应用改良AP-PCR技术进行食管癌相关基因分析

:目的　应用改良的随机引物聚合酶链反应(AP-PCR)技术,分离配对的食管癌组织和非癌食管组织中差异基因片断,并进行克隆、测序和序列分析。方法　在来自食管癌高发区的22例配对的食管癌组织和非癌食管组织中,应用AP-PCR技术测检了差异基因片段。结果　22例配对食管癌组织和非癌食管组织中,6例癌组织中有差异随机扩增片断,而相应的非癌组织缺如。其中5T差异基因片断为10kb左右,经克隆、测序和序列的同源性分析,基因文库内无同源序列。结论　5T差异基因片断是否为一个新的侯选基因或癌基因标志物,有待进一步筛查。     

人食管癌与NMBzA引起的人和猴食管上皮细胞中多种抑癌基因变…

为了研究人原发性食管癌组织中多种抑癌基因突变谱与甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）引起的人和猴食管上皮细胞中多种抑癌基因突变谱的相关性。我们应用ＰＣＲ扩增与直接测序技术分析了人原发性食管癌和ＮＭＢｚＡ处理的人和猴食管上皮细胞中多种抑癌基因ｐ５３，Ｒｂ，ＡＰＣ和ＭＣＣ的突变谱；发现４０．９％（９／２２）的人原发性食管癌ｐ５３基因突变与ＮＭＢｚＡ处理的人和猴食管上皮细胞中ｐ５３基因的突变相同，也发现ＮＭＢｚ     

nm23基因在食管癌中表达的免疫组化研究

目的研究ｎｍ２３基因表达与食管癌生物学行为和预后的关系。方法应用免疫组织化学ＳＰ法检测７６例食管鳞状细胞癌手术标本中ｎｍ２３表达。结果食管癌原发灶癌组织中ｎｍ２３表达阳性率８１．６％，癌旁形态学正常食管粘膜ｎｍ２３阳性率３６．８％，差异具有显著性意义（Ｐ＜０．００１）；食管癌ｎｍ２３高表达者的区域淋巴结转移发生率（５８．２％）明显高于低表达者（２２．２％，Ｐ＜０．００５）；ｎｍ２３表达水平与癌组织浸润食管深度及食管癌ＴＮＭ分期呈正相关，统计学均具有显著性意义（分别为Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０２）；ｎｍ２３低表达的患者术后三年和五年生存率分别为６０．０％和５１．６％，显著高于ｎｍ２３高表达者（３８．７％和２２．６％），Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１。结论ｎｍ２３基因过度表达与食管鳞状细胞癌的浸润及淋巴结转移有关，是预后不良的指标     

p73基因在食管癌中的转录表达及其意义

目的：检测p73 mRNA在食管癌中的表达情况，探讨p73基因在食管癌发生、发展中的角色和作用机制。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术（RT－PCR）检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73 mRNA的转录表达，并探其与食管癌临床病理特性的关系。结果：37例食管肿瘤组织中有21例（15．8％）p73 mRNA过度表达，其过度表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织（P＜0．05），但与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论：食管肿瘤组织中存在p73基因的过度转录表达，可能参与了调控食管癌的发生过程，它的存在并没有阻止食管癌的进展，在食管癌中可能没有担当起主要的抑癌作用。     

人端粒酶hTRT在癌旁黏膜上皮和食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的 研究食管黏膜鳞状上皮和食管鳞癌组织中端粒酶hTRT的表达，并探讨其与食管癌发生、发展的关系。方法 应用免疫组化S—P法，观察10例正常食管黏膜、35例癌旁食管黏膜上皮，120例食管癌组织微阵列中端粒酶hTRT的表达情况。结果 正常食管黏膜鳞状上皮细胞末见端粒酶hTRT阳性表达，癌旁黏膜上皮和癌组织端粒酶hTRT阳性表达串分别为94．3％和81．7％。癌组织hTRT的表达与癌组织的组织学分级、浸润深度和淋巴结转移无关(P＞0．05)。结论 端粒酶hTRT的激活表达与食管黏膜上皮的恶性转化密切相关，端粒酶hTRT的重新激活可能在食管癌的组织发生中起关键性作用。     

p73蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p73蛋白与食管癌临床病理特征的关系及其临床意义。方法 采用免疫组化技术检测37例食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73蛋白的表达情况。结果 37例食管癌组织中有18例（48．6％）p73蛋白呈过度表达，其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常食管组织（P＜0．05）；食管癌组织中p73蛋白过表达与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论 p73蛋白在食管癌组织中呈高水平表达，p73蛋白可能参与了食管癌的发生、发展过程。     

