结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值研究

目的：评价结核杆菌特异性抗原对结核病的诊断价值。方法分别以CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX单一或联合采用ELISA实验,计算敏感度、特异度、符合率、Youden指数。结果38KDa垣CE、38kDa垣HspX、38kDa垣CE垣HspX,灵敏度、特异度、符合率均在72%以上;38kDa垣CE垣HspX联合诊断,实测敏感度达80.39%、特异度18.99%,X线片结核空洞影敏感度97.06%（33/34）。结论单一与联合结核杆菌特异性抗原效用存在一定差异,38kDa垣CE垣HspX诊断效用相对较好。     

结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗效果的监测价值

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗疗效的监测意义。方法本研究采用T-SPOT.TB试剂盒,检测T细胞中γ-干扰素对结核分支杆菌特异性多肽类早期分泌性抗原靶标6-kD(ESAT-6)和培养滤液蛋白(CFP-10)的应答,对比113例结核感染者治疗前与治疗后T-SPOT.TB结果的变化,其结果根据对该试验中两种抗原的联合与各自应答来分析。结果113例感染者在治疗后T-SPOT.TB结果转阴者有42例(37.2%)。其中,CFP-10转阴率占48.9%(P<0.001),ESAT-6转阴率占20.0%(P=0.238)。ESAT-6的斑点形成细胞(SFCs)/2.5×105外周血单核细胞(PBMCs)的平均数在治疗前和治疗后分别为18.47和16.29(P=0.16),而CFP-10的SFCs/PBMCs的平均数在治疗前和治疗后分别为22.83和15.31(P<0.01)。结论结核病治疗对于T细胞中γ-干扰素引起的ESAT-6和CFP-10抗原应答影响不同,CFP-10的定量应答才是结核病治疗的更有效监测手段。     

结核分枝杆菌6 kD早期分泌靶抗原单克隆抗体的制备及其特异性分析

目的 制备结核分枝杆菌(Mtb)6 kD早期分泌靶抗原(ESAT-6)单克隆抗体(mAb)并分析其特异性。方法 用亲和层析法纯化目的蛋白ESAT-6,并用该蛋白免疫小鼠。分离免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌mAb的杂交瘤细胞系。制备腹水并纯化mAb。酶联免疫吸附试验法分析mAb亚类和相对亲和力,蛋白印迹法检测其特异性。结果 制备了可分泌ESAT-6抗体的杂交瘤细胞系,获得了纯化的mAb。mAb亚型为IgG1,相对亲和力为3.9×10^-5。该mAb可特异性识别Mtb的ESAT-6。结论 制备抗ESAT-6的mAb为ESAT-6用于结核病诊断与防治制剂及其机制研究奠定了基础。     

结核感染T细胞斑点试验在鉴别结核性与恶性胸腔积液中的价值研究

目的:探究结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在鉴别结核性和恶性胸腔积液中的价值.方法:选取胸腔积液患者407例为研究对象,分为结核性胸腔积液组(328例)和恶性肿瘤胸腔积液组(79例).比较两组患者胸腔积液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB检测结果及胸腔积液与外周血T-SPOT.TB差值.通过受试者...     

结核杆菌分泌抗原蛋白对结核性脑膜炎诊断的研究

结核是一个通过呼吸道传播的具有高度传染性的疾病,全世界每年大概有九百万的新发结核患者和一百七十万的死亡患者。在某些地域,如非洲,受到艾滋病的影响,结核病更是泛滥。而我国,是仅次于印度的世界第二的结核大国,传统用来诊断结核感染的方法如PPD试验因BCG(卡介苗)的接种会     

和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择最适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原最适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.     

