毛细管电泳法测定罗布麻叶中芦丁、异槲皮苷和槲皮素的含量

目的建立毛细管电泳法（capillary zone electrophoresis,CZE）同时分离测定罗布麻叶中的芦丁、异槲皮苷和槲皮素3种黄酮类化合物。方法采用熔融石英毛细管（58.5 cm×75μm）,有效长度为48.5 cm（未涂层）;缓冲体系为50mmol/L Na2B4O7（pH9.6＋15%乙腈）;分离电压20 kV（＋）→（-）;电泳时间20 min;电泳温度25℃;压力进样0.5 psi×20s;柱上检测UV 350 nm（二极管阵列检测器）。结果 3种黄酮类化合物在25 min内得到较好分离,芦丁、异槲皮苷、槲皮素的线性范围分别为4.4～442、.82～28.2、3.8～38μg/ml,相关系数为0.9968、0.99950、.9991,与峰面积线性关系良好;样品平均回收率分别为97.3%、98.4%和98.3%。结论本方法准确可靠,可用于罗布麻叶中黄酮类成分的含量测定。     

宫颈癌放射治疗患者代谢产物表达与急性放射性肠炎相关性的研究

目的在探讨宫颈癌患者放疗过程中粪便样本中代谢产物的表达变化与急性放射性肠炎发生的相关性。方法选取2017年9月至2018年6月在苏州大学附属第一医院接受宫颈癌放疗的患者51例(其中1名患者因入组后不能按要求留存有效标本而剔除,实际共50例),收集患者放疗期间4个时间点的粪便样本,即放疗开始、放疗2周、放疗4周、放疗结束,共计200个,采用液相色谱-质谱(LC-MS)的非靶向代谢组学方法检测。采用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),凝聚层次聚类分析等统计方法鉴定粪便中代谢产物的变化趋势。结果通过LC-MS的非靶向代谢组学分析,共检测到5770个代谢峰,鉴定出121个显著失调的差异代谢产物,其中77个代谢产物表达上调,44个代谢产物表达下调。有19个差异代谢产物在放疗4个时间点发生显著变化,包括1-甲基黄嘌呤、亚油酸、5-氨基戊酸、苯乙胺、苯乙烯、N-乙酰谷氨酸、19-去甲睾酮、4-乙酰氨基丁酸、N-乙酰-L-苯丙氨酸、大豆苷元、胆酸、花生四烯酸、甲蓝氨酸、N-甲酰-L-蛋氨酸、槲皮苷,苯丙氨酸、葡糖酸、蜜二糖及α-CMBHC。共筛选出4个代谢通路与放射性肠炎的发生有关(Pathway imPact>0.1),分别为苯丙氨酸酪氨酸代谢通路、烟酸和烟酰胺代谢通路、亚油酸代谢通路、赖氨酸降解代谢通路。结论宫颈癌患者放疗后粪便中代谢产物发生明显改变。随着放疗剂量的增加,粪便上清中的差异代谢产物表达发生不同程度的上调或下调,为急性放射性肠炎的预测提供了新的思路和方法。     

咖啡因探针法测定正常人肝脏N-乙酰化转移酶活性

目的 建立一套测定咖啡因的3种主要代谢物5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基尿酸（AFMU）、1-甲基黄嘌呤（1X）和1-甲基尿酸（1U）的高效液相色谱法,探讨咖啡因代谢物在N-乙酰化酶活性评价中的意义.方法 采用反相高效液相梯度洗脱法测定尿液内咖啡因代谢产物AFMU、1U和1X的相对含量,计算AFMU/（AFMU＋1X＋1U）比值,绘制概率分布直方图,确定正常人快、慢乙酰化代谢表型的截点（临界点）.结果 受试者可明显划分为快乙酰化者和慢乙酰化者,快、慢乙酰化代谢表型的临界点为0.26,快、慢乙酰化表型之比73∶17.结论 本方法简便、准确、快速,适合于尿中咖啡因代谢物的测定及N-乙酰化转移酶活性的研究.     

