重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成

观察重组人肝再生增强因子（ｒｈＡＬＲ）对免疫 务性肝纤维化的预防作用。建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。在造模的同时子ｒｈＡＬＲ腹腔注射。观察大鼠存活率,观察大鼠存活率,血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果：ｒｈＡＬＲ可提高人血白蛋白损伤生肝纤维化大鼠存活率氏肝纤维化大 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,病理检查显示ｒｈＡＬＲ有明显减轻大鼠肝纤维化形成的作用;     

Attenuation of hepatic fibrosis through ultrasound-microbubble-mediated HGF gene transfer in rats

ObjectiveThe objective was to explore the feasibility of ultrasound-microbubble-mediated hepatocyte growth factor (HGF) gene transfer for treating rat hepatic fibrosis induced by CCl₄.MethodsForty-eight male SD rats were divided into ultrasound-microbubble-HGF group (U-M-HGF group), ultrasound-HGF group (U-HGF group), microbubble-HGF group (M-HGF group), HGF group (HGF group), CCl₄ group (control group), and normal group. The serum levels of alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), total protein, albumin (ALB), and globulin (GLB) and the ratio of ALB/GLB were determined after treatment. The degree of hepatic fibrosis was evaluated by histopathological numerical scores. The protein expressions of HGF, collagen I, collagen III, and α-smooth muscle antibody (α-SMA) were detected by immunohistochemistry.ResultsUltrasound-microbubble-mediated HGF therapy significantly reduced the serum level of ALT and AST to 59.88% and 49.18% of the control group, respectively. Ultrasound-microbubble-mediated HGF therapy prevented liver fibrosis, with an obvious decrease in fibrosis areas and extracellular matrix production of collagen I, collagen III, and α-SMA. The gene therapy could induce HGF delivery into the fibrotic liver effectively.ConclusionsUltrasound-microbubble-mediated HGF gene therapy can reduce liver fibrosis, which provides a novel strategy for gene therapy of chronic liver disease.     

肝素对刀豆蛋白A诱导昆明小鼠急性肝损伤的保护作用

为了观察肝素预处理对刀豆蛋白A（ConA)诱导昆明小鼠急性肝损伤的保护作用,将24只昆明小鼠随机均分为A、B、C3组。A组为正常对照组;B组经小鼠尾静脉一次性注射给予一定剂量ConA,造成急性重型肝损伤;C组在给予ConA同时皮下注射肝素100U。结果发现,与单纯ConA处理组相比,肝素预处理组小鼠8h死亡率明显降低,血清ALT水平下降（P＜0．05）,肝窦瘀血及肝脏炎症程度明显减轻,肝组织匀浆中MDA水平显著降低,因此认为,肝素预处理对ConA诱导昆明小鼠肝损伤具有保护作用。     

环氧合酶-2在大鼠酒精性肝损伤中的作用

为探讨环氧合酶-2(COX—2)在大鼠酒精性肝损伤中的作用，将大鼠随机分为3组。正常组：予以玉米油 葡萄糖液灌胃；模型组：玉米油 酒精灌胃；处理组：玉米油 酒精 塞莱昔布(celecoxib，为COX—2选择性抑制剂)灌胃。3周后处死大鼠，然后进行大鼠肝组织切片HE染色、脂肪染色及COX—2免疫组化染色；血清AST、ALT水平、血浆及肝组织匀浆谷胱甘肽—S转移酶(GST)活性测定。结果发现，模型组脂肪染色明显加重，AST升高，肝GST活性降低，COX—2表达增加；而处理组比模型组脂肪染色减轻，AST下降，GST活性上升，肝组织中COX—2表达明显减少。提示使用选择性COX—2抑制剂能减轻大鼠酒精性肝损伤，证实COX—2参与了大鼠酒精性肝损伤过程。     

HGF和FGF4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

目的 评估肝细胞生长因子(HGF)和成纤维细胞生长因子4(FGF4)在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用.方法 CCl_4经腹腔注射复制小鼠肝损伤模型,48h后处死小鼠取肝组织,分离肝脏组织制备肝损伤条件培养液进行培养.以正常小鼠肝组织制备的培养液作为对照组.ELISA法测定培养0、1、5、3、6、12、24、48h后肝组织培养液中的HGF和FGF4含量.用肝损伤条件培养液培养骨髓间充质干细胞,分别加入HGF抗体和(或)FGF4抗体,以封闭培养液中的HGF和(或)FGF4因子,未添加细胞因子抗体的培养液作为对照组;ELISA法检测肝细胞特异性白蛋白(ALB)水平,免疫荧光法检测细胞内ALB、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)的表达,评价骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化状况.结果 与对照组比较,肝损伤小鼠肝细胞培养液中HGF和FGF4表达量均升高(P<0.05);在培养3h时HGF、FGF4上升达峰值,随后下降;FGF4在培养12h达低谷后再次升高.抑制HGF和(或)FGF4第14天后,ELISA和荧光标记染色法检测均显示ALB表达下降,与对照组比较差异显著(P<0.05);荧光标记染色显示封闭后AFP及CK-19表达均有下降(P<0.05).结论 HGF、FGF4是诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的重要因子,且可能有其他因子参与诱导肝细胞的定向分化.     

