细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4与SLE

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4可表达于免疫细胞为主的多种细胞.细胞毒性T淋细胞相关抗原-4Ig和抗单抗是细胞毒性T淋细胞相关抗原-4用于防治自身免疫性疾病、移植排斥及肿瘤的两种分子,其效能在动物实验及临床应用中已得到证实.SLE是一种常见的累及多器官自身免疫性疾病,其免疫学特征是T细胞反应受损和B细胞活性调节障碍,从而导致B细胞高活性和产生大量自身抗体.     

Nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响及可能机制

目的 观察顺式咪唑啉衍生物nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响,研究其机制。 方法 将A375细胞分为实验组和对照组,实验组细胞接受2.5、5、10 μmol/L nutlin-3处理,对照组细胞采用二甲基亚砜处理。分别于作用24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;Western印迹检测p53蛋白表达的改变;流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡;Transwell法检测迁移性变化。采用重复测量的方差分析进行统计学检验。 结果 2.5、5、10 μmol/L nutlin-3处理A375细胞24、48、72 h后,MTT法显示不同时间点间的增殖抑制率差异有统计学意义（F = 67.43,P < 0.01）,不同浓度间的抑制率差异有统计学意义（F = 135.58,P < 0.01）,浓度越高抑制率越高;时间和浓度之间有交互作用（F = 26.95,P < 0.01）。Western印迹 、流式细胞仪、Transwell法检测显示,不同时间点之间A375细胞的p53表达、G2期细胞百分率、凋亡率、迁移抑制率差异均有统计学意义（F值分别为1255.00、831.38、809.45、1100.00,均P < 0.01）,除p53外,时间越长各项指标值越高;不同浓度间各项指标值差异均有统计学意义（F值分别为9196.00、267.99、723.83、1667.00,均P < 0.01）,浓度越高各项指标值越高;时间与浓度之间交互作用有统计学意义（F值分别为826.79、21.602、44.48、313.09,均P < 0.01）。 结论 nutlin-3可能通过p53蛋白积累途径抑制人A375细胞的增殖和迁移,促进细胞周期停滞和细胞凋亡。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定

目的：针对单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法：用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载体,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。采用免疫组化和Western-blotting法鉴定重组质粒的表达情况,免疫BALB／c小鼠,进行CTL活性鉴定。结果：构建的重组质粒能在非洲绿猴肾细胞（COS-7细胞）内表达。该重组DNA疫苗免疫接种BALB／c小鼠后,其CTL活性增高。结论：成功构建HSV-2 pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒,并能在真核细胞内表达,该DNA疫苗对细胞免疫有明显的促进作用。     

Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响

【摘要】 目的 探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法 Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平,选取低表达 Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象,将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组,空白组不作处理,阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His（-）A,实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后,采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响;Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异,组间比较采用LSD-t检验。结果 SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平（0.037 ± 0.010）显著低于A375细胞（0.670 ± 0.150）,F = 46.62,P＜0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平（0.32 ± 0.04）显著高于阴性对照组（0.06 ± 0.02）和空白组（0.07 ± 0.02）,均P＜0.05。CCK8实验结果显示,不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义（F组间 = 1 077.36,F时间 = 4 903.04,均P＜0.05）,组别和时间之间有交互作用（F交互 = 205.20,P＜0.05）。Transwell实验显示,24 h后实验组高倍（× 200）视野下穿过小室的细胞数（18.67 ± 1.19）明显低于阴性对照组（87.89 ± 6.05）和空白组（86.78 ± 5.93）,均P＜0.05;划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。     

人乳头瘤病毒16 E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究

目的：利用穿膜肽人免疫缺陷病毒（HIV）-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒（HPV）16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位（第49～57位氦基酸）的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法：应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原（HLA）-A2．1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA—A2阳性健康者外周血单个核细胞（PBMC）中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果：经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95％以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性（P〈0．05）。结论：在HPV16E7HLA—A2．1限制性CTL表位（49～57）的N-末端加上HIV—Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。     

T淋巴细胞对小鼠接触变应性光皮炎的影响

目的 探讨T淋巴细胞在接触变应性光皮炎(CAPD)发病中的作用.方法 选用BALB/c纯系雌性小鼠建立氯丙嗪所致的CAPD模型,采用腹腔注射抗小鼠CD4、CD8单克隆抗体(mAb)方法,激发后48h测小鼠耳肿度,局部皮损行HE染色,计单一核细胞浸润数.ELISA法测小鼠血清白介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平.结果 腹腔注射抗CD4mAb组,IL-10水平与阴性对照组(仅光激发,不做光诱导)接近(P>0.05),而IFN-γ水平较阴性对照组高(P<0.05);与腹腔注射抗CD8mAb组相比,IL-10、IFN-γ水平均降低,但耳肿度及单一核细胞浸润数该两组接近,且该两组IL-10、IFN-γ水平均低于阳性对照组(P<0.05);联合注射抗CD4、CD8mAb组,IL-10、IFN-γ水平,耳肿度及单一核细胞浸润数均接近阴性对照组(P>0.05).结论 在氯丙嗪诱导的CAPD模型中,CD4⁺Th1和CD8⁺T淋巴细胞可通过上调IFN-γ水平正调节该反应;而CD4⁺Th2淋巴细胞可通过上调IL-10水平下调该反应.     

