RT-PCR检测白血病患者mdr1表达的临床研究

目的：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测多药耐药基因（ｍｄｒ１）ｍＲＮＡ的表达,以探讨白血病细胞的抗药性及化疗效果的关系。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３３例不同类型白血病患者ｍｄｒ１、ｍＲＮＡ的表达,同时检测２０例正常骨髓做对照。结论：对照均为阴性表达,而初始组ｍｄｒ１的阳性表达率为３５．００％,复发、难治组ｍｄｒ１阳性表达率为８４．６２％（Ｐ〈０．０１）,ｍｄｒ１阳性与ｍｄｒ１阴性     

急性白血病多药耐药基因及多药耐药相关蛋白基因的表达及临床研究

目的探讨急性白血病（ＡＬ）多药耐药基因（ｍｄｒ１）及多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）的表达与预后的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）的方法检测５５例ＡＬ患者的ｍｄｒ１及ＭＲＰ的表达。结果发现复发急变组的ｍｄｒ１及ＭＲＰ基因表达水平（０．７３５±０．２４９,１．１５７±０．４４７）较初治组（０．４０８±０．１８６,０．４６５±０．２５３）明显升高（Ｐ＜０．０１）。而且ｍｄｒ１及ＭＲＰ同时高表达者的完全缓解（ＣＲ）率明显低于ｍｄｒ１及ＭＲＰ同时低表达者（Ｐ＜０．０１）。结论ｍｄｒ１和ＭＲＰ同时高表达是判断ＡＬ患者耐药复发及不良预后的重要因素。     

急性白血病细胞端粒酶活性与预后及多药耐药的关系

目的：研究急性白血病（ＡＬ）细胞内端粒酶活性与ＡＬ预后,分型及多药耐药（ｍｄｒ－１）基因表达的相关性。方法：用ＴＲＡＰ法和ＲＴ－ＰＣＲ法分别测定４４例ＡＬ细胞内端粒酶活性和ｍｄｒ－１基因的表达,结果：４４例ＡＬ患者的白血病细胞端粒酶阳性率为４３．２％,ｍｄｒ－１阳性率为４０．９％;端粒酶阳性者ＣＲ率为５７．６％,阴性者ＣＲ率为８８．０％（Ｐ〈０．０１）;端粒酶表达与ｍｄｒ－１未显示出一致性,但端粒     

急性髓系白血病原发性耐药的表达

目的：探讨急性髓系白血病（ＡＭＬ）的原发性耐药蛋白ｐ１７０、ＧＳＴＰ－１等的表达和疗效、预后的关系。方法：采集ＡＭＬ患者治疗前骨髓液,采用ＡＢＣ－ＡＰ法检测ｐ１７０、ＧＳＴＰ－１和其他单抗。结果：①１０５例初治ＡＭＬ中１２例（１１．４％）出现ｐ１７０或ＧＳＴＰ－１的阳性表达。②耐药表达阳性的１２例中ＣＲ６例（５０％）,有效率为６６．７％;１２例中目前７例死亡,２例复发,总生存曲线下降较快。无病生存曲线反映１８个月追踪仅剩２５％左右。结论：成人ＡＭＬ原发性耐药的表达是治疗效果差的标志之一,与预后直接相关。     

反义核酸逆转人白血病多药耐药细胞株耐药性的实验研究

目的 采用一段人工合成的互补于多药耐药基因的反义硫代磷酸寡核苷酸转染白血病多药耐药细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ,来逆转白血病细胞的多药耐药。方法 四唑蓝快速比色法检测Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对阿霉素的半数抑制量,流式细胞仪分析细胞内的柔红霉素含量,免疫细胞化学染色方法确定Ｐ１７０的表达水平,逆转录聚合酶链反应检测ｍｄｒ１－ｍＲＮＡ的相对水平。     

白血病患者多药耐药基因1和多药耐药相关蛋白检测的临床意义

白血病细胞多药耐药性是影响疗效、导致化疗失败的主要原因。我们检测了３８例急性白血病（ＡＬ）患者多药耐药基因１（ＭＤＲ１）、多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因的表达,并探讨其与临床耐药及预后的关系。一、资料和方法１－研究对象：ＡＬ３８例,男１８例,女２０例,年龄１１～６５岁,中位年龄３３岁。其中急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）２４例（Ｍ１２例,Ｍ２７例,Ｍ３８例,Ｍ４２例,Ｍ５２例,Ｍ６１例;慢性粒细胞白血病急粒变２例）;急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）１４例（Ｌ１６例,Ｌ２７例,Ｌ３１例）。初治组１３例…     

