2 型糖尿病患者线粒体常见基因突变PCR检测的局限性

目的:研究北京地区汉族人群中线粒体DNA(m itochondrial DNA,m tDNA)多位点突变频率与2型糖尿病之间的相关性。方法:采用直接PCR、PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragm ent length polymorph ism,RFLP)、PCR-时相温度梯度凝胶电泳(temporal temperature grad ient gel electrophoresis,TTGE)法筛查m tDNA 4977片段缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变和m tDNA T14577C突变。结果:在250例2型糖尿病患者及142例健康对照外周血基因组总DNA中,未发现m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变。结论:m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变在外周血中没有检出,采用常规PCR法检测2型糖尿病患者外周血线粒体DNA突变具有较大的局限性。     

浙江汉族人群线粒体DNA ND1基因G3316A突变与2型糖尿病

目的：研究与日本人2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）相关的线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）ND1基因G3316A突变在浙江汉族T2DM人群中的发生率及其临床意义。方法：采用PCR产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315名T2DM患者及158名正常对照的外周血mtDNA进行检测,并用DNASTAR和Antheprot 5.0软件分析突变位点。结果：在T2DM患者中检测到6例（占1.90%）G3316A突变,对照组中发现3例（占1.90%）突变,突变发生率在两组间差异无显著性（P＆gt;0.05）。携带G3316A位点突变的T2DM组与无该突变的T2DM组之间的临床特点（发病年龄、体重指数和血糖水平等）比较差异亦无显著性。蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲的构成比没有发生改变。结论：线粒体DNA ND1基因G3316A突变可能与浙江汉族人群T2DM的发生无关,仅为人群中的基因多态性。     

Mitochondrial gene mutations and type 2 diabetes in Chinese families

Background Numerous mitochondrial DNA mutations are significantly correlated with development of diabetes. This study investigated mitochondrial gene, point mutations in patients with type 2 diabetes and their families.
Methods Unrelated patients with type 2 diabetes （n=826） were randomly recruited; unrelated and nondiabetic subjects （n=637） served as controls. The clinical and biochemical data of the participants were collected. Total genome was extracted from peripheral leucocytes. Polymerase chain reaction, restriction fragment length poiymorphism （PCR-RFLP） and cloning techniques were used to screen mitochondrial genes including np3316, np3394 and np3426 in the ND1 region and np3243 in the tRNA^Leu（UUR）.
Results In 39 diabetics with one or more mitochondrial gene point mutations, the prevalence （4.7%, 39/826） of mtDNA mutations was higher than that （0.7%, 5/637） in the controls. The identical mutation was found in 23 of 43 tested members from three pedigrees. Affected family members presented with variable clinical features ranging from normal glucose tolerance to impaired glucose tolerance （IGT） （n=2）, impaired fasting glucose （IFG） （n=1） to type 2 diabetes （n=13） with 3 family members suffering from hearing loss.
Conclusions Type 2 diabetes in China is associated with several mitochondrial gene mutations. Aged patients with diabetic family history had a higher prevalence of mutation and various clinical pictures. Mitochondrial gene mutation might be one of the genetic factors contributing to diabetic familial clustering.     

线粒体12SrRNA、ND1基因突变与糖尿病

目的探讨线粒体基因(mtDNA)12SrRNA1382、1442位点及NDI3394、3423位点突变与中国上海地区非肥胖2型糖尿病的关系。方法采用PCR-SSCP及PCR产物直接测序等技术检测mtDNA12SrRNA、NDI片段的突变情况。结果286例非肥胖2型糖尿病患者在12SrRNA1382位点有6例存在A→C的点突变，1442位点8例存在G→A的点突变；242例非糖尿病对照组中，2例存在1382位点A→C，1例存在1442位点G→A的点突变。286例非肥胖2型糖尿病和242例非糖尿病对照组中，未发现NDI3394位点突变，而3423位点的突变率为100％。结论12SrRNA1382、1442位点突变可能增加糖尿病的易感性。mtDNANDI3423位点突变率为100％，可能与人种有关；3394位点不存在突变说明糖尿病的发生在线粒体遗传上存在一定的异质性。     

PON1基因微卫星多态性与2型糖尿病的关联研究

目的:探讨南京地区汉族人群中对氧磷酶1基因(PON1)多态性与2型糖尿病是否存在相关性。方法:选择PON1基因附近高杂合度微卫星DNA多态标志,应用聚合酶链反应及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,探察这一微卫星多态在正常对照组与2型糖尿病组中的基因频率分布。结果:该多态位点存在4种等位基因,GT重复序列分别重复12、15、17、20次,病例与对照分析结果表示,两组间等位基因频率总体分布差异有显著性(χ2=14.10,P<0.01)。两组间基因型频率总体分布差异有显著性(χ2=12.72,P<0.01)。结论:南京地区汉族人群中对氧磷酶1基因多态性可能与2型糖尿病相关。     

