T、B淋巴细胞的非特异性酯酶标记鉴别法的改进

通常区别T、B淋巴细胞,主要是依据膜的特征,如玫瑰花形成,免疫萤光染色等。这些技术操作繁杂,不适于基层医疗单位的推广。近年来,国内外创用非特异性酯酶染色法,作为T细胞的标记,在普通光镜下可以鉴别T、B淋巴细胞,其基本原理是:T淋巴细胞浆中含有非特异的α-醋酸萘酯酶(α-ANAE),能将α-醋酸萘酯水解生成α-萘酚和醋酸离子,然后α-萘酚与六偶氮付品红偶联,在细胞浆中脂酶所在部位生成不溶性的红褐色颗粒,一般B淋巴细胞无此反应。     

TB淋巴细胞的酶标记鉴别法

近年来国外研究采用酯酶染色法,以非特异性酯酶作为T淋巴细胞的酶标记,在普通显微镜下可以鉴别T、B淋巴细胞。试验的基本原理为:T细胞胞浆中含有非特异性的—醋酸萘酯酶(—naphthyl acetate esterase, ANAE),能将—醋酸萘酯水解,生成—萘酚和醋酸离子,然后—萘酚与六偶氮付品红偶联,在细胞浆中酯酶所在部位生成不溶性的红棕色沉淀物,而B细胞则无此种反     

应用酸性酯酶染色鉴别小鼠T淋巴细胞

T淋巴细胞常被用作机体细胞免疫功能的一个重要指标,常用的检测方法是羊红细胞玫瑰花结试验,但小鼠的T淋巴细胞的结花率很低。Mueller等(1975)首先应用酯酶细胞化学染色技术鉴别T淋巴细胞,并很快得到了许多实验室研究资料的支持。T淋巴细胞的胞浆里含有α—醋酸酯酶(ANAE),能水解α—醋酸萘酯生成萘酚,后者与六偶氮付品红偶联生成点状或块状的棕红色沉淀物,它是T细胞所特有的标志。B细胞无此种反应。     

灌服大蒜液小鼠外周血T淋巴细胞及亚群的变化

用酸性α—醋酸萘酚酯酶(ANAE)胞浆标记法对灌服大蒜液小鼠的外周血白细胞、T淋巴细胞及亚群进行连续观察,结果表明服用大蒜液后,小鼠T淋巴细胞和白细数量增加,体重增加,辅助性T淋巴细胞(T_H)数量增加,说明大蒜对小鼠免疫功能有促进作用。     

非何杰金氐病性恶性淋巴瘤的酶组织化学

作者对52个病人的肿瘤标本进行了组织化学反应,同时作了免疫学和形态学的观查,并对12例正常淋巴结和3例胸腺作了对照检查。组织化学检查项目是酸性磷酸酶(AcP),β葡萄糖醛酸酶(βG),硷性磷酸酶(AIP),5—核苷酸酶(5—N),三磷酸腺苷酶(ATP酶),∝—萘酚醋酸酯酶(∝NE),∝—萘酚丁酸酯酶(∝NBE)。免疫学检查包括玫瑰花结实验、膜表面免疫球蛋白测定及抗T血清等伤害试     

外周血淋巴细胞酸性α—醋酸萘酯酶的观察(附青海西宁地区96名健康人的正常值)

1975年以来许多学者都认为成熟的T淋巴细胞多具有在酸性环境能水介α-醋酸萘脂的非特异性脂酶。这类酶又特称为酸性α-醋酸萘脂酶(acid α-naphthyl acetate esterase ANAE)。大多数B淋巴细胞则为ANAE阴性。故ANAE可作为T淋巴细胞的标志。一些人注意到淋巴细胞的ANAE反应产物呈两种形态:或为一个到数个孤立     

T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶测定法——咸宁地区122名健康人的正常值

<正> 据Kulenkempff J等报导,T淋巴细胞中酸性α-醋酸萘酯酶(Acid α-Naphthyl Acetate Esterase简称ANAE),能将结构中具有酯键的化合物水解为酚和酸性离子,即R—CooR′+HOH→RCooH+R′OH。例如:α-醋酸萘酯可被酯酶水解为α-萘酚和乙酸离子,然后α-萘酚与六偶氮副品红偶联形成棕红色,根据这个原理进行试验,可以反映机体T淋巴细胞的免疫功能。因     