免疫组化技术检测P—170糖蛋白在急性白血病患者中的表达

应用抗Ｐ－１７０糖蛋白单克隆抗体ＪＳＢ－１及碱性磷酸酶抗碱必磷酸酶桥联免疫细胞化学染色技术对１０例正常骨髓及４２例急性白血病患者（急性淋巴细胞白血病２３例，急性非淋巴细胞白血病１９例）的骨髓细胞Ｐ－１７０糖蛋白表达进行检测，以研究Ｐ－１７０糖蛋白的表达与临床多药耐药之间的关系。其中初治病人Ｐ－１７０糖蛋白阳性表达检出率为２８．６％（４／１４）；难治、复发病人阳性检出率为５８．８％（１０／１７）；完     

胃癌组织mdr1基因表达的临床意义

目的探讨多药耐药基因（ｍｄｒ１基因）在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系．方法应用ＲＴＰＣＲ法检测了２９例手术切除人胃癌组织中的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ．术前未用过化疗．结果ｍｄｒ１ｍＲＮＡ的阳性率为４８３％（１４／２９）,ｍｄｒ１ｍＲＮＡ的表达在肿瘤浸润浆膜者为３３３％（７／２１）,明显低于未浸润浆膜者（７／８）,基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移及ＴＮＭ分期等无关．结论化疗前胃癌组织中ｍｄｒ１基因即存在较高的表达率,这为选用化疗药物和ＭＤＲ逆转剂提供了参考指标．ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达减少似与肿瘤进展相关．     

多药耐药相关蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义

多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ）的产生是大肠癌化疗失败的重要原因．已有研究表明ｍｄｒ１基因编码的Ｐｇｐ表达是大肠癌ＭＤＲ的机制之一［１］．最近发现的另一个ＭＤＲ相关蛋白－多药耐药相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＲＰ）,成为肿瘤耐药和逆转耐药的热点［２］．我们的初步研究显示,ＭＲＰ在胃肠癌组织中过度表达［３］,但目前国内未见其他有关大肠癌ＭＲＰ表达的报道．我们应用免疫组化方法研究ＭＲＰ在大肠癌中的表达情况,并进一步…     

典型多药耐药在30例大肠癌标本化疗药敏实验中的作用

目的评价典型多药耐药在大肠癌以５－Ｆｕ，ＭＭＣ，顺铂常规化疗耐药中的具体作用。方法 采用逆转录－多聚酶２链反应技术及免疫组化方法检测了３０例大肠癌手术标本的ｍｄｒ１基因表达和ＧＰ１７０表达，同时用ＭＴＴ法药敏试验检测了大肠癌细胞对６种临床常用化疗药物的敏感性。结果 ３０例大肠癌手术标本的ｍｄｒ１基因表达阳性率为６３．３％，ＧＰ１７０表达阳性率为７３．３％，两者表达具一致性，且二者与ＡＤＭ的药敏结果     

初治急性白血病患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白基因表达与预后的关系

目的 探讨肺耐药蛋白（1rp)基因和多药耐药相关蛋白（mrp)基因表达与初治急性白血病（AL）患者化疗效果的关系。方法 用逆转聚合酶链反应方法检测58例初治AL患者骨髓单个核细胞中lrp和mrp的mRNA的表达。结果 初治急性淋巴细胞白血病（ALL）患者lrp和mrp阳性表达率分别为15．0％和40．0％, 初治急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者lrp和mrp阳性表达率分别为15．8％和42．1％;在ALL和ANLL组,lrp和mrp基因阳性与阴性患者的首次完全缓解（CR）经统计学分析,差异无显著性（P＞0．05）,而lrp和mrp基因双阳性与双阴性患者的首次CR经统计学分析,差异有显著性（P＜0．05）;lrp和mrp基因两者无相关性。结论 lrp和mrp单独作为预测初治AL患者化疗效果的敏感性较差,而两者联合检测则是预示原发耐药的良好指标。     

