唑来膦酸刺激健康人和骨肉瘤PBMCs体外扩增γδT细胞

目的:探讨唑来膦酸(Zol)联合IL-2对健康人和骨肉瘤患者末梢血γδT细胞的扩增和细胞毒性作用的影响。方法:取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用IL-2和Zol联合IL-2刺激体外扩增,流式细胞技术检测γδT细胞的纯度,并计算其扩增倍数。以Daudi细胞作为阳性对照、Raji细胞为阴性对照,并以人成骨细胞系hFOB细胞作为正常对照,用LDH法检测扩增后γδT细胞的细胞毒活性的变化。结果:健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞经过体外14 d的培养,Zol联合IL-2组可高度选择性扩增γδT细胞,并且扩增后γδT细胞具有杀伤活性,而对正常细胞无杀伤活性。结论:健康人和骨肉瘤患者PBMCs经唑来膦酸联合IL-2刺激后,可获得高纯度具有较强的杀伤作用的γδT细胞。     

γδT细胞经唑来膦酸刺激后对骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的:探讨外周血γδT细胞经唑来膦酸刺激后对骨肉瘤细胞株HOS的体内外杀伤作用及相关机制。方法:取健康人外周血5 mL,经唑来膦酸刺激后,在含IL-2的培养液中,培养14 d。用流式细胞仪测定γδT细胞所占的比例,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对骨肉瘤细胞株HOS的体外杀伤作用,并用抗人γδTCR抗体、抗人NKG2D抗体和穿孔素/颗粒酶阻滞剂CMA分别预处理γδT细胞,观察杀伤作用的变化。另用骨肉瘤细胞株HOS注入BALB/c裸鼠皮下建立骨肉瘤裸鼠种植瘤模型。随机将裸鼠分为2组,分别为未治疗组、γδT细胞治疗组。观察裸鼠瘤体大小及称量瘤重。结果:PBMCs经唑来膦酸刺激14 d后γδT细胞阳性率达到(95±3)%。当效靶细胞比为6∶1、12∶1、25∶1、50∶1时,对HOS细胞的杀伤率分别为26.8%、31.5%、37.8%、40.9%。用Anti-γδTCR抗体、Anti-NKG2D抗体及CMA预处理γδT细胞后,当效靶细胞比为25∶1时,对HOS的杀伤率分别为32.3%、4.7%、16.7%。体内抑瘤实验中,γδT细胞治疗组的肿瘤生长抑制率为42.78%。结论:PBMCs经唑来膦酸刺激后,可获得高纯度的γδT细胞,在体内外其对骨肉瘤细胞株HOS有较强的杀伤作用。     

Ⅰ型IFN体外增强人γδT细胞对骨肉瘤的杀伤作用

目的:探讨Ⅰ型干扰素(IFN)对人来源γδT细胞杀伤骨肉瘤作用的影响。方法:取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用唑来膦酸(Zol)、Zol和Ⅰ型IFN体外刺激扩增,流式细胞技术检测γδT细胞的纯度,计算扩增倍数。以Zol刺激体外扩增的γδT细胞为对照组,Zol联合Ⅰ型IFN刺激体外扩增的γδT细胞为实验组,LDH法检测不同方法扩增的γδT细胞的细胞毒活性,ELISA法检测γδT细胞分泌的IFN-γ。结果:Zol、Zol联合Ⅰ型IFN均可高度选择性扩增健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞中的γδT细胞,扩增后γδT细胞具有杀伤骨肉瘤细胞的能力。Ⅰ型IFN预处理γδT细胞后可显著增强γδT细胞的杀伤活性。结论:Ⅰ型IFN能够促进人γδT细胞的抗骨肉瘤作用。     

一种体外扩增γδT细胞的新方法

目的:建立一种新的γδT细胞扩增方法。方法:从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),与用唑来膦酸预处理过的未成熟DCs按10:1混合,在含IL-2 400 U/ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养,用MTT法测定细胞增殖倍数。用流式细胞仪对γδT细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果:经唑来膦酸预处理的树突状细胞与自身外周血单个核细胞共培养,到11天时γδT细胞增殖倍数达到(120±15)倍,第8天和11天γδT细胞百分率分别达到70.26%±3.56%、90.11%±4.67%。γδT细胞细胞内颗粒酶B、穿孔素及CD107a在第8天时分别为81.66%±4.32%、86.62%±5.21%和80.12%±3.78%,均高于对照组。培养的γδT细胞对SGC-7901、SW-1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第8天时达到峰值。结论:此法能有效诱导γδT细胞体外扩增,培养的γδT细胞颗粒酶B、穿孔素及CD107a均显著高于对照组,并有较强的抗肿瘤活性。     

