纤维蛋白诱导的自噬促进人脐静脉内皮细胞增殖与血管腔样结构形成

目的 探讨纤维蛋白诱导的自噬对内皮细胞增殖和血管腔样结构形成的作用.方法 MTT法观察在不同浓度和时间的纤维蛋白作用下,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)形成血管腔样结构和细胞增殖的改变;采用RT-PCR检测不同浓度(1.5、3.0和6.0 mg/ml)和时间(6、12和24 h)的纤维蛋白作用下,微管相关蛋白1轻链3(MAP1 LC3)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预作用最显著的纤维蛋白浓度和时间,观察细胞增殖、血管形成和基因表达变化.结果 HUVECs在纤维蛋白作用下,可见管腔样结构形成,并呈浓度和时间依赖性;细胞增殖也较对照组明显增加.LC3和VEGF的表达均随着纤维蛋白浓度和时间的增加而增加.但在自噬抑制剂3-MA的作用下,细胞增殖降低,未见明显的新生血管形成;并且LC3、VEGF的mRNA表达也明显减少.结论 纤维蛋白激活自噬,参与了细胞增殖和血管新生的过程.     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的:研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法:以不同浓度乙醇(50、100和200mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果:乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论:乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

卡托普利与黄芪注射液对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察卡托普利、黄芪注射液及两者合用对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）株凋亡的抑制作用,初步探讨其机制。方法将HUVEC分为11组：①正常对照组（Normal）;②H2O2模型组（Model）：细胞培养基中加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育4 h;③卡托普利低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.5,5.0,50.0 μg•mL 1卡托普利预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育;④黄芪注射液低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.1,1.0,10.0 mg•mL 1黄芪注射液预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育;⑤两药合用低、中、高浓度组：细胞培养基同时加入具有上述3种终浓度卡托普利和黄芪注射液混合液预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育。流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,吖啶橙溴化乙啶荧光染色（AO EB染色）观察细胞凋亡形态,Western blotting检测Bcl 2表达。结果与H2O2模型组比较,正常对照组、卡托普利各浓度组和黄芪注射液中、高浓度组早期凋亡率明显降低（P＜0.05或P＜0.01）;正常对照组、卡托普利和黄芪注射液中、高浓度组总凋亡率均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）, Bcl 2含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。各浓度联合用药组与单独用药组比较,早期凋亡率、总凋亡率明显降低,Bcl 2含量明显升高,均差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论不同浓度卡托普利、黄芪注射液及两药合用可降低H2O2诱导的HUVEC凋亡率,增强Bcl 2表达,且呈一定浓度依赖性。相同浓度两药联用作用优于单药组。     

咖啡酸抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及机制探讨

目的:用H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡建立氧化应激模型,观察咖啡酸对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)凋亡的保护作用并初步探讨其机制。方法:分别用不同浓度的咖啡酸和H_2O_2处理HUVEC-12,通过四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)检测细胞的活力,流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶荧光染色(AO-EB染色)观察细胞凋亡形态,Western blotting检测NF-κB、P53和Bcl-2的表达。结果:用0.5 mmol/L H_2O_2和不同浓度咖啡酸共同孵育24 h,MTT提示咖啡酸能明显减轻H_2O_2对HUVEC-12的损伤,提高细胞的存活率,流式细胞检测术提示咖啡酸能使H_2O_2诱导的HUVEC-12凋亡率由21.9%±2.1%降至3.8%±1.1%。AO-EB染色提示咖啡酸能降低H_2O_2诱导的细胞凋亡,使凋亡细胞减少;同时NF-κB和P53表达上调,Bcl-2表达下调。结论:不同浓度的咖啡酸对H_2O_2引起的HUVEC-12损伤有保护作用,并呈现一定的浓度依赖性和时效性,其机制可能与调节NF-κB、P53和Bcl-2蛋白的表达有关。     

马来酸噻吗洛尔对人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖、凋亡、成管的影响

目的探讨马来酸噻吗洛尔在治疗婴幼儿血管瘤的作用机制。方法培养HUVEC细胞,采用CCK-8检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,体外血管形成试验检测细胞成管情况,应用SPSS17. 0统计包进行数据分析。结果用CCK-8测定马来酸噻吗洛尔能抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长;使用Annexin V-FITC/PI双染色法结果表明马来酸噻吗洛尔对HUVEC细胞的凋亡成剂量依赖性抑制;采用体外血管形成试验,表明马来酸噻吗洛尔对HUVEC细胞的成管能力成剂量依赖性的抑制。结论马来酸噻吗洛尔可能通过对婴幼儿血管瘤肿瘤中内皮细胞增值和血管生成能力的抑制,同时诱导内皮细胞凋亡来实现治疗目的。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

