氯喹对胰岛素抵抗大鼠胰岛素降解酶基因及酶蛋白表达的影响

目的了解氯喹对大鼠肝脏胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)基因表达(expression of IDEgene,EIG)及酶蛋白表达(expression of IDE protein,EIP)水平的影响。方法以高脂肪饮食喂养法复制的胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)Wistar大鼠模型为对象,检测IR大鼠肝脏EIG,EIP水平和肝脏IDE活性,并测定大鼠的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate,GIR60~120),同时观察氯喹对上述指标的影响。结果IR大鼠的EIG,EIP水平显著高于常规饲料喂养的对照大鼠。服用氯喹后,IR大鼠EIG,EIP水平显著降低,对照大鼠的上述指标无明显改变。IR大鼠和对照大鼠的肝脏IDE活性均与EIG,EIP水平呈显著正相关,而与GIR60~120呈显著负相关。结论氯喹降低IR大鼠IDE活性可能是通过抑制IDE基因转录,从而降低IDE酶蛋白表达量来实现。     

康复训练对血管性痴呆大鼠胰岛素抵抗及海马胰岛素降解酶的影响

目的：研究康复训练对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠胰岛素抵抗及海马胰岛素降解酶（IDE）的影响。方法：采用结扎双侧颈总动脉法制作VD大鼠模型,将45只SD大鼠随机分为康复组、制动组、假手术组。术后4周评估大鼠学习记忆能力。采用ELISA法检测大鼠脑缺血不同时间点血浆胰岛素水平,免疫组织化学技术检测大鼠IDE的表达。结果：行为学评估提示康复组学习记忆能力强于制动组（P〈0.05）。制动组在不同时间点血胰岛素水平均高于假手术组（P〈0.05）。术后7 d和28 d,康复组血胰岛素水平均低于制动组（P〈0.05）。康复组海马IDE表达较制动组明显增加（P〈0.05）。结论：康复训练改善VD大鼠认知功能障碍可能与改善胰岛素抵抗并增加海马IDE的表达有关。     

胰岛素降解酶研究新进展

胰岛素降解酶研究新进展临床学院内分泌科李晨钟综述张素华舒昌达审校中图分类号Ｒ３４５胰岛素是目前研究最深入的激素之一。但其代谢过程，包括胰岛素降解的部位、催化降解反应的特异性酶类，降解的机制及其生理意义等内容，尚不十分清楚。大量证据表明，细胞水平催化胰...     

胰岛素降解酶和胰岛素降解酶基因与阿尔茨海默病的相关性

胰岛素降解酶（IDE）和胰岛素降解酶基因具有降解β淀粉样蛋白的能力,它们已经被认为是阿尔茨海默病（AD）发病的一个候选危险因素。目前关于AD的发病机制有多种假说,除了与IDE和IDE基因有关外,还与Tau蛋白、载脂蛋白E84等位基因、胰岛素信号转导等有关。为了更好地了解它们在AD发病中的可能作用,该文就IDE和IDE基因在AD发病机制中的研究进展予以综述。     

加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响

[目的]探讨加减抵当汤对IR大鼠肝脏InRmRNA表达的影响。[方法]造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、文迪雅组,用RT-PCR方法检测加减抵当汤对IR大鼠肝脏InRmRNA表达的影响。[结果]加减抵当汤高、中剂量组能明显上调IR大鼠肝脏InRmRNA的表达（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]加减抵当汤能上调InRmRNA的表达,可能是其改善IR的机理之一。     

葛根素对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察葛根素对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的作用。方法以链脲菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠及以氢化可的松琥珀酸钠(HCSS)诱导胰岛素抵抗小鼠模型,观察葛根素对正常、糖尿病及胰岛素抵抗模型小鼠血糖及血清胰岛素水平的影响。结果葛根素对正常小鼠空腹血糖无明显影响,可明显降低STZ诱导的糖尿病小鼠的血糖和血清胰岛素水平,使胰岛素敏感性指数显著升高,对HCSS诱导的小鼠胰岛素抵抗也有明显的改善,且均呈一定的剂量依赖性趋势。结论葛根素可显著改善实验性糖尿病小鼠的胰岛素抵抗。     

