地塞米松抑制哮喘小鼠肺RANTES的表达

目的 研究地塞米松对哮喘小鼠调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)蛋白和mRNA表达的影响.方法 将30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组(每组10只):对照组、哮喘组、激素干预组,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)计数;酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF和血清中RANTES含量;肺组织切片HE染色,光镜下计数细胞总数和EOS百分比;部分行免疫组化染色检测肺组织RANTES蛋白;用原位杂交法检测肺组织RANTES mRNA表达.结果 哮喘组白细胞总数、EOS百分比、RANTES浓度明显升高(P＜0.01),干预组明显低于哮喘组(P＜0.01);哮喘组肺组织RANTES蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),主要表达于上皮细胞;干预组肺组织RANTES蛋白及mRNA表达显著低于哮喘组(P＜0.01).结论 地塞米松可抑制RANTES表达和活性而发挥抗EOS炎症作用,这可能是其控制哮喘发病的重要机制之一.     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14 (Fn4)表达的调节作用.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型.将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只.HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P＜0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P＜0.01).TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P＜0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P＜0.01).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应.     

地塞米松可增强支气管哮喘小鼠肺组织RECK的表达

目的研究Kazal基序逆向诱导富含半胱氨酸蛋白(RECK)在支气管哮喘小鼠肺组织的表达及地塞米松处理后对其表达的影响。方法 BALB/c小鼠分为哮喘组、对照组、地塞米松组,每组10只。采用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏及雾化吸入的方法制作哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)及淋巴细胞(Lym)分类计数;HE染色观察气道炎症细胞浸润及气道重塑情况,实时荧光定量PCR检测RECK mRNA的表达,免疫组织化学法检测RECK蛋白的表达及定位。结果与对照组和地塞米松组相比,哮喘组BALF中细胞总数、EOS明显增多;RECK mRNA在哮喘组表达较对照组、地塞米松组明显降低。免疫组织化学结果显示RECK主要表达于气道上皮细胞、上皮下炎症细胞。哮喘组表达最低,对照组表达最高,地塞米松组表达较哮喘组有所增高。结论 RECK在哮喘小鼠肺组织中表达明显降低,而地塞米松可上调RECK的表达。     

哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt的表达与气道炎症的关系

目的:探讨Th17细胞转录因子RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与哮喘气道炎症的关系.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平;免疫印记(Western blot)方法检测肺组织RORγt蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、蛋白水平及IL-17水平均明显高于对照组和地塞米松治疗组(P＜0.05),RORγt蛋白表达量与嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、BALF、外周血中IL-17含量、肺组织IL-17 mRNA表达量均呈正相关关系(r＝0.789、0.795、0.902、0.669、0.806、0.883,P值均＜0.01).结论:RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达,其表达水平与气道炎症密切相关,参与了哮喘气道炎症的发生过程.     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt mRNA表达的干预作用

目的:初步探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中Th17细胞转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA表达的影响.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,BALB/c小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素-17(IL-17)水平;无创肺功能体描仪检测小鼠气道反应性;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、IL-17水平高于对照组(P<0.01),地塞米松治疗组RORγt mRNA、IL-17水平低于哮喘组(P<0.05).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织RORγt表达,阻止Th17的分化,从而减少IL-17的分泌,减轻哮喘气道炎症反应.     

CCR3在哮喘小鼠气道组织Muc5ac表达中的作用

目的:探讨CCR3在哮喘小鼠气道黏蛋白5ac(Muc5ac)表达中的作用。方法:将50只清洁级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组、SB328437干预组及溶剂对照组二甲基亚砜组,各10只。测定BALF中细胞总数、分类,ELISA检测IL-4、TNF-α,肺组织HE染色,免疫组化和RT-PCR检测Muc5ac、CCR3的表达。结果:在BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、IL-4,TNF-α水平、AB-PAS阳染面积、黏蛋白Muc5ac、CCR3蛋白IOD及Muc5ac mRNA、CCR3 mRNA表达方面,哮喘组与地塞米松干预组、SB328437干预组,具有统计学差异(P0.01或P0.05)。结论:SB328437可抑制肺组织CCR3表达,进而抑制Muc5ac的表达和分泌,从而控制气道炎症。     