肝缺血再灌注损伤中重组人促红细胞生成素对核因子-κB活化的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对核因子(NF)-κB活化的影响在肝缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法制作大鼠部分肝I/R模型,分为:假手术组(A组),肝缺血90 min组(B组),肝缺血90 min,再灌注120 min组(C组),肝缺血90 min,再灌注120min,加重组人促红细胞生成素(建模前1、3 d及5 d给予rhEPO100 U/kg)组(D组)。光镜观察肝脏组织学改变,测定血清肝酶学水平,用Western blot技术检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果A组肝细胞索排列有序,肝细胞形态正常;B组肝小叶结构紊乱,肝血窦和中央静脉有轻度淤血,内皮细胞和肝细胞水肿变性;C组肝细胞坏死较明显,D组上述改变明显减轻。和C组相比,D组血清肝酶学指标、NF-κB p65和TNF-α的表达水平明显下降,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 重组人促红细胞生成素能抑制肝脏NF-κB的活化,对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。     

脓毒症大鼠肝组织凝溶胶蛋白表达变化及血必净注射液干预的影响

目的 观察脓毒症大鼠肝组织凝溶胶蛋白(GSN)表达规律及中药血必净注射液干预的影响. 方法雄性Wistar大鼠104只,按随机数字表法分为正常对照组(8只)、假手术组(32只)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(32只)、血必净组(32只),后两组采用CLP制备脓毒症大鼠模型.血必净组于术后2,12,24,36,48,60 h静脉注射血必净注射液,每次剂量4 ml/kg.分别于术后6,12,24,72 h处死大鼠留取血和肝组织标本,检测肝功能生化指标和肝组织GSN、Gc球蛋白含量及GSN mRNA表达水平. 结果与正常对照组(2.28±0.34)ng/mg和假手术组比较,CLP组大鼠肝组织GSN含量显著下降(P＜0.05),12 h其含量最低,为(1.42±0.50)ng/mg;而肝组织GSN mRNA表达于CLP后6 h即明显上调,72 h仍高于假手术组(1.203±0.053比1.030±0.084,P＜0.05);CLP组6～72 h肝组织Gc球蛋白含量较正对照常组、假手术组均有不同程度的升高(P＜0.05).血必净治疗6～72 h肝组织GSN含量均显著高于CLP组(P＜0.05),6,12,24 h血清ALT、AST水平则明显低于CLP组(P＜0.05).血必净干预对肝组织GSN mRNA表达和Gc球蛋白水平均无明显影响(P＞0.05).结论 脓毒症时肝组织GSN含量持续降低,血必净可通过增加动物肝组织GSN含量,减轻脓毒症所致的肝功能损伤.     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠基质分解素—1基因表达的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR）对肝纤维化大鼠基质分解素－1（MMP3）基因表达的影响,建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型,模型完成后予不同剂量hALR治疗,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）测定MMP3的基因表达。结果在两种模型中hALR治疗组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段均明显高于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织基质分解素－1的基因表达水平均明显高于低剂量组,提示hALR可增强肝纤维化大鼠MMP3的基因表达。     

脾切除对肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子的表达和血清水平的影响

目的研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子（CTGF）的表达和血清CTGF水平的影响,探讨脾切除在肝纤维化治疗中的作用。方法采用CCL4诱导法建立肝纤维化模型;所有老鼠随机分为A、B、C组,并分别于建模0时、第5周、第10周切除脾脏;3组均在切脾前随机选择5只老鼠处死,剩余老鼠在建模第14周时全部处死,取其肝脏和血液标本,ELISA方法检测血清中CTGF含量,肝组织分别行HE染色和免疫组化染色。结果肝损伤不同时期大鼠肝脏及血清CTGF测定值表明,大鼠肝脏及血清CTGF含量与纤维化程度呈正相关;不同时期切脾鼠肝脏及血清CTGF值与切脾早晚呈相关关系,切脾越早,CTGF值越低。结论早期脾切除对肝硬化的发展有一定的延缓作用