食管癌组织端粒酶活性的研究

目的：检测食管癌及周围非癌食管粘膜活性、了解食管癌发生可能的分子生物学基础。方法：应用ＴＲＡＰ法对３３例食管及１８例癌周正常食管粘膜进行端粒酶活性测定。结果：食管癌组织２８例（８４．８％）表达阳性,癌周组织２例（１１．１％）表达阳性。端粒酶活性表达与食管的性别,民族,肿瘤部位,分化程度,有无淋巴结转移等似乎无关。结论：端粒酶活化与食管癌发生有关,并可为食管肿瘤早期诊断与治疗提供可靠的指标与线索     

中期因子在食管癌中的表达及其意义

目的：研究中期因子(midkine，MK)蛋白在食管癌中的表达情况。并探讨MK与其生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学S-P法，检测45例食管癌患者手术切除标本、10例正常食管黏膜组织及配对癌旁组织MK蛋白的表达情况。结果：MK在食管癌中为高表达(表达率为77．8％)。与食管癌的组织分化程度、癌组织浸润深度有统计学意义上的相关性，而与肿瘤部位及淋巴结转移无统计学意义上的相关性。结论 MK与食管癌的形成及肿瘤分化程度、浸润深度有关。     

食管癌及癌前病变组织P53蛋白表达的研究

对１９７例食管内窥镜活检组织中Ｐ５３蛋白的免疫组化分析表明，约３８．８％的食管轻度不典型增生，５２．０％的中重度不典型增生，６１．１％的原位癌和６２．５％食管浸润癌组织中有高表达的Ｐ５３蛋白。正常食管鳞状上皮和慢性皮炎症食管上皮中很少有Ｐ５３蛋白聚积，对１４例食管癌病人癌及癌旁不典型增生组织中Ｐ５３蛋白的免疫组化分析表明，９例Ｐ５３蛋白高表达的食管癌中，８例癌旁不典型增生组织也有高表达的Ｐ５３基因     

Shh和Ptch在食管鳞状细胞癌中的表达研究

目的探讨食管鳞状细胞癌中Shh和Ptch的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测35例食管癌及癌旁组织中shh和Ptch的表达情况。结果食管鳞癌中Shh和Ptch的表达阳性率分别为74．3％和68．6％，与正常组织相比Shh和Ptch在食管鳞癌组织中高表达。结论Shh和Ptch的高表达及Hh通路的激活参与了食管鳞癌的发生，可能足食管癌治疗的一个理想靶标。     

食管鳞癌组织中SPARC蛋白表达的临床意义

目的：探讨基质蛋白SPARC在食管鳞癌的增殖、侵润和转移中的作用。方法：应用免疫组化技术研究SPARC在食管鳞癌组织和其相邻的正常粘膜组织的表达差异，同时对蛋白表达进行定位。结果：36例食管鳞癌手术标本中30例SPARC蛋白表达阳性，正常食管上皮组织表达阴性（P〈0．01）。SPARC蛋白在不同分化程度的食管鳞癌组织中的表达阳性率基本相同（P〉0.05），有淋巴结转移的食管鳞癌组织与无淋巴结转移癌组织的表达间有显著差异（P〈0.05）。4例癌组织细胞核有表达，其余均为细胞浆表达。结论：SPARC和食管癌的发生与发展密切相关。食管癌出现转移时SPARC蛋白表达升高。     

