血管生成素在人毛囊中的表达及其对毛发生长的影响

目的 探讨血管生成素在人毛囊中的表达及其意义。方法 分离完整的人生长期毛囊,提取总RNA,RT-PCR法检测血管生成素mRNA的表达,同时应用免疫组化法检测血管生成素蛋白在人毛囊中的表达。在此基础上,在体外培养的人毛囊中加入不同浓度的重组人血管生成素（0 ～ 200 ng/mL）,培养6 d后测量毛囊的生长长度。利用两步酶法分离培养人毛乳头细胞,加入不同浓度的重组人血管生成素（0 ～ 200 ng/mL）,48 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果 RT-PCR显示人毛囊表达血管生成素mRNA,免疫组化法发现人毛囊的毛乳头和真皮鞘表达血管生成素蛋白。25 ～ 200 ng/mL重组人血管生成素呈浓度依赖性促进体外培养的人毛囊生长（P < 0.05）,而12.5 ～ 200 ng/mL重组人血管生成素能够明显促进体外培养的人毛乳头细胞增殖（P < 0.05）。流式细胞仪检测12.5 ～ 200 ng/mL重组人血管生成素能够显著增加S期细胞比率和细胞增殖指数（P < 0.05）。结论 血管生成素可能是一种促进毛发生长的因子。     

黄芩苷对人毛囊生长和毛乳头细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的 探讨黄芩苷对体外培养的人毛囊生长、毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 选择不同浓度黄芩苷作用于体外培养的人头皮毛囊8天,观察人毛囊生长及形态变化:作用于人毛乳头细胞72h,四甲基偶氮唑监(MTF)法测定细胞增殖活性,ELISA法检测细胞分泌的VEGF水平.结果 7.5.15,30,45μg/mL的黄芩苷对体外培养的人头皮毛囊有明显促生长作用;3.75,7.5,15,30μg/mL的黄芩苷对毛乳头细胞增殖无明显影响,但促进细胞分泌VEGF,与阴性对照组相比,差异有统计学意义.结论 黄芩苷促进体外培养的人头皮毛囊生长,部分可能是通过增加毛乳头细胞分泌VEGF促使毛发生长.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对体外培养的人毛囊生长和毛乳头细胞增殖的影响

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对体外培养的人毛囊生长和毛乳头细胞增殖的影响。方法 显微分离人毛囊，在加入不同质量浓度EGCG （0 ~ 250 mg/L）的Williams E培养基中培养，观察毛囊生长情况；利用两步酶法分离培养人毛乳头细胞，加入不同质量浓度的EGCG （0 ~ 500 mg/L），48 h后，利用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果 与空白对照组比较，0.1，1 mg/L的EGCG对体外培养的毛囊生长有明显促进作用（P < 0.05）；MTT显示15.6，31.2， 62.5 mg/L的EGCG能够明显促进毛乳头细胞的增殖（P < 0.05）；流式细胞仪检测7.8，15.6，31.2和62.5 mg/L的EGCG作用48 h后，S期和G2/M期细胞比率明显增加，G0/G1期细胞比率明显减少，细胞增殖指数明显增加（由5.25％增至5.64％，14.61％，32.51％，37.35％），细胞增殖指数与EGCG浓度呈显著正相关（r = 0.933）。结论 一定浓度的EGCG能够促进体外培养的人毛囊生长及人毛乳头细胞增殖。     

血管生成素对人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨血管生成素对体外培养的人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖的影响.方法:采用两步酶消化法分离和培养人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,将与绿色荧光蛋白基因共表达的血管生成素真核表达质粒pEGFP-ANG转染人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,同时设立转染空质粒的pEGFP-C2组和只加转染液的阴性对照组,48 h后利用ELISA法检测细胞上清液中血管生成素的表达,同时四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.另外,将不同浓度的重组人血管生成素(0～200μg/L)加入人毛囊外毛根鞘角质形成细胞中,培养48 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果:成功分离与培养了人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,转染人血管生成素的细胞上清液中血管生成素的浓度明显高于转染pEGFP-C2组和阴性对照组(P＜0.001),且其能够明显促进人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖(P＜0.001).另外,3.125～200.000 μg/L重组人血管生成素能够明显促进人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖(P＜0.001),其中以12.500 μg/L浓度组作用最为显著.流式细胞仪检测结果表明12.500～200.000 μg/L重组人血管生成素能够显著增加细胞增殖指数(P<0.05).结论:内源性和外源性血管生成素均能明显促进体外培养的人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖,提示血管生成素可能通过促进毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖而促进毛发生长.     