线粒体DNA3160-3755区域基因突变与2型糖尿病的关系

目的研究线粒体DNA3160-3755区域基因在延边地区2型糖尿病（T2DM）患者中的突变情况,探讨该区域线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymorphismchainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP）技术和直接测序法对延边地区人群108例正常健康体检者、328例T2DM患者（其中2例合并耳聋）,进行线粒体DNA3160-3755区域基因突变筛查。结果线粒体DNA3316G-A在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为3．7％和3．8％。两组间差异无统计学意义（P〉0．05）;3394T→C在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为7．3％和1．9％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）;在糖尿病组及正常对照组中均未检测到线粒体DNA3243A→G、3593T→C和3714A→G突变。结论线粒体DNA3316G→A突变与延边地区T2DM的发生无关;线粒体DNA3,394T→C突变与延边地区T2DM的发生有关;线粒体DNA3423A→G,3593T→C,3714A→G突变在延边地区T2DM中的发生率为0,提示上述位点基因突变率极低。     

脂联素基因单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性研究

[目的]探讨脂联素基因H241P突变与2型糖尿病的关系.[方法]随机选取377例无亲缘关系的吉林省延边地区朝鲜族和汉族人群,其中糖耐量正常者为195名,2型糖尿病患者为182名;行口服葡萄糖耐量实验,于实验前及实验后2h时检测血糖;用体重指数及腰臀比值评估体脂肪含量及分布;采用聚合酶链反应-单链构象多态性方法对apM1基因突变进行初筛分析,并对异常带型标本进行基因序列测定.[结果]在研究对象中发现脂联素基因H241P突变者为1例,属于2型糖尿病组,突变频率为0.5%.[结论]脂联素基因H241P突变可能不是2型糖尿病的易感因素.     

白血病线粒体DNA突变的研究

目的：研究mtDNA突变与白血病发生、发展的关系。方法：测定26例成人白血病患者的骨髓和口腔上皮正常组织的mtDNA基因组全序列。结果：发现26例白血病病人中11例有突变(42．3％),突变类型均为碱基替代突变,其中3例突变位于Cytb基因(其中有1个是异质性突变),2例位于D—loop,其他6例分别位于复合物Ⅰ(ND1、ND2、ND4、ND5、ND6)基因和12sRNA基因。结论：线粒体突变特别是在基因Cytb的突变可能在白血病的发生发展过程中起重要作用。     

上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变筛查及患者临床特征

目的 筛查上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变的发生情况并分析患者的临床特点.方法 选择上海地区96例早发2型糖尿病患者作为研究对象,以100名健康志愿者作为正常对照.收集受试者年龄、性别、血压等一般资料以及糖、脂代谢等实验室检查资料,并进行组间比较.应用PCR直接测序法,对两组受试者Isl-1基因突变情况进行筛查,观察突变基因位点、基因型分布频率、等位基因频率以及携带突变基因者的临床特点.结果 与正常对照组比较,早发2型糖尿病组患者年龄较轻,空腹血糖、空腹胰岛素及三酰甘油水平均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;空腹血浆C肽水平虽高于正常对照组,但差异无统计学意义（P＞0.05）.PCR直接测序筛查结果显示,正常对照组未见Isl-1基因突变;早发2型糖尿病组筛查发现2例患者携带Isl-1外显子5的E283D错义突变基因（A→T）,其中T等位基因频率为1.0%,AT基因型分布频率为2.1%;两突变基因携带者空腹血浆C肽分别为0.6 ng/mL和0.2 ng/mL,均低于其0.82 ng/mL的正常值下限（P＜0.05）.结论 上海地区早发2型糖尿病患者中筛查出Isl-1基因外显子5的E283D突变,且突变基因携带者的空腹血浆C肽水平均低于正常值下限.     

NIDDM患者胰岛素受体底物-1基因突变研究

目的：探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因Gly971Arg突变与非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)的相关性。方法：采用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法，对60例NIDDM患者和30例正常个体IRS-1基因Gly971Arg突变进行筛查。结果：60例NIDDM患者中检测出2例Gly971Arg突变者，30例正常人中没有发现突变者。结论：IRS-1基因Gly971Arg突变在NIDDM患者中出现频率较正常人略高，Gly971Arg突变对IRS-1活性的影响及其在NIDDM发病中的作用有待进一步研究。     

HLA-DQB1基因多态性与2型糖尿病的关系

目的:探讨中国北方汉族人HLA-DQB1等位基因多态性与2型糖尿病的关系.方法:采用PCR技术和限制性内切酶片段长度多态性分析方法对49例2型糖尿病患者及55例正常对照者进行了HLA-DQB1基因分析.结果:病例组和对照组HLA-DQB1基因突变型等位基因(G)频率在病例组和对照组间差异无显著性(χ2=0.36, P>0.05),GG、GC 、CC三种基因型出现频率差异无显著性.基因型频率的相对风险分析结果表明 GC基因型与CC基因型患2型糖尿病风险度为1.02, GG基因型与CC基因型患2型糖尿病风险度为0.43.结论:HLA-DQB1基因突变型等位基因与2型糖尿病发病无必然的联系,突变基因型并没有增加2型糖尿病的发病风险.     

