一氧化氮在血管内皮生长因子诱导恶性黑素瘤细胞增殖机制中的研究

目的　观察血管内皮生长因子 (VEGF)过度表达对恶性黑素瘤细胞株A3 75增殖的影响 ,研究一氧化氮在其中所起的作用 ,以明确VEGF的作用机制。方法　VEGF165cDNA经电穿孔转染A3 75细胞 ,经逆转录聚合酶链反应(RT PCR)、免疫酶联吸附实验 (ELISA)检测转染前后A3 75细胞VEGF的mRNA和蛋白表达 ,应用细胞计数和MTT法比较转染组和对照组A3 75细胞增殖能力和活性 ,用硝酸还原酶法检测A3 75细胞转染前后培养上清中一氧化氮含量 ,并应用一氧化氮合酶抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)观察A3 75细胞转染VEGF165cDNA后的增殖情况。结果　转染VEGF165cDNA后 48h、72h和 96hA3 75细胞VEGFmRNA分别为 0 .48± 0 .0 5 ,1.2 7± 0 .0 7,1.2 4± 0 .0 1,较转染前的 0 .2 4± 0 .0 5明显增加 (P <0 .0 5 ) ;VEGF蛋白表达和一氧化氮水平也呈相同的变化趋势 (P <0 .0 5 ) ;转染VEGF165cDNA后A3 75细胞增殖能力较未转染组明显增强 (P <0 .0 5 ) ;L NAME可剂量依赖性地抑制转染后的A3 75细胞增殖活性 (P <0 .0 1)。结论　内源性的一氧化氮在VEGF促进A3 75细胞增殖中起重要作用。     

血管内皮生长因子过度表达促进恶性黑素瘤细胞增殖机制研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)过度表达促进恶性黑素瘤(MM)细胞增殖的机制。方法:通过电穿孔法将VEGF165cDNA转染至MM细胞系A375中,细胞计数法、MTT法和酶联免疫吸附实验(ELISA)法分别检测A375细胞体外增殖效应和其分泌的VEGF蛋白水平,化学比色法和蛋白印迹法(Western Blot)分别检测转染前后的A375细胞合成的诱导型、内皮型、神经型一氧化氮合酶(iNOS、eNOS、nNOS)的活性和蛋白表达。结果:转染VEGF165cDNA后,A375细胞明显增殖,其分泌的VEGF在转染后72 h、96 h明显增加(P<0.01),其合成的iNOS的活性和蛋白表达在转染后48 h、72 h、96 h明显升高(P≤0.05),但在转染前后未检测到eNOS和nNOS的活性及蛋白表达,一氧化氮合酶抑制剂L-NAME呈剂量依赖性地抑制转染72 h后的A375细胞增殖活性。结论:iNOS可能在VEGF过度表达促进MM细胞增殖中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子及其受体在尖锐湿疣组织中的表达

血管内皮生长因子(VEGF)有两种特异性受体,分别为含激酶插入区受体(KDR)和fms样酪氨酸激酶-1(Flt-1),主要分布在血管内皮细胞表面^[1]。研究表明在人类实体肿瘤中VEGF表达升高^[2]。本实验用RT-PCR方法检测VEGF、Flt-1、KDR的mRNA在尖锐湿疣组织的表达,探讨在尖锐湿疣发病机制的作用。     

VEGF-C及其受体在皮肤恶性黑素瘤中的表达及其临床意义

目的：研究皮肤恶性黑素瘤（MM）组织中血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）及其受体VEGFR-3（flt-4）的表达情况,分析其在肿瘤淋巴管的生长及淋巴转移中的作用。方法：采用免疫组化SP法分析29例MM石蜡标本中VEGF-C/flt-4蛋白的表达情况,并与20例色素痣石蜡标本中VEGF-C/flt-4蛋白表达情况相对比,统计分析其与临床病理特点之间的关系。结果：VEGF-C蛋白的阳性率为96.6%（28/29）,flt-4的阳性率为86.2%（25/29）,明显高于色素痣（P〈0.01）,与肿瘤的病理分级、临床分期和肿瘤的淋巴转移显著相关（P〈0.05）;VEGF-C和flt-4的阳性表达相一致。结论：VEGF-C/flt-4在皮肤恶性黑素瘤中的表达明显高于色素痣,与肿瘤的预后密切相关,在肿瘤淋巴转移中可能有重要作用。     

