PMA及IL4序贯诱导人单核细胞系成为M2型巨噬细胞

目的将人单核细胞系U937及THP-1体外诱导得到M2型巨噬细胞。方法将U937及THP-1细胞以phorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA)及白介素-4(interleukin,IL-4)序贯诱导,采用q RT-PCR法及ELISA法检测M1/M2标志物m RNA及蛋白表达。结果 PMA使两种细胞转化为巨噬细胞,IL-4序贯诱导使巨噬细胞伸出伪足,序贯诱导后巨噬细胞M1表型标志物(IL-1β、IL-6、IL-12及i NOS)m RNA表达水平下调,M2表型标志物(IL-10、CD163)m RNA表达水平上调。同时,CCL18蛋白和m RNA表达水平均上调,而雷帕霉素可下调升高的CCL18表达水平。结论及IL-4序贯诱导人单核细胞系成为M2型巨噬细胞,雷帕霉素可逆转这一过程。     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体外诱导特异性T细胞免疫的研究

目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(AdSF35-LMP2)修饰的DC能否在体外诱导LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子诱导下生成树突状细胞,Ad5F35-LMP2感染树突状细胞后激发同源的T细胞,MTT法检测其对T细胞的增殖作用,及激活的特异性CTL对表达LMP2的人CNE-2细胞的特异性杀伤效应.结果Ad5F35-LMP2能有效感染树突状细胞.其激活的特异性CTL对CNE-2细胞有特异性杀伤活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 重组腺病毒Ad5F35-LMP2感染的DC可以有效的诱导产生EBV-LMP2特异性细胞毒效应.     

人Wilms瘤基因1重组腺病毒Ad5/F35的制备及感染树突状细胞后的鉴定

目的构建人Wilms瘤基因1(WT1)重组腺病毒载体Ad5/F35并鉴定。方法运用不同病毒滴度的Ad5-EGFP和Ad5/F35-EGFP感染黑素瘤患者外周血树突状细胞(DC),用荧光显微镜检测EGFP的表达,选择对DC感染率高的腺病毒;同源重组构建Ad5/F35-WT1腺病毒载体,用免疫细胞化学和流式细胞术(FCM)检测WT1的表达。结果在相同滴度下,腺病毒载体Ad5/F35的感染优于Ad5;成功构建了Ad5/F35-WT1重组腺病毒,免疫细胞化学染色和FCM证实该病毒能有效介导WT1在DC中的表达。结论 Ad5/F35-WT1重组腺病毒能将WT1基因成功导入DC并有效表达。     

过表达白细胞介素8促进乳腺癌BT549细胞迁移

目的构建含有白细胞介素8(IL-8)基因的重组腺病毒,并观察其对BT549乳腺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力的影响。方法以143B细胞c DNA为模版,PCR扩增IL-8基因,与穿梭质粒p Ad Track-TO4连接,构建重组穿梭质粒p Ad Track-TO4-IL-8,由PmeⅠ线性化并电转入Ad Easier细菌中,获得重组腺病毒质粒p Ad IL-8,PacⅠ酶切经LipofectamineTM2000介导转入HEK293细胞进行包装扩增,检测滴度;反转录PCR检测BT549细胞中IL-8 mRNA的水平,ELISA检测BT549细胞培养上清液中IL-8的水平;流式细胞术检测细胞周期情况;MTT法检测细胞增殖能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。结果PCR以及测序证实p Ad Track-TO4-IL-8构建成功;p Ad IL-8经酶切证实重组正确;重组腺病毒Ad IL-8感染BT549细胞,可高表达IL-8。过表达IL-8的BT549细胞迁移能力增强,但其增殖活性无明显变化、将细胞周期阻滞于S期。结论过表达IL-8可促进BT549细胞的迁移。     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体内特异性抗瘤作用的研究

目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2）修饰的DC能否在体内抑制肿瘤细胞生长.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-a诱导下生成树突状细胞.将人的外周血单个核细胞移植入实验组SCID小鼠体内2次,再分别经两次DC与Ad5F35-LMP2-DC免疫SCID小鼠,然后用1×10^6的CNE-2肿瘤细胞接种SCID小鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果 Ad5F35-LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,对照组和DC组小鼠1周左右就出现了肿瘤,而Ad5F35-LMP2-DC组则直到2周左右才出现肿瘤;且肿瘤体积最小,重量最轻,与DC组比Ad5F35-LMP2-DC疫苗组的肿瘤抑制率为64.75%.结论 Ad5F35-LMP2重组腺病毒疫苗修饰的DC在体内可以有效的抑制NPC肿瘤细胞CNE-2生长.     