前列腺特异性抗原对前列腺癌早期诊断的价值

目的 探讨血清前列腺特异性抗原(PSA)、游离前列腺特异性抗原(FPSA)、前列腺特异性抗原密度(PSAD)对经前列腺癌早期诊断的价值.方法 对128例[其中确诊为前列腺癌32例,非前列腺癌患者中28例有前列腺上皮内瘤形成(PIN)]经直肠前列腺穿刺活检诊断的患者PSA、FPSA、FPSA/PSA比值、PSAD等计量资料以及分区域计数资料与病理诊断结果进行分析,探讨PSA、FPSA、FPSA/PSA、PSAD与前列腺癌的关系.结果 前列腺癌和非前列腺癌患者PSA(P＜0.001)和PSAD都存在显著差异(P＜0.01),FPSA/PSA存在差异(P＜0.05);将无前列腺癌及癌前病变、非前列腺癌存在PIN改变、前列腺癌患者分别作为第一、二、三组分组进行比较,第一、三组患者PSA(P＜0.001)和PSAD存在显著差异(P＜0.01),FPSA/PSA存在差异(P＜0.05);第二、三组患者PSA(P＜0.01)和PSAD都存在显著差异(P＜0.01),FPSA/PSA无显著差异(P＞0.05);第一、二组患者之间无显著差异.结论 PSA是早期诊断前列腺癌的重要线索,结合 FPSA/PSA比值对早期诊断前列腺癌有较大意义,PSAD可以作为前列腺癌早期诊断的辅助指标.     

脑脊液结核杆菌抗原及核酸联合检测对结核性脑膜炎早期诊断的评价

目的:结核性脑炎是目前临床上常见的疾病,也是结核病中最严重的病型.由于结核分枝杆菌生物性状的特珠性,致使本病在临床上诊断较为困难,同时早期诊断和及时抗痨治疗,对本病的疗效起着重要的作用,目前本病还没有一个统一的诊断标准.常规方案是根据临床(A)、脑脊液常规(B)、头颅CT(C)、神经系以外结核(D),一般都是采取综合的方法进行判断,依据数据多,所需时间长,对本病的疗效影响很大,探讨一种便于早期诊断、特异性高、操作简单的方法,是临床迫切解决的问题;据报道单独利用PCR技术检测脑脊液中的核酸提高检出率,亦有检测结核杆菌原来提高检出率,都收到了一定的效果,但仍不理想.方法:自2008年至2010年间住院的脑膜炎的病人150例,在常规做脑脊液检查的同时,保留脑脊液标本,集中测定结核杆菌核酸和结核杆菌抗原结果.结果 两项试验同时阳性者占65%,核酸阳性而抗原阴者占20%,核酸阴性抗原阳性者占7.5%.结果:①说明两试验有相同的诊断份值,②说明,但阳性率还只能满足临床要求;③三种阳性模式总阳性率为92.5%,与阴对照组相比有显著差异,(P＜0.01);结论:对于该病的早期诊断有很大的意义.     

痰涂片检查联合结核杆菌培养诊断肺结核的临床意义

目的探讨痰涂片检查联合结核杆菌培养诊断肺结核的临床意义。方法回顾性分析2016年7月至2018年4月于郑州中医骨伤病医院接受治疗的102例肺结核患者的临床资料,所有患者均接受痰涂片检查与结核杆菌培养,对比痰涂片检查、结核杆菌培养与两项联合法对清晨痰、即时痰的阳性检出率。结果结核杆菌培养对清晨痰、即时痰的阳性检出率(88.23%、86.27%)比痰涂片检查(58.85%、50.98%)高,两项联合法对清晨痰、即时痰的阳性检出率(98.04%、98.04%)比痰涂片检查、结核杆菌培养高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论痰涂片检查联合结核杆菌培养在肺结核诊断中的应用价值较高,可有效提高痰液标本的阳性检出率。     

38kDa抗原用于肺结核血清学诊断的meta分析

目的系统评价38kDa抗原对肺结核的诊断价值并作meta分析。方法制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索Pubmed,EMBASE,BIOSIS,WebofScience以及维普、万方、中国知网（日期：1990年1月01日-2009年11月30日。纳入的文献采用QUADAS进行质量评价,用MetaDisc1．4软件进行meta分析。结果符合标准的共有26个研究,备研究间存在畀质性,但不存在阈值效应。合并后的诊断优势比为29．48195％C1（14．43～60．26）1,敏感度为O．53195％CI（0．51-0．55）],特异度为O．94195％CI（0．93～0．95）],阳性似然比为14．22195％CI（6．77—29．89）】,阴性似然比为0．51195％CI（0．45～0．57）]。SROC曲线的AUC面积为0．730,Q＊指数为0．667。结论血清38kDa诊断肺结核的效能中等,不能取代痰涂片检查。     