血管内皮生长因子及β-连环蛋白在皮肤黑素细胞肿瘤中的表达

目的：检测黑素细胞痣及不同生长阶段恶性黑素瘤(简称恶黑)中血管内皮生长因子(VEGF)及β-连环蛋白(catenin)的表达,以探寻它们之间的关系及其临床病理意义。方法：用免疫组化链霉亲和素一生物素法(简称SP法)检测50例黑素细胞痣及65例皮肤恶黑中的VEGF及β-连环蛋白的表达水平。结果：VEG17在所有黑素细胞痣中表达阴性,而在皮肤恶黑的初始阶段、侵袭阶段、侵袭转移阶段、转移阶段、未转移阶段阳性率分别为33．3％、73．1％、87．5%、89．3％及50．0%。β-连环蛋白在所有黑素细胞痣中表达率为66％,在皮肤恶黑的初始阶段、侵袭阶段、侵袭转移阶段、转移阶段、未转移阶段阳性率分别为93．3％、65．40%、37．5％、35．7％、77．3％。结论：VEGF表达随皮肤恶黑的侵袭与转移程度有增加趋势;β-连环蛋白表达随皮肤恶黑的侵袭与转移程度有下调趋势;皮肤恶黑中的VEGF与β-连环蛋白表达无相关关系;VEGF与β-连环蛋白的检测对预测皮肤恶黑的预后有重要意义。     

靶向调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18的miRNA预测及表达相关性分析

目的 探讨靶向调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18的miRNA.方法 用miRanda和TargetScan在线软件进行生物信息学分析,预测靶向调控CCL18基因的miRNA.根据人基因序列分析构建CCL18基因3'UTR双荧光素酶报告载体及miRNA载体,共转染293T细胞48 h后裂解细胞并检测荧光素酶活性.其中,CCL18基因3'UTR双荧光素酶报告载体分3'UTR突变型组、3'UTR野生型组和空白对照组,miRNA载体携带筛选的miRNA.应用实时荧光定量PCR检测14例黑素瘤新鲜组织及瘤旁正常皮肤组织(对照)中CCL18和筛选miRNA的表达,并对其相关性进行分析.结果 在线软件分析显示,CCL18-3'UTR具有miR-183、miR-128、miR-33a等miRNA的作用靶点.成功构建荧光素酶报告载体及miRNA载体,荧光素酶活性检测显示,miR-183、miR-128的3'UTR突变型组荧光素酶表达量(11.63±0.42;8.80±0.49)明显高于3'UTR野生型组(4.86±0.39;5.01±0.54)及空白对照组(2.41±0.13;2.39±0.05),差异有统计学意义(均P＜0.01),而miR-33a的3'UTR突变型组荧光素酶表达量与3'UTR野生型组差异无统计学意义(6.41±0.47比6.16±0.22,P＞0.05).实时荧光定量PCR显示,14例黑素瘤肿瘤组织中CCL18基因的相对表达量(3.52±1.68)高于对照组织,而miR-183(0.49±0.32)、miR-128(0.30±0.20)、miR-33a(0.46±0.40)的相对表达量均低于对照组织.CCL18表达水平与miR-128表达水平呈负相关(rs=-0.548,P＜0.05),而与miR-183、miR-33a表达水平无相关性(P＞0.05).结论 miR-128可能参与调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18.     

胰岛素样生长因子Ⅱ和Ki-67在先天性皮肤血管瘤及血管畸形中的表达

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在血管瘤增殖与退化中的作用。方法应用免疫组化方法检测52例血管瘤、27例血管畸形和5例正常皮肤标本中IGF-Ⅱ及细胞增殖核抗原Ki-67的表达情况。同时应用RT-PCR法检测9例血管瘤、5例血管畸形和5例正常皮肤标本中IGF-ⅡmRNA的表达情况。结果免疫组化结果显示血管瘤组的IGF-Ⅱ和Ki-67表达均高于血管畸形组及正常皮肤组(P<0.01)。血管瘤组中增生期亚组两标记指数均高于退化期亚组(P<0.01)。血管瘤组中IGF-Ⅱ与Ki- 67标记指数的相关系数为0.84,P<0.01。RT-PCR法检测到增殖期血管瘤中有明显IGF-ⅡmRNA的表达,而消退期血管瘤、血管畸形和正常皮肤中未见明显IGF-ⅡtuRNA的表达。结论IGF-Ⅱ与血管瘤内皮细胞的增殖相关。     