白藜芦醇抑制哮喘幼鼠肺组织TLR4与TRIF的表达

目的探讨白藜芦醇对哮喘幼鼠肺组织toll样受体4(TLR4)与β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)表达的影响。方法 45只BALB/c幼鼠随机分为对照组、哮喘组和白藜芦醇组。采用卵清蛋白(OVA)刺激,建立幼鼠哮喘模型。HE染色观察各组幼鼠肺组织病理学改变,测定各组幼鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数,Western blot方法检测各组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白表达变化,real time PCR方法检测各组幼鼠肺组织TLR4 mRNA与TRIF mRNA的表达水平。结果与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织可见明显的炎性细胞浸润,气道管壁明显增厚,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著升高,P0.01;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺内炎性细胞浸润明显减轻,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著降低,P0.01。与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白与mRNA表达水平显著升高,P0.01;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白与mRNA表达水平显著降低,P0.01。结论白藜芦醇能够抑制哮喘幼鼠肺组织TLR4与TRIF的表达。     

CXCR4在哮喘小鼠肺组织中的表达及氯喹的干预作用

目的检测哮喘小鼠中趋化因子受体CXCR4的表达及其拮抗剂氯喹(CQ)的干预作用。方法将6~8周SPF级Balb/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和氯喹干预组,哮喘组和氯喹干预组用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型,干预组于激发前30 min给予CQ,连续3 d,对照组用PBS代替。最后1次激发24 h内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应;最后1次激发48 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色光镜下观察肺组织的病理炎症改变,免疫组化染色检测肺组织CXCR4的表达;荧光定量PCR(Q-PCR)测定肺组织中CXCR4 mRNA的表达。结果哮喘组气道高反应及BALF中细胞总数明显高于对照组,干预组小鼠气道高反应及BALF中细胞总数与哮喘组相比显著降低;BALF中哮喘组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞数较空白组显著增加,而氯喹干预组较哮喘组显著减低;HE染色结果显示哮喘组肺部炎症细胞浸润明显,干预组与哮喘组相比明显减轻,病理评分降低;免疫组化显示哮喘组CXCR4在气道上皮细胞呈强阳性表达,干预组表达呈弱阳性;哮喘组CXCR4 mRNA的表达较对照组升高,氯喹干预组较哮喘组CXCR4 mRNA表达量降低;CXCR4表达量与BALF细胞总数呈正相关。结论 CXCR4可能参与哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应的发生,氯喹能改善哮喘小鼠的气道高反应和气道炎症可能与拮抗CXCR4相关,为氯喹治疗哮喘提供理论和实验依据,为开发治疗哮喘新药提供新的思路。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑的干预作用

 目的 探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3,VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的干预作用及其机制。方法 卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型,BALB / c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DEX）组及VD组。HE 染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用明胶酶谱法及RT-PCR法检测各组的MMP-9的活性及其mRNA表达水平。结果 ①HE 染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而DEX组及VD组均可部分逆转上述病理改变;②DEX组及VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组( P < 0.05);③DEX组及VD组肺组织MMP-9的活性及其mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组 ( P < 0.05) 。结论 VD可显著减轻哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内 MMP-9的表达来延缓气道重塑进程。     

地塞米松减轻过敏性哮喘模型小鼠气道炎性反应

目的 观察地塞米松(DEX)对过敏性哮喘模型小鼠气道炎性的影响并探讨相关机制。方法 将小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组。哮喘组小鼠于实验第0、7、14天皮下注射卵清蛋白(OVA)/氢氧化铝混合液,第21、22天1%OVA混悬液雾化吸入20 min;地塞米松组在哮喘组基础上于每次雾化吸入前3 h地塞米松(2 mg/kg)腹腔注射。末次雾化结束测定小鼠气道阻力,24 h后收集肺泡灌洗液(BALF),Wright-Giemsa染色后行细胞分类计数;ELISA测定BALF中IL-6、IL-18和IL-1β等浓度;免疫组织化学法(IHC)检测肺组织NLRP3、IL-1β蛋白表达,HE染色观察肺组织病理。结果 与对照组比较,哮喘组小鼠气道高反应性(AHR)明显增高;BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞数量明显增加;IL-5、IL-6、IL-18和IL-1β表达均升高(P<0.01);肺组织NLRP3、IL-1β蛋白表达增强。与哮喘组比较,地塞米松组小鼠AHR显著降低,BALF中炎性细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均明显减少(P<0.01),IL-5、IL-6、IL-18...     

