组织蛋白酶D调控皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的研究

目的 探究组织蛋白酶D（CatD）对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物（AGE）的调控作用。方法 分别以CatB + CatL、CatD以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂（pepstatin A）、MG-132处理皮肤成纤维细胞,CCK8和荧光法检测细胞活性及蛋白酶活性。CA074Me、pepstatin A、MG-132组分别加入AGE-BSA孵育8 h,而对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）。孵育8 h后,置换含相应抑制剂的新鲜培养基继续培养24 h,流式细胞仪检测各时间点胞内AGE-BSA平均荧光强度。以不同浓度pepstatin A（37.5、75、150 μmol/L）或PBS处理皮肤成纤维细胞,加入AGE-BSA孵育,方法同前,ELISA检测各时间点胞内AGE-BSA平均浓度,计算降解率。慢病毒转染皮肤成纤维细胞,设空白对照组、空载病毒转染组、CatD高表达慢病毒转染组,荧光显微镜观察,RT-PCR、Western印迹法和荧光法检测各组CatD mRNA和蛋白表达及酶活性。分别加入AGE-BSA孵育,处理及检测方法同前,计算降解率。结果 1 μmol/L CA074Me组、75 μmol/L pepstatin A组及1 μmol/L MG-132组细胞增殖活性均在90%以上,与对照组（100%）差异无统计学意义（F = 1.525,P > 0.05）。去除AGE-BSA 24 h后,CA074Me + AGE-BSA组和MG-132 + AGE-BSA组胞内AGE-BSA荧光强度（275.00 ± 10.15、259.00 ± 11.14）均较其相应8 h点荧光强度（295.00 ± 6.56、285.67 ± 8.74）显著下降（配对t值分别为4.778、6.154,均P < 0.05）,而pepstatin A + AGE-BSA组8 h和32 h点细胞内AGE-BSA荧光强度差异无统计学意义（均P > 0.05）。37.5、75和150 μmol/L pepstatin A组24 h内对吞入胞内AGE-BSA的降解率分别为9.64% ± 1.27%、5.62% ± 0.47%和3.21% ± 0.73%,各组间差异有统计学意义（F = 45.876,P < 0.05）,且该降解率随pepstatin A浓度增加而降低（P < 0.05）。荧光显微镜下观察,空白对照组细胞未见荧光,空载病毒转染组和CatD高表达慢病毒转染组细胞荧光阳性率均在80%以上。CatD高表达慢病毒转染组CatD mRNA、蛋白表达及活性均较另2组显著上调（均P < 0.05）。CatD高表达慢病毒转染 + AGE-BSA组24 h内AGE-BSA的降解率显著高于AGE-BSA组和空载病毒转染 + AGE-BSA组（均P < 0.05）。结论 CatD可促进皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的AGE-BSA。     

UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响

目的 探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K(Cathepsin K,CatK)的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化.方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验.先以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后24、48、72 h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA.再以10 J/cm2、20 J/cm2、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后48 h收集细胞.用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组间CatK mRNA、蛋白的表达的差异.结果 10 J/cm2 UVA照射后1、2、3d,照射组CatKmRNA表达分别为0.351±0.038(对照组0.177±0.006)、0.510±0.017(对照组0.176±0.002)、0.313±0.012(对照组0.173±0.002).照射组CatK蛋白灰度值分别为1.76±0.27(对照组0.82±0.45)、2.97±0.36(对照组1.58±0.15)、2.23±0.14(对照组1.29±0.32),照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高(P＜0.05),且以照射后第2天表达最高.10、20、30 J/cm2UVA照射后,48 h皮肤成纤维细胞中CatK mRNA表达分别为对照组的2.34、2.91、3.18倍,CatK蛋白表达分别为对照组的1.77、2.82、3.64倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高.     

