中国两地旋毛虫分离株COXl序列分析

目的：分析广西南丹和河南两地旋毛虫分离株COXl序列，鉴定两地旋毛虫的虫种。方法：分别提取2个分离株基因组DNA，PCR扩增COXl片段，并对扩增产物进行T-A克隆测序；应用相关软件分析序列的同源性、遗传距离，同时构建系统发生树，并与GenBank中已知旋毛虫种相应基因序列比较。结果：我国2个旋毛虫分离株和T．spiralis的COXl序列长度相同，为419bp；南丹和河南分离株与T．spiralis的相似度分别为99．0％和98．8％。南丹与河南分离株之间为99．8％；两地分离株与其它旋毛虫种的相似度低于90．8％。南丹和河南分离株与T．spiralis遗传距离分别为0．005、0．003。两地分离株之间的遗传距离为0．003，与其它旋毛虫的遗传距离均〉O．101。2个系统发生树中，我国2个分离株与T．spiralis位于同一分支，自引导值分别为100和99。结论：推断广西、河南两地旋毛虫分离株均为T．spiralis。     

广西首次发现野生果子狸感染旋毛虫

目的对广西龙州果子狸旋毛虫分离株进行虫种研究,确定当地是否存在新虫种。方法对龙州果子狸旋毛虫分离株进行囊包形态学、毒力和保姆细胞形成时间进行实验观察。提取并且扩增该旋毛虫及从德保、南丹野鼠体内分离的旋毛虫、河南旋毛虫分离株细胞色素氧化酶1（COX1）基因,分析同源性及遗传距离,构建系统发生树,并且与Genbank已知的旋毛虫相应基因序列进行对照比较。结果龙州旋毛虫分离株原代囊包的平均大小为328.72μm×236.42μm。小鼠接种旋毛虫（2 000条/只）后,半数死亡天数为24～25d,死亡率为84.62%。小鼠感染后第18d开始形成保姆细胞,第34d后保持在较高水平波动,至56d实验结束时仍可见少量游离幼虫,未见钙化死亡囊。龙州旋毛虫分离株和南丹旋毛虫分离株、河南分离株之间COX1的同源性为99.8%～100.0%,遗传距离为0.000～0.003。龙州旋毛虫分离株、南丹旋毛虫分离株及河南分离株与基因库中T.spiralis COX1基因的同源性为98.8%～99.0%,遗传距离为0.003～0.005。构建的系统发生树显示,果子狸分离株与德保、南丹分离株及Genbank中的T.spiralis在同一分枝,与其它旋毛虫种在不同的分枝。结论广西龙州发现果子狸自然感染旋毛虫,与广西德保、南丹两县野鼠体内分离旋毛虫为同一虫种,即T.spirilas,广西未发现新的旋毛虫种株。     

中国两地旋毛虫分离株COX1序列分析

目的:分析广西南丹和河南两地旋毛虫分离株COX1序列,鉴定两地旋毛虫的虫种.方法:分别提取2个分离株基因组DNA,PCR扩增COX1片段,并对扩增产物进行T-A克隆测序;应用相关软件分析序列的同源性、遗传距离,同时构建系统发生树,并与GenBank中已知旋毛虫种相应基因序列比较.结果:我国2个旋毛虫分离株和T.spiralis的COX1序列长度相同,为419 bp;南丹和河南分离株与T.spiralis的相似度分别为99.0%和98.8%.南丹与河南分离株之间为99.8%;两地分离株与其它旋毛虫种的相似度低于90.8%.南丹和河南分离株与T.spiralis遗传距离分别为0.005、0.003.两地分离株之间的遗传距离为0.003,与其它旋毛虫的遗传距离均＞0.101.2个系统发生树中,我国2个分离株与T.spiralis 位于同一分支,自引导值分别为100和99.结论:推断广西、河南两地旋毛虫分离株均为T.spiralis.     