扛板归化学成分的研究

目的：研究扛板归（Polygonum perfoliatum L.）的化学成分。方法：利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对扛板归进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据（质谱、核磁共振谱）鉴定化合物的化学结构。结果：分离鉴定出12个单体化合物,分别为槲皮素（quercetin,1）、异鼠李素（isorhamnetin,2）、金丝桃苷（hyperrosid,3）、槲皮苷（quercitrin,4）、原儿茶酸（protocatechuic acid,5）、没食子酸（gallic acid,6）、鞣花酸（ellagic acid,7）、3,3′-二甲氧基-鞣花酸（3,3′-di-O-methyl ellagic acid,8）、1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖（1-O-galloyl-β-D-glucose,9）、黏酸二甲酯-2-O-没食子酰基（mucic acid dimethyl ester-2-O-gallate,10）、咖啡酸乙酯（ethyl caffeate,11）、黏酸二甲酯（mucic acid dime-thyl ester,12）。结论：化合物10和12首次从该属植物中分离得到,化合物2、3、7、8和9首次从扛板归中分离得到。     

鼠离体灌流心脏模型125I-BMIPP与125I-IPPA代谢的对比研究

目的 比较侧链脂肪酸β-甲基碘苯脂十五烷酸(BMIPP)和直链脂肪酸碘苯脂十五烷酸(IPPA)在心肌代谢上的异同和特点.方法 制备大鼠离体灌流心脏模型10只,分为2组,每组5只.基础灌流30 min后,分别于灌流液中加入125I-BMIPP和125I-IPPA,持续灌流3 h后取样灌流液,提取脂溶相处理后行薄层色谱法(TLC)和高压液相色谱法(HPLC)分析,并与加入被测物品初期(5 min)的结果相比较.结果 125I-BMIPP灌流5 min和3 h后脂溶相提取放射性活度分别为注入剂量的99%和92%,而125I-IPPA分别为95%和38%.125I-BMIPP灌流5 min,HPLC分析放射性全部集中于保留时间37 min段.3 h后该处仍呈主峰,其前出现数个小峰,峰值分别对应于代谢产物甲基碘苯脂十四烷酸、对碘苯十二酸、对碘苯十酸、对碘苯八酸、对碘苯六酸、对碘苯四酸和对碘苯乙酸.125I-IPPA灌流初期于HPLC保留时间33 min段显示明显高峰,继续灌流3 h后,该峰值消失.TLC测定125I-BMIPP Rf值为0.52,125I-IPPA为0.45.3 h后,85%的125I-BMIPP仍集中于Rf值0.52处,在Rf值0.31前后有数个小峰.而125I-IPPA持续灌流3 h后Rf值0.45处的峰消失,仅在原点发现放射性.结论 125I-BMIPP不被β氧化,能在心肌细胞内长时间滞留,便于观察脂肪酸在心脏内的分布状况.而125I-IPPA代谢快速,可显示心肌中长链脂肪酸代谢氧化过程.     

抗 HIV 先导物 DAAN-10341 的体外代谢产物筛查

目的应用超高效液相色谱．四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC—QTOF—MS／MS）并辅以代谢数据采集和处理软件,对新型非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）的先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体的代谢产物进行快速筛查和鉴定,并对其结构中的代谢位点进行分析。方法应用质量亏损过滤技术在UPLC—QTOF—MS／MS上比较分析0h与2h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-10341的16个代谢产物。应用仪器的碰撞能量梯度功能（MSE）对部分产物进行MS。分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构。结果先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体中的Ⅰ相代谢反应以氧化（羟基化）为主;Ⅱ相代谢主要以葡糖醛酸结合反应与谷胱甘肽结合反应为主。结论本文通过分析新型抗H／V先导物DAAN-10341的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供科学指导。     

基于UPLC-Q/TOF-MS/MS法的异鼠李素在小鼠体内代谢产物研究

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱（UPLC-Q/TOF-MS/MS）技术,分析小鼠灌胃给予异鼠李素后的体内代谢产物。方法 将12只C57BL/6J小鼠随机分为给药组和空白组,给药组按100 mg/（kg·d）剂量灌胃给予异鼠李素的0.5%羧甲基纤维素钠混悬液,空白组给予相应体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,分别收集小鼠粪便、尿液、血液和胆汁。采用不同的C18柱进行分离,柱温及自动进样器的温度分别为30和4℃,流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）。采用ESI（-）模式,扫描范围m/z 50～1700。结果 经灌胃给药后,在小鼠体内共鉴定出1种原形成分和25种代谢产物,分别分布于粪便（19种）、尿液（15种）、血液（5种）和胆汁（2种）。结论 异鼠李素在小鼠体内可分别发生羟基化、去羟基化、糖化、脱糖化、硫酸化、甲基化、乙酰化、氢化和葡萄糖醛酸化的代谢反应,这些代谢产物可能是异鼠李素发挥药效的潜在物质基础。     