2型糖尿病患者糖脂代谢、胰岛素降解酶活性情况及其与胰岛素抵抗的关系

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者的糖脂代谢及胰岛素降解酶(IDE)活性及其与胰岛素抵抗(IR)的关系.方法 对150例T2DM患者(糖尿病组)及150例健康体验者(对照组)进行问卷调查、体格检查,并检测糖脂代谢指标和IDE活性,同时计算IR指数(HOMA-IR).比较两组糖脂代谢指标及IDE活性,并分析糖脂代谢指标及IDE活性与HOMA-IR的相关性.结果 糖尿病组患者体质指数(BMI)、DBP、TG、TC、LDL-C、FBG、餐后2 h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR和IDE活性均高于对照组(P<0.05),HDL-C水平低于对照组(P<0.05).相关分析结果显示,HOMA-IR与BMI、TG、TC、LDL-C、FBG、2hPG、FINS、IDE活性呈正相关,与HDL-C呈负相关(P均<0.05);多元线性逐步回归结果显示,IDE活性、TG、LDL-C是影响HOMA-IR升高的独立危险因素(P<0.05).结论 T2DM患者存在明显糖脂代谢紊乱,且IDE活性升高.IDE活性升高是T2DM患者发生胰岛素抵抗的危险因素之一.     

溶血对血清胰岛素测定的影响及应对措施

目的 探讨溶血对血清胰岛素测定的影响程度及相应的处理方法。方法采用免疫化学发光法检测两种不同程度的溶血标本以及溶血标本在加入酶抑制剂EDTA后分别在4℃、25℃温度下胰岛素浓度的变化情况。结果 轻度溶血标本（Hb5g／L）胰岛素浓度在25℃温度下3h内下降至原来的30％，在4℃温度下3h内下降到原来的84％。重度溶血标本（Hb20g／L）胰岛素浓度在25℃温度下3h内下降至原来的4％，在4℃温度下3h内下降到原来的35％；溶血标本（Hb5g／L）在加入酶抑制剂EDTA后，胰岛素浓度在25℃温度下3h内下降至原来的87％，在4℃温度下3h内基本不下降。结论溶血程度越高，胰岛素降解越快。低温及酶抑制荆EDTA可明显改善溶血对胰岛素测定结果的影响程度。因此，要测定胰岛素的血清需进行低温保存或加入酶抑制剂EDTA。     

阿尔茨海默病患者血糖、胰岛素及胰岛素降解酶水平的研究

目的探讨阿尔茨海默病与血糖、胰岛素及胰岛素降解酶的关系,为进一步防治阿尔茨海默病提供理论依据。方法选择32例阿尔茨海默病患者(实验组)和30例正常老年人(对照组),进行简易智能状态检查量表(MMSE)及临床痴呆评定量表(CDR)评分,实验组按照CDR分为轻、中、重度组。采用酶联免疫吸附法和化学发光法分别检测其血清胰岛素降解酶(IDE)和胰岛素水平并计算胰岛素抵抗指数。结果与对照组相比,实验组血清IDE水平下降(P<0.05)。对照组中IDE水平与胰岛素、胰岛素抵抗指数之间有相关性,而实验组中无相关性。实验组空腹血糖与认知功能呈负相关(P<0.05)。轻、中、重度组患者之间血清IDE水平无统计学差异。结论胰岛素降解酶水平的下降与阿尔茨海默病的发生有一定相关性,在阿尔茨海默病患者体内胰岛素降解酶对胰岛素及胰岛素抵抗的调节可能出现障碍。     

葛根素对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的探讨葛根素对实验性2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖、血脂代谢的影响及其对胰岛素抵抗的改善作用。方法大鼠高糖高脂饮食伴尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)25mg·kg~(-1)复制2型糖尿病大鼠模型,然后给予葛根素注射液(Pue)160、80、40mg·kg~(-1),连续腹腔注射6周后,测定血糖、血清胰岛素(Ins)、胰岛素敏感指数(ISI)、游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。结果糖尿病组大鼠血糖、Ins、FFA、TC、TG、LDL-C含量显著增加,而ISI、HDL-C含量显著降低;与模型组比较,Pue高、中、低剂量组能降低2型糖尿病大鼠血糖、Ins、FFA、TC、TG、LDL-C,并提高ISI(P＜0．05或0．01),HDL-C含量变化不明显(P＞0．05)。结论Pue可降低T2DM大鼠的血糖,改善血脂代谢紊乱,改善胰岛素抵抗。     