辣椒素对人γδT细胞杀伤人骨肉瘤HOS细胞的影响

探讨辣椒素对人γδT细胞体外增殖及杀伤骨肉瘤细胞的影响及作用机制。分离健康人PBMC,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的DMEM-F12完全培养基中诱导培养γδT细胞。不同浓度的辣椒素作用于γδT细胞48h后,CCK-8法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达,用LDH释放法检测各组γδT细胞对骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性。结果显示,培养7d时各组γδT细胞纯度达到了(85.33±6.07)%。浓度为3.2~50μmol/L的辣椒素能显著促进γδT细胞的增殖,在浓度为25μmol/L时其穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达均显著高于对照组,且对人骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性显著增强。以上结果提示辣椒素在体外能通过促进γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达上调显著增强其抗骨肉瘤细胞活性。     

γδT细胞、NK细胞及LAK的部分抗肿瘤生物特性比较

目的：通过体外分离、增殖培养获取γδＴ细胞、ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞,并比较了３种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法：收集用不同单抗分别馐被粘附的细胞,然后通过ＭＡＣＳ细胞分选仪的分选,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以单抗阻断效应的分析。结果：经ＭＡＣＳ分离得到的γδＴ细胞,培养２ｗ后细胞数扩散６００～８００倍,ＣＤ３、ＣＤ８和γδ细胞表达阳性率分别是７２．２９％、５８．０２％和６５．９８％。γδＴ细胞对ＮＫ敏感细胞Ｋ５６２以及ＮＫ不敏感细胞Ｒａｊｉ和ＸＧ－７这３种不同靶细胞均有较高的杀伤率,分别为３５．９８％、４２．２７％和６９．０８％;ＮＫ细胞对此３种细胞杀伤率分别是４５．１２％、１２．３４％和２９．２７;ＬＡＫ细胞的杀伤率分别为４４．０１％、２９．２７％和２５．６８％。γδＴ细胞对经Ｍ     

唑来膦酸抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对人类急性髓系白血病细胞U937的增殖抑制及促凋亡作用。方法:CCK-8法检测不同时间ZOL对U937细胞的生长抑制率;流式细胞术检测ZOL对U937细胞周期的影响;Annexin V-PI法及Hoechst 33342法检测ZOL作用前后细胞凋亡情况变化,JC-1检测ZOL对U937细胞线粒体膜电位变化的影响;克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力;Western blot法检测ZOL对U937细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果:CCK-8结果显示ZOL可以抑制U937细胞的活力,并呈时间-剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst33342结果显示ZOL可以促进U937细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性;JC-1结果显示ZOL可以明显降低U937细胞线粒体膜电位;PI法证实ZOL将U937细胞周期阻滞在S期,克隆形成实验证实0.2 mmol/L ZOL可以完全抑制U937细胞的克隆形成能力;Western blot结果显示ZOL作用于U937细胞48 h后细胞周期相关蛋白p21表达显著增强,促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱。结论:ZOL抑制U937细胞的增殖和克隆形成主要是由于抑制了细胞周期相关蛋白表达,同时ZOL可以促进U937细胞凋亡,这种作用主要是通过调节线粒体凋亡途径相关蛋白来实现的。     

胰岛素联合唑来膦酸治疗糖尿病骨质疏松症对患者血清指标的影响

目的 分析胰岛素联合唑来膦酸治疗对糖尿病骨质疏松（DOP）患者血糖血脂以及骨代谢指标的影响。方法 选择2016年12月~2019年4月于我院诊治的DOP患者共136例进行研究,采用随机数字表法分为对照组和实验组,每组68例,对照组采用二甲双胍联合唑来膦酸治疗,实验组采用胰岛素联合唑来膦酸治疗,比较两组干预后血脂水平（TG、TC、LCL-C、HDL-C）、血糖指标（空腹、餐后2h、糖化血红蛋白）以及骨代谢相关指标（BAP、TRAP-5b、BGP以及s-CTX）。结果 治疗后实验组空腹、餐后2h血糖及HbA1c均低于对照组（P＜0.05）;实验组治疗后TG、TC、LCL-C、HDL-C水平均低于对照组（P＜0.05）;实验组BAP、BGP水平均高于对照组（P＜0.05）;实验组TRAP-5b水平均低于对照组（P＜0.05）;两组s-CTX指标比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 对DOP患者使用胰岛素与唑来膦酸联合治疗方案,有助于改善患者的血脂以及血糖水平,同时利于患者骨骼骨质的沉积,值得临床应用。     