食管上皮癌变过程中cyclin E和p21WAF1的表达及其意义

目的研究细胞周期调控因子cyclinE和p21^WAF1基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法应用免疫组化S—P方法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织和相应癌旁组织(正常黏膜17例，非典型增生组织31例)中cyclinE和p21^WAF1蛋白及mRNA表达。结果从食管正常黏膜到非典型增生组织和癌组织，cyclinE蛋白和mRNA阳性表达率皆呈逐渐升高的趋势，食管癌组织和癌旁组织之间差异有显著性。高分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于其它各组，mRNA阳性表达率显著高于正常黏膜和非典型增生Ⅰ级。p21^WAF1蛋白及mRNA在癌旁组织和癌组织中表达皆较高，两者差异无显著性。cyclinE和p21^WAF1基因表达无显著相关性。结论食管癌变过程中，细胞周期蛋白cyclinE表达水平增高，和组织分化程度显著相关，其异常是食管癌变过程中的早期事件，可能作为食管高分化鳞癌的诊断标志物之一。p21^WAF1基因在食管癌组织中高表达，可能与细胞周期调控的反馈机制有关。     

p73蛋白在食管癌中表达及其临床意义

目的研究p73蛋白在食管癌中的表达及其临床意义.方法采用Westernbloting技术检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73蛋白的表达,并探讨与食管癌临床病理特征的关系.结果37例食管肿瘤组织中有18例(48.6%)p73蛋白过度表达,其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织(P＜0.05),并与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系(P＞0.05).结论p73蛋白在食管肿瘤组织中呈高水平阳性检出率,p73蛋白可能参与了调控食管癌的发展过程.     

MRP基因表达与食管贲门癌临床病理关系的研究

目的：探讨多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因的表达与食管贲门癌临床病理特征的关系。方法：应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）该当,对８２例食管贲门癌组织、癌旁及４５枚淋巴结中ＭＲＰ基因的表达进行检测分析。结果：８３例食管癌贲门中ＭＲＰ阳性１９例（２２．９％）,癌旁组织ＭＲＰ阳性３例（３．６％）,癌组织的ＭＲＰ阳性率与癌旁组织比较具有非常显性差异（Ｐ〈０．００５）。２６枚转移淋巴结中ＭＲＰ阳性６例（     

食管癌和贲门癌组织中P53基因突变的研究

应用核酸杂交、ＰＣＲ扩增、直接测序等分子生物学技术，分析了林县原发性食管癌和贲门癌及其癌旁组织中抑癌基因Ｐ５３人子结构改变。用Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交法分析的３５例食管鳞癌和２７例组织中，有１例Ｐ５３基因缺失，１例重排结构性改变，占７．４％。上述食管鳞癌标本，用ＰＣＲ直接测序，发现５０％９１５／３０）的食管鳞癌有Ｐ５３基因的的５－９外显子和相应内含突变。４５％（５／１１）食管癌旁组织中有Ｐ５３基因突变。     

食管癌组织中金属硫蛋白3基因甲基化的地区性差异

目的:探讨食管癌高发区河北省中南部及广东省潮汕地区和食管癌非高发区的食管癌及正常组织中金属硫蛋白3 (metallothionein-3, MT-3)基因CpG岛的甲基化情况及其临床意义.方法:选取正常人血液标本10例,胎儿食管组织标本10例,非食管癌高发区正常人食管黏膜标本20例,河北省中南部食管癌高发区和潮汕地区食管癌新鲜手术标本及切缘正常组织各30例;应用甲基化特异性聚合酶链反应 (methylation-specific PCR, MSP)检测其MT-3基因CpG岛的甲基化情况,并分析其与临床病理资料之间的关系.结果: 高发区食管癌患者的切缘正常组织有20例(33.3%)存在MT-3基因甲基化,高于非高发区正常人食管黏膜(P=0.013);食管癌组织中有49例(81.7%)甲基化,明显高于相应肿瘤切缘正常组织(P<0.001),但2个高发区之间比较差异无统计学意义(P=0.739).结论:食管癌患者的正常食管黏膜及癌组织中均广泛存在MT-3基因的甲基化,后天因素刺激可能是导致MT-3基因甲基化的重要原因.     

