细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱 …

一氧化氮供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用＾３Ｈ－胍氨酸转移法进行了ＮＯ合成酶活性测定，亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰ１染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒，ｐＣＭＶ／ｉＭＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯＲ 重组细胞系，表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。     

一氧化氮在培养的大鼠心肌细胞缺氧—复氧损伤中的作用

目的：观察一氧化氮（ＮＯ）对心肌细胞缺氧－复氧损伤（ＨＲＩ）的作用。方法：培养的大鼠心肌细胞，培养液中分别预先加入ＮＯ前体Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）、ＮＯ供体ＳＩＮ－１或硝普钠（ＳＮＰ）、ＮＯＳ抑制剂Ｌ－ＮＮＡ或ＮＯＳ诱导剂脂多糖（ＬＰＳ），经缺氧１２０ｍｉｎ，复氧６０ｍｉｎ处理后，检测细胞存活率，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出量，亚硝酸盐（ＮＯ２）含量及细胞诱导型ＮＯ合酶（ｉＮＯＳ）活性等指标的改变。结果：①与常氧组比较，缺氧－复氧ＨＲ降低细胞存活率（２３％，Ｐ＜０．０１），增加ＬＤＨ漏出（６２倍，Ｐ＜０．０１），ｉＮＯＳ活性（７７％，Ｐ＜０．０１），ＮＯ２含量（６１７％，Ｐ＜０．０１）。②ＨＲ前预先加入ＳＩＮ－１、ＳＮＰ或Ｌ－Ａｒｇ，均引起ＬＤＨ漏出进一步增高（Ｐ＜０．０１），细胞存活率进一步降低（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。③Ｌ－ＮＮＡ２ｍｍｏｌ／Ｌ，单独应用对细胞损伤的影响无统计学意义，与Ｌ－Ａｒｇ联合应用，则减弱Ｌ－Ａｒｇ的细胞损伤作用。④ＬＰＳ１μｇ／ｍＬ，增加ｉＮＯＳ活性（２６倍，Ｐ＜０．０１）和ＬＤＨ漏出（５６％，Ｐ＜０．０１）。结论：ＮＯ加重心肌细胞ＨＲＩ，是心肌细胞ＨＲＩ的损伤因子     

gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究

目的　研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍ ａｇｅ, ｇａｄｄ）对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用。　方法　ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株ｇａｄｄ１５３ 基因表达。通过目的基因的克隆、载体构建技术,将目的基因ｇａｄｄ１５３ 重组于ｐｌＸＳＮ－ｎｅｏ 逆转录病毒表达载体;构建的ｐＬＸＳＮ－ｇａｄｄ１５３载体采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）（ＤＯＴＡＰ）的方法,分别转染ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株;经Ｇ４１８ 抗性筛选;ＲＴ－ＰＣＲ表达鉴定;足叶乙甙（ＶＰ１６）诱导,采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡。　结果　ＳＫＯＶ３－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０ 期,部分细胞进入凋亡的状态;３ＡＯ－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制,未引起凋亡。　结论　转染ｇａｄｄ１５３ 基因的肿瘤细胞系,诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０期,并有细胞进入凋亡状态。证实ｇａｄｄ１５３ 基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程。     

Bak基因对Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的调控作用

目的 研究Ｂｃ１－２基因家族促凋亡蛋白Ｂａｋ在细胞凋亡细胞周期调控中的作用,评价它们作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法 采用一种可诱导性表达系统,（ＭＴ－Ⅱ调节系统）,在外加锌离子（ＺｎＳＯ４,１００μｍｏｌ／Ｌ）的条件下诱导Ｂａｋ基因表达。以Ｈｅｌａ细胞系作为靶细胞,获得表达Ｂａｋ基因的稳定转染子。结果 可诱导性Ｂａｋ基因过表达的Ｈｅｌａ细胞出现广泛死亡。ＴＵＮＥＬ染色证实细胞核碎片化,提示     

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核;ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质;３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。     

血小板活化因子介导肾小球系膜细胞产生活性氧的研究

为探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧的调节作用，本研究观察了ＰＡＦ对体外培养的大鼠ＧＭＣ产生超氧化物阴离子（Ｏ）和过氧化氢（Ｈ－２Ｏ－２）的影响。结果表明１０￣（－９）Ｍ／Ｌ的ＰＡＦ已能诱导ＧＭＣ产生Ｏ和Ｈ２Ｏ２（１．１４±０．４２ｎｍｏｌ／１０￣５ＧＭＣ、０．９７±０．１６ｎｍｏｌ／１０－５ＧＭＣ），这一效应呈剂量依赖性；溶ＰＡＦ无诱导ＧＭＣ产生活性氧作用；特异性ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１抑制ＰＡＦ的刺激作用，抑制作用也呈剂量依赖性，５×１０￣（－５）Ｍ／ＬＢＮ５２０２１完全抑制ＧＭＣ合成活性氧。本研究说明ＰＡＦ可诱导ＧＭＣ合成活性氧。     

