迷迭香酸对MPP~+导致MES 23.5细胞损伤保护作用

目的观察迷迭香酸对1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP+)所致MES 23.5细胞损伤的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测方法,观察不同浓度的迷迭香酸对MPP+处理的MES 23.5细胞的保护作用。结果 10-9~10-6mol/L的迷迭香酸对MES 23.5细胞无毒性作用(F=0.581,P>0.05)。200μmol/L的MPP+可使细胞存活率降低(F=44.863,P<0.01),而应用10-9~10-6mol/L的迷迭香酸预孵育细胞后,能明显提高细胞的存活率(P<0.01)。结论迷迭香酸能拮抗MPP+对MES 23.5细胞的毒性作用,具有一定的神经保护作用。     

佛波醇酯对MES 23.5细胞铁调节蛋白1表达的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波醇酯(PMA)对MES 23.5细胞中铁调节蛋白1(IRP1)的激活作用。方法采用MTT法观察细胞的存活率,Western Blot法检测IRP1和铁转出蛋白(Fpn1)的表达变化。结果 0.01~2.00μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,细胞存活率无明显变化(F=3.050,P>0.05)。0.20μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,IRP1表达明显上调(t=4.501,P<0.01),Fpn1表达明显下调(t=5.174,P<0.01)。结论 PMA在多巴胺能神经细胞系MES 23.5细胞中能明显激活IRP1。     

淫羊藿总黄酮对MPP＋诱导MES23．5细胞损伤保护作用

目的 探讨淫羊藿总黄酮对1-甲基-4-苯吡啶离子（MPP＋）诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用.方法 MES23.5细胞常规培养,淫羊藿总黄酮预处理24 h,再用MPP＋和淫羊藿总黄酮共同处理细胞24 h,MTT法检测细胞的存活率,实时反转录聚合酶链反应（real time RT-PCR）观察bcl-2和bax基因的表达情况.结果 MPP＋可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞（F=18.38,P〈0.001）;淫羊藿总黄酮预处理可明显对抗MPP＋的毒性作用 （F=44.36,P〈0.001）;MPP＋对bcl-2基因表达没有明显影响,但可明显增加bax基因的表达（F=10.92,P〈0.05）;淫羊藿总黄酮预处理可明显增加bcl-2基因的表达（F=15.76,P〈0.01）,并可逆转bax基因表达的增高（F=10.92,P〈0.05）.结论 淫羊藿总黄酮可明显对抗MPP＋对MES23.5神经细胞的损伤,其作用机制可能与抗凋亡有关.     

扇贝多肽对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。     

齐墩果酸对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨齐墩果酸对氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法体外培养HUVEC,以维生素E（200μmol/L）或齐墩果酸（5-40μmol/L）预处理细胞24h,再加入200mg/L oxLDL继续培养24h造成细胞损伤。采用MTT法检测各组细胞存活率,同时检测细胞丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原型谷胱甘肽（GSH）含量,采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧（ROS）含量。结果与正常组比较,200mg/L oxLDL组细胞存活率、SOD活性、GSH含量明显降低,MDA、ROS含量明显增加,差异均有统计学意义（F=67.72-173.25,q=11.46-30.86,P〈0.01）;与200mg/L oxLDL组比较,齐墩果酸在5-20μmol/L浓度范围内,可剂量依赖性提高细胞存活率、减少MDA含量及ROS形成、增加GSH含量及SOD活性（q=4.26-22.35,P〈0.05）。结论齐墩果酸能抑制ox-LDL诱导的HUVEC氧化损伤,其机制可能与维持SOD活性,减少ROS释放、MDA生成及GSH消耗有关。     