唑来膦酸联合放疗治疗脊柱转移瘤

目的 研究唑来膦酸联合放疗治疗脊柱转移瘤疼痛的临床疗效.方法 将124例脊柱转移瘤患者随机分为唑来膦酸联合放疗组(56例),单纯放疗组(40例),单纯唑来膦酸组(28例)进行治疗,并观察比较各组止痛及改善活动能力效果.结果 治疗结束时唑来膦酸联合放疗组与单纯唑来膦酸组止痛效果差异有显著性(P<0.05),但唑来膦酸联合放疗组与单纯放疗组止痛效果差异无显著性(P>0.05);随访2个月后唑来膦酸联合放疗组止痛效果及活动能力改善均较单纯放疗组及单纯唑来膦酸组明显,差异有显著性(P<0.05).结论 唑来膦酸联合放疗治疗脊柱转移瘤疗效优于单纯放疗或单纯唑来膦酸治疗,可明显提高患者疼痛缓解率,延长疼痛缓解时间,显著改善患者活动能力,是治疗脊柱转移瘤的理想方案.     

唑来膦酸联合泰索帝治疗晚期非小细胞肺癌骨转移疗效分析

目的 评价唑来磷酸联合泰索帝治疗晚期非小细胞肺癌骨转移的疗效及安全性.方法 41例晚期非小细胞肺癌骨转移患者随机分为唑来膦酸联合泰索帝(A组)及单用唑来磷酸(B组)治疗,对两组疗效进行分析比较.结果 A组骨痛缓率、生存质量改善率略好于B组(P>0.05).毒副作用差异无显著性.A组骨转移灶修复率52.4%(11/29),B组20.0%(4/20).差异有显著性(P<0.05).结论 唑来膦酸联合泰索帝治疗晚期非小细胞肺癌骨转移有较好的治疗用,毒性可耐受.     

含氮二膦酸盐/IL-2诱导肿瘤患者外周血γδT细胞增殖的作用

目的探讨药物（含氮二膦酸盐联合IL-2，N-BP／IL-2）诱导实体肿瘤患者外周血γδT细胞增殖作用。方法采用流式细胞仪测定103例肿瘤患者和43例健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和相对值，测定患者外周血经药物体外刺激后御细胞增殖指数和用药前后患者外周血总T细胞、γδT细胞绝对值和相对值。结果肿瘤患者和健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1306细胞/μl和1522细胞/μlP=0．003），64细胞/μl和162细胞/μl（P〈0．001），5％和11％（P〈0．001）。24例经药物体外扩增试验阳性的肿瘤患者治疗前后体内外周血总T细胞绝对值、γδT细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1283细胞/μl和1552细胞/μl（P=0．001），54细胞/μl和107细胞/μl（P〈0．001），6％和8％（P=0．008）。全部肿瘤患者中外周血γδT细胞对药物体外诱导增殖反应阳性患者的百分率为68．9％。结论肿瘤患者外周血γδT细胞计数显著低于健康人。不同肿瘤患者外周血γδT细胞对药物刺激增殖的反应性不同。N-PB／IL-2在体内有显著增加御细胞数量的药理作用。体外增殖试验可作为N-PB／IL-2治疗患者的参考。     

唑来膦酸治疗恶性肿瘤骨转移疼痛20例临床观察

目的 :评价注射用唑来膦酸治疗恶性肿瘤骨转移疼痛的疗效和安全性。方法 :4 0例患者随机分为治疗组和对照组各 2 0例。治疗组用唑来膦酸 4mg加入生理盐水溶液 5 0ml,静滴 30min ,对照组用帕米膦酸二钠 90mg加入生理盐水溶液 75 0ml,静滴 6h。两组均一次性给药后连续观察 2 8d。结果 :治疗组有效率为 80 % ,对照组 70 % ,不良反应发生率分别为 2 5 %和 5 5 % ,两者差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :唑来膦酸是新一代骨吸收抑制剂 ,对恶性肿瘤骨转移所致疼痛有较好的止痛效果 ,且安全性高。     

