系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

目的　探讨CD28在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其意义。方法　应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人PBMC中CD28mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者CD28的阳性表达率为20.6%,明显低于正常人对照组(70.0%),差异非常显著(P＜0.001);活动期SLE组CD28的平均表达水平(0.19±0.21)亦明显低于正常对照组(0.43±0.11),差异显著(P＜0.05)。结论　CD28的异常表达可能在SLE发病机制中起作用,CD28mRNA的低水平表达可能与外周血CD28＋T细胞凋亡增加或迁移到炎症部位有关。     

性慢乙型肝炎外周血单个核细胞白细胞介素—18mRNA的表达及动态观察

我们对慢性乙型病毒性肝炎患者活动期及缓解期进行外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)白细胞介素 (ＩＬ) 18诱生的研究 ,以探讨ＩＬ 18在乙型病毒性肝炎中的作用。一、材料与方法1 研究对象 :随机选取我科住院的乙型肝炎病毒感染者 33例 ,并对其中 30例进行动态观察。我科门诊ＨＢｓＡｇ阳性无症状携带者 15例。所有病例的诊断均符合 1995年第五次全国传染病与寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准 ,并排除合并其他型病毒性肝炎。 33例慢性肝炎患者均有肝组织病理诊断 ,肝组织炎症程度分为 4级 ,标准同上。以 10例健康献血员为正常对照。2 .标…     

外周血单个核细胞巨噬细胞移动抑制因子表达及其与狼疮活动

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA表达及血MIF水平的变化,并分析其与SLE疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。方法 采用逆转录-PCR技术及ELISA方法分别测定34例活动期和21例静止期SLE患者的PBMC中MIF mRNA表达及血清MIF浓度,并以18例正常人作对照,观察SLE患者血MIF的改变及其与疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。结果 SLE患者PBMC中MIF mRNA表达及血MIF水平较正常人显著升高(P<0.01),且活动期患者增高更为明显,显著高于静止期患者(P<0.01)。SLE患者血MIF水平及PBMC中MIF mRNA表达与疾病活动指数、抗ds-DNA抗体、血补体C3、C4及IgG水平明显相关,但与抗核抗体无关。结论 SLE患者血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映SLE患者疾病的活动性。     

支气管哮喘患者外周血单个核细胞凋亡的检测

支气管哮喘是由多种炎性细胞和炎性介质参与的慢性气道炎症 ,其中单核 巨噬细胞在哮喘发病中起重要作用。本研究意在观察哮喘患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)的凋亡及糖皮质激素对其的影响。一、对象与方法1.对象 :(1)哮喘组 :2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 0年 12月在我院呼吸科就诊的中、重度哮喘急性发作期患者 30例 ,男 17例 ,女 13例 ,年龄 (38± 11)岁 ,诊断符合 1997年中华医学会呼吸病学分会制定的支气管哮喘防治指南 (支气管哮喘的定义、诊断、治疗、疗效判断标准及教育和管理方案 )。所有患者对包括屋尘螨在内一项以上过敏原测定结果阳…     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞端粒酶活性的研究

目的 了解乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）端粒酶活性的表达情况。方法 通过扩增端粒重复序列（TRAP）及光度酶联免疫法，分别检测健康人及各类乙型肝炎患者PBMC的端粒酶水平。结果 各组患者PBMC在植物血凝素（PHA）刺激前均有端粒酶活性的表达，以急性型肝炎组最高，重型肝炎组最低，二者差别具有显著性（P〈0．001）。PHA刺激后与刺激前比较各组端粒酶活性均有显著性升高（P〈0．001），刺激后的端粒酶水平以重型肝炎组为最低，与其他三组比较差别具有显著性（P〈0．05）。慢性重型乙型肝炎经胸腺五肽（TP5）治疗后端粒酶活性显著增高（P〈0．05）。结论 HBV急性感染期PBMC的端粒酶水平升高；慢性感染期PBMC的端粒酶水平在体内被抑制。TP5具有免疫调节作用，能使过低的端粒酶水平趋向于正常。     

冠心病患者外周血单个核细胞激活诱导凋亡的检测

激活诱导细胞死亡(activation-induced cell death,AICD)也称细胞凋亡,外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在抗原、丝裂原等刺激下可引起AICD.为了探讨冠心病患者PBMC的AICD水平,我们应用丝裂原PHA-P分别与正常人及冠心病患者PBMC体外培养,通过流式细胞仪检测PBMC凋亡率,了解冠心病免疫细胞变化,探讨冠心病发病的免疫机制.     

