肺泡上皮细胞间质转化及其信号转导途径在肺纤维化中的作用

目的以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,探讨EMT过程及其信号转导途径在肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA表达,Western blot检测上皮及间质细胞的标志物以及信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化。结果 TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达下调（P〈0.05）,间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调（P〈0.05）;信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1上调（P〈0.05）,snail2弱表达（P〉0.05）;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snail1信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。     

EGFR在TGFβ1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在转分化因子β1(TGFβ1)体外诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,以TGFβ1刺激,倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;收集不同时段的细胞,应用RT-PCR检测TGFβ1干预前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化;Western blot观察E-cad、α-SMA和信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果倒置相差显微镜观察到TGFβ1刺激后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌成纤维细胞;TGFβ1刺激A549细胞能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调;α-SMA mRNA和蛋白表达上调;磷酸化EGFR(p-EGFR)表达上调。结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转分化,其机制与EGFR信号通路的活化相关。抑制EGFR的活化可能为临床防治肺纤维化提供新的途径。     

p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转化中的意义

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通道在转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的意义,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制.方法 使用TGF-β1诱导A549细胞EMT,分别在蛋白水平（使用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125）和RNA水平（RNA干扰）抑制p38 MAPK和JNK信号通道,检测抑制后A549细胞的p38 MAPK和JNK的蛋白和mRNA,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和上皮细胞表型蛋白包括E-钙黏素、紧密连接蛋白-1、水通道蛋白-5的表达.结果 TGF-β1可以诱导A549细胞EMT,表现为间质细胞表型蛋白表达的增加和上皮细胞表型蛋白表达的减少,这一过程p38 MAPK和JNK通道表达也增加,无论蛋白水平抑制或基因沉默p38 MAPK和JNK均可减轻A549细胞的EMT.结论 p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程中起重要作用.     

STAT3加重TGF-β1诱导的肝癌细胞上皮-间质转化的发生

目的探讨IL-6/JAK/STAT3和Smad3/TGF-β1信号通路在肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)发生过程中的作用。方法分别予TGF-β1、IL-6、AG490刺激人肝癌细胞株(HepG2、Bel7402、MHCC97H、HCCLM3)后,qPCR检测Snail、STAT3的mRNA表达水平,蛋白质免疫检测p-STAT3/STAT3、p-Smad3/Smad3、TGF-β1以及EMT相关分子标志物Snail、E-Cadherin、Vimentin的蛋白表达水平。结果 TGF-β1可以诱导HepG2细胞EMT的发生,下调E-Cadherin的表达,上调Vimentin、Snai的表达。IL-6在肝癌细胞中通过刺激STAT3,激活Smad3/TGF-β1通路,进而上调EMT相关分子标志物Snail、Vimentin的表达。AG490(一种JAK2的特异性抑制剂)抑制p-STAT3/STAT3、p-Smad3及EMT相关分子标志物Snail的表达。结论STAT3在TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT发生过程中作为一个正向调控因子,IL6/JAK/STAT3和Snail/Smad3/TGF-β1信号通路协同促进肝癌细胞EMT的发生。     

利拉鲁肽对转化生长因子β1诱导上皮间质转化的作用及其机制

目的研究利拉鲁肽(Li)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质转化(EMT)的作用及其可能机制。方法本研究为实验研究。培养人Ⅱ型肺泡上皮(A549)细胞, 药物处理分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+Li(125 nmol/L)组和Li组(125 nmol/L)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;免疫荧光观察细胞内紧密连接蛋白1(ZO-1)、Vimentin表达情况;Western blot检测各组ZO-1、Vimentin和Fibronectin表达及p-p38、p38、p-Erk、Erk蛋白含量。结果 Transwell实验结果显示, Li可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞迁移;细胞形态学结果显示, Li可以减轻TGF-β1诱导的A549细胞伸长, 呈间充质化细胞的"纺锤样"形态;免疫荧光双标结果显示, Li抑制TGF-β1诱导的A549细胞ZO-1荧光强度下调以及Vimentin荧光强度的上调;Western blot结果显示, Li可以减少TGF-β1诱导的A549细胞表型转化标志物ZO-1的下调, 显著抑制Vim...     

