抗核糖核酸酶抑制因子抗体的制备与纯化

目的 :制备并纯化抗核糖核酸酶抑制因子 (RI)的抗体。方法 :从人胎盘中提取RI,经亲和层析纯化后免疫家兔制备RI抗体。用rProteinASepharoseFastFlow层析对抗RI抗体进行纯化 ,并用SDS PAGE、ELISA及Westernblot等进行鉴定。结果 :制备并纯化了抗RI抗体 ,经SDS PAGE分析达到了电泳纯。结论 :获得了效价高、特异性强、稳定性好的抗RI抗体 ,为对其深入研究奠定了基础     

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究

目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY) 的制备方法及其生物学活性，为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。 方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY；SDS-PAGE 测定各级提取物的抗体纯度；间接ELISA 法和双向免疫扩散法观察效价变化；动物体外中和实验检测其生物活性。 结果:卵黄经水稀释法及经60% 硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%；进一步经阴离子交换层析，总蛋白回收率14.86%，效价提高24倍；IgY分子量约为220 kD，由两个亚基组成；体外中和试验表明，2.28 mg/kg 特异性IgY能完全中和2 LD50 的眼镜蛇毒，保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。 结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源，经水提、盐析、层析三级提取，可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。     

抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定

目的:制备特异性抗肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的卵黄抗体并检测其生物学性能,这对EV71感染手足口病的预防和治疗具有重大的意义。方法:用纯化并灭活后EV71作为抗原免疫健康产蛋鸡。采用本实验室水提综合聚乙二醇法提取纯化鸡卵黄抗体;用Bradford法测定卵黄抗体提取液的蛋白含量;还原性SDS-PAGE凝胶电泳分析测定提取蛋白的纯度及相对分子质量;分别用ELISA、双向免疫琼脂扩散检测纯化特异性卵黄抗体抗EV71效价;Western blot分析特异性卵黄抗体的免疫反应性。结果:卵黄中卵黄抗体含量达7.76 mg/ml,卵黄抗体的纯度为94.86%。初免10天后蛋黄中可检测到特异性抗EV71卵黄抗体,初免40天后ELISA检测抗体效价高达1∶20 480,双向琼脂扩散检测效价达1∶16。提取的卵黄抗体具有良好的免疫反应性,能与EV71特异性结合。结论:水提综合聚乙二醇法提取纯化得到的抗EV71卵黄抗体产量和纯度高、效价好且具有良好的免疫反应性。     

抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性

目的制备特异性抗痢疾志贺氏菌的鸡卵黄免疫球蛋白,研究母鸡对痢疾志贺氏菌的免疫应答规律及抗体的稳定性。方法以两种不同剂量的痢疾志贺氏菌作为抗原免疫产卵母鸡,应用酶联免疫吸附测定法检测抗痢疾志贺氏菌IgY的效价及其稳定性。结果初次免疫后第12天,卵黄中开始出现抗痢疾志贺氏菌的IgY,免疫应答持续时间超过25周。稳定性试验表明IgY在pH3-11,温度不超过60℃,蔗糖质量浓度不高于700 g/L的渗透压条件下活性稳定。结论用痢疾志贺氏菌免疫母鸡制备的IgY效价高,理化性质稳定。     

眼镜王蛇毒单克隆抗体的制备

目的:应用眼镜王蛇毒基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体(mAb).方法:应用眼镜王蛇Oh-3基因真核表达质粒pIRES-Oh3,佐以脂质体制成基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同源Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,制备mAb.结果:获得了2株分泌抗眼镜王蛇毒mAb的杂交瘤细胞株(F5、 F11),细胞培养上清液的抗体效价分别为3.2×10-1、 6.4×10-1,腹水抗体效价分别为1.28×10-4、 2.56×10-4.结论:成功地制备了2株眼镜王蛇毒mAb.     

双价抗蛇毒鸡卵黄抗体制备与生物活性研究

目的 通过双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(bivalent anti-snake venom immunoglobulin yolk,双价IgY)的制备及其相关特性研究,为多价抗蛇毒IgY的制备和应用奠定基础.方法 两种单一抗原(舟山眼镜蛇、圆斑蝰泰国亚种)按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价IgY;测定双价IgY效价(间接ELISA法)、交叉免疫特性(双向免疫扩散试验)及对溶膜活性(溶膜试验)、半数致死量(LD50)的中和作用.结果 初次免疫后第28-42天,以水稀释法提取的双价IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1:12 800和1:6400.双价IgY与眼镜蛇亚科、蝰业科6种蛇毒有明显的交叉免疫反应,而与蝮亚科4种蛇毒的交叉免疫反应不明显.双价IgY能显著降低眼镜蛇、蝰蛇毒对鸡卵黄膜的溶膜作用,也能显著延长眼镜蛇和蝰蛇伤小鼠的存活时间(P<0.05),同等剂量的双价lgY提高眼镜蛇伤存活率优于蝰蛇伤.结论 双价IgY能够显著中和眼镜蛇、蝰蛇毒的溶膜和致死活性,能有效保护机体免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击.     