结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定

目的　克隆并表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6的编码基因 ,为研究其免疫功能奠定基础。方法　以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板 ,用PCR对ESAT 6基因进行扩增 ,扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3 1/Zeo( )中。对重组表达载体pcDNA ESAT 6进行酶切、PCR及测序鉴定。经鉴定无误的重组质粒用DEAE 葡聚糖法转染COS 7细胞 4 8h后 ,用Trizol法提取转染细胞总RNA进行RT PCR鉴定。结果　重组质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,并能在COS 7细胞中有效表达。结论　结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6真核重组表达质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,为进一步研究ESAT 6和CFP 10的免疫原性、免疫保护性及其二者之间的相互作用奠定了基础     

重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达

目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性。方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析。将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性。结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别。结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10。     

结核杆菌ＥＳＡＴ-６抗原多表位ＤＮＡ疫苗的构建与表达

目的:构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Fh3配体基因的重组质粒,并使其在大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中表达.方法:用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱,选取3个T细胞表位,并以Ala-Ala-Tvr(AAY)序列作为接头,合成全基因序列,定向克隆入真核双表达载体pIRES及质粒plRES-FL.在酶切分析与序列测定后.用PEI转染至GMCs细胞,并行Western blot鉴定其体外表达.结果:核酸序列测定证实重组质粒构建正确,Western blot证实该重组质粒能在体外GMCs细胞中表达融合蛋白.结论:成功构建了结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因重组质粒.     

结核分枝杆菌CFP10诊断抗原基因的克隆及序列特性分析

目的扩增结核分枝杆菌培养滤液蛋白10基因（CFP10）,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析,为研究结核病候选诊断抗原基因奠定基础。方法以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌CFP10抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由303bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆CFP10基因,经DNA测序证实,该片段阅读框完整,为其原核表达及相关研究奠定了基础。     

结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

目的　构建分泌性表达结核分枝杆菌抗原蛋白 ESAT- 6的重组卡介苗。方法　分别以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌 H37Rv株基因组 DNA为模板 ,通过 PCR扩增得到约 117bp的 BCGα抗原 (α- Ag)信号肽序列和 2 85 bp的结核杆菌 esat- 6基因序列。将 esat- 6基因与大肠杆菌 -卡介苗穿梭质粒载体 p MV2 6 1重组 ,得到重组质粒 p ME。再将 BCGα- Ag信号肽序列克隆至 p ME中 ,得到重组质粒 p SME。结果　质粒 p SME用双酶切和 PCR扩增鉴定证实 ,克隆基因 α- Ag信号肽序列和 esat- 6正确插入载体 p MV2 6 1。结论　重组质粒 p SME可望在 BCG中分泌性表达结核分枝杆菌的免疫保护性抗原蛋白 ESAT- 6 ,该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型结核病疫苗奠定了基础     

结核杆菌ESAT-6抗原及Flt3配体双表达核酸疫苗的构建与体外表达

目的:构建可同时表达flt3配体(flt3-ligand,FL)和结核杆菌6kD早期分泌蛋白(ESAT-6)的重组pIRES质粒,并在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中表达,为进一步研究结核杆菌DNA疫苗提供实验基础.方法:采用PCR方法将FL和ESAT-6基因分别定向克隆入真核双表达载体pIRES.在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至GMC细胞,Western blot鉴定其体外表达.结果:核酸序列测定证实重组质粒构建正确,该重组质粒在体外GMC细胞中能表达FL和ESAT-6两种蛋白.结论:成功构建了结核杆菌FL和ESAT-6双顺反子真核表达质粒,并在体外实现了共表达.     

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化

目的　构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。　方法　用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a( ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。　结果　从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。　结论　利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。     

结核分枝杆菌CFP-10蛋白的克隆及表达

目的通过构建结核分枝杆菌CFP-10蛋白表达载体,在大肠杆菌表达,为探索重组多肽在结核病血清学诊断的应用奠定前期实验基础。方法用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出CFP-10基因片段,连接到表达载体PET30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签（His-Tag）镍柱层析纯化重组蛋白。结果构建了含CFP-10重组质粒的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶性蛋白形式存在。结论 CFP-10蛋白基因克隆入宿主菌中并表达成功。