急性白血病患者细胞周期蛋白B1表达与耐药的关系

目的　探讨细胞周期蛋白B1 (cyclinB1 )在急性白血病 (AL)中的表达以及与耐药的关系。方法　本研究对 85例初治AL患者 (其中敏感组 47例 ,耐药组 38例 )及 1 7例正常人采用流式细胞术检测cyclinB1、p1 70蛋白表达水平。采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测cyclinB1、多药耐药基因 1 (mdr 1 )、DNA拓扑异构酶Ⅱ的两个同工酶TOPOⅡα、TOPOⅡβ以及bcl 2的mRNA水平。结果　 (1 )耐药组cyclinB1蛋白 (M =1 2 3 % )和mRNA (M =0 2 1 7)以及TOPOⅡα(M =0 2 36)、TOPOⅡβ(M =0 32 8)的mRNA表达水平明显低于敏感组cyclinB1蛋白 (M =2 2 7% )和mRNA (M =0 563)、TOPOⅡα(M =0 51 4 )、TOPOⅡβ(M =0 635) (P <0 0 1 )。全部正常人cyclinB1蛋白的表达水平 <5 % ,在相同条件下未检出cyclinB1、TOPOⅡα、mdr 1的mRNA表达。 (2 )耐药组患者的p1 70蛋白 (M =1 4 3 % )及mdr 1 (M =1 0 71 )、bcl 2 (M =0 941 )的mRNA表达水平明显高于敏感组p1 70蛋白 (M =3 6 % )、mdr 1 (M =0 0 94)和bcl 2 (M =0 1 53)的mRNA表达水平 (P <0 0 1 )。 (3)cyclinB1蛋白与TOPOⅡα、TOPOⅡβ的mRNA表达呈正相关 (rTOPOⅡα=0 472 ,P <0 0 1 ) ;(rTOPOⅡβ=0 683 ,P <0 0 1 ) ;cyclinB1mRNA与TOPOⅡα     

急性白血病患者血管内皮生长因子及其受体表达的临床意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (VEGFR)在成人急性白血病 (AL)中的表达、对临床疗效和预后的影响以及与多药耐药的关系。方法 :采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 6 4例成人AL患者VEGF、VEGFR 1、VEGFR 2、mdr 1mRNA表达水平。结果 :VEGF基因在AL组中表达的平均水平和阳性率均高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。其中急性粒细胞白血病 (AML)组广泛表达 ,明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而急性淋巴细胞白血症 (ALL)组的表达与正常对照组相比差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。AL组VEG FR 1表达阳性率高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;VEGFR 2表达阳性率与正常对照组相比无显著性意义 (P >0 .0 5 )。VEGF表达水平在临床耐药组高于临床敏感组 (P <0 .0 5 ) ,是影响缓解率和生存期的危险因素。VEGF与mdr 1表达无相关关系。结论 :VEGF及VEGFR 1基因在成人AL患者中有异常表达 ,是影响成人AL患者临床疗效和预后的因素之一。     

初诊和复发急性髓性白血病p15、p16基因甲基化研究

目的探讨急性髓性白血病(AL)p15、p16、p18、p19基因失活的发生率及与疾病发生、发展、预后的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增46例患者的p15、p16、p18、p19基因外显子1和外显子2。再用限制性内切酶一PCR方法检测基因甲基化。结果46例患者中。急性淋巴细胞白血病(ALL)19例．11例p15基因失活,10例p16基因失活;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)27例．9例p15基因失活,18例P16基因失活;均以甲基化失活为主。所有病例均无p18、p19基因失活。结论在AL发生、发展过程中。p15、p16基因失活主要是由于P15、p16基因甲基化所致。     

Expression of the mdr-1/P-170 gene in patients with acute lymphoblastic leukemia

Increased expression of the multidrug resistance gene (mdr-1/P-170) and the dihydrofolate reductase (DHFR) gene have been implicated in the development of in vitro drug resistance. Overexpression, with or without gene amplification, is seen in the development of drug resistance in culture and it has been postulated that genetic modulation of mdr-1/P-170 and DHFR may also be involved in the development of clinical drug resistance. We screened lymphoblasts from 28 patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) for evidence of overexpression of mdr-1/P-170 using RNAse protection, RNA in situ hybridization and immunohistochemistry. Overexpression of mdr-1/P-170 without gene amplification was detected in samples from four patients (three after multiple relapses, one at presentation). Overexpression of mdr-1/P-170 was heterogeneous within the population of malignant lymphoblasts as demonstrated by RNA in situ hybridization, immunohistochemistry, and drug uptake using daunomycin autofluorescence analysis. There was no evidence of overexpression of DHFR in any of the eight patient samples tested by RNAse protection nor was there any evidence of gene amplification in 11 patient samples on Southern blot analysis. From these observations it appears that overexpression without gene amplification of mdr-1/P-170 may be one mechanism of clinical drug resistance in ALL.     