皮肤组织蛋白酶D表达与晚期糖基化终末产物堆积的相关性研究

目的 研究组织蛋白酶D（CatD）与晚期糖基化终末产物（AGE）在不同年龄、不同曝光程度皮肤中的表达及其相关性,初步探讨CatD在光老化皮肤AGE降解和堆积中的作用。方法 15 ~ 20岁、35 ~ 40岁、55 ~ 60岁及75 ~ 80岁患者曝光和非曝光部位皮肤组织,共8组,每组6份。采用免疫组化和免疫荧光双染法分别检测CatD和AGE在各组皮肤中的表达。采用析因设计方差分析、Wilcoxon秩和检验和Kruskal?Wallis秩和检验分析CatD和AGE表达与年龄、曝光的关系,并用Pearson相关系数分析CatD和AGE两者表达的相关性。结果 免疫组化显示,CatD表达随年龄增加而明显下降,而AGE的沉积则随年龄增加而逐渐增多;曝光部位CatD表达较同年龄组非曝光部位明显降低,而AGE沉积比同年龄组非曝光部位明显升高。析因设计方差分析显示,曝光会降低CatD的表达（F = 58.70,P < 0.001）,但会增加AGE的表达（F = 158.18,P < 0.001）。年龄的增长亦会引起CatD表达降低（F = 79.49,P < 0.001）,但AGE表达随年龄的增长而增加（F = 106.06,P < 0.001）。除了15 ~ 20岁年龄组,其他年龄组曝光组和非曝光组间CatD（35 ~ 40岁组：0.020 ± 0.005比0.032 ± 0.005;55 ~ 60岁组：0.012 ± 0.004比0.026 ± 0.002;75 ~ 80岁组：0.002 ± 0.001比0.013 ± 0.004）和AGE平均吸光度值（35 ~ 40岁组：0.030 ± 0.008比0.010 ± 0.003 ;55 ~ 60岁组：0.066 ± 0.010比0.021 ± 0.004 ;75 ~ 80岁组：0.085 ± 0.015比0.035 ± 0.009 ）差异均有统计学意义（均P < 0.001）。在固定曝光因素各水平条件下,不同年龄组间CatD和AGE表达差异亦均有统计学意义（均P < 0.001）。免疫荧光双染结果与免疫组化结果相似。Pearson相关分析显示,曝光部位皮肤CatD表达与AGE沉积呈高度负相关（r = -0.915,P < 0.05）,在非曝光皮肤中两者呈中度负相关（r = -0.730,P < 0.05）。结论 随年龄增长皮肤组织中CatD表达水平下降,而AGE表达水平上升。非曝光部位皮肤CatD和AGE表达呈中度负相关,曝光部位皮肤CatD和AGE表达呈高度负相关,CatD很可能在光老化皮肤AGE降解和堆积中起重要作用。     

光老化对皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的影响

目的 探讨光老化对皮肤成纤维细胞降解胞内晚期糖基化终末产物（AGE）的影响。方法 连续长波紫外线（UVA）照射诱导成纤维细胞光老化,通过CCK8法、β半乳糖苷酶染色及细胞凋亡率检测验证模型是否构建成功。取原代成纤维细胞分为4组：光老化组（以UVA照射诱导光老化）,非光老化组（不做处理）,光老化 + AGE组（以UVA照射诱导光老化后加入200 mg/L AGE?BSA孵育）,非光老化 + AGE组（未诱导光老化细胞中加入200 mg/L AGE?BSA孵育）,孵育4 ~ 72 h后,流式细胞仪检测各组细胞内AGE?BSA荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜定位、半定量各组细胞8 h点胞内AGE?BSA。ELISA检测各组细胞24 h内AGE?BSA浓度变化。结果 与对照组（未照射UVA）相比,UVA照射组细胞增殖活性显著下降（t = 7.559,P < 0.05）,而凋亡率及β半乳糖苷酶染色阳性率显著升高（t值分别为14.075、43.524,均P < 0.05）。流式细胞仪检测示,孵育4、8、16、24、48、72 h后,光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度分别为293 ± 8.19、359.67 ± 11.59、347 ± 12.29、338 ± 12.77,334.67 ± 14.22、336.3 ± 10.21,非光老化 + AGE组分别为222.33 ± 8.74、276.33 ± 6.11、256.33 ± 5.51、243 ± 10.15,236.33 ± 1.53、240.33 ± 1.52,均分别高于相应时间点光老化组和非光老化组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。其中光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度显著高于相应非光老化 + AGE组细胞（P < 0.05）。激光扫描共聚焦显微镜观察发现,吞入胞内的AGE?BSA主要位于溶酶体内,光老化 + AGE组AGE?BSA荧光强度显著高于非光老化 + AGE组,P < 0.05。ELISA检测发现,32 h点非光老化 + AGE组细胞AGE浓度较8 h点下降（14.6 ± 1.2）%,显著高于光老化 + AGE组（t = 6.604,P < 0.05）。结论 光老化皮肤成纤维细胞对吞入胞内AGE?BSA的降解能力下降,可能致AGE在光老化皮肤堆积。     