唑来膦酸促进去势大鼠牙槽骨的成骨作用

背景：唑来膦酸主要作用于破骨细胞的形成,也能抑制成骨细胞的凋亡及成骨细胞增殖和分化,但唑来膦酸对去势大鼠牙槽骨促成骨作用及机制尚存在争议。目的：基于牙槽骨NLPR3/Caspase-1/IL-1β信号通路,探讨唑来膦酸对去势大鼠牙槽骨促成骨作用的机制。方法：选取36只SD雌性大鼠,随机分为对照组、模型组、唑来膦酸组,每组12只,后两组采用双侧卵巢切除术建立骨质疏松大鼠模型,唑来膦酸组于造模术后12周一次性皮下注射20μg/kg唑来膦酸,对照组及模型组注射同等剂量生理盐水。药物干预4周后麻醉大鼠,收集腹主动脉血清及取牙槽骨进行相关检测。ELISA检测大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素及白细胞介素1β的表达水平;苏木精-伊红染色观察各组大鼠牙槽骨病理结构变化;TUNEL染色检测各组大鼠牙槽骨成骨细胞凋亡情况;钙黄绿素荧光标记检测牙槽骨骨形成情况;Western blot检测各组大鼠牙槽骨骨组织中NLPR3、Caspase-1、白细胞介素1β蛋白的表达水平及Runt相关转录因子2、碱性磷酸酶和骨钙素蛋白的表达情况。结果与结论：(1)与模型组相比,唑来膦酸组大鼠血清中碱性磷酸酶及白细胞介素1β表达水...     

唑来膦酸联合内分泌治疗前列腺癌骨转移疼痛的临床思路构建

目的：探讨唑来膦酸与内分泌联合治疗前列腺癌骨转移疼痛的临床效果。方法选择我院2010年6月~2013年9月收治的62例前列腺癌骨转移疼痛患者为研究对象,随机分为对照组31例,观察组31例,对照组使用唑来膦酸治疗,观察组在唑来膦酸基础上加用内分泌治疗,对两组患者的治疗效果进行分析。结果观察组治疗有效率为90.3%,对照组治疗有效率为71.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者的PSA和Kamofaky Score评分物明显差异,治疗后,均有明显变化,观察组显著优于对照组。结论采取内分泌和唑来膦酸联合对前列腺癌骨转移疼痛患者进行治疗,其疗效显著,能缓解不良反应,值得临床进一步推广使用。     

复合唑来膦酸磷酸钙骨水泥的力学性能测定

目的研究加入不同浓度的唑来膦酸对磷酸钙骨水泥体外凝结时间、抗压强度的影响。方法将唑来膦酸与磷酸钙骨水泥以不同质量比混合,制备力学性能测试标本,并分为A(空白对照)、B(含0.2%唑来膦酸)、C(含0.4%唑来膦酸)、D(含0.6%唑来膦酸)4组,每组6个标本。测定其凝结时间及抗压强度。结果随载药浓度的增加,复合磷酸钙骨水泥凝结时间逐渐延长,但各实验组凝结时间与空白对照组均无明显统计学差异(0.05)。B、C组抗压强度与A组之间无明显统计学差异(0.05),而D组与A组之间有统计学差异(=0.000)。结论三组中唑来膦酸的添加量对磷酸钙骨水泥凝结时间无明显影响,且各组凝结时间均满足临床应用标准。含0.2%和0.4%唑来膦酸对磷酸钙骨水泥抗压强度无明显影响,而含0.6%唑来膦酸可使磷酸钙骨水泥抗压强度明显降低。但三含量组的抗压强度均满足临床应用标准。     