血管内皮生长因子、增殖细胞核抗原在尖锐湿疣中的表达

目的探讨尖锐湿疣(CA)组织中血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及相关性。方法采用免疫组化SP法检测32例CA组织和10例正常人皮肤组织中VEGF,PCNA的表达,并做相关性分析。结果 CA组织中VEGF,PCNA表达水平均明显高于正常人皮肤组织(P0.001)。CA组织中VEGF和PCNA的表达模式具有相同性:以基底层、棘层细胞表达最为显著,为二者共同的优势表达部位;二者的表达呈正相关关系。结论 CA组织中均存在VEGF和PCNA的过度表达,二者表达存在正相关性关系,表明表皮角质细胞过度增殖引起的局部缺氧是刺激VEGF过度表达的重要原因。     

血管内皮生长因子及其在皮肤病中的表达

血管内皮生长因子是一种内皮细胞特异性有丝分裂原，在生理和病理状态下均有表达。综合近几年国外文献，回顾了血管内皮生长因子及其受体的生物学特征，并简述了血管内皮生长因子在各种皮肤病中的表达和临床意义。     

血管内皮生长因子在扁平苔藓及银屑病皮损中的表达

目的探讨扁平苔藓及银屑病患者皮损表皮血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。方法用抗VEGF及CD34抗体行免疫组化染色,对扁平苔藓及银屑病皮损标本进行观察,计数表皮下方真皮的毛细血管密度。结果正常人表皮VEGF基本阴性,扁平苔藓及银屑病患者非病变部VEGF阴性,移行部表皮上层VEGF染色逐渐由弱到强,由间断到连续;病变部表皮VEGF阳性,以表皮上层细胞质的细颗粒状染色为主。CD34染色各部分真皮上层毛细血管密度为;扁平苔藓的非病变部(45.61±15.70)个/mm²、移行部(68.63±15.36)个/mm²、病变部(92.07±16.84)个/mm²;银屑病的非病变部(43.73±14.55)个/mm²、移行部(72.12±18.81)个/mm²、病变部(100.29±21.93)个/mm²,各病种三个部位之间比较差异均有统计学意义。结论扁平苔藓及银屑病皮损表皮分泌VEGF,并与真皮毛细血管增生扩张密切相关。     

The Ki-67 antigen in primary human melanomas —its relationship to mitotic rate and tumor thickness and its stability

Summary We investigated whether two parameters of proliferative activity — mitotic rate and Ki-67 positive cells — are interchangeable. The mitotic rate was assessed on paraffin-embedded sections, Ki-67 positive cells were immunohistologically determined in frozen tissue. A poor correlation (correlation coefficient r=0.57) was found between both parameters. The proliferative activity was often not homogeneously distributed in the tested tumors. However, this is a major reason for the observed difference only in thin melanomas (<1.5 mm) as seen by comparison of tumors with homogeneous and inhomogeneous proliferative activity. We assume that arrest of cells in different stages of the cell cycle — variable from melanoma to melanoma — is the major reason for the observed discrepancy between mitotic rate and Ki-67 positive cells in tumors of 1.5 mm and thicker. The mean number of Ki-67 positive cells increased with tumor thickness. The stability of the Ki-67 antigen towards freezing, thawing, and formalin was studied.     

