Fbxw7在肝癌中的表达及与肝癌细胞增殖相关性研究

目的:探讨Fbxw7在肝癌中的表达及其与肝癌细胞增殖能力的相关性.方法:收集40例肝细胞癌组织及对应的癌旁组织,运用RT-PCR、免疫组化技术检测Fbxw7在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;real time RT-PCR技术检测正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株Hep3B和SMMC-7721中Fbxw7mRNA的表达水平;平板克隆形成实验与裸鼠皮下成瘤实验检测不同Fbxw7 mRNA表达水平的细胞株体内外增殖能力.结果:Fbxw7 mRNA及蛋白在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织(P＜0.05);Fbxw7蛋白低表达与高Edmonson分级和高TNM分期具有显著的相关性(P＜0.05);正常肝细胞株LO2中Fbxw7 mRNA的表达水平显著高于肝癌细胞株Hep3B和SMMC-7721 (P＜0.05);Fbxw7表达较低的细胞株形成的克隆数较多,且裸鼠皮下成瘤体积较大,结果均具有统计学差异(P＜0.05).结论:Fbxw7低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,并与肝癌细胞增殖能力相关.     

MYH9在人肝癌组织中的表达及其对肝细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨非肌肉肌球蛋白重链(MYH9)在肝癌组织中的表达及通过沉默MYH9基因对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法收集50组人肝癌组织及癌旁组织,选用人肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2及人正常肝细胞系LO2,免疫组织化学方法及Western blot检测肝癌组织及癌旁组织中MYH9蛋白的表达,Western blot检测SMMC-7721、Hep G2及LO2中MYH9蛋白的表达;将MYH9 siRNA转染SMMC-7721,CKK8法及流式细胞术检测沉默MYH9对肝癌细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果 MYH9蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁(P0.05);MYH9蛋白在SMMC-7721及Hep G2中的表达均明显高于LO2(P0.05);沉默MYH9基因可抑制细胞增殖(P0.001),促进细胞凋亡(P0.05)。结论 MYH9蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织;MYH9低表达能有效抑制肝癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在LO2人正常永生化肝细胞及Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、E-cadherin、vimentin的蛋白水平。结果 miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低。PPARγsiRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用。结论 miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭。     

miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长

目的探讨微小RNA 204(miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关。     

胶质瘤相关癌基因1在肝细胞癌中的表达及其与Shh、Vimentin、E-cadherin蛋白的相关性研究

目的:研究胶质瘤相关癌基因1( Gli1)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨Gli1表达与sonic hedgehog通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin表达的相关性,由此分析其在肝癌EMT过程中的作用.方法:收集63例肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织应用免疫组化,RT-PCR法检测Gli1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,同时应用免疫组化法检测Hedgehog信号通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,使用Mann-Whitney U检验分析肝细胞癌组织与癌旁正常组织Gli1的mRNA含量以及蛋白表达差异.使用卡方检验分析Gli1蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者临床特征的关系.使用Spearmen秩检验分析肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达分别与Shh、Vimentin及E-cadherin这三种蛋白表达的关系.结果:肝细胞癌组织中Gli1蛋白及mRNA含量明显高于癌旁正常肝组织;Gli1蛋白表达分别与肿瘤肝内转移或淋巴结转移(x2=6.205,P＜0.05)、门静脉侵袭(x2=4.014,P＜0.05)、高Edmonson病理分级(x2=19.668,P＜0.05)以及TNM肿瘤分期较晚(x2=7.091,P＜0.05)有关;肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达与Shh(r=0.574,P＜0.05)、Vimentin蛋白(r=0.467,P＜0.05)表达呈明显正相关,而与E-cadherin蛋白(r=-0.439,P＜0.05)呈负相关.结论:Gli1在肝细胞癌中表达增加,且与肝癌侵袭转移有关的临床病理特征具有相关性,Gli1可能在Shh配体的作用下激活Hedgehog信号通路,并可能诱导肝癌发生与侵袭转移相关的EMT过程.     

微小RNA204(miR-204)低表达与肝细胞癌预后不良相关北大核心CSCD

目的研究微小RNA204(mi R-204)在肝细胞癌中的表达及与预后的关系和可能机制。方法选择50例肝细胞癌患者,收集手术切除后的肝癌细胞以及肝癌旁组织,采用定时定量PCR检测肝细胞癌组织及癌旁组织mi R-204的表达,以mi R-204表达水平中位数为分界点,观察mi R-204的表达与肝细胞癌患者临床病理特征的关系。采用免疫组织化学染色检测Bcl2及SIRT1(sirtuin 1)蛋白的表达,合成mi R-204转染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法检测细胞增殖,采用PCR检测SMMC-7721细胞的SIRT1与Bcl2 m RNA的水平。结果 HCC组织mi R-204水平显著降低;与mi R-204低表达的患者相比,mi R-204高表达的患者瘤体直径较小(在5 cm)、肿瘤数少、TNM分期较低,与患者年龄、性别、乙型肝炎病毒(HBV)感染情况无关;mi R-204低表达组中Bcl2及SIRT1蛋白水平显著高于mi R-204高表达组,mi R-204与Bcl2及SIRT1的水平呈负相关;mi R-204转染SMMC-7721细胞后,过表达mi R-204的SMMC-7721细胞SIRT1与Bcl2 m RNA水平不仅显著低于转染阴性对照mi RNA的细胞,也显著低于癌旁肝组织SIRT1与Bcl2 m RNA水平;与阴性对照组相比,转染mi R-204的SMMC-7721细胞的增殖能力明显降低。结论 mi R-204低表达肝细胞癌预后不良相关,上调其表达可下调SIRT1、Bcl2水平,抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡。     