长波紫外线对皮肤成纤维细胞表达和分泌组织蛋白酶G的影响

目的 研究长波紫外线（UVA）照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶G（CatG）表达和分泌的影响。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验。①以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24、48、72 h后提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA,并收集细胞上清液;②分别以10、20、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24 h后收集细胞和上清液。用RT-PCR 和Western印迹分别检测各组细胞CatG mRNA及蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液CatG的含量。 结果 10 J/cm2 UVA照射后24、48、72 h,照射组细胞CatG mRNA表达分别为0.376 ± 0.014、0.308 ± 0.022和0.296 ± 0.032,对照组分别为0.183 ± 0.003、0.185 ± 0.005、0.182 ± 0.004;照射组细胞CatG蛋白灰度值分别为1.80 ± 0.12、1.41 ± 0.17和1.27 ± 0.09,对照组分别为0.96 ± 0.06、0.95 ± 0.22、1.00 ± 0.14;照射组细胞CatG mRNA、蛋白表达及细胞上清液CatG含量较相应的对照组升高（均P < 0.05）,且以照射后24 h表达最高。10、20、30 J/cm2 UVA照射后24 h,皮肤成纤维细胞CatG mRNA表达分别为对照组的1.90、2.51、3.04倍,细胞CatG蛋白表达分别为对照组的1.88、3.97、4.72倍,细胞上清液CatG含量分别为对照组的1.36、1.50、1.66倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义（均P < 0.01）。 结论 急性UVA照射促进皮肤成纤维细胞表达和分泌CatG。     

组织蛋白酶B在急性光损伤皮肤成纤维细胞中的表达及意义北大核心CSCD

目的 探讨组织蛋白酶B（CatB）在急性光损伤人皮肤成纤维细胞（HDF）中的表达变化及意义.方法 体外培养原代HDF,选取第4～8代细胞进行实验.实验设长波紫外线（UVA）照射组和不照射的对照组.CCK8法分别检测5、10、15、20和25 J/cm2 UVA照射后HDF的增殖率.用10 J/cm2 UVA单次照射致HDF急性光损伤,Western印迹及实时定量逆转录（RT）-PCR分别检测急性光损伤组HDF及对照组HDF照射后24、48、72 h CatB蛋白及mRNA表达;另外分别用10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF,Western印迹及实时定量RT-PCR分别检测急性光损伤组及对照组HDF照射后48 h CatB蛋白及基因表达.数据采用SPSS 13.0统计软件行方差分析,两组间比较采用最小显著差异法（LSD）.结果 UVA照射导致HDF增殖率下降;当UVA剂量≤10 J/cm2时,细胞存活率均保持在85％以上,各照光组分别与对照组24、48、72 h时比较,均P＜0.05.Western印迹结果显示,急性光损伤组（10 J/cm2 UVA照射）CatB蛋白灰度值在照射后24 h（0.76±0.14）、48 h（1.34±0.38）、72 h（0.82±0.09）均较对照组（分别为0.35±0.01、0.45±0.12、0.61±0.06）升高（均P＜0.05）.实时定量RT-PCR显示,在急性光损伤组CatB的mRNA表达在照射后24 h（0.149±0.009）、48 h（0.173±0.009）、72 h（0.185±0.158）也较对照组（分别为0.089±0.015、0.091±0.010、0.111±0.017）上调（均P＜0.05）.10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF后48 h,CatB的蛋白灰度值分别为0.99±0.07、1.49±0.14、1.89±0.08、2.07±0.06,均较对照组（0.60±0.05）升高（均P＜0.05）,CatB的mRNA表达也较对照组升高.结论 UVA致急性光损伤的皮肤成纤维细胞中CatB蛋白及mRNA表达均上调.     

糖尿病小鼠皮肤组织中晚期糖基化终末产物的表达及其对胶原纤维的影响北大核心CSCD

目的 观察不同病程糖尿病小鼠皮肤组织晚期糖基化终末产物（AGE）的表达及其对胶原纤维的影响.方法 健康8周龄C57BL/6J雄性小鼠采用小剂量链佐星（50 mg/kg）多次注射法建立糖尿病模型,分别在造模后第4周和12周处死小鼠,取背部中央皮肤,HE染色观察组织学结构,样本碱水解法测定羟脯氨酸水平反映胶原总量,限制性胃蛋白酶降解法测定胶原交联程度,实时定量PCR法测定Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原基因表达,荧光分光光度法和Western印迹检测晚期糖基化终末产物水平,硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量.统计学分析采用t检验.结果 镜下可见糖尿病小鼠皮肤组织明显变薄,胶原呈进行性减少.第4周和12周时,糖尿病组小鼠皮肤组织羟脯氨酸含量与正常对照组比较显著降低[（684.5±76.7）比（787.7±87.7） mg/g,（558.1±73.1）比（757.8±75.3） mg/g,均P＜ 0.01],皮肤AGE水平显著上升[（37.47±10.65）比（26.39±3.74）AUF/mg羟脯氨酸,（47.70±5.66）比（29.91±6.50） AUF/mg羟脯氨酸,均P＜ 0.01],丙二醛含量显著增加[（6.62±0.47）比（4.82±0.56） μmol/L,（8.63±0.36）比（5.15±0.46）μmol/L,均P＜ 0.01],交联胶原以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均下降（P＜0.01或0.05）,糖尿病12周组非交联胶原亦明显下降（P＜0.05）;与糖尿病4周组相比,糖尿病12周组小鼠皮肤羟脯氨酸含量、Ⅰ型胶原表达进一步减少（P＜0.05）,AGE和丙二醛水平进一步增加（P＜0.01）.结论 糖尿病小鼠皮肤组织胶原纤维性状发生改变,可能与皮肤组织中晚期糖基化终末产物水平上升及氧化损伤加剧有关.     