Circulating vascular endothelial growth factor in cutaneous malignant melanoma

BACKGROUND: Angiogenesis has been reported as a parameter of potential prognostic value in solid tumours, as it may facilitate tumour growth and metastasis. One of the most important growth factors involved in angiogenesis is vascular endothelial growth factor (VEGF). OBJECTIVES: To determine the predictive value of circulating VEGF levels in a cohort of patients with melanoma. METHODS: In a prospective cohort study, 324 patients with cutaneous melanoma at different clinical stages were investigated over 2 years (2002-04). VEGF was measured in plasma using enzyme-linked immunosorbent assay. Two hundred and eight patients were able to be followed up for progression of their disease and for blood sample collection (mean +/- SD follow-up 13.4 +/- 0.8 months). Data were compared with the extent of the disease and the clinical course. RESULTS: A significant increase in plasma VEGF levels was found in patients with melanoma compared with healthy controls, with statistically significant differences between patients in stages I, II and III vs. those in stage IV, but not between patients in stages I, II and III. When considering the 237 patients in stages I and II, no statistical correlation was found between plasma VEGF levels and tumour thickness. Baseline plasma VEGF levels were not significantly higher in patients who relapsed compared with nonprogressing patients. Among the 35 patients (two stage I, eight stage II and 25 stage III) who experienced a progression during follow-up, an increase in plasma VEGF level to > 100 pg mL(-1) was found in 20 (sensitivity 57.1%), while 38 of the 173 remaining nonprogressing patients demonstrated an increase in VEGF level, indicating a specificity of 78%. In addition, an increase in plasma VEGF level was found in 58 patients during follow-up, of whom 20 showed evidence of progression, indicating a positive predictive value of 34.5%. However, among the 150 remaining patients who did not demonstrate any increase in plasma VEGF level during follow-up, only 15 experienced a progression, indicating a negative predictive value of 90%. CONCLUSIONS: Our data confirm that blood VEGF levels are significantly increased in patients with melanoma and, more interestingly, that the absence of plasma VEGF level increase during follow-up appears to be associated with remission.     

氨基酮戊酸-光动力疗法对尖锐湿疣组织中血管内皮生长因子和增殖细胞核抗原表达的影响

【摘要】 目的 研究氨基酮戊酸-光动力疗法（ALA-PDT）对尖锐湿疣组织中血管内皮生长因子（VEGF）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法 2016年10月至2017年9月在郑州大学第一附属医院皮肤科门诊收集56例尖锐湿疣患者ALA-PDT治疗前及第1次治疗后1周皮损各1份,采用免疫组化SP法检测尖锐湿疣组织角质形成细胞中VEGF及PCNA的表达情况。分别采用χ2检验和秩和检验分析治疗前后VEGF与PCNA蛋白表达率和表达强度的差异,采用Spearman分析检验VEGF及PCNA蛋白表达的相关性。结果 ALA-PDT治疗前尖锐湿疣组织角质形成细胞中VEGF和PCNA表达率分别为71.43%（40/56）、73.21%（41/56）,治疗后分别为44.64%（25/56）、41.07%（23/46）。治疗前后VEGF和PCNA的表达率（χ2值分别为8.25、11.81, 均P < 0.05）及表达强度（H值分别为11.29、12.22,均P < 0.05 ）差异均有统计学意义。ALA-PDT治疗前后尖锐湿疣组织VEGF与PCNA表达呈正相关（rs值分别为0.202、0.273,均P < 0.05）。结论 ALA-PDT治疗后尖锐湿疣组织中VEGF和PCNA表达下降,这可能是其治疗尖锐湿疣的作用机制之一。     

Notch信号相关受体/配体在皮肤恶性黑素瘤中的表达

目的 检测Notch信号通路中Notch1、Notch4、Jagged1以及Dll4在皮肤恶性黑素瘤组织中的表达,初步探讨Notch信号通路在黑素瘤发病机制中的作用.方法 免疫组化SP法检测40例恶性黑素瘤及15例色素痣石蜡标本中Noteh1、Notch4、Jagged1以及Dll4的表达模式和表达强度.采用SPSS21.0软件进行卡方检验及Spearman秩相关分析.结果 在40例黑素瘤组织(31例阳性表达)及15例色素痣组织(3例阳性表达)Notch1的表达率差异有统计学意义(x2=15.281,P=0.000),原位(18例)及侵袭性黑素瘤(22例)间Notch1表达强度差异无统计学意义(x2=0.631,P=0.427).Notch4、Jagged1以及Dll4的表达率在恶性黑素瘤与色素痣之间差异均有统计学意义(均P＜0.05),三者表达强度在原位与侵袭性黑素瘤之间差异亦均有统计学意义(P＜0.05).在黑素瘤组织中,Notch1与Jagged1的表达呈正相关(rs=0.350,P=0.027),与Dll4的表达亦呈正相关(rs=0.562,P=0.000),但是Jagged1与Dll4的表达呈负相关(rs=-0.734,P=0.000).结论 Notch信号通路异常可能是黑素瘤的发病机制之一,但具体作用机制有待进一步研究.     

