

信号分子ERK1／2与抑郁症

本文对信号分子ERK1／2在抑郁症中的研究进展作一综述。     

ERK通路参与蛇毒型神经生长因子诱导的中枢神经保护作用

目的观察经侧脑室给予蛇毒型神经生长因子（vNGF）对脑缺血再灌注损伤后细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase,ERK）表达的影响,探讨外源性vNGF通过影响ERK的表达减轻神经元损伤的可能机理。方法取健康清洁级雄性Wistar大鼠,按随机分组原则分为2d组（n=30）、7d组（n=30）、14d组（n=30）。每个时间点再分为五个亚组vNGF25U、vNGF50U、vNGF100U、生理盐水对照组、以及假手术组,每个亚组6只大鼠。生理盐水对照组和vNGF各亚组大鼠采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,术后各时间点vNGF亚组采用改良的侧脑室置管术法给予相应剂量蛇毒型神经生长因子,生理盐水对照组给予等渗盐水。采用免疫组织化学法测定术后第2d、第7d以及第14d缺血皮质周围和海马CA3／DG区ERK阳性细胞数。结果（1）与对照组相比,经侧脑室给予蛇毒型神经生长因子各组大鼠神经功能明显改善,显示了外源性补充蛇毒型神经生长因子的明显正性干预作用。（2）ERK免疫组织化学结果显示：经侧脑室给予vNGF各亚组ERK阳性细胞在缺血皮质周围和海马CA3／DG区第2d表达为高峰,第7d明显下降,第14d恢复基线水平。与相应时间点对照组相比,呈明显下降趋势。结论局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加,NGF可能通过抑制ERK途径而发挥神经保护作用。     

胃酶抑素A通过上调p-ERK1/2的表达来保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的 探讨胃酶抑素A(Pepstatin A)保护大鼠脑缺血再灌注损伤的潜在机制。方法 将48只成年雄性健康Sprague-Dawley大鼠随机分配至假手术组(16只)、生理盐水对照组(16只)及Pepstatin A干预组(16只); 大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型遵照Zea longa线栓法制备,即缺血2 h即恢复血流灌注,再灌注24 h后处死大鼠; 干预组及对照组在脑缺血再灌注即刻分别经腹腔注射Pepstatin A配置液(0.2 mL/10 g)或等体积生理盐水; 脑缺血2 h再灌注24 h时采用标准评分法行神经功能缺损评分; 假手术组、对照组及干预组中随机各取8只检测脑梗死体积,余下8只大鼠行western blot检测p-ERK1/2及Caspase-3的表达水平。结果 神经功能缺损评分显示,假手术组大鼠行为学表现正常,评分为0分,干预组大鼠的评分均显著低于对照组(P<0.05)。TTC染色显示,假手术组脑组织无梗死灶,干预组大鼠的相对脑梗死体积显著低于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,对照组p-ERK1/2蛋白的表达水平显著高于假手术组(P<0.05); 干预组该蛋白的表达水平较对照组显著增加(P<0.05); 干预组Caspase-3蛋白的相对表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 Pepstatin A可能通过上调p-ERK1/2的表达来减少脑梗死体积及细胞凋亡发生,从而保护大鼠脑缺血再灌注。     

PI3K/Akt-eNOS-NO信号通路与脑缺血后适应的研究进展

缺血后适应对缺血性脑卒中具有内源性保护作用,其机制尚未完全阐明.PI3 K/Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,达到对缺血性脑卒中的神经保护作用.缺血后适应通过激活PI3 K/Akt信号通路,从而激活下游内源性eNOS-NO系统,实现多条途径保护缺血脑组织.     

适度酒精预适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 研究适度酒精预适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注诱导的神经元损伤的保护作用。 方法 将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和酒精预适应组,每组12只。局灶性脑 缺血再灌注模型采用右侧大脑中动脉闭塞方式,缺血2 h,再灌注24 h。酒精预适应组在脑缺血再灌 注前24 h用95%酒精与0.3 ml无菌蒸馏水混合后进行灌胃,95%酒精体积（μl）计算为：[大鼠体重（g） x0.6]+0.3。其余两组用同等剂量的生理盐水灌胃。每组取8只大鼠在缺血再灌注后24 h进行神经功能 评分和氯化2,3,5-三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色并根据染色结果计 算脑梗死体积。每组剩余的4只,在缺血再灌注后24 h进行磁共振T2加权像（T2-weighted imaging,T2WI） 序列扫描,然后将大鼠处死取脑,经过冷冻切片后,每只大鼠取第一躯体感觉皮质区的2张切片,1 张用末端转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferasemediated 2'-deoxyuridine 5'-triphosphate nick-end labeling,TUNEL）检测其凋亡性细胞死亡情况,另一 张用Fluoro-Jade B检测其神经元退化变性情况。 结果 相较于缺血再灌注组,经过适度酒精预适应后会显著降低大鼠的神经功能评分[15.00 （14.25,16.00）vs 3.50（2.25,4.00）（P <0.001）]、脑梗死体积[TTC：（242.80±17.44）mm3 vs （54.83±13.43）mm3;T2WI ：（296.80±8.53）mm3 vs（59.68±9.97）mm3,P均<0.001]、凋亡细胞所占百 分比[（33.47±2.23）% vs（9.66±0.84）%,P <0.001]和退化变性神经元所占百分比（[ 45.31±3.40）% vs（23.26±1.25）%,P <0.001]。 结论 适度酒精预适应可以保护局灶性脑缺血再灌注诱导的神经元损伤。     