MAPK信号通路调控长波紫外线诱导的皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达

【摘要】 目的 研究MAPK信号通路调控长波紫外线（UVA）诱导皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K（CatK）的表达。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞取自儿童包皮。Western印迹检测10 J/cm2 UVA照射前及照射后0.75、1.5、3和6 h皮肤成纤维细胞中磷酸化JNK（p-JNK）、JNK、磷酸化P38（p-P38）、P38蛋白的表达。800 nmol/L SP600125（SP）、10 μmol/L SB203580（SB）分别孵育皮肤成纤维细胞,实验分为无UVA照射的对照组、SP组、SB组及10 J/cm2 UVA照射的对照（UVA）组、UVA-SP组、UVA-SB组。先以Western印迹检测各组UVA照射后1.5 h磷酸化c-Jun（p-c-Jun） 和磷酸化MAPKAPK2（p-MAPKAPK2）表达,再以RT-PCR 和Western印迹检测各组照射后48 h CatK mRNA、蛋白的表达。 结果 皮肤成纤维细胞在UVA照射后0.75、1.5 h,p-JNK表达的灰度值分别为4.77 ± 0.19和4.68 ± 0.09,p-P38分别为2.44 ± 0.13、2.30 ± 0.04,均较照射前（p-JNK为3.2 ± 0.27,p-P38为1.61 ± 0.08）显著升高（均P ＜ 0.05）;而在照射后3、6 h的表达与照射前相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。p-c-Jun在UVA-SP组表达（2.55 ± 0.48）、p-MAPKAPK2在UVA-SB组表达（1.16 ± 0.12）均显著低于UVA组（分别为4.85 ± 0.96和2.46 ± 0.09）,均P ＜ 0.05。UVA-SP组、UVA-SB组CatK mRNA、蛋白的表达分别降为UVA组的38.9%、28.7%和55.7%、49.6%（P ＜ 0.05）,UVA-SP组CatK mRNA、蛋白的表达也均显著低于UVA-SB组（P ＜ 0.05）。 结论 JNK和P38信号通路在调控UVA上调的皮肤成纤维细胞CatK表达中起重要作用。     

强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞活性及其分泌基质金属蛋白酶的影响

目的 探讨强脉冲光(IPL)照射对培养状态下的人成纤维细胞形态、增殖活性以及分泌基质金属蛋白酶l(MMP-1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响.方法 由健康人皮肤标本中分离培养成纤维细胞,用一定剂量IPL分别照射后进行培养,光学显微镜观察成纤维细胞形态学变化,MTY法检测细胞增殖活性,ELISA法检测MMP-1及MMP-2水平.结果 成纤维细胞经IPL照射后形态无明显改变;能量密度为18,29,35J/cm²的IPL均可明显提高成纤维细胞活性,但无剂量依赖性.IPL照射后成纤维细胞MMP-1及MMP-2分泌水平无明显改变.结论 IPL照射能增强成纤维细胞增殖活性.     

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。     

晚期糖基化终末产物及其受体在瘢痕疙瘩中的表达

目的 研究晚期糖基化终末产物（AGE）及其受体（AGER）在瘢痕疙瘩中的表达。方法 瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常人群血清、皮肤组织标本各20份,以荧光分光光度计检测三组人群血清中AGE含量,分别采用免疫组化法、Western印迹分析检测三组人群皮肤组织标本中AGE和AGER表达情况。结果 瘢痕疙瘩组血清中AGE含量为（0.713 ± 0.098） AU/ml,增生性瘢痕组为（0.699 ± 0.077） AU/ml,明显高于正常人群组（0.179 ± 0.056） AU/ml,三组差异有统计学意义（F = 283.82,P < 0.01）。免疫组化显示,AGE、AGER在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕皮肤组织标本中表达阳性,正常人群组织表达则为阴性。Western印迹检测显示,瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中AGE和AGER蛋白表达均明显高于正常人群,差异有统计学意义（F值分别为18.04、42.80,P < 0.05）,而瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组之间差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 AGE和AGER在瘢痕疙瘩中表达升高,在其发病过程中可能发挥一定的促进作用。     