胰岛素对大鼠局灶缺血脑组织c-fos基因表达的影响

目的：观察胰岛素对局灶缺血脑组织ｃｆｏｓ基因表达的影响。方法：３０只肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲ）随机分４组,在大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）后即予胰岛素（２．１ＩＵ／ｋｇ,Ａ组）、葡萄糖（２ｇ／ｋｇ）和低剂量胰岛素（２．１ＩＵ／ｋｇ,Ｂ组）、葡萄糖（４ｇ／ｋｇ）和高剂量胰岛素（４．５ＩＵ／ｋｇ,Ｃ组）、生理盐水（Ｄ组）,采用原位杂交技术检测各组ＭＣＡＯ后３ｈ脑组织ｃｆｏｓ基因的表达。结果：低剂量胰岛素组（Ａ、Ｂ组）ｃｆｏｓｍＲＮＡ未出现明显变化（Ｐ＞００５）,而Ｃ组ｃｆｏｓｍＲＮＡ则有统计学意义的增加（Ｐ＜００１）。结论：胰岛素促进缺血脑组织ｃｆｏｓ基因表达,可能是其神经保护作用机制之一。     

Chronic Hyperinsulinism Induced Down-regulation of Insulin Post-Recentor Signaling Transduction in Hep G2 Cells

Summary: To study the regulatory effect of acute and chronic insulin treatment on insulin post-re-ceptor signaling transduction pathway in a human hepatoma cell line (Hep G2), Hep G2 cells wereincubated in the presence or absence of insulin with different concentrations in serum free mediafor 16 h and then stimulated with 100 nmol/L insulin for 1 min. Protein levels of insulin receptorβ-subunit (IRβ), insulin receptor substrate-1 (IRS-1) and p85 subunit of phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase) were determined in total cell lysates by Western-immunoblot. Phosphorylat-ed proteins IRβ, IRS-1 and interaction of PI 3-kinase with IRS-1 were determined by immunopre-cipitation. Results showed that 1-min insulin stimulation rapidly induced tyrosine phosphorylationof IRβ and IRS-l, which in turn, resulting in association of PI 3-kinase with IRS-1. 1-100 nmol/L chronic insulin treatment induced a dose-dependent decrease in the protein level of IRβ and aslight decrease in the protein level of IRS-1. There wass more marked reduction in the phospho-rylation of IRβ, IRS-1, reaching a nadir of 22 % (P＜0. 01) and 15 % (P＜0. 01) of control lev-els, respectively, after 16 h treatment with 100 nmol/L insulin. The association between IRS-1and PI 3-kinase was decreased by 66 % (P＜0. 01). There was no significant change in PI 3-ki-nase protein levels. These data suggest that chronic insulin treatment can induce alterations ofIRβ, IRS-1 and PI 3-kinase three early steps in insulin action, which contributes significantly toinsulin resistance, and may account for desensitization of insulin action.     

壳聚糖介导人胰岛素基因在糖尿病鼠体内外表达的研究

目的研究壳聚糖介导人胰岛素基因在糖尿病鼠体内外转染及表达。方法采用壳聚糖体外转染鼠成纤维细胞,对转染后72h的细胞应用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达。27只糖尿病大鼠随机分为3组(pCMV.INS组、pCMV组、生理盐水组),体内转染通过尾静脉注射糖尿病大鼠,检测空腹血糖和胰岛素。结果pCMV转染细胞无胰岛素表达,pCMV.INS转染大约10%的细胞有胰岛素表达;pCMV.INS转染大鼠血浆胰岛素显著高于生理盐水对照组(P<0.01)和pCMV对照组(P<0.01)。结论人胰岛素基因可通过壳聚糖直接转染至糖尿病大鼠体内发挥治疗作用及壳聚糖可能是一种很有前途的基因载体。     