miRNA-21在支气管哮喘患儿血清及哮喘小鼠模型肺组织中表达上调

目的探讨miRNA-21在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达,观察其靶基因PTEN在哮喘小鼠模型肺组织中的表达变化。方法应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miRNA-21的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症。应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miRNA-21及其靶基因PTEN的表达,Western blot方法检测哮喘小鼠与对照组小鼠肺组织PTEN蛋白的表达。结果支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-21表达水平显著高于正常儿童(P0.01)。哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数及肺组织炎症细胞浸润显著高于正常对照组,哮喘组小鼠肺组织miRNA-21mRNA表达水平显著高于正常对照,PTEN mRNA与蛋白水平明显低于正常对照组(P0.01)。结论 miRNA-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,表明其可能参与支气管哮喘的发病机制。     

二甲双胍抑制慢性哮喘小鼠气道炎症、重塑及新生血管形成

目的:探讨二甲双胍对慢性哮喘气道炎症、重塑及新生血管形成的影响及可能机制。方法:采用卵白蛋白(OVA)致敏并激发制备慢性哮喘小鼠模型,给予二甲双胍干预,与生理盐水对照组和慢性哮喘模型组相比,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、外周血免疫球蛋白、气道重塑及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)蛋白水平的变化。结果:慢性哮喘小鼠BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比较对照组升高(P0.01),血清OVA特异性IgE明显升高(P0.01),给药组可降低上述指标(P0.05)。肺组织HE染色可见气道壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、上皮下胶原沉积等病理改变,免疫组化CD31染色观察到气道上皮下新生血管数目和面积增加;二甲双胍部分抑制了上述病理过程。肺组织免疫组化p-AMPK染色观察到其在模型组气道壁的表达较对照组下降(P0.05),给药组升高明显(P0.01)。结论:慢性哮喘中AMPK磷酸化表达水平受抑制。二甲双胍可能通过激活AMPK来抑制慢性哮喘气道炎症、重塑及新生血管的形成。     

褪黑素促进哮喘小鼠肺组织STAT4的表达及抑制气道炎症

目的 探讨褪黑素(MT)对哮喘小鼠肺组织信号传导子和转录激活子4(STAT4)表达的影响及其在气道炎症中的作用.方法 最后1次雾化激发后1 h行左肺支气管肺泡灌洗计数炎性细胞;免疫组织化学和实时定量PCR分别检测右肺组织STAT4蛋白及其mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测外周血IL-12水平.结果 (1)模型组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数和EOS较对照组明显增多,肺组织STAT4蛋白及其mRNA表达较对照组明显降低;MT组以上指标均得到明显缓解(P<0.01);(2)哮喘小鼠STAT4蛋白及其mRNA的表达均与BALF中EOS呈高度负相关(r=-0.754,r=-0.755;P<0.01),外周血IL-12水平与STAT4蛋白表达呈高度正相关(r=0.742,P<0.01).结论 MT能通过诱导哮喘小鼠肺组织STAT4基因的转录、翻译,促进外周血IL-12产生,抑制EOS等炎性细胞浸润,显著抑制气道炎症.     