唑来膦酸静滴辅助放化疗治疗肺癌骨转移临床探究

目的：对唑来膦酸静滴辅助放化疗治疗肺癌骨转移的临床治疗效果予以探讨。方法本次研究中,随机的选取我院收治的肺癌骨转移患者64例,将其均分为两组,分别作为对照组与观察组,对对照组的患者应用长春瑞滨注射液联合顺铂化疗方案治疗,对于观察组的患者,在对照组化疗治疗方案的基础上,加用唑来膦酸静滴进行辅助治疗,对两组患者的疼痛缓解情况、骨病灶的改善情况、活动能力的改善情况以及生存质量的改善情况、不良反应的发生情况进行对比分析。结果两组患者在生存质量改善情况、骨病灶疗效的总有效率、活动能力恢复情况、疼痛的总缓解率上具有明显的差异,并且<0.05,差异具有统计学意义,观察组的患者明显优于对照组;两组患者在不良反应的发生情况上没有明显的差异。结论将唑来膦酸静滴辅助化疗治疗方案应用于肺癌骨转移患者的临床治疗中,能够有效减轻患者的疼痛、改善患者的生活质量及活动能力,并且具有较少的不良反应,值得在临床应用中推广。     

双氢青蒿素对γδT细胞杀伤SW1990细胞的增强作用

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46％ ±5.32％.浓度为50～100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关.     

HIV-1早期感染者γδT细胞对储藏库细胞的细胞毒作用

目的探讨HIV-1早期感染者γδT细胞是否具有清除HIV-1储藏库的能力。方法入组HIV-1早期感染者16例,分离外周血单核细胞,体外采用唑来膦酸(5μmol/L)加IL-2(1 000 IU/m L)扩增γδT细胞。乳酸脱氢酶(LDH)法检测γδT细胞对储藏库细胞(J-Lat Full Length Clone10.6)的细胞毒作用;流式细胞计量术检测扩增前后γδT细胞的表型和储藏库细胞中GFP的荧光强度。结果唑来膦酸加IL-2在体外刺激γδT细胞快速且大量扩增(P0.001)。γδT细胞对储藏库细胞具有较强的细胞毒作用,储藏库细胞中GFP的平均荧光强度显著减弱(P0.05)。扩增后γδT细胞表现出细胞毒性NK细胞样表型,HIV-1感染者CD56+Vδ2T细胞的比例较健康对照显著增加(P0.05)。结论γδT细胞具有清除HIV-1储藏库的能力,基于γδT细胞的自体或异体过继免疫治疗有望成为清除储藏库,治愈HIV-1感染的一种新策略。     

PKP联合唑来膦酸治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的疗效分析

目的评估PKP联合唑来膦酸治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的临床疗效。方法纳入2016年1月至2018年11月本院收治的老年骨质疏松性椎体压缩骨折患者70例(70椎体),其中男14例,女56例,年龄76～94岁,平均年龄80.5岁,椎体骨折部位包括T_7-L_4。实验组35例行PKP联合唑来膦酸治疗,对照组35例单纯行PKP治疗。实验组椎体成形术治疗后1个月应用唑来膦酸注射液治疗。比较PKP治疗前、治疗后1个月和治疗后1年骨折椎体高度、Cobb角变化、目测类比评分(visual analogue scale score,VAS)、Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)评分,骨密度T值和血清骨代谢指标情况。观察术后恢复和再发椎体压缩性骨折情况。结果骨折椎体高度和Cobb角:两组内治疗后1个月、治疗后1年与治疗前相比,指标均明显改善(P0.05);目测类比评分和Oswestry功能障碍指数:两组内治疗后1个月、治疗后1年与治疗前相比,指标均明显改善(P0.05),两组间治疗后1年比较差异有统计学意义(P0.05);骨密度T值:实验组治疗后1年与治疗前相比,骨密度明显改善(P0.05),对照组治疗前后差异无统计学意义(P0.05)。两组间比较差异有统计学意义(P0.05);血清骨代谢指标:实验组治疗1年后与治疗前比较,总I型胶原氨基端延长肽(PINP)和-胶原降解产物(-CTX)水平均明显下降(P0.05)。25-羟基维生素D水平明显上升(P0.05)。甲状旁腺素(PTH)水平无明显变化(P0.05)。治疗1年后两组间比较,总I型胶原氨基端延长肽、-胶原降解产物和25-羟基维生素D水平差异有统计学意义(P0.05)。结论 PKP联合唑来膦酸治疗可以有效治疗骨质疏松性椎体压缩骨折,缓解疼痛,改善骨质疏松,值得临床推广。