微波快速脱钙及其脱钙液的选择

微波快速脱钙及其脱钙液的选择杨传红，赖晃文，唐赓云，姜秀英骨组织超薄切片的制备是进行骨组织超微结构研究的先决条件。常规脱钙方法时间太长且超微结构保存不良，不利于临床病理的快速诊断。我们选择不同脱钙液在微波条件下探讨快速脱钙的方法，以达到快速诊断的目的...     

三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果的比较

<正>骨组织是一种致密的结缔组织,细胞基质含有大量钙盐沉积,质地坚硬^[1]。骨组织必须进行脱钙处理才能制片,而脱钙过度会导致骨组织的结构被破坏,相关细胞表面抗原丢失,严重影响HE染色制片和免疫组化制片效果,影响病理诊断^[2]。脱钙液种类繁多,且尚未有相关文献报道各种脱钙液表面脱钙效果的优劣。本实验拟采用临床工作中常用的三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果进行比较,为病理医师选用合适的表面脱钙液提供参考。     

骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法

骨和牙体组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大。常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术。脱钙不好切片破碎甚至切不成片,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,染色不佳甚至染不上色,无法进行观察和研究。脱钙液和脱钙方法虽然很多,但目前尚无公认的理想方法,为此我们在骨和口腔疾病诊断及在大骨节病、氟中毒骨病和很多口腔疾病实验研究中,证明甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法效果优良。     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

盐酸脱钙液后脱钙在骨髓组织活检中的应用及体会

<正>骨髓组织活检是明确骨髓病变最主要的方法之一,但由于骨髓组织中含有大量的磷酸钙和碳酸钙,在常规制片中易致切片破碎、刀痕严重等问题,因此对骨髓组织进行充分的脱钙也显得格外重要[1-2]。目前在临床工作中,我们常使用的脱钙液有酸类脱钙液、电解质脱钙液、螯合剂脱钙液、离子交换树脂脱钙液等[2-3]。这些脱钙液作用机制不同,效果各有千秋[4]。在实际临床工作中我们对脱钙液选择的标准应该是效果强、时间短、对组织细胞形态以及对抗原影响小等[5]。本实     

不同脱钙方式对骨组织样本不同病理分析的影响

<正>骨与软组织肿瘤生物学特性复杂,在临床病理工作中有时依据形态学较难做出准确的病理诊断,需行免疫组化、FISH、PCR、Sanger测序及NGS等检测^[1]。骨组织质地坚硬,应使用脱钙液将组织软化后制片。目前,临床使用较多的仍为混合酸性脱钙液,其脱钙速度快,但易对组织抗原及DNA造成不可逆的损伤; EDTA性质温和,对组织抗原及核酸保存较好,但缺点是脱钙时间久且效果差。有研究显示改良EDTA常温处理骨髓样本20～24 h,HE染色佳,免疫组化染色强度适中,定位准确^[2]。     

微波-EDTA快速脱钙技术及其在免疫组化染色中的应用

在临床病理诊断和一些动物实验研究中,常常需要对骨组织进行脱钙处理,硝酸脱钙液的pH值低,对骨组织的抗原性影响大,给免疫组织化学染色造成不良影响,乙烯二胺四乙酸(ethylene diamine tetraceticacid,EDTA)脱钙液的pH值近中性,对组织结构、抗原     

一种简便快捷的骨及钙化组织脱钙液

脱钙是骨组织制片染色技术的关键步骤.在实践工作中以硝酸、盐酸为主配制的脱钙液,脱钙迅速,但对组织破坏程度大,影响以后染色.螯合剂是一种缓慢的脱钙剂,脱钙后染色分化仍佳,酶也不受破坏,但脱钙需花费2周至几个月时间,不能满足病理科日常工作的需求[1].现介绍一种混合脱钙液,它既对组织损害小,又简便快捷.它可促进脱钙并加快脱钙速度,同时又防止纤维性组织过度膨胀,减少对组织的破坏及对染色的影响.经此脱钙液制成的组织切片薄厚均匀,平坦完整,组织形态和细胞清晰,着色鲜艳.     

一种用于制作骨骼组织切片的新脱钙液

在日常病理工作中,对某些骨骼组织需作薄切片观察其细微结构,这就要对骨骼进行脱钙处理.通常使用的脱钙液有以硝酸、盐酸、甲酸为主配制的脱钙液、还有以铬酸和螯合剂配制的脱钙液.     

石蜡包埋组织块简易快速脱钙法

病理组织制片质量的优劣直接影响病理诊断，在临床病理活检和制片过程中，经常碰到骨组织脱钙不全或碎组织损伤刀口及病变软组织中夹带点状钙化灶，造成切片困难。笔者参考有关文献，在常规脱钙制片基础上不断改进，获得满意的效果，本法简便，快速易行，稳定可靠，有一定实用价值，现介绍如下。     

一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用

临床病理检查经常遇到骨及钙化组织标本,常规处理方法是先固定,待充分固定后进行脱钙处理,然后进入常规制片程序,到完成病理诊断需要较长的时间。如何在较短时间内完成固定、脱钙处理,其速度快、效果好,同时制成的切片又和常规处理的不含骨组织的切片一样,不影响对病变组织     