减毒活菌卡介苗通过STAT6对哮喘小鼠肺组织Th1和Th2型细胞因子的影响

目的:研究减毒活菌卡介苗(BCG)干预对哮喘小鼠呼吸道炎症、气管肺泡盥洗液(BALF)中细胞因子及肺组织信号转导和转录激活因子-6(STAT6)蛋白表达的影响。方法:将昆明小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组、BCG治疗组3组,每组小鼠都为10只。正常对照组以生理盐水致敏激发,以卵清白蛋白(OVA)致敏激发建立小鼠哮喘模型,BCG治疗组于OVA致敏前及后5天分别以BCG皮内注射干预,所有小鼠在最后一次抗原激发后24小时收集BALF,计数BALF中的白细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数目,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学改变,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-4、IFNγ-水平,以免疫组织化学法观察各组小鼠肺组织STAT6表达。结果:小鼠肺组织HE切片显示哮喘组有大量炎症细胞浸润。哮喘组、BCG治疗组小鼠肺组织STAT6蛋白表达和BALF中的白细胞总数、EOS计数、IL-4水平均较正常对照组升高(P<0.05);而与哮喘组比较,BCG治疗组肺组织STAT6蛋白表达和BALF中的白细胞总数、EOS计数、IL-4水平均降低(P<0.05)。与正常对照组比较,哮喘组BALF中的IFNγ-水平显著下降(P<0.01),而BCG治疗组BALF中的IFNγ-水平增加(P<0.05)。结论:BCG能抑制哮喘小鼠气道炎症、减少哮喘小鼠Th2型细胞因子IL-4的生成、提高Th1细胞因子IFNγ-的水平,其干预机制可能与BCG抑制哮喘小鼠肺组织STAT6蛋白的表达有关。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察1,25-二羟维生素D3(VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨VD在哮喘治疗中的作用.方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组.卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;HE染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用RT-PCR法检测各组的MMP-9mRNA表达水平.结果:①HE染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而VD组可部分逆转上述病理改变;②VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05);③VD组肺组织MMP-9mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05).结论:VD干预可明显减轻慢性哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内MMP-9的表达来延缓气道重塑进程.     

黄芪和地塞米松对哮喘失衡表达转录因子T-bet/GATA-3不同的调节作用

目的 观察T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达,探讨黄芪和地塞米松对其不同的调节作用.方法 40只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组和黄芪组,20只雄性SPF级致敏SD大鼠脾脏中分离获得CD4+T细胞,苏木精·伊红染色观察气道病理改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3 mRNA表达;Western blot法检测T-bet和GATA-3蛋白表达.结果 肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)哮喘组比对照组明显增多或增厚(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组明显低于哮喘组(P均<0.01);血清中IL-4和IL-5含量,哮喘组高于对照组(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组均低于哮喘组(P均<0.01),血清中IFN-γ含量哮喘组远低于对照组(P<0.01),地塞米松组低于对照组(P<0.01),但黄芪组明显高于哮喘组(P<0.01).在大鼠肺组织和致敏大鼠脾CD4+ T细胞中,IFN-γ mRNA、T-bet mRNA和蛋白表达哮喘组明显低于对照组(P均<0.01),地塞米松组与哮喘组相似(P>0.05),黄芪组与对照组相似,但明显高于哮喘组(P<0.01);IL-4和IL-5 mRNA、GATA-3 mRNA和蛋白表达,哮喘组异常高于对照组(P<0.01),地塞米松组和黄芪组均明显低于哮喘组(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值,哮喘组明显低于对照组(P<0.01),地塞米松组与哮喘组相近(P>0.05),黄芪组与对照组的比值相近(P>0.05),明显高于哮喘组和地塞米松组(P均(0.01).结论 T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在哮喘中失衡表达,黄芪抑制哮喘气道炎症可能通过双向调节T-bet和GATA-3平衡来实现,地塞米松抑制GATA-3表达,不能增加T-bet表达,其抑制哮喘气道炎症并非通过调节转录因子T-bet和GATA-3平衡实现.     

细胞周期蛋白E在哮喘大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系

目的:通过测定哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达,研究cyclin E在哮喘气道重塑中的作用。方法:20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用鸡卵清白蛋白(OVA)溶液致敏及激发复制哮喘模型。HE染色观察气道炎症;图像分析测量气道管壁厚度;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;免疫组化法检测cyclin E的表达情况;实时定量(real-time)RT-PCR测定肺组织中cyclin E mRNA水平表达;Western blotting法检测肺组织中cyclin E蛋白的表达。结果:哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组增加(P0.01);哮喘组外周血单个核细胞S期、S+G2/M期百分率均较对照组增加,而G0/G1期百分率较对照组降低(均P0.01);哮喘组肺组织中cyclin E mRNA和蛋白水平的相对表达量较对照组高(均P0.01);肺组织中cyc-lin E蛋白的相对表达量与支气管管壁厚度呈正相关(P0.01)。结论:Cyclin E在哮喘大鼠肺组织中表达增加,其表达的上调可使细胞周期的G1期缩短,进而可能通过促进细胞的分裂增殖而参与哮喘气道重塑的发生发展。     