不同促透剂对肝素钠肌醇烟酸酯乳膏透皮吸收影响

目的探讨不同促透剂对肝素钠肌醇烟酸酯乳膏透皮吸收的影响。方法采用改良Franz扩散池,选择离体兔皮为渗透屏障,加入N-甲基吡咯烷酮(NMP)和肉豆蔻酸异丙酯(IPM)及氮酮等不同种类及浓度的促透剂,观察其对肝素钠肌醇烟酸酯乳膏透皮吸收的影响。结果肌醇烟酸酯在0.5~25.0μg/ml与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=7 260.4C+1 214.9(r=0.999 1);精密度良好,肌醇烟酸酯峰面积为1.86%;5 h内稳定性良好,肌醇烟酸酯峰面积为1.26%;平均加样回收率为96.94%,肌醇烟酸酯峰面积为2.98%。对肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中肌醇烟酸酯的促透作用强弱顺序依次为含3%氮酮的乳膏>含3%IPM的乳膏>含3%NMP的乳膏>未加促透剂的乳膏;不同用量氮酮的促透作用强弱顺序依次为3%氮酮>5%氮酮>1%氮酮。结论 3%氮酮对肌醇烟酸酯经皮吸收具有明显的促进作用,为肝素钠肌醇烟酸酯乳膏的处方的设计及新药的开发提供了依据。     

旋覆花水提物的TLC和HPLC特征图谱及6种化学成分的含量测定

目的 建立旋覆花水提物的薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)的特征图谱,同时建立水提物中6种成分(绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、1,5‐二咖啡酰奎宁酸、4,5‐二咖啡酰奎宁酸和旋覆花内酯)的含量测定方法,评价11批旋覆花药材水提物的相似性。方法 (1)采用HF₂₅₄型薄层层析硅胶板、正丁醇‐丙酮‐吡啶‐水‐冰醋酸(1∶5∶3∶1∶10μL)为展开剂,在365 nm波长下检视喷洒10%硫酸‐乙醇前、后的色谱斑点,建立TLC特征图谱。(2)采用Sino‐Chrom ODS‐BP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.05%磷酸溶液‐乙腈的梯度洗脱程序,流速0.8 mL/min,柱温35℃,检测波长205 nm,建立HPLC特征图谱。(3)6种成分的含量测定条件与(2)相同,但检测波长分别为203 nm(旋覆花内酯)、256 nm(异槲皮苷)和327 nm(咖啡酸、绿原酸、1,5‐二咖啡酰奎宁酸、4,5‐二咖啡酰奎宁酸)。结果 (1)喷洒显色剂前、后的TLC图谱均显示出良好的特征性。(2)HPLC特征图谱显示含有28个共有峰,指认出10个峰(绿原酸...     

LC-MS/MS法研究左旋去甲基苯环壬酯在比格犬体内的生物利用度

目的评价左旋去甲基苯环壬酯在比格犬体内生物利用度。方法 LC-MS/MS法测定比格犬口服和静脉给药后体内的血药浓度,计算药代动力学参数和绝对生物利用度。结果比格犬口服给药2 mg/kg后5 min即可测得血中药物含量,口服给药后1 h左旋去甲基苯环壬酯在比格犬体内血药浓度达峰,给药后36 h血中药物浓度均已降至LLOQ以下。比格犬口服和静脉注射2 mg/kg左旋去甲基苯环壬酯的t1/2分别为（5.36±0.82）h和（6.73±2.00）h,Cmax分别为（141.88±51.03）和（591.84±144.61）μg/L;AUC（0-36 h）分别为（962.42±220.96）和（1572.06±365.80）μg.L-1.h;用AUC（0-36 h）计算比格犬口服单剂量左旋去甲基苯环壬酯的绝对生物利用度为（61.22±10.78）%。结论左旋去甲基苯环壬酯口服给药吸收迅速,绝对生物利用度较高,具有良好的开发前景。     

莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的观察不同剂量莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤S180的抑瘤作用,以及对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480的体外抑瘤作用。方法 72只二级昆明小鼠采用肿瘤移植法建立小鼠荷瘤动物模型;椒莪软胶囊灌胃给药,剂量分别为0.3、0.6、1.2 ml/kg;氟尿嘧啶22.5 mg/kg作为阳性对照药腹腔注射给药;连续给药15 d,观察药物对肿瘤生长的抑制作用。对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480进行传代培养后,制备不同剂量(椒莪软胶囊0.015 625、0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2、4 mg/ml)含药血清、氟尿嘧啶阳性药血清和肿瘤移植模型不用药对照血清,作用于人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝比色法观察血清对两种细胞的抑制作用。椒莪软胶囊0.0、6.25、12.5、25.0μg/ml给药15 h后,经流式细胞仪测定对人源性肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。结果①椒莪软胶囊0.3、0.6、1.2 ml/kg肿瘤抑制率分别为19.73%、32.22%和46.68%。随着给药剂量的增加,坏死的肿瘤细胞所占比例也相应增加,生长活跃的肿瘤细胞逐渐减少。②抑制作用随剂量升高而作用增强,对人源性肝癌细胞株HepG2体外最低药物物浓度为0.062 5 mg/ml,对大肠癌细胞株SW480体外最低药物浓度为0.125 mg/ml。③椒莪软胶囊可明显促进人源性肝癌细胞株HepG2的细胞凋亡。结论椒莪软胶囊对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用,对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480有明显的抑制作用。椒莪软胶囊在临床具有广阔的应用前景。     

Imaging of single human carcinoma cells in vitro using a clinical whole-body magnetic resonance scanner at 3.0 T.

The purpose of the present study was to examine whether single human carcinoma cells labeled with iron oxide nanoparticles could be detected by magnetic resonance (MR) imaging on a clinical 3-T scanner using a surface coil only. WiDr human colon carcinoma cells were loaded with two kinds of iron oxide nanoparticles differing by coating and size: aminosilan-coated (MagForce) and carboxy-dextran-coated particles (Resovist). The latter were preferred by the colon carcinoma cell line used here and taken up much faster (12 h) than the smaller carboxydextran-coated Resovist (48 h). Labeled single carcinoma cells, distributed in an agarose gel in a monodisperse layer as controlled by light microscopy, became detectable as punctuate signal extinctions when using a small circularly polarized surface coil in conjunction with a T(2)*-weighted GE sequence at 3 T. The threshold for the detectability of labeled colon carcinoma cells ranged at a load of 4-5 mug iron/10(6) cells. Obviating the need for special hardware additions, this study opens a new lane for single-cell tracking on clinical 3-T MR scanners amenable to patient studies.     

反转录病毒介导的Luciferase基因稳定转染细胞株的建立及其生物发光成像检测

目的 建立反转录病毒介导的Luciferase基因(Luc2)稳定转染的细胞株,通过体内及体外实验探讨Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统光通量之间的关系.方法 采用分子克隆方法构建pMX-Luc2质粒,将其与pMD.G质粒共转染293T gag-pol细胞,获得表达Luc2的反转录病毒.将该反转录病毒感染小鼠结肠癌CT26、人小细胞肺癌NCI-H446、人结肠癌HT-29、人卵巢癌SKOV3、人肝癌sMMC-7721细胞系,建立并筛选Luc2阳性表达的细胞株.分别接种10～1×104个SKOV3-Luc2细胞于培养皿中,在4只裸鼠背侧皮下16个位点分别接种200μl不同浓度(1×107、5×106、2.5×106、1 × 106、5×105、2.5 × 10s、1×105、5 × 104/ml)的SKOV3-Luc2细胞,在另外4只裸鼠尾静脉中分别注射1 ×106和3×106个SKOV3-Luc2细胞.采用生物发光成像系统检测体外、体内接种细胞的光通量值.结果 成功获得表达Luc2的反转录病毒,感染肿瘤细胞系CT26、NCI-H446、HT-29、SKOV3、SMMC-7721,筛选阳性细胞株,均可稳定表达Luc2.体外生物发光成像系统检测结果表明,光通量值与培养皿中接种的细胞数之间存在显著的线性关系(R2=0.944,β=0.972,P＜0.01);活体检测结果表明,光通量值与裸鼠尾静脉注射和皮下接种的细胞数之间均存在显著的线性关系(R2=0.991,β=0.996,P＜0.01; R2=0.351,β=0.628,P＜0.01).结论 采用表达Luc2的反转录病毒感染肿瘤细胞系是快速建立Luc2阳性细胞株的一种可行方法.Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统中光通量值具有显著的线性关系.     