巴豆生物碱通过ERK1/2通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响

目的 探讨巴豆生物碱(Croton alkaloids,CA)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2)通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响。方法 50只大鼠建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,造模成功大鼠(48只),并随机分为模型组(12只)、CA低剂量组(12只)、CA中剂量组(12只)和CA高剂量组(12只),其余10只为对照组; CA低、中和高剂量组分别注射0.6、1.2、2.4 mg/kg的CA注射液,连续注射7 d; 对照组及模型组给予等量生理盐水注射; 应用神经功能评分法评定大鼠神经功能缺损和改善情况; 苏木精-伊红染色法(Hematoxylin eosin staining,HE)检测大鼠脑组织海马神经元的形态及数量; 原位末端转移酶标记法(Terminal uridine nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马ERK1/2、哺乳动物同源蛋白(Mammalian homologous protein,Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,CA低、中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA低剂量组比较,CA中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA中剂量组比较,CA高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 CA可降低MCAO大鼠神经细胞凋亡率,在一定程度上修复MCAO大鼠神经功能,发挥神经保护作用,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

17β-雌二醇对脑缺血时Bc1-2蛋白表达的影响

目的　研究 17β 雌二醇对缺血性脑损害的神经保护作用是否与Bc1 2蛋白的表达有关。 方法　采用大鼠大脑中动脉闭塞制成局灶性脑缺血模型。在缺血 2小时 ,再灌注 2 2小时后立即断头取脑 ,应用TTC染色和免疫组化方法 ,观察脑梗死体积及Bc1 2蛋白的表达。结果　 17β 雌二醇用药组较对照组脑梗死体积显著缩小 (P <0 .0 5 ) ;Bc1 2蛋白的表达较对照组明显增强 (P <0 .0 5 )。结论　 17β 雌二醇上调大鼠脑缺血时bc1 2的表达很可能是其具有神经保护作用的机制之一。     

ERK1／2在左旋多巴诱导的异动症发生机制中的作用

目的研究细胞外调节激酶（ERK1／2）在左旋多巴诱导的异动症（LID）发生机制中的作用。方法将SD大鼠分为5组：正常对照组、帕金森病（PD）组、LID组、LID＋SCH23390组和非LID组，分别观察各组行为学变化，并用免疫组化方法测定大鼠纹状体区ERK1／2及其活化形式p—ERK1／2表达水平。结果多巴胺D1受体阻断剂SCH23390可以减轻LID大鼠行为学异常；LID组和非LID组ERK1／2的表达无显著性差异，而LID组p-ERK1／2的表达较非LID组和PD组明显增加，SCH23390使其表达下降。结论ERKI／2是LID大鼠纹状体内直接输出通路上的重要信号分子，其活化参与了异动症的发生。     

缺血后处理对局灶脑缺血再灌注大鼠Toll样受体2表达的影响

目的 探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体2(TLR2)表达的影响。方法 成年雄性SD大鼠90只,分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组各30只; 用线栓法建立局灶性大脑中动脉闭塞模型(MCAO),随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、缺血后处理组(IPC),分别于再灌注24、48、72 h后留取大脑皮质组织; 采用Longa的等级评分法进行神经行为学评分,免疫组化和蛋白质印记(Western blot)法检测TLR2蛋白的表达水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR2 mRNA表达水平。结果(1)缺血后处理组大鼠神经行为学评分明显改善;(2)缺血再灌注组TLR2蛋白在再灌注24、48、72 h表达水平明显升高(P<0.05); 缺血后处理组TLR2蛋白表达在各时间点均减少(P<0.05); TLR2 mRNA的表达趋势与蛋白表达基本一致。结论 缺血后处理可以降低TLR2表达水平,这可能是其脑保护作用的部分机制之一。     