白黎芦醇对fMLP诱导中性白细胞与人脐静脉内皮细胞粘附的抑制作用及机制

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对趋化肽N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸(fMLP)诱导中性白细胞与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的粘附及HUVECs释放可溶性粘附分子的影响。方法观察不同浓度Res对fMLP(10μmol.L-1)刺激HU-VECs与中性白细胞粘附的影响。以ELISA法测定可溶性细胞间粘附分子,血管细胞粘附分子和E-选择素。以Fura-3和海萤萤光素诱导剂为荧光指示剂分别测定中性白细胞内[Ca2+]i水平和O2.浓度。结果Res(1~50μmol.L-1)明显抑制fMLP诱导的中性白细胞与HUVECs的粘附反应,同时,明显抑制fMLP诱导粘附分子的释放效应。Res抑制中性白细胞中O2.生成和[Ca2+]i升高,其中Res5μmol.L-1和50μmol.L-1与fMLP诱导组相比具有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇通过影响中性白细胞内O2.生成和[Ca2+]i水平,抑制中性白细胞与内皮细胞的粘附以及细胞间粘附分子表达,在阻断炎性反应的发生与发展过程中发挥着重要作用。     

萝卜硫素通过Src/PI3K/Akt通路调控人脐静脉内皮细胞NO的生成机制

目的：研究萝卜硫素（SFN）促进人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）生成一氧化氮（NO）,参与内皮细胞修复的作用机制。方法：采用MTT法检测SFN对HUVEC细胞存活率的影响;检测SFN对HUVEC NO释放量的影响;采用Western blot法检测SFN对NO释放途径相关蛋白表达量的影响。结果：SFN浓度低于50 μmol·L^-1时,对HUVEC细胞无明显毒性（P<0.05）;SFN可显著增加NO释放量,呈剂量依赖性,eNOS特异性抑制剂L-NAME明显抑制NO生成（P<0.05）;SFN呈时间和剂量依赖性显著增加eNOS磷酸化（p-eNOS）水平,促使Akt磷酸化（p-Akt）及PI3K上游调节因子Src激酶的活化。结论：SFN通过Src/PI3K/Akt信号通路增强HUVEC细胞中eNOS的活性,促进NO生成参与内皮细胞修复,为SFN在预防内皮功能障碍、动脉粥样硬化和其他心血管疾病方面的应用提供实验依据。     

碲化镉量子点抑制人脐静脉内皮细胞存活并损伤线粒体

目的观察碲化镉量子点(Cd Te QD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)线粒体自噬的诱导作用,探讨Cd Te QD对血管内皮细胞的毒理特性。方法原代培养的HUVEC采用免疫荧光法鉴定后与Cd Te QD(0.1~100 mg·L~(-1))共孵育24 h,MTT法检测细胞存活;Mitotracker标记、激光共聚焦显微术观察线粒体断裂情况;JC-1染色、流式细胞术检测Cd Te QD对HUVEC线粒体膜电位的影响;Western蛋白印迹法检测线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)、膜突蛋白样BCL2作用蛋白1(Beclin1)、同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)和动力相关蛋白1(DRP1)水平的变化。结果经鉴定,原代培养的HUVEC>95%为血管内皮细胞。MTT结果显示,Cd Te QD作用于HUVEC 24 h后,细胞存活率显著下降(P<0.05,P<0.01)。激光共聚焦显微术检测发现,Cd Te QD导致HUVEC胞内线粒体大量断裂。流式细胞术检测染色结果表明,Cd Te QD 0.1,1和10 mg·L~(-1)使HUVEC的线粒体膜电位下降,膜电位较高的HUVEC比例分别由正常对照组的(91.8±0.6)%下降至(90.2±1.1)%,(84.4±0.9)%和(78.1±1.3)%(P<0.05,P<0.01)。Western蛋白印迹结果显示,Cd Te QD 10 mg·L~(-1)诱导自噬相关蛋白Beclin1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值PINK1和DRP1的水平升高(P<0.05,P<0.01),Cd Te QD 1 mg·L~(-1)还造成线粒体自噬相关蛋白PINK1和DRP1表达显著上升(P<0.05,P<0.01)。结论 Cd Te QD可诱导HUVEC线粒体损伤并激活线粒体自噬。     