吲哚胺加双氧酶的表达调控THP-1巨噬细胞的极化

目的研究吲哚胺加双氧酶(IDO)对巨噬细胞表型转化的影响。方法以10 ng/mL佛波酯诱导THP-1人单核细胞,建立分化的巨噬细胞模型,分别以100 U/mL IFN-γ和100 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激分化的THP-1细胞,获得M1型和M2型巨噬细胞,利用实时定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术和Western blot法检测巨噬细胞HLA-DR、CC型趋化因子受体7(CCR7)、IL-12p35、IL-10、CXCR4和IDO的表达变化。采用细胞转染实验对分化的THP-1细胞进行IDO的过表达和针对IDO基因的siRNA干扰实验,检测其IL-12p35、CCR7、IL-10和CXCR4的表达变化。结果 IFN-γ可诱导THP-1细胞向M1型发生转化并上调IDO的表达。而在巨噬细胞内过表达IDO促进THP-1向M2型极化,沉默细胞内的IDO基因则导致THP-1细胞极化为M1型。结论 IDO表达可调控巨噬细胞极化。     

Dectin-1介导香菇多糖诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12的研究

目的探讨香菇多糖能否依赖Dectin-1介导而诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12。方法香菇多糖作用THP-1细胞后,实时荧光定量RT-PCR检测Dectin-1、IL-12p35和IL-12p40的mRNA表达水平;ELISA法检测THP-1细胞分泌IL-12的含量;以Dectin-1抑制剂昆布多糖预处理THP-1细胞,比较香菇多糖诱导产生IL-12的变化。结果香菇多糖可上调THP-1细胞表达Dectin-1的mRNA水平;能上调THP-1细胞IL-12p35和IL-12p40的mRNA表达和IL-12分泌;昆布多糖可明显抑制香菇多糖诱导THP-1细胞分泌IL-12。结论 Dectin-1能介导香菇多糖诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12。     

重组腺病毒Ad-IL-12感染淋巴细胞对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响

目的 探讨重组腺病毒Ad-IL-12感染人外周血淋巴细胞后对人卵巢癌细胞SKOV3周期、增殖和凋亡的影响.方法 采用重组人IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染人外周血淋巴细胞,感染48 h后与人卵巢癌细胞SKOV3共培养(SKOV3/Ad-IL-12),同时设未感染组(SKOV3)和Ad-GFP空载感染组(SKOV3/Ad-GFP)作为对照.RT-PCR检测IL-12双亚基P35和P40的mRNA表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-12 P70蛋白的分泌,CCK8法检测卵巢癌细胞增殖,流式细胞术分析卵巢癌细胞周期和凋亡,RT-PCR和Western blot检测抗凋亡蛋白BCL-2、survivin 的表达.结果 重组腺病毒Ad-IL-12可成功感染人外周血淋巴细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白;淋巴细胞过表达IL-12可抑制SKOV3细胞的增殖;与未感染组和空载组相比,SKOV3/Ad-IL-12组G1期细胞显著增加,凋亡率显著升高(P＜0.05),SKOV3细胞中抗凋亡蛋白BCL-2和survivin显著下调(P＜0.05).结论 人IL-12基因重组腺病毒可以成功感染人外周血淋巴细胞,分泌IL-12 P70蛋白,并可以通过阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖.     

腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响

目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。     

IRF1对M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应的影响

目的研究IRF1对M1巨噬细胞极化及M1介导的抗肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建单核细胞U937来源M1巨噬细胞模型(U937-M1),将细胞分为4组:用PMA诱导的未活化巨噬细胞组(M0),用PMA,IFN-γ和LPS处理的M1型巨噬细胞组(M1),用siRNA干扰IRF1的M1型巨噬细胞组(si IRF1)以及阴性干扰的M1型巨噬细胞组(si C)。用流式细胞术检测M1/M2特异表面标志物CD86/CD206的表达;q PCR检测M1/M2相关基因(IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α/IL-10)及IFNB1的表达;ELISA检测IL-12p70,IL-10及IFN-β的表达;Western blot检测IRF1及IRF5的表达;CCK8和流式细胞术分别检测Hep G2及SMMC-7721增殖和凋亡。结果与U937-M1组相比,干扰IRF的M1组CD86表达降低,但CD206升高(P0.05);mRNA水平上,IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α以及IFNB1表达降低,但IL-10表达增高(P0.01);蛋白水平上,IL-12p70,IFN-β及IRF5表达降低,但IL-10表达增高(P0.05)。IRF1干扰后,M1巨噬细胞促进肝癌细胞增殖、抑制其凋亡(P0.05)。结论干扰IRF1后,M1巨噬细胞极化状态受损,甚至部分向M2型转变;其抗肿瘤效应转变为促肿瘤效应;且IRF1可能参与调节IFN-β与IRF5的表达。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.