甘珀酸增强RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的 探讨铁死亡诱导剂RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞（I-10/DDP）增殖、侵袭和迁移能力的影响以及甘珀酸对RSL3抗耐药睾丸癌活性的作用。方法 MTT法检测不同浓度RSL3（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）及合用甘珀酸（100 μmol/L）作用后I-10/DDP细胞的存活率、铁死亡抑制剂Fer-1（2 μmol/L）的作用下RSL3（4 μmol/L）及甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（4 μmol/L）处理后I-10/DDP细胞的存活率。后续实验分为Control组、甘珀酸（100 μmol/L）组、RSL3（2 μmol/L）组、甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（2 μmol/L）组,采用集落克隆实验检测细胞增殖能力、划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力。Western blot检测GPX4水平、C11 BODIPY 581/591荧光探针检测lipid 活性氧（ROS）水平、FerroOrange荧光探针检测Fe2+水平。结果 RSL3呈浓度依赖性降低I-10/DDP细胞存活率,且在RSL3浓度2、4、8 μmol/L 时,合用甘珀酸后细胞存活率显著降低（P<0.05）;与Control组相比,RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数减少、划痕愈合率减小（P=0.012）、侵袭和迁移细胞数减少（P<0.001）;与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数显著减少、划痕愈合率显著减小（P=0.005）、侵袭和迁移细胞数显著减少（P=0.001,P=0.002）。Fer-1降低单用RSL3、甘珀酸合用RSL3对I-10/DDP细胞增殖的抑制率（P<0.01）;与Control组相比,RSL3作用后细胞内GPX4水平降低（P=0.001）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平升高;且与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后细胞内GPX4水平明显降低（P=0.01）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平明显升高。结论 RSL3可诱导耐顺铂睾丸癌细胞发生铁死亡,并能抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力;甘珀酸通过促进RSL3诱导的铁死亡从而增强RSL3的抑制作用。     

淫羊藿总黄酮对MPP~+诱导MES23.5细胞损伤保护作用

目的探讨淫羊藿总黄酮对1-甲基-4-苯吡啶离子(MPP+)诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用。方法 MES23.5细胞常规培养,淫羊藿总黄酮预处理24 h,再用MPP+和淫羊藿总黄酮共同处理细胞24 h,MTT法检测细胞的存活率,实时反转录聚合酶链反应(real ti me RT-PCR)观察bcl-2和bax基因的表达情况。结果 MPP+可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞(F=18.38,P<0.001);淫羊藿总黄酮预处理可明显对抗MPP+的毒性作用(F=44.36,P<0.001);MPP+对bcl-2基因表达没有明显影响,但可明显增加bax基因的表达(F=10.92,P<0.05);淫羊藿总黄酮预处理可明显增加bcl-2基因的表达(F=15.76,P<0.01),并可逆转bax基因表达的增高(F=10.92,P<0.05)。结论淫羊藿总黄酮可明显对抗MPP+对MES23.5神经细胞的损伤,其作用机制可能与抗凋亡有关。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂对17β-雌二醇作用下Ishikawa、HEC-1A细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002 对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断PI3K/Akt通路治疗子宫内膜癌的可能性. 方法:应用MTT法(10-10 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L、10-4 mol/L的E2或10-6 mol/L E2及0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L的LY294002)、流式细胞技术(0 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L E2或10-6 mol/L E2及0 μmol/L、1 μmol/L、50 μmol/L LY294002)观察LY294002对E2作用下子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:随着E2浓度的增加,Ishikawa细胞A(570 nm)值逐渐升高并呈时间依赖性(F=3.915,P=0.043),G0-G1期比例下降(F=50.926,P≤0.001),S期比例升高(F=17.836,P=0.001);而HEC-1A细胞周期各期比例无变化(P＞0.05).随着 LY294002浓度的增加,2种细胞A(570 nm)值逐渐下降并呈现时间依赖性(F=10.398,P=0.001;F=5.542,P=0.043),而且G0-G1期比例(F=32.024, P≤0.005;F=14.725,P≤0.017)升高,S期(F=30.132, P≤0.001;F=24.72,P≤0.01)比例下降.50 μmol/L和100 μmol/L LY294002作用2种细胞48 h后,凋亡细胞百分比均增加(P＜0.001).结论:LY294002可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的增殖,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展,使细胞周期停滞在G1期.PI3K/Akt信号传导通路可作为治疗子宫内膜癌的新靶点.     

人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路.方法 MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B (Akt) 表达的影响,MTT法观察细胞的存活率.结果 6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01).结论 人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用.