高血糖、高胰岛素对内皮细胞凋亡及Mn-SOD表达的研究

目的：了解糖尿病高胰岛素及高血糖的改变对内皮细胞凋亡及Mn-SOD表达的影响。方法：在高糖、高胰岛素及对照培养环境,分别孵育内皮细胞72h测定细胞凋亡情况并检测Mn-SOD的表达水平。结果：内皮细胞在高糖、高胰岛素条件下凋亡显著增加（P〈0.05）,同时Mn-SOD表达下降（P〈0.05）。结论：在高胰岛素血症而血糖没有升高到糖尿病标准的阶段,就会有内皮细胞凋亡显著增加,从而促进动脉粥样硬化形成,同时还有Mn-SOD表达水平的下降,病损持续存在于2型糖尿病进展的各个阶段。     

小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞(MOLT-4)凋亡的作用。 方法将处于对数生长期的MOLT-4细胞分为3组，A组加入小檗碱(10，100 mg·L^–1)，B组加入柔红霉素1 mg·L^-1，C组加入小檗碱＋柔红霉素，作用6 和24 h后，用MTT法检测细胞存活率；用流式细胞术、DNA电泳及光学显微镜观察小檗碱对MOLT-4细胞凋亡的影响。结果作用6，24 h后，A组(10 mg·L-¹)细胞存活率分别为81.80%，64.67%； B组为98.38%，38.46%，C组为68.35%，20.51%；C组与A、B组比较，在两个时间段差异均有显著性(P＜0.05)。小檗碱诱导MOLT-4细胞发生典型的细胞凋亡形态学变化，出现DNA规律性断裂，电泳呈典型的梯状条带变化。细胞周期分析提示小檗碱浓度在10，100 mg·L-1时作用24 h细胞凋亡率分别为5.83%，19.93%。结论小檗碱具有诱导白血病细胞凋亡的作用，且小檗碱可增强柔红霉素的抗肿瘤作用，为其临床应用提供了依据。     

紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响

目的:研究紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin-1、p62的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照比较,10、20、40μg/mL紫草素作用48 h后HCT116细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01)。10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后均可不同程度地升高细胞中LC3、Beclin-1、p62 mRNA及其蛋白的表达水平,除10μg/mL紫草素作用后细胞中LC3 m RNA表达水平升高不显著外,其余指标水平与空白对照比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草素可诱导人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,并激活其自噬途径。     

玫瑰花露抑制紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的:研究玫瑰花露(RW)抑制紫外线A和B诱导永生化角质形成细胞株(HaCaT)凋亡的分子机制。方法:复制紫外线A和B辐射诱导的HaCaT凋亡的模型,实验分为分6组,即对照、模型、阳性对照[维生素C(5.68mmol/L)或N-乙酰半胱氨酸(5mmol/L)]和RW高、中、低浓度(0.2%、0.1%、0.05%)组。采用MTT法检测RW对HaCaT细胞活性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内活性氧(ROS)水平;酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)水平和丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测HaCaT细胞IκBα磷酸化水平。结果:与模型组比较,RW高、中浓度组HaCaT细胞活性显著增强,细胞凋亡率显著降低,细胞内ROS水平显著降低,SOD、GSH-Px、CAT活性和T-AOC水平显著升高,MDA含量显著降低(P<0.01或P<0.05);RW高、中、低浓度组HaCaT细胞IκBα磷酸化表达显著降低(P<0.01)。结论:RW可通过调节核转录因子(NF)-κB通路抑制紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

摘 要 目的:研究天麻多糖（polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP）对皮质酮(corticosterone, CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP。将培养好的细胞分为正常对照组、模型组（200 μmol·L^-1 CORT）和GEP高（1 000 μg·ml^-1）、中（500 μg·ml^-1）、低（250 μg·ml^-1）剂量组。GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多。当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01)。结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究天麻多糖(polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP)对皮质酮(corticosterone,CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP.将培养好的细胞分为正常对照组、模型组(200 μmol·L-1 CORT)和GEP高(1 000 μg·ml-1)、中(500 μg·ml-1)、低(250 μg·ml-1)剂量组.GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态.结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多.当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据.     