青蒿素及其衍生物体外抗肿瘤活性研究

目的研究青蒿素及其衍生物体外抗肿瘤活性。方法采用四甲基偶氮唑盐法测定青蒿素、双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯体外抑制人肺癌细胞、人胃癌细胞、人结肠癌细胞、人红白血病细胞和人肝癌细胞的活性。结果青蒿素、双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯对5株肿瘤细胞有选择性的抑制作用。结论青蒿素及其衍生物在体外对不同的肿瘤细胞有抑制活性。     

Pre-exposure of human squamous carcinoma cells to low-doses of gamma-rays leads to an increased resistance to subsequent low-dose cisplatin treatment

Purpose: To investigate low-dose hypersensitivity to cisplatin and increased resistance at higher doses of cisplatin for the human squamous carcinoma cell line SCC-25 and its cisplatin-resistant derivative SCC-25/CP, and to examine the effects of pre- and post-treatment of SCC-25 cells with low-doses of gamma-rays on their resistance to cisplatin. Materials and methods: SCC-25 and SCC-25/CP cells were treated with various cisplatin concentrations (0.1 to 20 mu m for 1h) and assayed for survival using a conventional colony assay. For SCC-25, various doses of gamma-rays (5cGy to 2.5Gy) were given either 10 or 60min before the cisplatin challenge dose as well as either 10 or 60min after the cisplatin challenge dose. Results: Low-dose (0.5, 0.75 and 1 mu m for 1h) hypersensitivity to cisplatin and increased resistance at higher doses was detected for the SCC-25 cell line, but not for its cisplatin-resistant derivative, SCC-25/CP. Pretreatment of SCC-25 cells with an acute low-dose of 5, 25cGy or 1Gy gamma -rays given 60min before a low-dose cisplatin challenge (0.1 and 1 mu m for 1h) resulted in a significant increase in resistance (p=0.2, 0.01 and < 0.001 respectively). For pretreatment of SCC-25 cells with similar lowdoses of gamma-rays 10min before the challenge cisplatin dose, the increased resistance was reduced or absent and was only significantly increased for pretreatment with 25cGy and a challenge cisplatin dose of 0.1 mu m for 1h (p=0.02). Similar acute low-doses of gamma-rays given either 10 or 60min after the challenge cisplatin dose did not increase resistance. Conclusions: The human squamous carcinoma cell line SCC-25 showed a low-dose hypersensitivity to cisplatin followed by increased resistance at higher doses. Treatment of SCC-25 cells with low-doses of gamma-rays can induce a protective effect to a subsequent low-dose cisplatin challenge.     

Pre-exposure of human squamous carcinoma cells to low-doses of gamma-rays leads to an increased resistance to subsequent low-dose cisplatin treatment.