免疫球蛋白、白细胞介素及T细胞亚群检测对慢性荨麻疹患者的临床意义

目的观察免疫球蛋白、白细胞介素及T细胞亚群检测对慢性荨麻疹患者的临床意义。方法选取2017年12月至2019年11月某医院就诊的慢性荨麻疹患者64例为观察组,另选取同期健康体检者65例为对照组。采集两组研究对象空腹静脉血离心后检测血清免疫球蛋白、白细胞介素、T细胞亚群。结果观察组IgG、IgE均显著高于对照组(P<0.05);观察组IL-4、IL-10、IL-17、IL-23、IL-25均显著高于对照组(P<0.05),IL-35显著低于对照组(P<0.05)。两组研究对象中CD_4^+、CD3+均无显著性差异(P>0.05);观察组中CD8+显著高于对照组(P<0.05),CD_4^+/CD8+显著低于对照组(P<0.05)。结论免疫球蛋白、白细胞介素、T细胞亚群可能参与调控慢性荨麻疹的发生发展。     

干扰素诱导蛋白10对变应性接触性皮炎小鼠T细胞亚群的影响

目的 探讨干扰素诱导蛋白10(IP-10)对体外培养变应性接触性皮炎(ACD)小鼠T淋巴细胞亚群的影响,探讨ACD的发病机制.方法 建立ACD小鼠模型,分离纯化小鼠脾淋巴细胞,并和不同浓度的IP-10共同培养,应用流式细胞术检测与IP-10共同孵育的小鼠脾淋巴细胞中CD4+、CD8+和CD3+水平,以方差分析进行结果　分析.结果 IP-10各浓度组体外培养的ACD小鼠CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞的含量均高于对照组,但仅高浓度组与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.01).结论 IP-10可升高成熟T淋巴细胞比率,非特异性地增加Ⅳ型变态反应主要效应细胞CD4+T及CD8+T亚群的表达,扩大变应性接触性皮炎的免疫反应.     

茶多酚对CD8+T细胞杀伤白癜风患者黑素细胞的保护作用研究

目的 探讨茶多酚对CD8+T细胞杀伤白癜风患者黑素细胞的保护作用.方法 取白癜风患者白斑边缘处皮片组织,培养CD8+T淋巴细胞,细胞纯度用流式细胞仪进行鉴定,通过和黑素细胞共培养验证其针对黑素细胞的杀伤作用.将不同浓度茶多酚加入CD8+T细胞和黑素细胞共培养的体系,用流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡.结果 取白癜风皮损边缘表皮组织中成功培养CD8+T淋巴细胞,纯度达90％以上,高表达活化抗原CD137和CD69.CD8+T细胞和黑素细胞共培养后,可明显诱导黑素细胞凋亡.200 μg/ml和400 μg/ml浓度茶多酚处理均可以降低黑素细胞的凋亡率.结论 白癜风皮损边缘组织来源的CD8+T细胞对白癜风患者黑素细胞有明显杀伤作用.茶多酚对抗CD8+T细胞杀伤黑素细胞,从而对黑素细胞有一定的保护作用.     

Clinical significance of serum soluble T‐cell immunoglobulin and mucin domain 3 levels in systemic sclerosis: Association with disease severity

T‐cell immunoglobulin and mucin domain 3 (TIM‐3) has been thought to play a crucial role in the negative regulation of immune responses. Here, we examined the levels of serum soluble TIM‐3 (sTIM‐3) in patients with systemic sclerosis (SSc) and evaluated the results with respect to the clinical features of the disease. Patients with diffuse cutaneous SSc (dcSSc) had higher levels of sTIM‐3 than those with limited cutaneous SSc and healthy individuals. Serum sTIM‐3 levels were positively correlated with the severity of skin sclerosis in early phase dcSSc. Moreover, serum sTIM‐3 levels were increased more often in patients with renal crisis and cardiac involvement than in those with normal sTIM‐3 levels. These results suggest that serum sTIM‐3 levels may be increased in patients with early phase dcSSc and associated with cardiac involvement and renal crisis. Measurement of serum sTIM‐3 may be useful for risk stratification in the early stage of the disease.     

6味中药乙醇提取物对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶及其相关蛋白-1、-2 mRNA表达的影响

目的 研究墨旱莲(旱莲草)等6味用于治疗白癜风中药的乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白-1、-2(TRP-1、-2)mRNA表达的影响.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶及TRP-1、-2 mRNA的表达,并与阳性对照甲氧沙林(8-MOP)进行比较.结果 山慈姑(毛慈姑)、苦参、黑芝麻和墨旱莲的乙醇提取物显著上调细胞酪氨酸酶mRNA的表达(P<0.05);除苦参对TRP-2 mRNA有明显上调作用外(P<0.05),其他中药对TRP-1和TRP-2 mRNA的表达无明显作用(P>0.05).结论 山慈姑、苦参、黑芝麻和墨旱莲有上调酪氨酸酶mRNA的作用,苦参还可上调TRP-2 mRNA的表达.