咖啡因对体外培养人毛囊及毛乳头细胞的影响

目的:研究咖啡因对人毛囊及毛乳头细胞体外培养的影响.方法:选择不同浓度咖啡因作用于体外培养的人毛囊及毛乳头细胞,记录6 d内毛囊的生长速度和毛球部形态学改变,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定毛乳头细胞增殖活性;流式细胞技术测定细胞凋亡;RT-PCR技术进行血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)及5α-还原酶(SRD5A)的mRNA定量.结果:与对照组相比,0.005%咖啡因明显促进毛囊生长,0.000 5%咖啡因促进毛乳头细胞增殖、抑制凋亡,并促进毛发生长正性相关因子表达,抑制负性相关因子表达.结论:在有效浓度范围内,咖啡因可以促进人毛发生长,高浓度咖啡因抑制毛发生长.     

血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响

目的:探讨血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响.方法:利用松香-石蜡拔毛法诱导C57BL/6小鼠背部的毛囊同步进入生长期,半定量RT-PCR检测血管生成素mRNA在不同毛囊周期小鼠皮肤中的表达.分离与培养完整的小鼠触须毛囊,加入不同浓度的血管生成素(0～200 μg/L),培养8 d 后测量毛囊的生长长度.与此同时,皮内注射血管生成素或血管生成素真核表达质粒pEGFP-ANG,并设立同时注射抗人血管生成素抗体组、注射空质粒pEGFP-C2 组和注射赋形剂的对照组,观察小鼠局部皮肤颜色的改变,并借助苏木精-伊红染色组织切片测量皮肤的厚度和计数生长期Ⅵ毛囊的比例.结果:半定量RT-PCR 显示小鼠皮肤中血管生成素mRNA 在生长期表达逐渐增加,生长期晚期表达最高,退行期开始减少,至休止期表达最低,其表达模式与毛囊周围的血管形成相一致.12.5～200.0 μg/L血管生成素呈剂量依赖性地促进体外培养的小鼠触须毛囊生长(P < 0.01).而且,皮内注射血管生成素和血管生成素真核表达质粒对C57BL/6小鼠背部的局部皮肤颜色无明显影响,但能明显增加局部皮肤的厚度(P ＜ 0.01)和生长期Ⅵ毛囊的比例(P ＜ 0.01).结论:血管生成素在小鼠皮肤中的表达具有毛囊周期依赖性的特点,血管生成素可能通过促进毛囊周围的血管形成和诱导毛囊进入生长期Ⅵ而促进小鼠毛发的生长.     

毛乳头细胞在毛囊形态学发生和生长调控中的作用

毛乳头细胞是一群特异的间质细胞 ,位于毛囊底部。在毛囊的胚胎发育过程中 ,这些细胞起源于真皮成纤维细胞。通过细胞外基质的变化 ,毛乳头细胞在毛囊的形态学发生和成年毛囊的周期性生长过程中具有重要的作用     

毛乳头诱导毛囊形成和毛发生长信号通路的研究进展

毛乳头是位于毛囊底部的特殊成纤维细胞团块,在毛囊的周期性生长中,毛乳头细胞与周围细胞相互作用而发挥重要功能,被认为是控制毛囊形成和毛发生长信号传导的中心.近年来的研究表明,许多信号通路,包括Wnt、骨形成蛋白、Shh、Notch、成纤维细胞生长因子等信号通路,在毛乳头控制毛囊形成和毛发生长的机制中起作用.可以通过这些信号通路,促进体外培养毛乳头细胞的增殖、加强体外培养毛乳头细胞诱导毛发生长的能力,从而建立一种毛发重构技术用于临床治疗.     