基因芯片筛查糖尿病线粒体基因突变

目的建立一种快速、准确的高通量检测线粒体DNA突变的基因芯片技术,并探讨这些突变与糖尿病的关系。方法以尼龙膜为介质,通过紫外交联固定28个待测突变位点的野生型和突变型探针,并采用该基因芯片对200例2型糖尿病患者和210名健康对照的线粒体tRNA leu（UUR）基因及ND1基因进行筛查,DNA测序进一步确证突变位点,Mfold和Antheprot软件预测变异型基因及蛋白质二级结构。结果成功研制可检测28个突变位点的线粒体DNA芯片,在糖尿病组检出tRNA leu（UUR）基因13290C突变2例（1．0％）,ND1基因突变23例：G3316A突变6例（3．0％）、13394C突变5例（2．5％）、A4164G突变8例（4．0％）,T4216C突变2例（1．0％）,T3593C（0．5％）和A3606G突变各1例（0．5％）;对照组检出G3316A突变1例（0．5％）、A4164G突变5例（2．4％）。这些突变位点的测序结果与基因芯片检测结果一致。两组间仅13394C突变率差异有统计学意义（P=0．027）。G3316A突变导致丙氨酸→苏氨酸,13394C突变导致酪氨酸→组氨酸,13593C突变导致缬氨酸→丙氨酸,T4216C突变导致酪氨酸→组氨酸,A3606G和A4164G突变分别为亮氨酸和蛋氨酸的无意义突变,前4种突变型的ND1蛋白二级结构不同于野生型。结论线粒体DNA芯片是一种快速可靠的高通量基因突变检测方法,ND1基因13394C突变可能参与了线粒体基因缺陷型糖尿病的发病。     

线粒体基因ND1/T3394C突变与糖尿病

【目的】调查线粒体NADH脱氢酶亚单位 1(ND1)基因的T3394C位点突变与中国人糖尿病的发病情况。【方法】随机收集 338例无血缘关系的糖尿病患者及 2 6 2例正常对照组 ,用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行突变筛查 ,DNA序列分析确认。【结果】糖尿病患者中T3394C突变者共 8例 (2 37%) ,正常对照组中只有 1例 (0 38%,P <0 0 1)。糖尿病突变患者中 4例有糖尿病家族史 ,4例病人由于胰岛素分泌功能下降和 /或出现并发症 ,需用胰岛素治疗。【结论】ND1/T3394C突变在糖尿病患者中的发生率明显高于正常对组 ,提示这个位点突变可能是导致线粒体糖尿病的易感基因之一。     

线粒体基因16189 T/C突变性糖尿病的特点

目的：研究线粒体基因16189 T/C突变性糖尿病在中国北方人群中的特点。方法：采用聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RELP）分析方法对中国北方155例2型糖尿病患者（糖尿病组）和164例正常中国北方人（对照组）进行核心家系线粒体基因筛检和分析。结果：①线粒体基因 16189 T/C 突变在糖尿病组占32.26%（50/155）,在对照组占15.24%（25/164）,二者比较差异有显著性（P<0.05）。②在糖尿病患者中线粒体基因16189 T/C 突变组（n=50）与非突变组(n=105)比较,空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（GHbA₁c）、空腹C-肽及餐后2 h C-肽,差异均无显著性。③线粒体基因16189 T/C突变的糖尿病患者临床特点多为50岁左右发病,男女发病率无明显差异（1.3∶1）;发病时体重指数常较高（74%的患者BMI超过标准值）;65%患者伴血脂代谢异常;具有明显的母系遗传倾向。结论：线粒体基因16189 T/C点突变可能仅为人群中的基因多态现象,还不能确定其为糖尿病单基因致病突变。     

上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变筛查及患者临床特征

目的 筛查上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变的发生情况并分析患者的临床特点.方法 选择上海地区96例早发2型糖尿病患者作为研究对象,以100名健康志愿者作为正常对照.收集受试者年龄、性别、血压等一般资料以及糖、脂代谢等实验室检查资料,并进行组间比较.应用PCR直接测序法,对两组受试者Isl-1基因突变情况进行筛查,观察突变基因位点、基因型分布频率、等位基因频率以及携带突变基因者的临床特点.结果 与正常对照组比较,早发2型糖尿病组患者年龄较轻,空腹血糖、空腹胰岛素及三酰甘油水平均明显升高(P＜0.05或P＜0.01);空腹血浆C肽水平虽高于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).PCR直接测序筛查结果显示,正常对照组未见Isl-1基因突变;早发2型糖尿病组筛查发现2例患者携带Isl-1外显子5的E283D错义突变基因(A→T),其中T等位基因频率为1.0%,AT基因型分布频率为2.1%;两突变基因携带者空腹血浆C肽分别为0.6 ng/mL和0.2 ng/mL,均低于其0.82 ng/mL的正常值下限(P＜0.05).结论 上海地区早发2型糖尿病患者中筛查出Isl-1基因外显子5的E283D突变,且突变基因携带者的空腹血浆C肽水平均低于正常值下限.     