老年糖尿病患者外周血单个核细胞胰岛素受体研究

外周组织对胰岛素呈抵抗状态是 2型糖尿病发病的重要原因 ,胰岛素受体异常是常见的原因。本文对 2型糖尿病患者外周血单个核细胞胰岛素受体进行研究 ,旨在探讨胰岛素受体在 2型糖尿病老年患者的变化。1　临床材料1 1　对象　糖尿病组 42例 ,符合WHO (1999)糖尿病诊断标准 ,临床分型符合 2型糖尿病者 ,病程 1～ 3 6年 ,均为口服降糖药治疗。其中老年组 2 3例 ,年龄 60～ 87岁 (平均 71 3± 14 6岁 ) ;体重指数 (BMI) 18 4～ 2 8 6(平均 2 3 4± 2 2 8) ;非老年组 19例 ,年龄 3 0～ 5 9岁 (平均 45 3± 11 6岁 ) ,BMI2 0 0～ 3 0 2 …     

外周血单个核细胞中HBV,HCV重叠感染的研究

近年来有较多资料表明乙型肝炎病毒(HBv)和丙型肝炎病毒(H改)能存在于外周血单个核细胞(PBMC)中。HBv不但能存在于该细胞中,而且能在其中复制和表达。HCV可以感染PBMC,但是否能复制还有争议。至于HBv、HCv重叠感染PBMC目前作者尚未见报道,本研究旨在了解PBMc中HBV、Hcv重叠感染的可能性,以及细胞中病毒的检出与血清学标志的关系‘材料与方法 一、病例 70例慢性病毒性肝炎患者选白浙江医科大学附属第一医院和杭州铁路医院传染科住院患者,检测其血清和PBMC中的刊3v、HCv指标。为排除血清污染,同时检测PBMC最后一次洗液。另设…     

原位杂交法检测外周血单个核细胞中HCV RNA

目的比较慢性丙型肝炎患者用干扰素治疗前以及治疗后３个月ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。方法应用地高辛素标记ＨＣＶＲＮＡ正链及负链探针，建立原位杂交方法检测外周血单个核细胞（ＰＭＢＣ）中的ＨＣＶＲＮＡ。结果治疗前１９例患者正链ＨＣＶＲＮＡ阳性，８例负链ＨＣＶＲＮＡ阳性，用正链探针杂交在较多的细胞中出现杂交信号，负链探针杂交仅在少数细胞中出现杂交信号，ＨＣＶＲＮＡ在ＰＢＭＣ胞浆中呈均质性分布。用干扰素治疗结束后３个月２０例患者中９例ＨＣＶＲＮＡ转阴性，近期治愈率４５％。结论原位杂交技术的敏感性及特异性较高，且重复性较好，是研究ＨＣＶＲＮＡ在组织中定位分布和病毒复制场所一种切实可行的方法     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞丙型肝炎病毒感染研究

目的 以分子生物学、免疫学有电镜等技术对慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣｓ进行综合检测,以证实其受ＨＣＶ感染,并试图在电镜下发现和证实感染细胞内ＨＣＶ颗粒。方法 对逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学等技术分别检测患者ＰＢＭＣｓ内的ＨＣＶ ＲＮＡ和ＨＣＶＡｇ,以常规和免疫电镜技术观察研究感染细胞内ＨＣＶ的形态、定位和超微结构。结果 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率为７７．２％（１７／２２）,ＨＣＶＡｇ     

肺结核患者外周血单个核细胞中miRNA-150的表达及意义

目的分析外周血单个核细胞(PBMC)中miRNA-150在肺结核患者(TB)及健康人群(HD)中的表达差异,探讨miRNA-150诊断活动性肺结核的应用价值。方法选择41例TB患者为实验组(其中19例为涂阳患者,22例为凃阴患者),同时选择35例HD为对照组。采集外周抗凝血利用密度梯度离心法分离PBMC,提取总RNA,利用Taq Man探针q PCR技术检测miRNA-150在各组人群中的相对表达量,以RNU6B作为内参基因。结果 miRNA-150在TB患者外周血PBMC中表达量为(8.74±1.36),显著高于健康对照组(3.544±0.59),差异有统计学意义(P0.05);应用ROC曲线分析表明,miRNA-150诊断TB的敏感性为61%,特异性为82%。痰涂片阳性TB患者中miRNA-150表达水平显著高于痰涂片阴性患者(12.30±2.43Vs 5.66±1.12),差异有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-150在TB患者PBMC中表达水平升高,尤其是涂阳患者,可以作为诊断TB的分子标识。     