广西南丹县旋毛虫COX1基因和5S rRNA基因分析

目的分析广西壮族自治区南丹县旋毛虫（Trichinella spiralis）COX1和5SrRNA基因特点,阐述该分离株的系统发生关系及基因变异规律。方法PCR扩增南丹旋毛虫分离株COX1和5SrRNA基因片段并对扩增产物进行测序;应用Blast和ClustalX软件计算其碱基组成,分析该分离株与GenBank中相应序列的同源性及遗传距离,同时应用UPGMA方法分析聚类关系。结果扩增后COX1基因片段长419bp,5SrRNA基因片段长695bp。南丹旋毛虫分离株与Trichinella spiralis（T.spiralis）的同源性最高,分别为99.0%和99.1%,遗传距离最小,分别为0.005和0.014。采用UPGMA法构建的2个系统发生树,南丹分离株和T.spiralis具有高度同源性,位于同一分枝,与无囊包旋毛虫（T.papuae和T.zimbabwensis）分枝较远,后者独成一枝,与T.spiralis相比,2个基因均存在变异,且变异位点均为4个,分别占相应基因序列的1.19%和0.57%。2个基因均富含A和T碱基,A＋T含量分别占相应基因的61.8%和66.4%。COX1变异存在转换和颠换,但均发生在密码子第三位点。5SrRNA基因变异位点分散,但变异均为转换,无颠换。结论南丹旋毛虫分离株与T.spiralis具有高度的亲缘关系,其COX1和5SrRNA基因的碱基组成、变异位点及变异类型均具有偏好现象。     

汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白M的基因克隆与序列分析

目的：建立汉坦病毒（HV）包膜糖蛋白M的克隆载体;研究M基因的变异情况,并对其序列进行系统发生树分析。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增GM04—38M片段的基因。产物纯化后克隆于PMD-18T载体。经氨苄青霉素筛选,酶切鉴定,并进行序列测定,应用DNASTAR软件将它与世界范围内分离的病毒株同一基因序列分析比较。结果：筛选出含有HVM蛋白基因的克隆。GM04—38株M片段的全基因序列共3651个核苷酸。4种核苷酸的比例分别为：A30．46％。T30．13％,G20．84％。C18．57％。序列同源分析表明。GM04—38株与Z37株核苷酸同源性最高（97.3％）。属于SEO型HV。与其他SEO各株的差别均小于18．0％：绘出了核苷酸系统发生树。结论：成功地建立汉坦病毒M蛋白基因克隆载体：中国不同地区汉坦病毒流行株基因序列存在明显差异。这为研究HV遗传与变异以及制备有效的亚单位疫苗奠定了基础。     

不同地理株旋毛虫细胞色素氧化酶Ⅰ基因多态性的PCR-单链构象多态性分析

目的:观察不同地理株旋毛虫细胞色素氧化酶Ⅰ(COX Ⅰ)基因片段的多态性.方法:根据旋毛虫mtD-NA COX Ⅰ设计引物,应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对我国7个猪源旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)地理株(河南、湖北、云南、西安、天津、黑龙江同江及哈尔滨株)与1个波兰猪源旋毛虫(T1,编号ISS3)地理株进行COX Ⅰ基因片段多态性进行分析.结果:我们7个猪源旋毛虫地理株与波兰地理株COX Ⅰ基因均扩增出约400 bp的片段,PCR扩增产物经SSCP检测发现有3种基因型(AA、AB和BB),波兰地理株为AA型,黑龙江同江、哈尔滨、西安、云南、湖北及河南株均为AB型,天津株为BB型,其中以AB基冈型频率最高(0.75),AA与BB基因型均为0.125;A和B等位基因频率均为0.5;旋毛虫不同地理株COX Ⅰ基因的多态性信息含量为0.375.为中度多态性.结论:8个不同地殚株猪源旋毛虫的COX Ⅰ基因为中度名杰件.     

我国4个旋毛虫分离株DNA限制性酶切片断长度差异的比较研究

报告我国云南、河南、沈阳（猪）以及长春（犬）４个旋毛虫分离株，用１０种限制性内切酶分析比较其基因组ＤＮＡ酶切片断长度差异。结果表明：来自猪体与来自犬体的旋毛虫酶切图谱不同，显示宿主的不同比地理位置、气候条件差异在旋毛虫的分类上更有意义。     

云南巴尔通体的系统发育多样性分析

目的基于gltA基因序列的系统发育分析对云南巴尔通体的多样性进行分析。方法用云南省1999年至今分离到的并已在GenBank中公布的32个巴尔通体变异体（gltA基因）为目标株，利用网上核酸序列比对程序BLAST进行核酸序列同源性搜索，调出相似性最高且有效发表种典型菌株为对比株，进行比对和系统发育分析。结果32个巴尔通体变异体可归为B．ehzabethae、B．tribocorum、B．grahamii、B．washoensis、B．taylrii、B．phoceensis和B．yunnannensis7个分枝。同一枝中所有分离的变异体与其发育关系最密切且有效发表种典型的菌株间的gltA基因序列均有不同程度的差异。部分变异体与有效发表种典型的菌株问存在较大的遗传差异。结论云南巴尔通体菌不仅具系统发育多样性，而且还具有其特异性和可能有潜在的新种。一些不明原因的疾病有可能与巴尔通体的感染有关不容忽视。     