沙利度胺对肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的作用

目的探讨沙利度胺对A549上皮-间质转分化的作用,阐明其抗肺纤维化的机理。方法 A549细胞分为3组,A:对照组;B:TGF-β1+DMSO组;C:TGF-β1+沙利度胺组。通过免疫印迹法检测A549细胞磷酸化p38 MAPK和JNK的蛋白,以及间质表型蛋白和上皮表型蛋白的表达;实时荧光定量PCR方法检测A549细胞p38 MAPK和JNK mRNA的表达。结果沙利度胺显著抑制(P0.05)TGF-β1诱导的A549细胞间质表型蛋白表达增加,可阻止(P0.05)A549细胞上皮表型蛋白表达的减少,显著减少活性MAPK蛋白及mRNA的表达(P0.05)。结论沙利度胺可能通过p38MAPK和JNK信号通道,从而抑制肺泡上皮细胞的上皮-间质转分化过程而发挥抗纤维化作用。     

Nr4a1拮抗剂抑制肺癌细胞的上皮-间质转化的作用机制

目的观察Nr4a1拮抗剂在αVβ6-ERK-ETS1通路中抑制肺癌细胞上皮-间质转化的作用。方法培养传代肺癌A549细胞系,分为实验组及对照组,两组均采用生长因子诱导上皮-间质转化过程,实验组采用Nr4a1拮抗剂阻断αVβ6-ERK-ETS1通路,对照组不采用拮抗剂,采用流式细胞术及Western印迹检测信号通路中相关蛋白表达水平。结果形态学上,实验组组细胞呈梭形或类似于成纤维细胞的形态,而对照组部分细胞呈圆形或卵圆形。Western印迹及流式细胞检测均发现对照组细胞上皮细胞标志物E-cadherin、γ-catenin及αvβ6表达均较处理前显著降低,而间质细胞标记物Nβ-cateinin、Vimentin表达则有不同程度升高(P<0.05)。结论 Nr4a1拮抗剂能够通过αVβ6-ERK-ETS1通路抑制肺癌细胞的上皮-间质转化。     

低密度脂蛋白诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用机制研究

目的探讨低密度脂蛋白(LDL)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化的影响及其作用机制。方法将体外培养的NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、洛伐他汀(Lov,1μmol/L)组、LDL(250 mg/L)刺激组、LDL(250mg/L)+Lov(1μmol/L)组。应用倒置显微镜观察细胞形态学改变;RT-PCR检测NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3和整合素链接酶(ILK)mRNA表达;West-ern blot检测α-SMA、E-cadherin及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达;ELISA检测上清液TGF-β1。结果加入LDL培养24 h后,NRK-52E细胞由立方形或多角形变为长梭形,α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3和ILK mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01);α-SMA和p-Smad2/3蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),E-cadherin蛋白表达量显著低于对照组(P0.01);细胞上清液TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01)。LDL+Lov组与LDL组比较,NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、ILK mRNA的表达及α-SMA、p-Smad2/3的蛋白表达均明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显增强。结论LDL可诱导肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是激活TGF-β1/Smads/ILK信号通路,而Lov能部分阻断LDL诱导的小管上皮细胞转分化。     

miR-365抑制TGF-β诱导的人肺癌细胞上皮-间质转化

目的研究miR-365在TGF-β诱导的人肺癌细胞A549上皮-间质转化过程中的作用。方法 TGF-β刺激A549细胞,观察细胞形态变化, RT-PCR检测细胞内miR-365的表达;通过感染慢病毒,使A549细胞中miR-365过表达,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin的表达。结果 TGF-β刺激A549细胞后,细胞形态发生改变,呈长纤维状,胞内miR-365表达上升;过表达miR-365,E-cadherin表达升高。结论 miR-365可抑制TGF-β诱导的人肺癌细胞上皮-间质转化。     