食管癌相关基因4在肝细胞肝癌中的表达和功能

目的了解人食管癌相关基因4（ ECRG4）在人肝细胞肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况,探讨ECRG4对肝癌细胞增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法提取24例配对肝细胞肝癌组织和癌旁肝组织的总RNA以及正常肝细胞系QSG7701和肝癌细胞系HepG2的总RNA和总蛋白,分别利用即时荧光定量PCR（ RT-qPCR）和Western blot法检测ECRG4的表达;构建ECRG4的真核表达质粒ECRG4-pcDNA3.1,转染肝癌细胞系HepG2,进行体外的细胞增殖、凋亡以及迁移实验。结果与癌旁肝组织相比,在肝细胞肝癌组织中ECRG4 mRNA表达下调或缺失（98.5％,23／24,P＜0.01）;和正常肝细胞系QSG7701相比,ECRG4 mRNA在肝癌细胞系HepG2中的表达明显下调（ P＜0.05）并且其蛋白表达水平也明显降低。转染ECRG4表达质粒后HepG2细胞的增殖和迁移能力明显低于对照组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论 ECRG4在肝细胞肝癌中表达下调,在体外肝癌细胞系中过表达ECRG4可抑制细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,ECRG4可能是肝细胞肝癌潜在的抑癌基因,有望为肝细胞肝癌分子靶向治疗提供新策略。     

肝细胞核因子-1α和肝细胞核因子-4α在人肝细胞癌中的表达及意义

目的 检测肝细胞癌（HCC）标本中肝细胞核因子-1α(HNF-1α)和肝细胞核因子-4α(HNF-4α)的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用。 方法 采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测HNF-1α、HNF-4α mRNA和蛋白质在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达。 结果 HNF-1α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.818±0.371明显高于肝细胞癌组织0.383±0.102,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-4α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.846±0.384明显高于肝细胞癌组织0.397±0.105,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-1α和HNF-4α mRNA 的表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。HNF-1α 蛋白在癌旁肝组织中的阳性率（92.3%）明显高于肝细胞癌组织（42.3%）,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-4α 蛋白在癌旁肝组织中的阳性率（96.2%）明显高于肝细胞癌组织（50.0%）,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-1α和HNF-4α 蛋白的表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。在肝细胞癌组织中HNF-1α与HNF-4α mRNA表达水平呈负相关关系。 结论 HNF-1α和HNF-4α在肝细胞癌中表达下调,这可能与肝癌的发生、发展相关。     

肝癌组织RUNX3mRNA和蛋白表达及其与临床病理的相关性研究

目的 探讨肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3mRNA和蛋白表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性.方法 采用RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）和IHC（免疫组织化学）分别检测肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3mRNA和蛋白表达水平,并分析与临床病理因素的相关性.结果在51例肝癌组织中RUNX3mRNA表达量相对值为：0.4509±0.0963;在51例相对应的癌旁组织中RUNX3mRNA表达量相对值为：0.9147 ±0.0222;两者间差异有统计学意义（t=33.6087,P＜0.001）.在51例肝癌组织中RUNX3蛋白表达阳性率为49.02％（ 25/51）;而在51例相对应的癌旁组织中RUNX3蛋白表达阳性率为82.35％ （42/51）;两者间差异有统计学意义（x2=12.5706,P＜0.005）.RUNX3mRNA和蛋白表达水平均在分化程度、门静脉癌栓、肝内转移等病理因素差异有统计学意义（P＜0.05）,而在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型的差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 RUNX3基因在肝癌组织中mRNA和蛋白表达水平均显著低于在癌旁组织中的表达水平,RUNX3mRNA和蛋白表达下调可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要作用;RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因.     

肝癌组织Bcl-2的检测及小干扰RNA抑制

目的探究肝癌组织中Bcl-2的表达与肝癌临床病理特征、患者预后之间的关系;观察siRNA抑制Bcl-2表达后,SMMC-7721增殖能力的变化。方法通过反转录PCR、免疫组织化学SP法以及Western blot法检测68例肝癌组织中Bcl-2的表达;根据Bcl-2表达水平的高低进行分组,比较不同组中肝癌临床病理特征及患者预后;通过siRNA抑制Bcl-2在SMMC-7721细胞中的表达,应用MTT法检测细胞增殖能力的变化。结果相较于癌旁组织,Bcl-2肝癌中表达明显升高;Bcl-2在肝癌组织中表达水平与肝癌临床病理特征存在明显相关性,Bcl-2表达水平较高的患者预后较差;siRNA抑制SMMC-7721细胞中Bcl-2的表达后细胞增殖能力显著降低。结论 Bcl-2的表达在肝癌组织中异常增高,且与肝癌临床病例特征及患者预后存在相关性;抑制Bcl-2的表达可降低肝癌细胞的增殖能力。