Expression of mdrl, mrp, topoisomerase IIα/β, and cyclin A in primary or relapsed states of acute lymphoblastic leukaemias

Summary. In a series of 60 ALL samples drawn during different stages of the disease we used a cDNA-PCR approach to analyse the relative mRNA levels of the MDR-associated genes encoding mdrl/P-glycoprotein, mrp, and the topoisomerase II isozymes α and β. Expression analysis of the cyclin A gene was included to examine cellular proliferation activity. The expression of gapdh served as an internal standard. Calculating the mean values we found: (i) a distinctly lower mdrl gene expression in primary ALL and first relapses compared to bone marrow from healthy donors, (ii) no change in mdrl and mrp, but a decreased topoisomerase IIα gene expression in first relapses of ALL compared to the primary leukaemia, and (iii) increased mdrl and mrp levels combined to decreased topoisomerase IIα levels in recurrent relapses of ALL showing significant correlations (mdrl/mrp: r_s=+0.6833, P <0.05: mdrl/topollα: r_s− 0.6727, P < 0.05). The expression of the topoisomerase IIá gene was correlated to that of cyclin A, indicating a link of its expression to cellular proliferation. Our findings suggest that a multifactorial MDR including mrp appears particularly in recurrent relapses of ALL. which often do not respond to chemotherapy. Nonetheless, some individual samples showed gene expression levels very different from the mean values calculated for a particular state of the leukaemia, indicating the need of an individual expression analysis of MDR-associated genes.     

Overexpression of multidrug resistance-associated p170-glycoprotein in acute non-lymphocytic leukemia.

Resistance to several cytotoxic agents, including anthracyclines, vinca alkaloids and epipodophylline derivatives (multidrug resistance, or MDR) can develop in tumor cells by overexpression of a 170-kd glycoprotein (p170) which is an essential component of a membrane transport system leading to increased drug efflux and decreased intracellular drug concentration. By means of a p170-directed monoclonal antibody (MRK-16) and immunocytochemistry (alkaline phosphatase anti-alkaline phosphatase technique), we investigated the expression of p170 in marrow blast cells of 59 cases (38 at diagnosis and 21 in relapse) of acute-non-lymphocytic leukemia (ANLL). The proportion of strongly MDR-positive cells was higher in relapse that at diagnosis (median 15.5% vs 1.5%). Out of 31 patients who were evaluable for the results of first remission induction, failure of first-line treatment (including Daunorubicin, standard-dose and high-dose Arabinosyl Cytosine, and sometimes also Mitoxantrone) occurred in 8/22 MDR-positive cases and in 1/9 MDR-negative ones (p = 0.21). Failure of first-line treatment was always associated with a progressive increase of p170 expression. Total failures (no remission plus early relapse) were more frequent (p = 0.001) among MDR-positive cases (16/22) than among the others (2/9). These data show that MDR is very frequent in ANLL also at diagnosis and suggest that MDR can contribute to early failure of standard treatment.     

免疫组化技术检测P－170糖蛋白在急性白血病患者中的表达

应用抗Ｐ－７０糖蛋白单克隆抗体ＪＳＢ－１及碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联免疫细胞化学染色技术对１０例正常骨髓及４２例急性白血病患者（急性淋巴细胞白血病２３例，急性非淋巴细胞白血病１９例）的骨髓细胞Ｐ－７０糖蛋白表达进行检测，以研究Ｐ－７０糖蛋白的表达与临床多药耐药之间的关系。其中初治病人Ｐ－７０糖蛋白阳性表达检出率为２８．６％（４／１４）；难治、复发病人阳性检出率为５８．８％（１０／１７）；完全缓解病人阳性检出率为９．１％（１／１１）；１０例正常骨髓标本中有１例阳性表达。１５例Ｐ－７０糖蛋白表达阳性的急性白血病患者中１２例表现为临床耐药。初步结果表明：急性白血病患者Ｐ－７０糖蛋白的表达与临床耐药性有很好的相关性，Ｐ－７０糖蛋白的检测有助于临床选择用药及判断病人预后。