胃泌素对胃癌细胞EMT和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的探讨高表达胃泌素(gastrin)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法用gastrin过表达质粒pcDNA3-gastrin及空载体pcDNA3.1转染胃癌细胞SGC-7901、MKN45,48 h后收集细胞蛋白,Western印迹检测鉴定gastrin表达,检测EMT相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Snail及wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路相关基因wnt3α、β-catenin、c-myc的蛋白表达变化。结果在SGC-7901、MKN45细胞中成功过表达gastrin。与pcDNA3.1空载体转染组相比,pcDNA3.1-gastrin转染SGC-7901、MKN45细胞中上皮标志蛋白E-cadherin表达下调,间质标志蛋白N-cadherin、Snail表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);同时Wnt/β-catenin通路蛋白相关蛋白wnt3α、β-catenin及其下游基因c-myc的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达gastrin能够激活Wnt/β-catenin信号通路和促进胃癌细胞SGC-7901和MKN45发生EMT。     

桂皮醛通过TGF-beta信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移研究

目的研究桂皮醛通过转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移的机制。方法用不同浓度桂皮醛处理人结肠癌SW480细胞,观察SW480细胞增殖活性、细胞凋亡、侵袭、转移能力及凋亡、上皮间质转化(EMT)、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达情况;用10 ng/m L的TGF-β1处理诱导SW480细胞EMT,并用80 mg/L的桂皮醇进行干预,观察SW480细胞中EMT、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达。结果桂皮醛处理后SW480细胞Bcl-2/Bax比率、细胞侵袭率、划痕愈合率、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TGF-β、Smad3、Snail蛋白表达降低,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0. 05);桂皮醛干预后能够缓解TGF-β1处理后诱导的Vimentin、N-cadherin、MMP-9、Smad3、Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论桂皮醛可能通过抑制人结肠癌细胞系SW480中TGF-beta/Smad3信号途径来抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制EMT,降低其侵袭转移能力。     

ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用

目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的A549细胞上皮一间质转化（EMT）的抑制作用.方法 将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组（用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT）、Y-27632组（对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预）.采用MTr法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（ot-SMA）表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子（SRF）、心肌相关转录因子（MATF-A）表达.结果 与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调（P均＜0.05）;Y-27632组能显著抑制上述变化（P均＜0.05）.结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力.     

基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗特发性肺纤维化的生物学机制

目的 运用网络药理学研究方法预测补阳还五汤(BYHWT)治疗特发性肺纤维化(IPF)的潜在靶点及可能机制,并通过转化生长因子(TGF)-β1诱导肺泡上皮细胞A549的上皮间质转化(EMT)进行体外实验验证。方法 根据网络药理学的原理获得BYHWT治疗IPF的潜在作用靶点,利用Cytoscape软件绘图、STRING网络平台、Metascape数据库进行蛋白互作(PPI)网络、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,以TGF-β1诱导肺泡上皮细胞为体外模型,对网络药理学预测的信号通路进行实验验证。结果 网络药理学预测BYHWT治疗IPF的潜在作用靶点为168个,KEGG富集分析相关信号通路有磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、核转录因子(NF)-κB信号通路及FOXO信号通路等。细胞实验结果证明,较模型组相比,BYHWT可显著下调p-Akt1/2/3、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)的蛋白水平,并在RNA水平显著下调EMT相关标记蛋白Ⅰ型胶原(Coll)A1、锌指蛋白(Snail)和波形蛋白(Vimentin)的基因表达(P<...     

过表达Krüppel样因子9对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响及机制

目的:探讨Krüppel样因子9(KLF9)对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡和炎症的影响及机制。方法:A549细胞随机分为四组:NC组、LPS组、LPS+pcDNA-con组和LPS+pcDNA-KLF9组。qRT-PCR检测KLF9、IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测KLF9、CyclinD1、Bax、Bcl-2、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达。结果:与NC组相比,LPS组的细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著增加,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著降低,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著升高;与LPS+pcDNA-con组相比,LPS+pcDNA-KLF9组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著升高,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著降低(P<0.05)。过表达KLF9可抑制LPS诱导的A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路的激活。结论:过表达KLF9可减轻脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤,这可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Smad7在人慢性髓细胞白血病细胞株K562中的表达

