间歇低氧对人脐静脉内皮细胞中内皮素的影响

目的通过建立间歇低氧细胞模型,测定不同低氧模式下人脐静脉内皮细胞中内皮素(endothelin,ET)含量的变化,以进一步探讨ET在细胞水平对间歇低氧在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压患者中的作用.方法采用人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304细胞系,暴露于不同低氧条件,暴露完成后采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)测定培养基中ET浓度.结果间歇低氧组ET浓度[(12.86±6.68)pg/mL]与间歇正常氧组[(3.29±0.88)pg/mL]及空白对照组[(4.67±1.22)pg/mL]间差异有统计学意义(F=13.687,P<0.05).其中,间歇低氧组高于间歇正常氧组(P<0.05)及空白对照组(P<0.05),而间歇正常氧组及空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05).相同累加低氧时间及程度的间歇低氧组ET浓度显著高于持续低氧组[(7.07±1.00)pg/mL](P<0.05).结论间歇低氧可引起ET水平升高,提示ET在间歇低氧合并高血压中可能起重要作用.     

醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述过程的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达，在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应，由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

不同间歇低氧暴露时间对人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:通过检测间歇低氧刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的凋亡率、炎性因子及氧化应激因子的水平,探讨不同间歇低氧暴露时间对HUVECs损伤的影响。方法:分别给予HUVECs间歇低氧刺激(1%O25 min;21%O210 min)及常氧(对照组)处理。在不同的间歇低氧暴露时间点应用膜联蛋白(annexin)Ⅴ-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞上清液中白介素(IL)-6和IL-8水平,分光光度法检测上清液中丙二醛(MDA)水平。结果:间歇低氧处理12、16、20和24 h的细胞凋亡率逐渐增高,且均高于对照组(P<0.01),间歇低氧处理的细胞上清液中IL-6水平均显著高于对照组(P     

核仁素对血管内皮生长因子介导的人脐静脉内皮细胞管型形成的影响

目的核仁素是细胞核仁中含量最多的一种多功能磷酸蛋白质和RNA结合蛋白,其主要功能涉及核糖体RNA的合成、核糖体的装配、细胞生长、凋亡、炎症免疫等生理病理过程。然而细胞内核仁素在血管内皮生长因子(VEGF)诱导的血管新生中有何作用,尚不清楚。本研究拟探讨VEGF在诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管型形成过程中对核仁素蛋白表达的影响及核仁素在这一过程中的作用。方法采用免疫印迹和定量聚合酶链反应(PCR)技术检测VEGF对核仁素表达的影响;采用基质胶、细胞划痕试验分析核仁素过表达和抑制表达对VEGF诱导的HUVEC管型形成、迁移能力的影响;采用生物信息学分析血管新生相关基因mRNA序列中含核仁素特异性结合基序的数量和位点。采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析核仁素与靶基因mRNA的结合。结果 VEGF促进HUVEC中核仁素蛋白和mRNA的表达,其表达量在100μg/L VEGF处理24 h时增加约3.5倍,并维持至48 h。核仁素过表达显著增强50μg/L VEGF介导的HUVEC形成管型的能力以及细胞迁移能力,而核仁素抑制表达则显著削弱100μg/L VEGF介导的HUVEC管型形成与细胞迁移能力。生物信息学分析发现,环氧合酶2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、endoglin(ENG)、整合素αV和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)等12个血管新生相关基因mRNA中含有核仁素结合基序"(T/G)CCCG(A/G)"。进一步采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析初步发现核仁素可以与ENG、MMP-9和COX-2的mRNA结合。结论核仁素正性调节VEGF介导的血管新生,其机制可能是核仁素与血管新生相关基因mRNA结合,维持后者的稳定性,从而发挥在转录后水平对血管新生相关靶基因表达的调节作用。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

腺苷对人脐静脉内皮细胞中肝细胞生长因子合成表达的影响

将人脐静脉内皮细胞(HUEVC)按加入腺苷浓度的不同分为A组(10-4mmol/L)、B组(10-8mmol/L)和空白对照组,48 h后检测各组肝细胞生长因子(HGF)合成,RT-PCR方法检测HGF mRNA表达。结果对照组HGF染色阳性细胞少,染色程度轻;A组HGF染色阳性细胞多,染色深,平均吸光度与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组平均吸光度与对照组比较无显著差异(P>0.05);RT-PCR分析A组中HGF mRNA表达含量与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。表明HUEVC中存在HGF表达,腺苷可部分通过促进内皮细胞中HGF合成表达而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