Dual roles of the MAPK/ERK1/2 cell signaling pathway after stroke

Extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), one of the best-characterized members of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) family, mediates a range of activity from metabolism, motility, and inflammation to cell death and survival. It is phosphorylated and activated through a three-tiered MEK mode via cell surface receptors stimulated by growth factors or cytokines. The phosphorylated ERK1/2 level is usually increased after cerebral ischemia/reperfusion, but whether an increase in ERK1/2 phosphorylation is protective or detrimental is highly debatable. Much of the support for ERK1/2's role as a neuroprotectant against stroke stems from its apparent involvement in the beneficial effects of growth factors, estrogen, preconditioning, and hypothermia on the ischemic brain. Conversely, evidence supporting the detrimental effects of ERK1/2 activity is derived from its activation promoting inflammation and oxidative stress and its inhibition reducing ischemic damage. The dual potential of ERK1/2 actions in the ischemic brain is likely related to its responses to a diverse array of agonists and cell surface receptors. Plausibly, the ERK1/2 activity generated by cytokines and free radicals or other inflammatory factors after stroke may worsen ischemic damage, whereas the ERK1/2 activity produced by exogenous growth factors, estrogen, and preconditioning favors neuroprotection. Future experiments should be conducted to optimize the protective effect of ERK1/2 while blocking its detrimental actions.     

脑缺血后适应对基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:探讨缺血后适应对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及与MMP-9的关系。方法:应用线栓法制做大鼠脑缺血再灌注损伤模型;对大鼠脑缺血再灌注1h和48h进行神经功能评分;48h后TTC染色测定脑梗死体积和脑水肿程度;4h、8h、24h、48h后免疫组化定位定量MMP-9水平。结果:缺血后适应组大鼠脑梗死体积、水肿程度、术后神经功能评分较对照组明显改善(P<0.05),各时间点后适应组大鼠基底节区MMP-9表达较对照组显著减少(P<0.05),梗死侧皮层MMP-9表达无显著改变。结论:缺血后适应能减少脑缺血后MMP-9的表达,缩小梗死体积,减轻脑水肿程度,改善术后神经功能。MMP-9下调可能是缺血后适应脑保护的分子机制之一。     

Neuroprotective effect of human placental extract on hypoxic–ischemic brain injury in neonatal rats

We investigated the neuroprotective effects of human placental extracts (HPE) and the effects of HPE on recovery of cognitive and behavioral function on hypoxic–ischemic brain injury in the newborn rat. The right common carotid arteries of 7-day-old rats were coagulated, and rats were then exposed to 8% oxygen. Immediately before and again at three times after the hypoxia–ischemia (pre-treatment group), and immediately after and three times again after hypoxia–ischemia (post-treatment group), the rats were intraperitoneally injected with HPE (0.1, 0.25, or 0.5 mL/10 g/dose). No-treatment rats received saline only. On postnatal day 12, brains were removed and gross morphological damage was evaluated. To quantify the severity of brain injury, bilateral cross-sectional areas of the anterior commissural and posterior hippocampal levels were analyzed with NIH Image. Assessments of the open field activity levels at 2, 4, 6 and 8 week and, the Morris water maze test at 8 weeks after hypoxia–ischemia were carried out according to standard methods. HPE pre-treatment decreased the incidence of liquefactive cerebral infarction, at an optimally neuroprotective dose of 0.5 mL/10 g/dose (P < 0.05). In the Morris water maze test, the group injected with HPE at 0.5 mL/10 g/dose concentration showed shorter escape latencies than the no-treatment group (P < 0.05). These findings support a protective effect of the HPE treatment on neuronal integrity and cognitive function following hypoxic–ischemic brain injury. Injected at an appropriate dose prior to exposure, HPE may significantly reduce or prevent hypoxic–ischemic injury in the immature brain.     

银杏叶提取物后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 探讨银杏叶提取物EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞再灌注模型.将30只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组,即假手术组（n-10）：给予5 ml生理盐水腹腔注射;对照组（n-10）：缺血90 min,再灌注24 h,5 ml生理盐水腹腔注射;实验组（n-10）：缺血90 min,再灌注24 h,在再灌注即刻20 mg/kg银杏叶提取物生理盐水稀释成5 ml腹腔注射.再灌注24 h后采用四分法测定大鼠的神经功能障碍评分（NDS）;实验结束后断头取脑采用TTC染色法测定脑梗死面积（以其同侧大脑半球体积的百分比表示）;采用western blot测定脑组织微管相关蛋白2（MAP2）的表达水平.结果 与假手术组比较,对照组、实验组小鼠NDS评分均显著升高,分别为（2.49±0.85）分和（1.58±0.62）分,3组间比较差异均明显（P＜0.05）;对照组、实验组脑梗死面积均显著增大（P＜0.05）,实验组脑梗死面积较对照组显著减小（P＜0.05）;与假手术组比较,与假手术组比较,对照组、实验组缺血侧MAP2蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.05）,实验组缺血侧MAP2蛋白的表达水平较对照组显著升高（P＜0.05）.结论 银杏提取物EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有显著的保护效应,其效应与MAP2蛋白表达水平升高有关.