特发性肺间质纤维化病人外周血单核细胞中DcR3基因表达的意义

目的　探讨外周血单核细胞 (PBMC)中DcR3基因表达水平与特发性肺间质纤维化 (IPF)的关系。方法　 1 4名IPF病人和 1 0名健康对照各取 5ml静脉血 ,肝素抗凝 ,密度梯度离心法分离PBMC ,异硫氰酸胍 酚 /氯仿法提取PBMC总RNA ,用半定量RT PCR法检测PBMC中DcR3基因的相对表达水平 ,并用t检验进行比较。结果　IPF病人组PBMC中DcR3基因的相对表达水平为 0 375± 0 0 88,与正常对照组 (0 2 59±0 0 84)相比有明显差异 (P <0 0 5)。结论　IPF病人PBMC中DcR3基因的表达水平增高。     

白细胞介素-15对脐血和成人外周血单个核细胞抗肿瘤活性的影响

目的：探讨白细胞介素—15(1L—15)对脐血单个核细胞(CBMNC)和成人外周血单个核细胞(PBMNC)抗肿瘤活性的影响。方法：采用MTT法分别检测静止的CBMNC和PBMNC对K562和HL—60细胞株的杀伤活性、经不同浓度的IL—15及不同效靶比条件下激活的CBMNC和PBMNC抗瘤活性，采用ELISA法测定培养上清中IFN—r及TNF—a水平，采用APAAP检测CD56、CD16表面抗原。结果：①静止CBMNC抗肿瘤活性显著低于PBMNC，经IL—15活化后，脐血NK活性显著增强，可达成人水平，脐血LAK活性显著高于成人血LAK活性。②活化后培养上清中的IFN—r及TNF—a水平均显著增强，但脐血培养上清中两种细胞因子的水平仍低于成人血。③活化前后脐血NK细胞CD56表达显著增强。结论：IL—15能显著提高CBMNC的抗肿瘤活性，为今后优选IL—15活化脐血进行肿瘤过继免疫治疗提供了理论依据。     

Analysis for the optimal blood draw speed to collect sufficient peripheral blood mononuclear cells by COBE Spectra

In recent years the procedures for peripheral blood mononuclear cell (PBMNC) harvests have gradually been increasing. These PBMNCs are collected for several treatments, for example, donor lymphocyte infusion (DLI), immunotherapy for solid carcinoma, and regeneration therapy for ischemic limbs. In order to analyze the optimal procedure for collecting PBMNCs safely and efficiently, we evaluated 129 PBMNC apheresis procedures from April 1996 to May 2003, without hemopoietic stem cell mobilization by G-CSF. In every case, PBMNC collections were performed with a COBE Spectra cell separator (Gambro BCT). The median apheresis volume was 5550 mL. The median of blood draw speed was 48.1 mL/min. The median TNC (total nuclear cell) number in products was 50.4 x 10(3)/ micro L. In the regression analysis, no significant correlation was seen between the blood draw speed and the concentrations of TNC in products (Y = aX + b, a = 0.842497, b = 17.11352, r = 0.222032, P = 0.012464). A positive correlation was seen between WBC on apheresis day and the concentrations of TNC (Y = aX + b, a = 0.009822, b = 3.224679, r = 0.550431, P = 2.93 x 10(-11)). A significantly higher correlation was seen between the MNC (mononuclear cells) on apheresis day and the concentrations of TNC (Y = aX + b, a = 0.028278, b = 13.09266, r = 0.696988, P = 9.486 x 10(-9)). This study has shown evidence that a higher increment of blood draw speed does not provide a higher concentration of products. An adequate apheresis speed is about 40 mL/min. If we want to obtain sufficient cell counts, it is very important to obtain sufficient volume with a moderate blood draw speed, therefore protecting against side-effects.     