Sprouty 2在皮肤鳞状细胞癌中低表达并与E-cadherin、Ki-67的表达相关

目的检测皮肤鳞状细胞癌(CSCC)组织中Sprouty 2、E-cadherin(E-cad)和Ki-67的表达及定位,并分析Sprouty 2与E-cad、Ki-67的相关性。方法收集2018年3—7月南方医科大学皮肤病医院15例头面部CSCC患者的癌组织(鳞癌组)、癌旁组织(癌旁组)和患者正常皮肤组织(病例对照组)及10例健康对照者皮肤组织(健康对照组),采用qRT-PCR、Western blot、免疫组化检测各组中Sprouty 2、E-cad和Ki-67的表达及定位,分析上述指标在不同组间的表达差异及其相关性。结果免疫组化显示,Sprouty 2表达于上述各组表皮全层的角质形成细胞胞核和胞质,E-cad表达于各组表皮全层角质形成细胞胞膜,Ki-67定位于各组表皮基底层和棘层下部角质形成细胞胞核。qRT-PCR、Western blot显示,鳞癌组中Sprouty 2 mRNA(0.03±0.03)和蛋白(0.68±0.47)的表达低于癌旁组(分别为0.28±0.36、1.40±0.72)、病例对照组(分别为0.92±0.60、1.59±0.86)和健康对照组(分别为1.12±0.56、1.71±1.28);E-cad蛋白表达亦低于其他3组,但Ki-67蛋白表达高于其他3组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。相关性分析显示,Sprouty 2与E-cad呈正相关(r=0.59,P=0.021),与Ki-67呈负相关(r=-0.59,P=0.022)。结论Sprouty 2可能与CSCC发生发展存在相关性,且与E-cad可能在抑制肿瘤发生发展中起协同作用。     

STAT3和VEGF在皮肤黑素瘤中的作用及研究进展

信号转导和转录活化因子3是信号转导和转录活化因子家族的重要成员,参与调控相关靶基因表达,是多种致癌途径的焦点,其持续性激活能导致肿瘤的发生.信号转导和转录活化因子通过调节细胞凋亡抑制因子(Bc1-xL、Bc1-2、生存素)、细胞周期调节因子(细胞周期调节因子D1、细胞周期调节因子D2、原癌基因)以及血管生成诱导因子(血管内皮生长因子、环氧化酶-2、基质金属蛋白-9)等相关调控因子,在细胞增殖、存活、凋亡、分化及转移等过程中起作用.血管内皮生长因子是目前已知最重要的促血管生成因子之一,对肿瘤血管基质形成及肿瘤生物学行为均有重要影响,可作为肿瘤代谢及转移的标志.主要就信号转导和转录活化因子3、血管内皮生长因子及其相关调控基因在皮肤黑素瘤中发生、发展中所起的作用及其可能的机制做进一步阐述,以信号转导和转录活化因子3、血管内皮生长因子为靶点的联合治疗有望为皮肤黑素瘤的治疗提供新的思路.     

生存素在恶性黑素瘤中的表达及与VEGF和PCNA的关系

目的 探讨人恶性黑素瘤组织中凋亡抑制蛋白生存素的表达,及其与恶性黑素瘤临床特征、血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系.方法 免疫组化方法检测36例人恶性黑素瘤和30例色素痣组织中生存素、VEGF和PCNA蛋白表达.结果 ①生存素在恶性黑素瘤和色素痣中均有表达,但在恶性黑素瘤中表达明显高于色素痣(P<0.01).②在恶性黑素瘤组织中有30例表达VEGF(阳性率83.3%),36例表达PCNA(阳性率100%),而色素痣组织不表达VEGF和PCNA.③生存素的阳性表达与恶性黑素瘤患者的发病年龄、性别、淋巴结转移均无相关性(P>0.05),但其表达与VEGF和PCNA的表达密切相关(P<0.01).结论 生存素可能参与恶性黑素瘤的增殖和与VEGF相关的肿瘤血管生成.