高糖对人脐静脉内皮细胞内皮抑素表达的影响

目的 研究高糖对人内皮细胞内皮抑素(ES)mRNA及蛋白表达水平的影响及其意义.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常糖(5.6mmol/L)对照组,高糖(11.2、22.4mmol/L)组.培养24、48、72、96h后,收集各组不同作用时间点细胞,用RT-PCR法检测ES mRNA表达水平,Western blot法检测ES蛋白的表达.结果 高糖对HUVECs中ES mRNA和蛋白表达水平的影响是双相的:短时间内起促进作用,具有时间依赖性;随作用时间延长转为抑制作用,22.4mmol/L糖培养HUVECs 96h时组ES mRNA和蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05).结论 糖尿病(DM)慢性病程中,ES表达的降低可能与DM血管病变的发生有关.     

培养人脐静脉内皮细胞血管内皮舒张因子释放及对血小板聚集的影响

直接观察体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）上清液中血管内皮舒张因子（EDRF／NO）的释放变化及对血小板聚集的抑制作用。发现：（1）缓激肽（BK）或细菌脂多糖（LPS）能刺激（EDRF／NO增加到原来的2倍，并且以孵育第1h增长最多。（2）L-精氨酸（L－Arginine）作为EDRF／NO合成原料，可以提高HUVEC上清液中EDRF／NO量，但是EDRF／NO合成酶抑制剂L－NG－nitro－arginine（L－NNA）与L－Arginine同时存在时则降低这个合成量。（3）经消炎痛处理过并含有EDRF／NO的HUVEC上清液对血小板有抑制作用、这种抑制作用由于L－NNA的存在而减弱。     

亚砷酸钠对人脐静脉血管内皮细胞的毒性效应

目的探讨亚砷酸钠对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)毒性效应的分子机制。方法通过观察细胞形态和细胞增殖实验分别观察亚砷酸钠对细胞形态及增殖能力的影响;PI染色结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;应用实时定量RT-PCR技术检测c-Jun、c-Myc的mRNA表达水平。结果随着亚砷酸钠浓度增加,漂浮的细胞越来越多;细胞增殖抑制率越来越高;细胞周期结果显示,S期的细胞数明显减少,大多数细胞被阻滞在G0/G1期,呈典型的剂量-效应关系;亚砷酸钠下调HUVEC的c-Myc mRNAs水平。结论亚砷酸钠通过下调c-Myc基因表达,抑制细胞增殖能力,提示其在地砷病引起的血管损伤中发挥重要作用。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子表达的影响

观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达的影响。采用免疫细胞化学及Westem blot蛋白印迹方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养的人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述作用的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β明显增加人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1的表达，辛伐他汀可一定程度抑制上述作用。结果提示，辛伐他汀一定程度抑制促炎症因子刺激导致的细胞粘附分子表达上调，可能具有增加粥样斑块稳定性和延缓动脉粥样硬化进程的作用。     

锌离子对人脐静脉内皮细胞的影响

目的探究氯化锌(Zn Cl2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法体外培养HUVECs,氯化锌浓度6~34μM分别处理细胞,MTS检测生长活性,筛选促细胞增殖的最佳浓度作为实验组浓度。实验组和对照组(未处理)流式细胞术检测HUVECs凋亡情况;鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(FITC)染色检测HUVECs骨架重构;Transwell小室检测HUVECs迁移和侵袭;Real-time PCR检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA相对表达水平;明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性;ELISA法检测HUVECs上清液MMP-2、MMP-9水平。结果与对照组相比,浓度范围在10~22μM内Zn Cl2处理的细胞,其相对增殖率升高,差异具有统计学意义(P均0.05)。选取促进HUVECs增殖的最佳浓度14μM作为实验组浓度。实验组的HUVECs凋亡率为(12.02±0.84)%,高于对照组的(4.05±0.52)%,差异有统计学意义(P0.01)。实验组HUVECs细胞迁移个数为(112.20±10.83)个,高于对照组的(94.80±9.50)个,差异有统计学意义(P0.05)。实验组HUVECs细胞侵袭个数高于对照组,[(36.20±3.22)个vs.(32.80±1.07)个],差异有统计学意义(P0.05)。实验组HUVECs细胞迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的m RNA相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。实验组细胞迁移相关蛋白MMP-2的光密度值显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);实验组细胞MMP-9的光密度值高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组细胞上清液中MMP-2和MMP-9的吸光度值高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。结论 14μM氯化锌处理HUVECs,使其处于增殖和凋亡平衡的生长活跃状态,并且促进HUVECs骨架重塑和细胞迁移。     