微波辅助脱钙技术在猪脱钙骨基质制备中的应用研究

以猪后腿骨干骺端为对象,考察微波辅助脱钙技术在脱钙骨基质制备过程中的作用.以脱钙骨的脱钙率考察微波对脱钙效果的影响;利用Micro-CT和显微镜观察脱钙骨的大体三维结构;利用Micro-CT测量其孔隙率,利用显微镜及Digimizer3.1软件测量其孔径大小;利用物性测试仪测量脱钙骨的压缩模量以表征其力学性能.结果表明,脱钙骨脱钙率的测量结果显示,与传统脱钙法相比,微波制备法仅需2h就可使脱钙率达到100％,脱钙时间可缩短82％;且制备的脱钙骨具有良好的孔隙率和互相连通的孔径结构,孔隙率达到85％以上,孔径大小为( 345±76) μm,与传统制备方法无显著差异(P＞0.05);并具有良好的力学性能,在脱除90％以上的钙后脱钙骨的压缩模量仍可达到7.11 N/mm2.微波技术可以有效提高脱钙骨基质的制备效率,且制备效果良好,为微波技术在脱钙骨制备领域的应用提供了试验依据.     

骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究

近年来为配合白血病、淋巴瘤等疾病的诊断而开展了骨髓穿刺活体组织病理检查,特别是2003年以来,为了配合“非典”患者治疗后期相继出现股骨头坏死等病症的科研工作,我科先后为中国医学科学院实验动物研究所及中国人民解放军军事医学科学院等科研单位制作了大量实验动物的骨组织标本的病理学切片。在制作这些骨组织病理切片的“脱钙-染色过程中”遇到了一些问题：骨组织脱钙不足（脱钙液浓度过低、时间过短）造成组织太硬,不易切片且极易脱片;骨组织脱钙过度（脱钙液浓度过高,时间过长）严重影响骨髓组织细胞染色效果,造成细胞核无法正常着色,要么细胞核不着色或着色很浅亦或被伊红染成红色,从而影响对病变组织的病理诊断及实验动物的研究工作。为解决出现的上述问题,我们在工作中认真仔细地分析研究了骨组织的特点,经过反复实验,摸索总结出一套适用于骨穿组织及实验动物骨组织的“脱钙-染色方法”,并获得了满意的结果,现将将此方法作一简单介绍以供读者参考。     

脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响

骨组织脱钙常规多采用酸性液体（如硝酸、盐酸、甲酸等）进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。为此我们对９例骨组织用乙二胺四乙酸二...     

四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景：由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的：选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法：将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论：14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸水溶液> 14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

微波技术在牙齿脱钙中的应用

牙齿脱钙既往均采用酸性脱钙液,所需时间长,组织和细胞结构保存欠佳。本文通过摸索发现用络合剂乙二酸四乙酸钠（EDTA）作为脱钙液,利用微波脱钙可大大缩短脱钙时间,且组织细胞结构保存很好,现介绍如下。1材料和方法1．1材料收集成年鼠牙32例,随机分为4组。1．2试剂配制（1）EDTA脱钙液：EDTA10g,蒸馏水100ml,加NaOH搅拌溶解后,用1mol．L－1HCI调pH至7．0,然后加4％甲醛15ml。（2）酸性脱钙液：浓HCl7ml,甲酸8ml,AlCl36g,蒸馏水100ml.1．3方法按下列4种方法进行：（1）EDTA十微波组：将牙齿放入装有EDTA脱钙液的…     

Formical-4脱钙剂在骨组织脱钙中的应用

在骨组织病理制片中，脱钙是至关重要的步骤之一。目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂，虽脱钙效果较好，但常造成组织形态，特别是细胞结构的破坏，使得病理形态观察受到影响。笔者使用一种快速脱钙剂Formical-4，不仅能够保持组织形态良好，亦能用于特殊染色和免疫组化标记，现介绍如下。     

表面脱钙法在骨髓组织病理诊断中的应用

<正>病理工作中常遇到骨或含骨的组织、伴大片钙化的组织,这些组织无法常规直接制片,传统方法是将这些组织固定后进行脱钙,使钙盐溶解组织变软后再脱水、透明、浸蜡、包埋制片。然而,常规脱钙处理往往导致组织染色效果欠佳、组织抗原丢失及DNA等核酸分子严重片段化等[1],有时     

骨钉和脱钙骨在骨创伤和骨缺损中的应用

目的：探讨同种异体冻干骨钉固定关节内骨折和脱钙骨移植治疗骨缺损的实用价值。方法：应用骨钉治疗关节内骨折７例，其中股骨头骨折４例，距骨骨折１例，内踝骨折２例；应用脱钙骨皮质骨条、松质骨粒移植治疗四肢骨折骨不连６例、骨良性病变切除术后骨缺损６例。结果：术后随访３～１２个月，骨钉固定者８个月后骨钉与宿主骨融合，脱钙骨皮质骨条和松质骨粒植骨者２～６个月愈合，无一例发生免疫排斥反应，近期效果满意。结论：认为骨钉为临床治疗关节内骨折提供了一种新的内固定材料，避免再次手术取内固定物，脱钙骨皮质骨条或骨粒适宜于骨不连和骨缺损的填充植骨治疗。     

石蜡包埋中骨髓标准化脱钙的应用

骨髓活检是用一支特制的穿刺针在患者髂前上棘或髂后上棘处取出1.0～2.0 cm长、直径0.1～0.2 cm的圆柱形骨髓.骨髓富含钙盐、一定量的脂肪及少许纤维支架,具有组织小而硬、脆、松的特点,必须经过脱钙后才能进行石蜡包埋,制成骨髓切片.本实验经过长期实践,总结出一套骨髓标准化脱钙处理方法,操作安全简便,不仅制成了高质...