中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞上清液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响

目的 观察中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响.方法 取健康青少年男子环切术后包皮进行人真皮成纤维细胞的分离培养.将中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞设为实验组,并设立对照组即正常成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞.处理20 d后,用CCK8法检测细胞增殖活性,EDU(5-乙炔基-2,脱氧尿嘧啶核苷)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,β半乳糖苷酶染色计算衰老细胞百分比,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹法及间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3-B的表达水平.数据采用Graphpad Prism 5软件分析,两组间比较采用成组t检验.结果 实验组成纤维细胞增殖活力(0.831±0.017)明显低于对照组(0.973±0.017),但EDU染色及流式细胞仪检测结果均显示,实验组S期细胞百分比明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).β半乳糖苷酶染色显示,实验组成纤维细胞阳性率(25.710％±0.304％)高于对照组(5.257％±1.023％),差异有统计学意义(t=19.170,P＜0.05).吖啶橙染色结果显示,实验组成纤维细胞红色荧光量(14.287±2.269)低于对照组(29.614±2.650).Western印迹及间接免疫荧光结果均显示,实验组成纤维细胞LC3-B表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞的条件培养液可降低成纤维细胞的自噬及增殖,并加速其老化.     

中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞自噬对凋亡影响的初步研究

[目的]探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响.[方法]人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养,连续传代培养后取第3～ 10代的细胞进行实验.通过单丹酰戊二胺(MDC)染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3(LC3)的方法,确定不同剂量3-甲基腺嘌呤(3-MA)对自噬的抑制作用.UVB照射后立即加入0.5 mmol/L 3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法.Hoechst和碘化丙啶(PI)染色结合Annexin V-异硫氰酸荧光索(FITC)和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法.[结果]0.5 mmol/L 3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性(饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63.037％±5.876％,3-MA孵育后下降至34.425％±5.183％).空白对照组、30、50、100mJ/cm2UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强,照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显.0.5 mmol/L 3-MA对细胞活性影响最小.50 mJ/cm2 UVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多;100 mJ/cm2 UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少.Annexin V -FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示,在50 mJ/cm2 UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[( 10.933±0.839)％]较未抑制细胞[(7.267±0.473)％]上升,两者之间差异具有统计学意义(t=5.20,P＜ 0.05);而在100mJ/cm2UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[(7.100±0.781)％]较未抑制细胞[( 10.133±0.681)％]下降,两者之间差异具有统计学意义(t=6.29,P＜ 0.05).[结论]50 mJ/cm2 UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用,而在100 mJ/cm2 UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬性细胞死亡.     

黄芩苷抑制长波紫外线诱导的人成纤维细胞氧化损伤和凋亡

目的 探讨黄芩苷对长波紫外线(UVA)诱导的人二倍体成纤维细胞(HDF)氧化损伤和凋亡的抑制作用及其可能机制.方法 CCK-8法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度.将成纤维细胞分成对照组、UVA照射组、UVA+ 6.25 mg/L黄芩苷组、UVA+12.5 mg/L黄芩苷组、UVA+ 25 mg/L黄芩苷组.利用荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞中活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞凋亡率的变化.Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase3含量.以上多组间比较均采用单因素方差分析.结果 UVA照射组的活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量分别为813.1±30.29、353.3±19.13、107.1±11.44,较对照组(442.5±29.45、223.4±10.67、42.17±2.59)明显上升,均P＜0.05);同时,UVA照射组较对照组线粒体去极化增强,凋亡率上升.与UVA组比较,各浓度黄芩苷作用组氧化产物包括活性氧、超氧化物阴离子及一氧化氮含量均有明显下降,线粒体去极化减弱,细胞凋亡率也显著下降,均P＜ 0.01.UVA组凋亡相关蛋白caspase3相对含量为1.2680±0.0091,明显高于对照组(0.3675±0.1115),6.25、12.5和25 mg/L黄芩苷组(0.5588±0.1705、0.5365±0.1718、0.5454±0.2083)较UVA组有显著下调(均P＜0.01).结论 黄芩苷可以减轻UVA诱导的人成纤维细胞氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与清除活性基团、抑制线粒体膜去极化、阻止下游凋亡蛋白caspase3的激活和表达有关.