血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的研究

目的 探讨血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的作用及可能机制。方法 分离培养雄激素性秃发区毛乳头细胞,实时定量荧光PCR检测雄激素受体mRNA在不同传代次数毛乳头细胞中的相对表达量,CCK8法检测0、10、20、40、80、160 μg/L血管生成素对含或不含0.1 nmol/L二氢睾酮培养基培养的毛乳头细胞增殖的影响。取生长融合的第1代毛乳头细胞传代后分为3组：对照组（不用二氢睾酮或血管生成素处理）、0.1 nmol/L二氢睾酮组、0.1 nmol/L二氢睾酮 + 80 μg/L血管生成素组。作用48 h后,用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和转化生长因子β1（TGF?β1）mRNA的表达,Western印迹检测Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF?β1、p?Smad2和p?Smad3蛋白的表达。实验数据采用单因素方差分析、LSD检验和独立样本t检验进行分析。结果 体外培养的雄激素性秃发区毛乳头细胞随着传代次数增加,雄激素受体mRNA相对表达量明显降低（P < 0.05）。细胞增殖实验发现,20 ~ 160 μg/L血管生成素明显拮抗0.1 nmol/L二氢睾酮对毛乳头细胞增殖的抑制作用（均P < 0.05）。与对照组相比,二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和TGF?β1 mRNA显著升高,但二氢睾酮 + 血管生成素组较二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因mRNA（1.563 ± 0.143比4.329 ± 0.165）、纤维连接蛋白mRNA（1.290 ± 0.063比2.156 ± 0.115）和TGF?β1 mRNA（1.136 ± 0.098比1.707 ± 0.100）显著降低（均P < 0.05）。而且,血管生成素还能明显抑制由二氢睾酮诱导的毛乳头细胞中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF?β1、p?Smad2和p?Smad3蛋白的表达（均P < 0.05）。结论 血管生成素在体外能够抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中细胞外基质成分Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达,其机制可能与其下调TGF?β1表达及抑制TGF?β1/Smad信号通路的活化有关。     

毛乳头细胞在毛囊形态学发生和生长调控中的作用

毛乳头细胞是一群特异的间质细胞，位于毛囊底部。在毛囊的胚胎发育过程中，这些细胞起源于真皮成纤维细胞。通过细胞外基质的变化，毛乳头细胞在毛囊的形态学发生和成年毛囊的周期性生长过程中具有重要的作用。     

正常皮肤毛囊中朗格汉斯细胞的定位,定量观察

运用抗ＣＤ１ａ单克隆抗体免疫组化方法检测了１０例正常皮肤毛囊皮脂腺单位中朗格汉斯细胞（ＬＣ）的定位和定量情况,结果显示ＬＣ主要集中于毛囊上中部;如漏斗部平均１９．８７个／毛囊（范围８￣５４个）、皮脂腺导管和腺上皮中平均１６．３５个（范围７￣３４个）,其分布密度类似于表皮,相反,在毛囊下部ＬＣ数量明显减少,平均４．１６个／毛囊,且主要见于其上段的隆突部附近,毛囊部几乎见不到ＣＤ１ａ阳性ＬＣ。这种分布     

毛囊间充质干细胞的研究进展

 毛囊间充质干细胞（HFMSCs）是一类具有自我再生能力、高度增殖潜能、可多向分化且来源丰富的慢周期标记滞留细胞,可促进表皮、毛囊和皮脂腺再生。得益于其来源丰富、易获得、可于体外扩增、无需基因操作、不会形成肿瘤和无伦理限制等特点,毛囊间充质干细胞在再生医学中具有重要优势。Wnt、Shh、Notch和BMP等信号通路之间的协同和拮抗作用在干细胞稳态调节、表皮发育和毛囊再生过程中发挥至关重要的作用,这些途径的失调可能导致毛发脱落或者肿瘤的发生。本文综述毛囊间充质干细胞的分类及其特异性生物标记物、毛囊间充质干细胞的活化以及影响毛发再生的生物分子途径,为毛发疾病的治疗提供新的线索和靶点。     

Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in various compartments of the human hair follicle

Abstract Hair follicle vascularization appears to be closely related to the processes involved in hair cycle regulation, in which growth factors, cytokines and other bioactive molecules are involved. In particular, vascular endothelial growth factor (VEGF), essential for angiogenesis and vascular permeability, may be responsible for maintaining proper vasculature around the hair follicle during the anagen growth phase. The aim of our study was to compare the in vitro angiogenic capacity, i.e. the steady-state expression of the VEGF gene, of different cultured cell types derived from normal human hair follicles, corresponding to different follicular compartments. Human dermal papilla cells (DPC), fibrous sheath fibroblasts, dermal fibroblasts, and follicular and interfollicular keratinocytes were cultured and studied in vitro for VEGF expression at the mRNA level using RT-PCR, and for VEGF protein synthesis by radioimmunoprecipitation and immunocytochemistry. In vivo examination for VEGF expression in human terminal hair follicles was performed using immunohistochemical methods. In the present report the expression of four different VEGF molecular isoforms, differing in their angiogenic capacity, are described in different cultured follicular cell types for the first time. Cultured follicular cells strongly expressed mRNA of four VEGF molecular species identified as the 121-, 145-, 165- and 189-amino acid splice variants, the most prominent being the 121-amino acid molecule. DPC, and also other mesenchymal cells such as fibrous sheath fibroblasts and dermal fibroblasts, in vivo and in vitro strongly expressed VEGF mRNA and synthesized a 46-kDa VEGF protein, whereas follicular and interfollicular keratinocytes in vitro expressed lower levels of VEGF mRNA and proteins than mesenchymal cells. As the highest expression of VEGF was found in DPC, we suggest that DPC are mainly responsible for angiogenic processes possibly related to the human hair cycle. Received: 14 January 1998 / Received after revision: 16 July 1998 / Accepted: 30 July 1998     