白介素-18增强T淋巴细胞直接接触激活的单核细胞分泌细胞因子的功能

目的:研究IL-18是否参与调节T细胞通过直接接触激活的单核细胞的功能及其细胞内机制。方法:采用磁珠分离技术从健康人外周血分离纯化T细胞和单核细胞,被植物血凝素(PHA)预刺激的T细胞用多聚甲醛固定后按41与单核细胞共培养。采用ELISA法测定上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-18的含量。采用流式细胞仪分析单核细胞表面IL-18受体α链的表达(IL-18Rα)。结果:PHA刺激48 h或72 h的T细胞诱导单核细胞产生的TNF-α显著高于未接受PHA刺激的T细胞。单独培养的单核细胞和T细胞几乎不产生TNF-α。T细胞直接接触可诱导单核细胞产生IL-18,且该作用能被核因子(NF)-κB抑制剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)和磷脂酰肌醇(PI)3-激酶抑制剂LY294002分别抑制,但有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对之无作用。与T细胞共孵育24 h的单核细胞表面IL-18Rα的表达明显上调。单克隆的IL-18中和抗体呈剂量依赖性抑制与T细胞共孵育的单核细胞产生TNF-α。IL-18不能促进单纯的单核细胞产生TNF-α,但呈剂量依赖性地促进由于接触T细胞膜而激活的单核细胞产生TNF-α,且该作用可被NAC和LY294002分别拮抗,但不受SB203580影响。结论:T细胞可通过直接接触诱导单核细胞产生TNF-α和IL-18,上调单核细胞表面的IL-18R,并激活单核细胞内的NF-κB和PI3-激酶。IL-18可增强T细胞接触激活的单核细胞分泌致炎细胞因子的功能,该作用依赖细胞内NF-κB和PI3-激酶途径的激活。     

植物血凝素(PHA)诱发的淋巴細胞的转化

淋巴细胞在体外培养中,在植物血凝素(Phytohaemagglutinin,PHA)的作用下,激活并转化为“母细胞”。PHA激活的是T淋巴细胞,B细胞则不受其影响。T淋巴细胞在机体的细胞免疫过程中有重要作用。近年来,用PHA体外激活淋巴细胞,引起淋巴细胞转化,应用于肿瘤的予后与治疗,在国内外日益受到重视。淋巴细胞体外激活的效应,即淋巴细胞的转化率,可用两种方法检测:一种是以形态变化作指标,另一种是3~H——TdR的方法来检测。测定的体外培养后第3天或第5天的淋巴细胞转化率在不同研究者虽有差异,大约为55—90％,平均近70％。国内目前     

结肠上皮细胞和结肠癌细胞内溶酶体酶免疫电镜定位比较研究

采用后包埋免疫金技术，在透射电镜下识别确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋的结肠上皮细胞和结肠癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶超微结构定位，和两者之间比较。结果发现，此酶金标颗粒定位于结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的内质网、高尔基复合体和溶酶体中。癌细胞中β－葡萄糖醛酸酶的数量高于正常结肠上皮细胞。提示β－葡萄糖醛酸酶的增多可能与癌细胞旺盛的机能活动和异常的形态结构有关。     

红枣注射液对小鼠免疫功能的影响

目的：观察红枣注射液对小鼠免疫功能的影响。方法：用100％红枣注射液给小鼠皮下注射，观察小鼠胸腺及脾重量、血清溶菌酶含量、T淋巴细胞酸性α－醛酸奈脂酶（ANAE）细胞百分率及T淋巴细胞转化率。结果：实验组小鼠胸腺及脾重量增加，血清溶菌酶含量增加，T淋巴细胞ANAE活性升高，T淋巴细胞转化率增高。结论：红枣注射液能使小鼠免疫器官重量增加，并能增强小鼠非特异性免疫功能及特异性细胞免疫功能。     

不同刺激剂对健康人和结核患者外周血T细胞产生γ干扰素和肿瘤坏死因子-α的影响

目的:检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法:12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂(PMA)+钙离子霉素(IM)、结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)、植物血凝素(PHA)刺激,莫能霉素阻断,流式细胞仪检测产生IFN-γ和TNF-α的T细胞亚群比例。结果:PMA+IM刺激健康人外周血αβ T细胞产生IFN-γ的比例明显高于结核患者(P<0.01);PMA+IM、Mtb-HAg和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者(P<0.05~P<0.01)。PMA+IM和PHA刺激健康人外周血αβ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05);PMA+IM和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05)。结论:经不同刺激剂刺激后,健康人γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者γδ T细胞产生IFN-γ的比例。经PMA和PHA刺激后,健康人αβ T和γδ T细胞产生TNF-α的比例高于结核患者。     

影响T淋巴细胞α—醋酸茶酯酶活性的某些因素

随着(?)淋巴细胞酯酶染色方法的深入探讨和应用,揭示了有许多可变因素能引起(?)淋巴细胞酸性α—醋酸萘酯酯酶(ANAE)活性的改变。本文探讨了改变付品红与亚硝酸钠和α—醋酸萘酯在孵育液中的含量及六偶氮付品红溶液和α—醋酸萘酯溶液加入孵育液中的速度对ANAE活性的影响.     