人胰岛素基因在NIH3T3细胞中的基因转染和表达

目的　研究人胰岛素基因在体外培养的小鼠成纤维细胞系的基因转染和表达。方法　采用壳聚糖转染法将重组的人胰岛素基因表达质粒转染鼠成纤维细胞 (NIH3T3) ,转染后 72h ,经G4 18抗性筛选出阳性克隆并培养到第 2 4d ,用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达 ,同时用ELASA法监测转染后 2 4d的细胞培养液的胰岛素水平。结果　转染PCMV .INS的NIH3T3细胞培养液的胰岛素水平明显高于未转染组 (P <0 .0 1)及PCMV转染组 (P <0 .0 1) ,未转染组与PCMV转染组细胞培养液的胰岛素水平无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论人胰岛素基因在NIH3T3细胞系的转染成功和表达说明基因治疗有望成为 1型糖尿病的重要治疗手段 ,壳聚糖是一种很有前途的胰岛素基因载体。     

心肌梗塞合并糖尿病患者血管紧张素转换酶基因多态性分析

采用ＰＣＲ技术对４４例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者，３１例ＮＩＤＤＭ合并心肌梗塞（ＭＩ）患者及１３２例正常对照组的血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态进行探测。结果：ＮＩＤＤＭ合并ＭＩ组ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态中的缺失型（ＤＤ）频率（０．４２）明显高于ＮＩＤＤＭ组（０．１４，Ｐ＜０．０５）及正常对照组（０．１７，Ｐ＜０．０５），正常对照组与单纯ＮＩＤＤＭ组ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态基因型分布比例相近似。结果提示：ＮＩＤＤＭ的发生与ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态无关，ＡＣＥ基因多态中ＤＤ型是ＮＩＤＤＭ患者心肌梗塞发病的危险因素之一。     

Effects of Carvedilol on Cardiomyocyte Apoptosis and Gene Expression In Vivo after Ischemia-Reperfusion in Rats

The effects of carvedilol on cardiomyocyte apoptosis and expression of bcl-2, bax genesfollowing ischemia (0.5 h) and reperfusion (48 h) in vivo and the possible biological mechanism ofcarvedilol inhibiting cardiomyocyte apoptosis were studied. The left anterior descending artery inWistar rats were ligated to establish ischemia-reperfusion (I/R) models. The model animals were di-vided into two groups: I/R group, the model rats not subject to other treatments except ischemia-reperfusion (n=8); carvedilol-treated group (n=8), I/R model rats treated with carvedilol. Eightrats in the sham-operated group were subjected to only experimental open operation. The number ofapoptotic cardiomyocyte was determined by TUNEL staining. Immunohistochemistry and in situ hy-bridization histochemistry (ISHH) were used to detect the expression of bcl-2 and bax genes. Imageprocessing system was used to quantitatively dispose the positive metric substances of both immuno-histochemistry and ISHH through the average optical den     

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

目的　在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为标记基因的合适条件。方法　用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞,观察GFP瞬时表达的情况：1．直接测定GFP在COS-7细胞中的表达并观察表达的稳定性;2．比较不同启动子驱动的pcDNAa-EGFP和pSVKa-S65T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率;3．用LacZ基因与GFP基因共转染48h后,通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。结果　在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达,且表达具有稳定性,表达持续约2周左右;CMV启动子和SV40启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选,选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在1：4时可达85％以上。结论　通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达,利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。     

胰岛素受体底物-1基因多态性与多囊卵巢综合征

目的 通过检测多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）病人的胰岛素敏感等指标,观察是否存在胰岛素抵抗,对ＰＣＯＳ病人胰岛素受体底物－１（ＩＲＳ－１）基因多态性进行分析,探讨ＩＲＳ－１基因与ＰＣＯＳ的关系,判断其可否作为ＰＣＯＳ胰岛素抵抗的致病基因。方法采用ＰＣＲ技术检测正常人与ＰＣＯＳ病人ＩＲＳ－１的等位基因与基因频率,据不同的基因型（ＧＧ、ＧＡ或ＡＡ）将病人分为３组,比较各组的体重指数、腰臀围比例、黄体生成