两株登革2型病毒E、NS1蛋白基因序列测定及其系统发生分析

目的 :对从登革出血热 (denguehemorrhagicfever ,DHF)病人血清分离到的一株登革 2型病毒 (denguevirustype 2 ,DEN 2B株 )和DEN 2NGC株作E、NS1蛋白部分基因序列测定并进行系统发生树分析 ,了解其变异及分子进化特证。方法 :利用RT PCR法扩增B株和NGC株E、NS1部分基因片段 ,PCR产物直接测序 ;利用DNAssist软件预测其氨基酸序列 ,以及PHYLIP软件的CLUSTAL方法绘制系统发生树。结果 :B株与NGC株E蛋白基因区第 1～ 4 76nt(4 76bp)碱基序列存在 8个位点的差异 ;编码氨基酸存在 4个位置的不同 ;NS1基因区第 5 89～ 1 0 0 …     

2009—2019年北京市朝阳区甲型H1N1流感病毒 HA基因特征分析

目的 分析北京市朝阳区2009—2019年甲型H1N1流感病毒(H1N1)血凝素(hemagglutinin, HA)基因特征,了解朝阳区H1N1变异情况,为评估流感疫苗有效性提供依据。方法 从GenBank数据库和GISAID平台下载2009—2019年流感疫苗推荐株以及各分支主要流行株和代表株序列,与北京市朝阳区46株H1N1北京分离株的HA基因序列进行系统进化分析和氨基酸变异分析。利用MEGA 5.0软件邻接法(neighbor-joining, NJ)构建系统进化树并查看氨基酸变异位点,同时采用NetNGlyc 1.0在线软件分析HA基因潜在的糖基化位点。结果 北京市朝阳区46株H1N1分离株HA基因分别属于Clade 7、Clade 8、6B、6B.1、6B.2及6C等分支。除2009年以外,2012—2019年H1N1北京市朝阳区分离株与对应年度疫苗株比较接近,同源性为90%以上。各年份H1N1北京市朝阳区分离株在4个抗原决定簇区均有氨基酸变异发生,近年H1N1北京市朝阳区分离株所在的6B.1分支序列均有S74R(Cb区)、S164T(Sa区)共同氨基酸变异;除了6B.1A...     

RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM （RFLP） ANALYSIS OF GENOMIC DNA OF 5 STRAINS OF TRICHINELLA SPIRALIS IN CHINA

Five restriction endonucleases were used to digest genomic DNA from 5 isolates of Trichinella spiralis obtained from Changchun,Tianjin,Xian,Henan and Yunnan.All the isolates were secured from pigs ex-cept the Changchun strain which came from dog.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-mted by agarose gel electrophoesis.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-rated by agarose gel electrophoresis.The Changchun is olate had a EcoRI band at 1.12kb and a Dral band at 1.97kb which were unique to this isolate.A cloned specific repetitive DNA sequence(1.12kb) from the Changchun strain was selected to prepare a probe for the Southern blotting of EcoRI restriction DNA frag-ments for the 5 isolates.The 1.12kb hybridizing band did not appear except in the Changchun isolate.These results seem to indicate that there are differences between the isolates obtained from hosts in differ-ent geographical regions.     

旋毛虫西藏地理株生物学特性的研究

目的:为旋毛虫属的分类与肉类食品安全提供依据。方法:对我国西藏地区猪源旋毛虫地理株(iso-late)囊包大小与肌幼虫进行长度测量,观察其生殖力指数(reproductive capacity index,RCI)及冷冻耐力(freezing tolerance),并与河南猪源旋毛虫地理株进行比较。结果:旋毛虫西藏株的囊包长度、宽度、肌幼虫长度及RCI与河南株的差异均无统计学意义(P>0.05)。旋毛虫西藏株经-18℃冻存12、24及36 h后的RCI(44.33、26.71及0.83),均明显高于河南株(3.37、1.13及0))(P<0.01),西藏株-18℃冻存48 h才完全失去感染性,而河南株-18℃冻存36 h即已失去感染性。结论:旋毛虫西藏株的形态及RCI与河南株的差异无统计学意义,但其冷冻耐力明显高于河南株。     

Infectivity of Canadian isolates of Trichinella spiralis nativa for swine, rats and carnivores

The infectivity of Trichinella spiralis nativa isolates from widely separated geographic areas of Canada was determined by feeding infected musculature to swine, laboratory rats and carnivores (cats, foxes, ferrets). Low infectivity for swine and rats and high infectivity for carnivores were observed. Light infections were established in four of 16 swine examined between 25 and 53 days postinfection. Feeding of infected porcine musculature to ferrets demonstrated that Trichinella spiralis nativa can be passaged through swine even though the infectivity rate is low.     