肺结核患者外周血单个核细胞蛋白质差异的表达

目的 应用比较蛋白质组学方法筛选出肺结核患者发病免疫相关蛋白质,为阐明结核病的发病的免疫机制和诊断治疗提供理论依据.方法 收集10例肺结核患者和10名健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),采用双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,运用Image Master 2D Elite 5.0图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱获取肽质量指纹图谱,检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,并对差异表达的蛋白质用Western blot进行验证.两组间比较采用秩和检验.结果 建立了重复性良好的肺结核患者和健康志愿者PBMC的双向凝胶电泳图谱,找出14个表达量有明显差异的蛋白质点并鉴定出共12种蛋白质,其中冠蛋白1A等10种蛋白在肺结核组中表达上调,普列克底物蛋白(PLEK)和Ras基因抑制蛋白1(RSU1)在肺结核组中表达下调;Western blot法验证PLEK在肺结核组表达下调,与双向凝胶电泳结果一致.结论 对肺结核患者PBMC的比较蛋白质组学研究鉴定出冠蛋白1A、PLEK等12种差异蛋白质,其中PLEK和冠蛋白1A可能通过对单核巨噬细胞吞噬作用的调节在肺结核发病中起着重要作用.     

不同浓度甲氨蝶呤对外周血单个核细胞表达和分泌白细胞介素-17的影响

目的 体外观察不同浓度的甲氨蝶呤(MTX)对外周血单个核细胞(PBMCs)表达和分泌白细胞介素(IL)-17的影响,探究MTX有效治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制.方法 分离RA患者和健康人PBMCs,予不同浓度MTX预处理,抗人CD3和抗人CD28刺激后,37 ℃体积分数为0.05的CO2培养箱培养.分别于培养的不同阶段收集细胞或上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析IL-17mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中IL-17的浓度;荧光抗体标记细胞表面抗原CD4和胞内蛋白 IL-17,流式细胞仪分析CD4+IL-17+细胞的比例.结果 比较采用两两配对t检验或独立样本t检验.结果 浓度为0.1、1.0、5.0、25.0μg/ml MTX组IL-17mRNA/GAPDH比值分别为(0.58±0.09、0.48±0.11、0.50±0.09、0.51±0.14),与无药抗体组(0.76±0.08)组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);IL-17分泌水平则分别为(121±54)、(104±45)、(90±36)、(115±41)pg/ml,与无药抗体组(370±187)pg/ml组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);MTX处理组CD4+IL-17+细胞比例的平均值下降,但统计学检验差异无统计学意义(P＜0.05).结论 MTX可以有效抑制PBMCs合成和分泌IL-17,而且在一定的剂量下可发挥显著作用,加大剂量并不能增强该作用.     

CD150在成人乙型肝炎疫苗无应答者体外外周血单个核细胞中的表达

目的 了解信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)CD150在乙型肝炎(乙肝)疫苗无应答者体外外周血单个核细胞(PBMC)中的表达.方法 对2007年9月至2009年12月曾行乙肝疫苗接种、HBV标志物检测均阴性的202例患者进行标准程序再免疫,再接种后第7～12个月检测抗-HBs效价.根据抗-HBs效价判定无应答者18例(男11例,女7例);选取应答者18例(男9例,女9例)作为对照.采集无应答者与应答者静脉血18 mL,淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离PBMC,流式细胞仪测定细胞膜表面分子CD150.采用SAS统计软件包进行t检验以及Spearman 秩相关检验.结果 乙肝疫苗免疫后,在特异性刺激剂rHBsAg作用下,PBMC中CD150的表达无应答者为(39.20±10.66)%,高于应答者的(23.73±12.41)%,差异有统计学意义(t=2.1947,P<0.05);CD3+CD4+细胞中CD150的表达无应答者为(49.64±11.94)%.亦高于应答者的(37.73±11.02)%,差异无统计学意义(t=1.7175,P>0.05).在非特异性刺激剂植物血凝素(PHA)作用下,PBMC中CD150的表达在无应答者为(39.21±7.37)%,高于应答者的(23.18±12.68)%,差异有统计学意义(t=2.2835,P<0.05).在特异性刺激剂rHBsAg作用下,CD150在PBMC及CD3+CD4+细胞中与抗体效价呈负相关(r=-0.726,P<0.05).结论 CD150可能在机体接种乙肝疫苗后的无应答者中发挥一定作用.