Human hair growth ex vivo is correlated with in vivo hair growth: selective categorization of hair follicles for more reliable hair follicle organ culture

Of the numerous assays used to assess hair growth, hair follicle organ culture model is one of the most popular and powerful in vitro systems. Changes in hair growth are commonly employed as a measurement of follicular activity. Hair cycle stage of mouse vibrissa follicles in vivo is known to determine subsequent hair growth and follicle behavior in vitro and it is recommended that follicles be taken at precisely the same cyclic stage. This study was performed to evaluate whether categorization of human hair follicles by the growth in vivo could be used to select follicles of the defined anagen stage for more consistent culture. Occipital scalp samples were obtained from three subjects, 2 weeks later after hair bleaching. Hair growth and follicle length of isolated anagen VI follicles were measured under a videomicroscope. Follicles were categorized into four groups according to hair growth and some were cultured ex vivo for 6 days. Follicles showed considerable variations with respect to hair growth and follicle length; however, these two variables were relatively well correlated. Hair growth in culture was closely related with hair growth rate in vivo. Moreover, minoxidil uniquely demonstrated a significant increase of hair growth in categorized hair follicles assumed at a similar early anagen VI stage of hair cycle. Selection of follicles at a defined stage based on hair-growth rate would permit a more reliable outcome in human hair follicle organ culture.Oh Sang Kwon and Jun Kyu Oh contributed equally.     

人毛囊干细胞的定位及增殖特性

目的 探讨人毛囊干细胞定位和增殖特性.方法 取人枕部头皮毛囊进行角蛋白19(K19)免疫组化染色,并测量阳性段距毛囊下端的距离;将包含毛球部上方阳性段的毛囊上皮组织分别置于含有和不含有间质细胞的凝胶表面气液界面培养,当出现增殖灶时,测量其距毛囊下端的距离,分析K19阳性部位与培养出现的增殖灶之间的关系,并通过透射电镜观察增殖灶的超微结构.结果 人枕部头皮毛囊有两个K19阳性区域,即隆突部和毛球部上方一段外根鞘,毛囊下段上皮组织只在含有间质细胞的凝胶表面培养时毛球部上方出现一增殖灶,统计学分析支持毛球部上方的K19阳性部位和毛囊下段上皮组织培养出现的增殖灶为同一部位.透射电镜显示增殖灶含有幼稚细胞、成熟角质形成细胞和凋亡细胞.结论 人头皮毛囊可能有两个干细胞库,即隆突部和球部上方外根鞘的一个局限区域,干细胞的增殖需要间质细胞(如毛乳头细胞)的存在,增殖的干细胞可能向形成新的干细胞、成熟角质形成细胞和凋亡细胞三个方向演变.     

人毛乳头细胞体外培养生长曲线观察

目的：观察人正常头皮毛囊真皮成分的细胞体外培养的生长繁殖曲线及表皮细胞生长因子对它们的影响。方法：采用胶原酶消化法培养毛乳头细胞作真皮鞘细胞,在4种培养基中进行传代培养,并在基础培养基、常规培养基＋表皮细胞生长因子中进行^3H－TdR掺入,测定细胞代谢情况。结果：毛乳头细胞和真皮鞘细胞、成纤维细胞的生长呈现三个时相,停滞期、对数生长期和缓慢生长期,表皮细胞生长因子对3种细胞的生长具有显著的促进作用,尤其是对真皮鞘细胞的作用最为显著。结论：常规培养基＋表皮细胞生长因子对3种间质细胞的促生长作用表明,在器官型培养中对毛囊上皮细胞和真皮成分的细胞也会有促生长作用,为毛囊器官型培养和人工皮肤研究采用此培养基提供了实验依据。