旋毛虫河南株TspE1基因克隆及多态性分析

目的：构建旋毛虫河南成囊前期幼虫编码相对分子质量为31000的蛋白原结构基因（TspE1）的重组质粒（pUC18－TspE1)，测定TspE1基因序列，分析旋毛虫河南株的基因多态性。方法：根据TspE1基因已知序设计合成一对引物，采用RT－PCR技术获取旋毛虫成囊前期幼虫目的基因，PCR产物经纯化后用BamHI、HindⅢ进行双酶切，定向克隆入pUC18质粒，转化在肠杆菌JM109；重组质粒用BamHI＋HindⅢ酶切有PCR扩增鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行了DNA序列测定，应用DNASIS软件进行同源性比较。结果：RT－PCR扩增获得成囊前期幼虫TspE1基因（871bp），EcoRI酶鉴定正确；筛选出7个阳性克隆，对目的基因的测序结果显示旋毛虫河南株TspE1基因有5种类型，但都与GenBank中的TspE1基因序列及其由其推测的氨基酸序列不完全相同。结论：应用RT－PCR技术手增出旋毛虫河南株成囊前期成幼虫编码相对分子质量为31000的抗原结构基因，证实TspE1基因在成囊前期幼虫已有表达，结果还提示旋毛虫河南株可能存在有基因多态性。     

旋毛虫Ts43基因克隆和序列分析

目的：构建编码旋毛虫相对分子质量43000蛋白基因(Ts43)的原核表达载体,并对其序列进行分析。方法：应用RT—PCR方法从河南省南阳猪源旋毛虫获得旋毛虫基因Ts43,克隆人pGEMEX-1载体中构建重组质粒pGEMEX—Ts43,进行测序、同源性比较及抗原性预测分析。结果：所获基因的核苷酸序列与GenBank所登录的旋毛虫Ts43蛋白基因序列的同源性为99％。抗原性预测分析结果显示,河南省南阳猪源旋毛虫相对分子质量43000的蛋白分子上存在有4个明显抗原活性的结构域,分别位于距翻译起点第26～28、101～105、185～193、275～295个氨基酸残基的肽链上。结论：成功构建了旋毛虫相对分子质量43000蛋白抗原基因的原核表达载体。     

旋毛虫不同地理株冷冻耐力的观察

目的观察旋毛虫不同地理株的冷冻耐力。方法将75只雄性昆明小鼠随机分为3组（每组25只）,每组分别感染-18℃保存不同时间的旋毛虫河南株、云南株及乡土旋毛虫,每只小鼠经口接种300条肌幼虫。感染后42d剖杀,将全身骨骼肌消化后收集肌幼虫,测定其生殖力指数（Reproductivecapacityindex,RCI）。结果旋毛虫河南株-18℃保存0、6、12h后的RCl分别为91．4、0．03及0（X2=26．453,P〈0．05）,云南株-18℃保存0、6、12、24h后的RCl分别为235．6、0．04、0．01及0（x≮21．115,P〈0．05）;乡土旋毛虫-18℃保存0、6、12、24、48h后的RCl分别为34．6、26．8、21．9、10．8及7．4（F=8．505,P〈0．05）。结论旋毛虫河南株与云南株对低温的抵抗力较低,-18℃分别保存12、24h感染性已完全丧失;乡土旋毛虫对低温抵抗力较强,一18℃保存48h仍有较强的感染性。     

旋毛虫感染大鼠血清中IgE水平的动态观察

【目的】观察感染旋毛虫大鼠IgE水平的动态变化 ,探讨IgE在大鼠旋毛虫感染急性期免疫机理中所起的作用。【方法】采用双抗体夹心ELISA法 ,分别检测感染旋毛虫后 7、 14、 2 1、 2 8、 35、 6 0d大鼠外周血中总IgE水平 ,同时用间接ELISA法测定特异性IgE ,并做了特异性肥大细胞脱颗粒实验。【结果】实验组较对照组总IgE水平增高 ,在 14、 2 1d达到高峰 (P <0 0 5 ) ,第 3w后呈逐渐下降 ;特异性IgE在 14和 2 1d组与对照组有显著差异 (P <0 0 1) ,阳性率达 88 9%。实验组特异性肥大细胞脱颗粒实验与对照组有显著差异 (P <0 0 5 ) ,阳性率达 6 6 7%。【结论】血清中IgE抗体参与了旋毛虫急性期的免疫 ,主要作用为快速排出肠道内的旋毛虫脱囊幼虫 ,并可致敏肥大细胞 ,使其在旋毛虫幼虫抗原的作用下发生脱颗粒 ,故说明IgE是大鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。