蝰蛇毒压电免疫传感器固定方法的研究

目的：为研制蝰蛇毒压电免疫传感器，研究抗蛇毒抗体固定于石英晶体银电极表面的固定技术。方法：采用马抗蝰蛇毒血清抗体和抗蝰蛇毒鸡卵黄抗体作为生物敏感材料，对比研究了胱胺自组装-PSS反相吸附法和PEI粘附-戊二醛交联法：比较了采用两种固定方法所制的压电免疫传感器的性能。结果：鸡卵黄抗体采用PEI粘附-戊二醛交联法效果较好，其制备的IgY压电免疫传感器检测蝰蛇毒灵敏度为0．5ug／mL；而马血清抗体用胱胺自组装-PSS反相吸附法较好，其制备的IgG’免疫传感器检测蝰蛇毒灵敏度为10ug／mL。结论：以PEI粘附-戊二醛交联法固定抗蝰蛇毒鸡卵黄抗体所制备的蝰蛇毒压电免疫传感器的性能稳定，特异性好，可实现蛇毒的快速检测。     

单克隆抗-HBc抗体亲和层析纯化大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究

本文报道了用单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱大量纯化大肠杆菌合成的HBcAg。经单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱一步纯化的HBcAg,它的比活性从94·12单位/mg蛋白提高到12851.40单位/mg蛋白,提高了136.54倍。纯化的HBcAg紫外光谱分析证明是单一的蛋白成分。免疫电镜观察结果证明,纯化的大肠杆菌来源的乙肝病毒核心抗原相似于肝脏来源的乙肝病毒核心抗原的典型形态和大小。 亲和层析纯化的E-HBcAg,用SDS和2-巯基乙醇处理后,纯化的E-HBcAg转化为E-HBeAg。转化的E-HBeAg能被抗-HBe抗体特异性地完全中和。而不被抗-HAV、抗-HBs、正常人血清、小牛血清中和。但是,它能部分的被纯-HBc抗体中和。     

生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定

目的在成功制备中和性生长抑素(SS)单克隆抗体的基础上,制备了SS抗独特型卵黄抗体Ab2,鉴定其生物学特性,探讨其在促进动物生长方面的应用。方法用对SS具有免疫中和性的单克隆抗体2E7免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用稀释和酸化沉淀法除脂蛋白,用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体Ab2。用间接ELISA检测卵黄Ab2的特异性、效价和浓度,用竞争抑制和动物免疫检测卵黄Ab2β,用动物实验检测卵黄Ab2β促进鸡生长的效力。结果该SS抗独特型卵黄抗体Ab2效价为10~(-5),含量为8 mg/mL。且与兔抗SS抗体发生免疫反应,不与兔抗生长激素抗体、兔抗胰岛素抗体、兔抗胃泌素抗体发生免疫反应。该SS卵黄Ab2能和异种动物兔产生的SS抗体发生免疫反应,该免疫反应能被SS竞争抑制,该SS卵黄Ab2能诱导小鼠产生SS Ab3,该SS Ab3能和SS发生免疫反应,说明它是SS卵黄Ab2β。用其作疫苗,以0.8μg/只和3.2μg/只分别皮下注射免疫小鼠,以0.8μg/羽和3.2μg/羽分别肌肉注射免疫鸡,以3.2μg/尾浸泡免疫多宝鱼。一个月后,实验小鼠平均体质量比对照组分别增加33.5%和37.9%,实验鸡平均体质量比对照组分别增加25.6%和34.1%,实验鱼平均体质量比对照组增加24.8%。结论成功制备了特异性强、效价高的SS卵黄抗体Ab2β,以其作疫苗免疫动物,以较小剂量一次性免疫即可产生显著的促鸡和多宝鱼生长效果。     

单克隆抗-HBc抗体亲和层析纯化大肠肝菌合成的HBcAg转化为 HBeAg的研究

本文报道了用单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱大量纯化大肠杆菌合成的HBcAg。经单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱一步纯化的HBcAg,它的比活性从94.12单位/mg蛋白提高到12851.40单位/mg蛋白,提高了136.54倍。纯化的HBcAg紫外光谱分析证明是单一的蛋白成分。免疫电镜观察结果证明,纯化的大肠杆菌来源的乙肝病毒核心抗原相似于肝脏来源的乙肝病毒核心抗原的典型形态和大小。 亲和层析纯化的E-HBcAg,用SDS和2-巯基乙醇处理后,纯化的E-HBcAg转化为E-HBeAg。转化的E-HBeAg能被杭-HBe抗体特异性地完全中和。而不被抗-HAV、抗-HBs、正常人血清、小牛血清中和。但是,它能部分的被纯-HBc抗体中和。     

Cracking the egg: An insight into egg hypersensitivity

Hypersensitivity to the chicken egg is a widespread disorder mainly affecting 1–2% of children worldwide. It is the second most common food allergy in children, next to cow's milk allergy. Egg allergy is mainly caused by hypersensitivity to four allergens found in the egg white; ovomucoid, ovalbumin, ovotransferrin and lysozyme. However, some research suggests the involvement of allergens exclusively found in the egg yolk such as chicken serum albumin and YGP42, which may play a crucial role in the overall reaction. In egg allergic individuals, these allergens cause conditions such as itching, atopic dermatitis, bronchial asthma, vomiting, rhinitis, conjunctivitis, laryngeal oedema and chronic urticaria, and anaphylaxis. Currently there is no permanent cure for egg allergy. Upon positive diagnosis for egg allergy, strict dietary avoidance of eggs and products containing traces of eggs is the most effective way of avoiding future hypersensitivity reactions. However, it is difficult to fully avoid eggs since they are found in a range of processed food products. An understanding of the mechanisms of allergic reactions, egg allergens and their prevalence, egg allergy diagnosis and current treatment strategies are important for future studies. This review addresses these topics and discusses both egg white and egg yolk allergy as a whole.