肝细胞核因子4α抑制人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达和人脐静脉内皮细胞小管形成

背景:肝细胞核因子4α(HNF4α)在肝脏的发育过程中发挥重要作用。研究证实HNF4α与肝细胞癌(HCC)的发生相关。然而HNF4α对人肝癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成的调控作用尚不明确。目的:探讨HNF4α对人肝癌细胞株VEGF表达和HUVEC小管形成的影响。方法:构建过表达HNF4α的慢病毒,并转染人肝癌细胞株HepG 2和SMMC-7721(实验组),以转染慢病毒空载体和未转染的细胞分别作为阴性对照组和空白对照组。分别以qRT-PCR、蛋白质印迹法检测HNF4α、VEGF mRNA和蛋白表达。将HUVEC与HepG2和SMMC-7721细胞不含血清的条件培养基共培养,检测小管形成数量。结果:成功构建了过表达HNF4α的HepG2和SMMC-7721稳转株。与阴性对照组和空白对照组相比,实验组HepG 2和SMMC-7721细胞中VEGF mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.05),HUVEC小管形成数量明显减少(P0.05)。结论:HNF4α能明显抑制人肝癌细胞株中VEGF表达以及HUVEC小管的形成。     

血管内皮生长因子对培养内皮细胞合成一氧化氮的影响

目的 :探讨血管内皮生长因子 （VEGF） /血管渗透因子 （VPF）对内皮细胞 （EC）分泌一氧化氮 （NO）的影响。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 （HUVEC）随机分为 6组 （n=6 /组 ） :1正常对照组 ;2 VEGF 1ng/ m l;3VEGF 10ng/ m l;4VEGF 10 0 ng/ m l;5低氧组 ;6低氧组 +VEGF 10 0 ng/ m l。采用硝酸还原酶法测定培养液中的 NO2 - ,NO3 -的含量以反映 NO水平。结果 :VEGF促进正常 EC分泌 NO,在一定浓度范围内呈剂量依赖性 ;低氧损伤 EC,使其分泌 NO减少 ;VEGF 10 0 ng/ ml预处理可保护 EC免受低氧损害 ,保持正常分泌 NO的功能。结论 :VEGF能够调节 EC的功能 ,为其促血管形成作用中 EC分裂、增殖、迁移奠定物质基础     

血管内皮生长因子基因对人工血管内皮细胞生长的影响

目的构建携带血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因腺病毒的人工血管模型。方法测定ad5-EGFP转染EAhy926转染率,观察人工血管携带腺病毒在静水中的释放情况及人工血管上内皮细胞的黏附情况,构建ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测VEGF基因水平表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测VEGF蛋白水平表达,噻唑蓝(MTT)法检测内皮细胞活性。结果ad5转染EAhy926的最适感染复数(MOI)为200。人工血管上携带的病毒静水中能在人工血管上保留1 h左右,逐渐释放。扫描电镜显示内皮细胞在人工血管上吸附。聚合酶链反应半定量电泳图中,ad5-hVEGF165转染组均可见564 bp条带,而ad5-Null组和空白组均未见此条带。ad5-hVEGF165组培养液中hVEGF165蛋白浓度在各时间点均高于ad5-Null组和空白组,差异有统计学意义(P<0.01)。ad5-hVEGF165组噻唑蓝试验后第3、5、7天测得的OD值高于ad5-Null组和空白组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论本实验成功构建携带VEGF基因腺病毒的人工血管。     

高糖作用下脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子基因表达与蛋白激酶C通路的关系

目的观察高糖作用人脐静脉内皮细胞时血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达与蛋白激酶C通路被激活和抑制的关系。方法提取并体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入不同浓度葡萄糖(5.5、11、22及44mmol/L)、蛋白激酶C激活剂和阻断剂并分别作用不同时间,应用逆转录聚合酶链反应检测血管内皮生长因子mR-NA水平,免疫细胞化学检测血管内皮生长因子及蛋白激酶C蛋白表达。结果经高糖处理的人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子mRNA的转录水平明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),但脐静脉内皮细胞经22 mmol/L葡萄糖作用72 h或佛波酯作用6 h,血管内皮生长因子mRNA水平不再升高,而呈下降趋势(P<0.05)。经22 mmol/L葡萄糖作用72 h后,血管内皮生长因子蛋白表达也逐渐下降。蛋白激酶C在22 mmol/L葡萄糖处理2 h后出现膜转位。而蛋白激酶C抑制剂GF109203X可阻断上述现象。结论高糖能引起脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mR-NA和蛋白表达增高。高糖引起脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子基因表达增高,其机制与高糖激活蛋白激酶C通路有关。