目的：观察人慢性髓细胞白血病细胞株K562中Smad7基因和蛋白的表达；探讨转化生长因子(TGF—β1）mad7的诱导作用。方法：采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白印迹法方法检测K562细胞与TGF-1共育前后Smad7 mRNA蛋白表达水平。结果：K562细胞中具有Smad7的表达，且可由外源性TGF-β1短暂诱导，Smad7的表达及变化在转录及翻译水平上基本保持一致。结论：Smad7参与K562细胞TGF-β信号的传导，Smad7与TGF-β1之间存在自身调节负反馈通路。     

基因芯片研究甘草酸对大鼠肝星状细胞转化生长因子-β信号通路的影响

目的应用基因芯片技术探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞（HSC）转化生长因子（TGF）-β信号转导通路相关基因表达的作用。方法体外分离、培养大鼠HSC，分为对照组、TGF-β1组（5ng／ml）、TGF-β1（5ng／ml）＋甘草酸（100μmol／L）组，10h后分别收集细胞抽提总RNA。应用针对于TGF-β/BMP信号转导通路的GEArray^TM Q基因芯片技术，筛选出甘草酸作用后HSC中TGF-β信号通路表达发生明显改变的相关基因。结果经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后下调的基因有16项，占16．7％（如Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7，a1Ⅲ型前胶原，a2 Ⅰ型前胶原，纤溶酶原激活物抑制剂1）；经TGF-β1作用后下调，再经甘草酸作用后上调的基因有5项，占5．2％（如骨成型蛋白7，胰岛素生长因子结合蛋白3等）；经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后上调更显著的基因有2项，占2．1％（转化生长因子2型受体，转化生长因子受体3）。并用RT-PCR法验证了部分基因（Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7）mRNA的表达与基因芯片中变化趋势的一致性。结论甘草酸可能通过干预大鼠HSC中TGF-β信号通路，减少胶原合成，促进细胞外基质降解而发挥抗纤维化的分子机制。     

氧化苦参碱干预TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞氧化应激反应和炎症因子表达作用研究

目的 本研究旨在探讨氧化苦参碱(Oxymatnine,Oxy)对转化生长因子p1(TGF-β1)诱导肺泡上皮细胞氧化应激反应和炎症因子表达的干预作用.方法 0.25、0.5、1 g/L氧化苦参碱预处理A549细胞30 min后,再给与5μtg/L TGF-β1共孵育培养48 h,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化,试剂盒检测髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测炎性因子肿瘤坏死因子a(TNF-a)和IL-6的表达.结果 氧化苦参碱能有效干预TGF-p1诱导的A549细胞iNOS表达,降低MPO活性、MDA含量以及TNF-α、IL-6的水平.结论 氧化苦参碱能有效抑制TGF-β1诱导的A549细胞氧化应激反应和炎症因子表达,氧化苦参碱可以作为抗肺纤维化治疗的候选药物.     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

p15与c-Myc在TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大中的表达及与TGF/Smad信号通路的关系

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号通路及其目的蛋白p15的表达。方法建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型。PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大。实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因β肌球蛋白重链(β-MHC)的表达。Smad2 siRNA干扰Smad信号通路表达并检测其相关蛋白表达。Western blot检测心肌细胞p-Smad2、Smad2、Smad2/3、p15及c-Myc蛋白表达。结果 TGF-β1可诱导体外培养的心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组(P0.01)。PI染色标记细胞双链RNA法检测发现,TGF-β1组RNA含量明显增高(P0.01),与对照组相比,TGF-β1可明显上调p-Smad2、Smad2、Smad2/3及Smad通路目的蛋白p15、c-Myc的表达(P0.01)。给予Smad2 siRNA特异性干扰后,p15表达较TGF-β1组减少(P0.01)。结论 TGF-β1可能通过Smad蛋白通路诱导心肌细胞肥大形成,此过程中相关目的蛋白p15表达增加。     

KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用

目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。