信号转导子和转录激活子6及其mRNA在哮喘大鼠气道炎症中的作用

目的：探讨信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA在哮喘大鼠气道炎症中的作用。 方法： 20只二级雄性SD大鼠随机分为2组, 对照组和哮喘组。以卵清白蛋白(OVA) 致敏激发法复制大鼠哮喘模型，每只大鼠左肺留取肺组织，右肺进行支气管肺泡灌洗并留取支气管肺泡灌洗液(BALF)。对BALF进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数；应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（Sandwich ELISA）法测定BALF和血清中IL-4浓度；采用免疫组化法和原位杂交法测定STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达情况。 结果： (1) BALF和血清中白细胞介素4(IL-4)的浓度哮喘组均显著高于对照组(均P<0.01)；(2)免疫组化和原位杂交显示，哮喘组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达均显著高于对照组(均P<0.01)，其主要表达细胞是上皮细胞；(3)支气管上皮细胞STAT6蛋白及其mRNA含量分别与BALF中的IL-4浓度、EOS绝对值呈非常显著正相关。 结论： 哮喘大鼠STAT6蛋白和mRNA高表达，上皮细胞是其主要表达细胞，并与IL-4浓度、EOS募集密切相关。     

Toll样受体4/核因子-κB对哮喘大鼠气道炎症和重构的影响

目的: 探讨TLR4/NF-κB对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响。方法: 将18只SD大鼠随机分成3组:对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只。造模成功后,利用HE染色、免疫组织化学方法及病理图像分析系统分析大鼠气道平滑肌的嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况、气道壁厚度以及增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达量。利用RT-PCR和Western blotting检测ASM中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达。结果: 哮喘4周组和哮喘8周组的气道壁EOS计数、气道壁厚度、气道反应性均较正常对照组显著增加(P<0.01);哮喘4周组和哮喘8周组的TLR4及NF-κB的mRNA水平和蛋白表达与对照组比较均显著增加(P<0.01);TLR4及NF-κB的mRNA水平随哮喘天数的增加而显著增加(P<0.01);哮喘4周组、哮喘8周组PCNA和Bcl-2的蛋白表达量均显著高于正常对照组(P<0.01);哮喘两组间上述指标差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论: TLR4/NF-κB可能参与哮喘大鼠气道炎症和气道重构的调控。     

BATF、RORγt及IL-17在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义

目的探讨B细胞活化转录因子(BATF)、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素-17(IL-17)在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义。方法将15只小鼠随机分为3组:生理盐水(NS)组、哮喘(AS)组和地塞米松(DXM)组,每组5只。利用卵清蛋白(OVA)造模。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测脾组织中BATF、RORγt mRNA的表达量;并对上述指标的相关性进行分析。结果 1)与AS组相比,DXM组小鼠BALF白细胞(WBC)总数、中性粒细胞(NEU)数和嗜酸性粒细胞(EOS)数明显降低(P0.01)。2)DXM组肺部炎症较AS组明显减轻。3)与AS组相比,DXM组脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度减低(P0.05)。4)与AS组相比,DXM组脾组织中BATF、RORγt mRNA表达量减少(P0.01)。5)脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度与BALF中WBC总数、NEU数、EOS数呈正相关(r=0.838、0.737、0.882,P均0.005);脾组织BATF mRNA的表达量与RORγt mRNA表达量、脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.807、0.833,P均0.005);脾组织RORγt mRNA的表达量与脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.890,P0.005)。结论 1)在哮喘小鼠脾组织中BATF与RORγt可能共同调节IL-17的分泌,并通过IL-17的致炎作用参与哮喘气道炎症的发生发展。2)DXM可能通过BATF、RORγt途径部分阻止脾源性Th17细胞的分化,减少IL-17的分泌。