槟榔碱对细胞增殖、凋亡和炎症反应影响的研究进展

目的与方法综合整理并介绍槟榔碱及其衍生物对细胞增殖和凋亡影响的研究历程及新进展。结果与结论槟榔碱及其衍生物通过产生亚硝胺类和活性氧族的广泛作用,对细胞多个靶点的进攻最终产生系统毒性作用,进一步抑制细胞增殖、阻断细胞周期、诱导细胞的凋亡。通过调节多种具有重要作用的细胞因子的表达,影响机体免疫功能并导致炎症反应的发生。对其结构中的某些基团进行修饰可能导致其生物学效应发生改变,为抗肿瘤新药的开发提供新的思路和途径。     

染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖凋亡和周期的影响

［摘要］目的探讨染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡和周期的影响及机制。方法50 mol&#8226;mL 1染料木素处理Siha细胞,用噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、周期及周期蛋白cyclin A和cyclin B表达的变化。结果染料木素作用于Siha细胞后,增殖抑制率比对照组明显升高（P＜0.05）;染料木素处理48 h后,实验组凋亡率较对照组升高,分别为（67.45±1.54）%和（45.37±1.65）%（P＜0.01）。染料木素处理后的Siha细胞G2/M期的细胞比例显著上升,由（9.55±0.71）%升至（79.54±1.09）%（P＜0.01）;cyclin A和cyclin B表达上调,分别由（1.84±0.11）%升至（37.38±0.71）%（P＜0.01）,由（69.44±1.84）%升至（97.70±1.20）%（P＜0.01）。结论染料木素在体外可有效抑制人宫颈癌细胞生长,其抗肿瘤机制可能是上调cyclin A和cyclin B蛋白表达和引起G2/M期细胞周期阻滞。     

新辅助化疗治疗宫颈癌对细胞增殖与凋亡的影响分析

目的探讨新辅助化疗治疗宫颈癌对细胞增殖与凋亡的影响,从而了解新辅助动脉化疗的作用机制,为宫颈癌的治疗提供参考。方法 52例Ib-IIb期宫颈癌患者平分两组,观察组施行动脉灌注栓塞化疗后手术,对照组直接手术治疗,观察临床疗效。分别记录两组手术病例的术中出血量,并作比较;同时检测动脉灌注栓塞化疗前、后及直接手术患者的肿瘤细胞增殖指数（Ki-67）及凋亡指数（AI）。结果观察组宫颈癌动脉灌注栓塞化疗总有效率为80.8%,对照组术后须行放疗或化疗者20例,占76.9%。观察组手术病例手术出血量为（362.5±11.5）ml,对照组手术出血量为（524.5±15.0）ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。观察组动脉化疗前活检标本,Ki-67指数（%）为（67.5±76）,对照组直接手术病理标本,Ki-67指数（%）为（80.1±8.5）。观察组AI（%）为（3.5±1.3）,对照组检测AI（%）为（0.8±0.3）。结论 Ib-IIb期宫颈癌行新辅助动脉灌注栓塞化疗,可显著缩小病灶体积,从而提高患者生活质量。可明显减少手术中出血量,有利于患者康复。同时促进肿瘤细胞增殖显著下降、凋亡显著增加,提示动脉化疗有抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的作用。     

金雀异黄素对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡作用

目的探讨金雀异黄素对人红白血病细胞系K562细胞的生长抑制、诱导凋亡作用。方法不同浓度的金雀异黄素处理K562细胞后,用MTT比色法检测细胞生长增殖作用,Wright-Gimesa法观察细胞的形态学变化,FCM检测K562细胞凋亡峰。结果金雀异黄素对K562细胞具有与时间、浓度呈正相关的生长抑制作用。形态学显示金雀异黄素高浓度组细胞发生核固缩、核碎裂,并有凋亡小体出现。细胞周期显示对照组K562G2／M期细胞8．9％,金雀异黄素75gmol·L^-1时升高到60．6％（P〈0．05）;金雀异黄素75gmol·L^-1时K562细胞亚G1期细胞为27．3％,对照组为0．4％（P〈0．05）。结论金雀异黄素对K562细胞具有很强的生长抑制作用,K562细胞可发生明显G2／M期阻滞,金雀异黄素诱导了K562细胞发生凋亡。