PURPOSE: To investigate low-dose hypersensitivity to cisplatin and increased resistance at higher doses of cisplatin for the human squamous carcinoma cell line SCC-25 and its cisplatin-resistant derivative SCC-25/CP, and to examine the effects of pre- and post-treatment of SCC-25 cells with low-doses of gamma-rays on their resistance to cisplatin. MATERIALS AND METHODS: SCC-25 and SCC-25/CP cells were treated with various cisplatin concentrations (0.1 to 20 microM for 1 h) and assayed for survival using a conventional colony assay. For SCC-25, various doses of gamma-rays (5 cGy to 2.5 Gy) were given either 10 or 60 min before the cisplatin challenge dose as well as either 10 or 60 min after the cisplatin challenge dose. RESULTS: Low-dose (0.5, 0.75 and 1 microM for 1 h) hypersensitivity to cisplatin and increased resistance at higher doses was detected for the SCC-25 cell line, but not for its cisplatin-resistant derivative, SCC-25/CP. Pretreatment of SCC-25 cells with an acute low-dose of 5, 25 cGy or 1 Gy gamma-rays given 60 min before a low-dose cisplatin challenge (0.1 and 1 microM for 1 h) resulted in a significant increase in resistance (p=0.2, 0.01 and <0.001 respectively). For pretreatment of SCC-25 cells with similar low-doses of gamma-rays 10 min before the challenge cisplatin dose, the increased resistance was reduced or absent and was only significantly increased for pretreatment with 25 cGy and a challenge cisplatin dose of 0.1 microM for 1 h (p = 0.02). Similar acute low-doses of y-rays given either 10 or 60 min after the challenge cisplatin dose did not increase resistance. CONCLUSIONS: The human squamous carcinoma cell line SCC-25 showed a low-dose hypersensitivity to cisplatin followed by increased resistance at higher doses. Treatment of SCC-25 cells with low-doses of gamma-rays can induce a protective effect to a subsequent low-dose cisplatin challenge.     

粉防己碱对放射线的增敏作用与机理研究

目的探讨粉防己碱(Tet)在结肠癌中对X射线的增敏作用及机理。方法采用克隆形成测定法、流式细胞术、Western Blotting与分裂指数法检测Tet在体外对X射线的增敏作用与机理。使用肿瘤生长延缓实验检测Tet在体内对X射线的增敏作用。结果结肠癌HT-29细胞在受到X射线照射后，明显阻滞于G2／M期；Tet可以清除这种阻滞，并起到显著的增敏作用，其增敏比为1．63。进一步研究显示，HT-29细胞在受到x射线照射后，其chkl蛋白表达水平升高，Cyclin Bl表达水平明显降低，分裂指数也明显降低；在用Tet处理后，chkl蛋白表达水平降低，Cyclin Bl的表达水平明显增高，分裂指数也增高。体内实验结果表明，Tet明显引起受照射小鼠结肠癌C26生长延缓。Tet与X射线联合使用组的肿瘤生长延缓天数是单用X射线组的1．63倍，对照组的2．82倍。结论Tet是一种细胞周期关卡清除剂．体外和体内对X射线都有明显的增敏作用．     

咖啡酸苯乙酯靶向调控人结肠癌HT-29细胞FAK-ERK信号通路的研究

目的探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）对结肠癌HT-29细胞FAK-ERK信号转导通路中相关蛋白表达的作用,寻找其作用靶点,试图阐明CAPE抗肿瘤作用的分子机制。方法用不同浓度CAPE处理HT-29细胞,利用Hoechst33258染色法和流式细胞术,检测细胞凋亡的发生。应用Western印迹法分析不同浓度CAPE对HT-29细胞中黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulatedkinase,ERK）蛋白表达的影响。结果 Hoechst33258染色发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加。流式细胞仪细胞凋亡率分析显示,0,2.55,.0,7.5和10μg/ml处理HT-29细胞24 h后,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性。Western印迹结果显示,在0～10μg/ml范围内不同浓度CAPE作用于HT-29细胞24 h后,FAK、ERK蛋白表达随CAPE浓度的增加而下调。结论 CAPE可诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡,其作用机制可能与CAPE抑制FAK-ERK信号转导通路的激活有关。     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

新的肝细胞生长因子HPPCn的人多组织表达谱分析

目的观察新型肝细胞生长因子肝细胞生成素Cn（HPPCn）在人不同组织和细胞中的表达谱。方法采用Northen印迹和多组织芯片点杂交的方法,在mRNA水平上观察HPPCn在18种人肝源细胞系和非肝源细胞系中的表达水平,以及60种成人和7种胚胎组织中的分布。结果 HPPCn在脑、心、肝和肾中表达水平较高,而在肺、胸腺、横纹肌、结肠等组织中低表达,成年组织中的表达水平高于胚胎组织。HPPCn在肿瘤细胞中表达水平较高,在4种肝癌细胞系中的转录水平是正常肝细胞系L02的2～4倍。结论 HPPCn呈多细胞、多组织分布,在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。