胞浆型磷脂酶A2基因多态性与2型糖尿病的关系

目的：探讨胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）基因多态性与中国北方汉族人群2型糖尿病（T2DM）的关系。方法：采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测T2DM患者（病例组121例）和健康对照（对照组142例）3个cPLA2基因（PLA2G4A、PLA2G4B和PLA2G4C基因）的基因型;借助UNPHASED分析平台,利用等位基因条件分析（COA）和基因型条件分析（COG）方法分析基因的联合作用与T2DM的遗传相关性。结果：病例组与对照组中3个基因位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律;病例组和对照组中各基因位点的等位基因及基因型的频数分布比较差异均无显著性（P>0.05）;COA分析表明BanISNP-rs1648833、BanISNP-rs1549637、rs1648833-rs1549637和BanISNP-rs1648833-rs1549637位点间的联合与T2DM不存在关联性（P>0.05）;而COG分析发现,rs1648833-rs1549637联合时与T2DM相关联（P<0.05）,但BanISNP-rs1648833、BanISNP-rs1549637和BanISNP-rs1648833-rs1549637位点间的联合与T2DM无关联（P>0.05）。结论：cPLA2基因多态性与中国北方汉族人群T2DM存在较弱的关联性。     

线粒体DNA3316、3394等4个突变位点与2型糖尿病的关系研究

目的:探讨DNA tRNA Leu(UUR)基因及ND-1基因3316 G/A、3394 T/C等4个突变位点与2型糖尿病的关系。方法:对236例海南地区2型糖尿病患者和252例健康对照者进行空腹血糖测定并采用聚合酶链式反应—限制性核酸内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法进行mtDNA的3243、3316、3394、和3593共4个位点进行突变筛选,并采用DNA测序方法确证。结果:实验组空腹血糖(9.37±3.01)mmol/L与健康对照组(4.96±0.76)mmol/L差异有统计学意义(P<0.05);实验组检出3316(G→A)突变8例,3394(T→C)突变3例;健康对照组未发现上述突变;突变检测结果与测序一致。两组间3316(G→A)突变率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体DNAtRNALeu(UUR)基因及ND-1基因3316、3394位点的基因突变,尤其是3316位点(G→A)突变可能与某些核基因或环境因素协同促进了2型糖尿病的发生。     

失血性休克大鼠心肌细胞线粒体ND1、ND2亚基编码基因改变的研究

目的探讨失血性休克大鼠心肌细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2编码基因改变.方法通过建立失血性休克大鼠模型,提取心肌细胞线粒体DNA,经PCR扩增呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2基因后测序检测其序列组成改变.结果测序结果显示,失血性休克大鼠心肌细胞线粒体的ND1和ND2基因碱基序列无缺失、突变等改变;本实验中使用的Wistar大鼠ND1、ND2基因可能与NCBI提供的基因序列存在多个位点的单核苷酸多态性现象.结论心肌细胞ND1、ND2基因在失血性休克引起的缺血缺氧性损害中较为稳定.     

胰岛素受体基因第17外显子突变与2型糖尿病相关性研究

目的：研究胰岛素受体（Insulin receptor,INS-R)与2型糖尿病的相关性。方法：利用PCR－SSCP法对42例2型糖尿病患者及30例健康对照者INS－R基因第17外显子进行了研究。结果：在被检测的42例2型糖尿病患者中，5例检出异常带型（11.9%)，健康对照者未检出异常带型。结论：INS－R基因第17外显子突变可能与2型糖尿病具有相关性。     

葡萄糖转运蛋白4基因与2型糖尿病相关性研究

目的 探讨中国汉族人群中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因val383Ile突变与2型糖尿病的相关性。方法 采用聚合酶链反应—寡核苷酸连接测定方法对北京地区204例患者—配偶进行GLUTT4基因Val383Ile多态性基因型检测。结果 病例组中发现2例为GLUT4基因val383Ile突变的杂合携带者，对照组中末发现GLUT4基因Val383Ile突变。结论GLUT4基因val383Ile突变在北京地区汉族人群中不常见，可能为2型糖尿病某种亚型的致病因素。