Abstract：

Objective To study the expression of signaling lymphocytic activation molecule (SLAM)CD150 in peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)isolated from adult non-responders to recombined yeast gene hepatitis B vaccine.Methods A total of 202 cases were recruited.All these subjects had been immunized with recombined yeast gene hepatitis B vaccine for more than one standard scheme in two years(from Sep 2007 to Dec 2009)and remained negative for hepatitis B markers(HBsAg,anti-HBs,HBeAg,anti-HBe and anti-HBc).After recruitment,all 202 subjects received another standard scheme(0,1 and 6 month)revaccination.The blood samples were collected 7 months later after the first injection of revaccination to detect anti-HBs titer.The PBMCs were isolated from 18 adult non-responders(anti-HBs titer<10 mIU/mL)and 18 adult responders(antiHBs titer≥100 mIU/mL).CD150 expression on cell surface was analyzed by flow cytometry.SAS package was used for t test and spearman rank correlation analysis.Results After rHBsAg stimulation,the percentage of PBMCs expressed CD150 was significantly higher in non-responders (39.20%±10.66%)than responders(23.73%±12.41%)(t=2.1947,P<0.05).The same trend was also observed in rHBsAg stimulated C133+CD4+T cells,but the difference was not statistically significant(49.64%±11.94%vs 37.73%±11.02%)(t=1. 7175,P>0.05).After phytohaemagglutinin (PHA)stimulation,the percentage of CD150-positive PBMCs was also significantly higher in non-responders (39.21%±7.37%)than responders(23.18%±12.68%)(t=2.2835,P<0.05).CD150 expressions in both PBMCs and CD3+CD4+T cells were negatively correlated with anti-HBs titer after rHBsAg stimulation (r=-0.726,P<0.05).Conclusion Activation of CD150 may contribute to the non-response to hepatitis B vaccine.     

从外周血分离单核细胞的不同方法及各自特点

单核细胞是机体重要的固有免疫细胞,能吞噬并清除受伤和衰老的细胞及其碎片,参与人体的免疫炎症反应。单核细胞能进一步分化为巨噬细胞和树突状细胞,二者在建立有效的免疫应答中发挥着重要作用。单核细胞及巨噬细胞和树突状细胞被广泛应用在基础与临床医学的相关研究中。本文将介绍从外周血中分离单核细胞的几种不同方法,并比较分析其优劣性,帮助研究者选择合适的分离方法以高效地获得符合实验要求的单核细胞,为后续研究奠定基础。     

外周血单核细胞数量与肺癌放疗近、远期疗效的相关性分析

目的基于外周血单核细胞（pbMXD）迁徙在肿瘤放疗后复发中的重要作用,探讨pbMXD在监测肺癌放疗近、远期疗效中的价值。方法回顾性分析肺癌放疗患者,随访观察其放疗前后血象变化、pbMXD变化与近、远期疗效的相关性。结果105例肺癌患者,整体客观缓解率（RR）61．9％（65／105）,中位无进展生存期（PFS）5．0个月（1～20．3个月）;28例局部晚期非小细胞肺癌（NSCLC）,同步放化疗组RR为66．7％（8／12）,PFS6．5个月（1．5—14．2个月）。两类资料中,放疗前、后pbMXD绝对值、相对值及变化值与RR和PFS均无显著相关性（P〉0．05）;pbMXD最低值与整体NSCLC和局部晚期NSCLC单纯放疗组的近期疗效相关（P〈0．05）。结论NSCLC放疗中,pbMXD最低值对预判近期疗效有一定价值,阻断pbMXD迁徙或有较好临床前景。     

肝移植患者外周血单个核细胞中HBV DNA检测及临床意义

目的研究乙型肝炎肝硬化终末期患者肝移植后外周血单个核细胞(PBMC)HBV DNA状态及临床意义.方法应用荧光PCR技术检测乙型肝炎肝硬化终末期肝移植术后30例患者血清及PBMC标本HBV DNA,并用细胞计数法和管家基因β-actin标定PBMC HBV DNA,观察PBMC HBV DNA与血清HBV DNA定量关系;观察患者肝移植术后不同时间PBMC HBV DNA水平.30例对照组为肝炎肝硬化失代偿期患者.结果移植后患者19份(63%)PBMC标本HBVDNA阳性,低于对照组(87%,26/30).以Ct值为定量参数,移植后患者PBMC HBV DNA水平显著低于对照组(P=0.02);肝移植术后患者PBMC HBV DNA长期维持于103～104拷贝/106细胞水平,与肝移植后时间无明显关系.移植后患者血清HBV DNA均阴性,而对照组血清阳性率为48%.结论乙型肝炎肝硬化终末期患者肝移植术后,经有效预防HBV再感染治疗后,虽然血清中不能测出HBV DNA,但PBMC中HBV DNA阳性,这可能成为肝外"病毒池",导致供肝再感染;对移植后患者监测PBMC HBV DNA,可能有助于早期诊断HBV再感染或复发.