急性冠状动脉综合征患者体内T细胞亚群的变化及活化

目的研究T淋巴细胞是否参与了急性冠脉综合征(ACS)相关的炎症反应。方法采用流式细胞分析仪分析64例ACS患者和66例健康者循环T淋巴细胞亚群和T细胞激活标志物HLA-DR抗原的表达。结果ACS患者HLA-DR阳性的淋巴细胞数量显著高于健康者。结论ACS患者循环CD4+T淋巴细胞被激活,T细胞参与了ACS的发生。     

基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染

目的 研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性.方法 以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量.结果 流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01).结论 以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染.     

T淋巴细胞绝对值对放射线工作者健康调查的意义

用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)法标记T淋巴细胞,对128例放射线工作者进行了T细胞百分率、淋巴细胞绝对值和T细胞绝对值检测.结果表明T细胞百分率与对照组无显著差别,淋巴细胞绝对值放射组低于对照组,两组有显著差别(P<0.01).放射组T细胞绝对值低于正常下限的有55例,占42.97%,而T细胞百分率低于正常下限的有31例,占24.21%,两者有显著差异(P<0.001).作者认为对小剂量电离辐射者而言,T细胞绝对值表示法比T细胞百分率更为灵敏、确切.接触射线人员随着工龄的增加T细胞百分率有逐渐下降的趋势.     

外周血涂片酸性非特异性酯酶的染色方法及体会

1975年Mueller等用α—醋酸萘酯作底物孵育小鼠淋巴结冰冻切片,发现付皮质区94％以上的淋巴细胞胞质中有斑点状酶反应产物,而滤泡皮质淋巴细胞呈酶反应阳性的尚不足7％,从而提出;这类酸性非特异性酯酶可能是T淋巴细胞的标志。次年Ranki等把该方法用于人外周血淋巴细胞,也认为它可作为休止状态的T细胞的标志。此后,许多人的研究结果都支持Mueller等的见解,并把该方法用于临床或动物实验,以了解机体的细胞免疫状况。该方法简单,一般医院均可开展。且只需耳垂采血,易为受试者接受。根据我所条件及科研和临床工作的需要,我们对酸性非特异性酯酶染色方法进行了摸索。兹将反应原理,操作要点及心得体会分述如下。     

中药猪苓多糖对小鼠血液ANAE阳性淋巴细胞的影响

本实验研究了猪苓多糖对小鼠血液ANAE阳性淋巴细胞的影响。实验动物每天由腹腔注射猪苓多糖2mg/0.2ml,连续七天,实验前、后取血涂片,用α—醋酸萘酯酶法,标记ANAE阳性T淋巴细胞,测定其百分率。实验结果表明:猪苓多糖对小鼠血液ANAE阳性T淋巴细胞总数无影响,对颗粒型阳性T淋巴细胞有减少,而对分散颗粒型阳性T淋巴细胞有显著增加现象。根据上述结果,本文讨论了猪苓多糖对细胞免疫的作用。     

单纯性肾病患儿的免疫功能

在体外培养条件下应用3种丝裂原分别激活各淋巴细胞亚群,用放射性同位素掺入实验测定其转化能力。实验表明,肾病患儿活动期PHA 激活的T 淋巴细胞~3H—TdR 掺入降低,病情缓解后掺入接近正常,反映了肾病的发病与细胞免疫力下降有关。LPS 细胞和Con A 细胞的转化能力增强,说明肾病时B 淋巴细胞系统的功能激活。     

肝癌细胞内逆转录病毒介导β-葡萄糖醛酸苷酶基因的表达

目的 建立高表达β－葡萄糖醛酸苷酶（β－Ｇｌｕ）的肝癌细胞株。方法 采用脂质体介导法,将重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－βＧ转染肝癌细胞,Ｇ４１８筛选出阳性克隆,用免疫组化法、酶组织化学法、原位杂交法及酶活性测定等方法观察β－Ｇｌｕ表达情况。结果 共获得４株转染阳性克隆,其中Ｆ１,Ｈ４为β－Ｇｌｕ高表达克隆。免疫组化法发现转染细胞β－Ｇｌｕ免疫阳性物质主要分布于胞质及胞核内,酶组织化学法观察转染细