河北省磁县食管癌高发区食管鳞状细胞癌组织HPV检测及FHIT表达的研究

背景与目的:河北省磁县是食管癌高发区,有关人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染和当地食管癌发生的关系尚无研究报道。本研究旨在探讨HPV感染在当地食管癌发生中的病因学意义,同时分析与环境致癌物密切相关的脆性组氨酸三联体基因(fragilehistidinetriad,FHIT)表达与HPV感染的关系。方法:收集河北省磁县食管癌高发区128例和非高发区24例食管鳞状细胞癌石蜡包埋组织,用PCR进行HPV检测,用免疫组化方法分析FHIT在蛋白水平上的表达情况,同时分析HPV感染和FHIT异常表达的关系。结果:PCR检测结果表明,河北省食管癌高发区食管鳞状细胞癌组织中HPV检出率为20.3%,略高于非高发区(8.3%),但两者差别无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,食管癌高发区食管鳞癌组织中FHIT基因异常表达率(75.6%)明显高于非高发区食管鳞癌组织(54.2%,P<0.05)。食管癌组织中HPV感染和FHIT的异常表达之间无明显相关性。结论:河北省食管癌高发区食管癌组织FHIT的异常表达率明显高于非高发区病例。     

食管癌219例根治性切除的淋巴结的转移规律

目的研究淋巴结在食管癌转移的规律。方法根治性切除２１９例食管癌患者的癌组织及廓淋巴结１８７９枚并作区域分布的病理分析。结果２１９例根治性切除食管癌患者中６５例有淋巴结转移。其中胸上段食管癌８例中有２例颈深淋巴结转移。胸中段食管癌１８６例中５２例有淋巴结转移,其中伴有隆突淋巴结转移２６例,伴有食管旁、贲门区和胃左动脉旁、左下肺静脉及左下肺韧带淋巴结转移分别为１５、１２、２２、４、５例。胸下段食管癌２５例中有淋巴结转移者１１例,其中伴有食管旁、左下肺韧带、贲门区和胃左动脉旁淋巴结转移分别为１、２、５、８例。左肺动脉淋巴结无１例转移。结论淋巴结在食管癌转移的共性规律是：上段癌向上转移大于向下,下段癌向下转移大于向上,中段癌转移依次隆突区、胃左动脉旁、胸上食管旁、胸下食管旁和贲门区。左肺动脉淋巴结甚少转移。     

Twist 基因联合p53E-cadherin检测在食管癌中的意义*

目的:检测食管癌患者的癌组织、癌旁组织和正常食管组织中Twist、p53、E-cadherin 蛋白表达水平,探讨Twist蛋白表达与食管癌临床病理参数的关系,并阐述Twist与p53、E-cadherin 蛋白表达的相关性。方法:各选取30例食管癌组织和癌旁组织,同时选取10例良性食管疾病的正常食管组织,应用免疫组化和免疫印迹方法进行蛋白检测,实验结果应用SPSS15.0 统计软件包进行数据分析处理。结果:Twist、p53、E-cadherin 蛋白表达水平在食管癌组织、癌旁组织和正常食管组织中有明显差异;在不同浸润深度、有无淋巴结转移、TNM分期及肿瘤分化程度不同的食管癌组织Twist蛋白表达具有明显差异;食管癌组织中Twist表达水平与p53、E-cadherin 之间存在一定的相关性。结论:Twist可能通过调节ARF/p 53途径抑制细胞凋亡促进肿瘤细胞形成,同时影响E-cadherin 的表达而促进上皮- 间质转化现象,参与食管癌的发生和转移,其可能成为食管癌诊断的分子生物学指标和分析食管癌患者病程以及判断疾病预后的特异性指标之一。      

食管拉网细胞端粒酶活性检测及临床应用研究

目的：检测食管拉网细胞中端粒酶活性，探讨其在食管癌诊断及预测预后的临床应用价值。方法：应用端粒重复序列扩增法，对３０例食管拉网细胞标本及相应的癌组织和癌旁正常食管组织进行检测。结果：３０例食管拉网标本中端粒酶活性阳性率为８３．３％（２５／３０），相应癌组织中阳性率为９６．７％（２９／３０），１４例正常食管组织中阳性率为１４．３％（２／１４）。拉网细胞和癌组织中端粒酶阳性率与正常组织相比较差异有显著