LPS和几种促炎细胞因子促进人血管平滑肌细胞iNOS mRNA的表达

ＬＰＳ、ｒｈｌＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＴｈＦ－ａ和ｒｈＩＦＮ－γ单独或两两组合加于培养的人血管平滑肌细胞（ｈＶＳＭＣ）,测定了ｈＶＳＭＣＮＯＳ活性,ｃＧＭＰ含量,ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达丰度和培养液中ＮＯ２浓度。ＬＰＳ和细胞因子都能诱导ｈＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ　ｍＲＮＡ,升高ｈＶＳＭＣ　ＮＯＳ活性、ｃＧＭＰ含量和培养液中ＮＯ２浓度;ＴＮＦ－ａ是受试细胞因子中唯一能与另外三种细胞因子分别组合都显示出协同效应的细胞因子;ＬＰＳ和其余三种细胞因子间的两两组合都没有显示出协同效应;本研究结果表明：ＬＰＳ、ｒｈＴＮＦ－α、ｒｈＩＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｔｈＴｈＦ－α、ｔｈＩＦＮ－γ都能诱导ｈＶＳＭＣ合成ＮＯ;ＴＮＦ－α可能是诱导ｈＶＳＭＣｉＮＯＳ表达的致炎细胞因子中最为重要的。     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的：探讨ＮＦкＢ在大鼠肺微血管内皮细胞ｉＮＯＳ基因诱导表达中的作用及抗氧化睦内皮细胞ｉＮＯＳ诱导表达的影响及其机制。方法：Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞上清液ＮＯ２水平以反映ＮＯ的生成,Ｎｒｔｈｅｒｎ印迹分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平,ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦкＢ的结合活性。结果：抗氧化可阻断内皮细胞培养体系ＬＰＳ和ＴＮＦα诱导的ＮＯ生成及ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达;ＬＰＳ和ＴＮＦα可诱导大鼠肺微血管内皮细胞Ｎ     

NO与细胞凋亡

自由基ＮＯ是体内ＮＯＳ催化Ｌ－精氨酸氧化生成的一种具有多种生物学效应的特殊介质，通过和细胞内的酶作用，形成ＯＨ－，直接损伤ＤＮＡ等方式发挥其影响。除在转录及表达水平经防止凋亡抑制基因ｂｃ１－２表达减少而阻止Ｂ细胞凋亡外，ＮＯ经损伤ＤＮＡ、抑制核酸和蛋白质合成、减少ＡＴＰ产生、降低ｐＨ和改变Ｃａ２＋分布、增强ｐ５３表达等途径介导其他多种细胞凋亡。     

干扰素对人胃癌细胞IAP－2表达的调节

应用基因重组干扰素－ａ和－γ（ＩＦＮ－ａ和－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ＿（７９０１）、ＭＧＣ＿（８０３）和ＭＫＮ＿（４５），ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照组细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ能增加这三株细胞ＩＡＰ－２表达量；而高浓度（＞１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－ａ和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＭＰ－２表达水平检测作为临床应用ＩＦＮｓ治疗癌症患者的疗效判别指标可能具有一定价值。     

汽车驾驶员腰椎保护带的振动防护效应测试及其生物力学作用分析

通过对汽车驾驶员腰部振动的测试 ,了解腰椎保护带对振动的防护效应并对其生物力学作用进行分析。以日本产五十铃八吨载重卡车 (TDG72 )为测试车型。在装载六吨货物以三种不同车速 (10、30、6 0 km/ h)行进在柏油公路时 ,分别在佩带和不佩带腰椎保护带的情况下 ,对驾驶员腰椎部位垂直振动和水平纵向振动进行实时测量 (传感器安置于裤腰带和保护带的背外侧 )。结果显示 :1驾驶员腰部振动频率多为 10 Hz以下 ,属低频振动 ;2垂直振动大于水平纵向振动 ;3系腰椎保护带时的振动测量值大于不系腰椎保护带的测量值。由于腰椎保护带改变了脊柱的生物力学和振动特性 ,从而起到了保护腰椎的作用。我们认为它是防治汽车驾驶员腰痛的良好方法之一。     

心音图运动试验的精密度和准确度的分析

“心音图运动试验”(PCGET)是新近提出的一项心肌收缩能力以及心血管病人和健康人的心力储备评估方法。为了验明 PCGET方法的可信度 ,我们进行了该方法的精密度和准确度的研究。对 30个志愿者进行了PCGET,不同检查者对同一受试者同一心动周期中 S1幅值测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=5 .0 5 0 .0 45 1,检查者 B的一组数据的 x± s=4.95± 0 .0 34 6 ,F=1.6 99,P>0 .0 5。不同检查者对同一受试者同一心动周期测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=0 .789± 0 .0 0 18,检查者 B的一组数据的 x± s=0 .787± 0 .0 0 17,F=1.16 7,P>0 .0 5。对 PCGET运动前后心脏变力性状态评估的准确度为 10 0 %。结果表明 ,PCGET的精密度和准确度高 ,可作为心力储备的无伤性、简便、经济的量化测评方法。     

家蝇实验种群生殖,存活及生命表的研究

在最适宜的综合实验条件下，采用定量研究的方法，对家蝇实验种群的生殖、存活和生命表进行了研究，求出家蝇各生长阶段的发育历期（卵为０．５±０．０８００ｄ；幼虫为４．５±０．５０００ｄ；蛹为５．５±０．５０００ｄ；一世代为１５．５±１．５５６６ｄ），成活率（卵为９４．８２５１％；幼虫为８９．３２３８％；蛹为９５．２３７７％；一世代为８１．０２８９％），生殖特性（最大产卵量为１８４个／次／雌，平均产卵次数为８±７．８３７７次；终生产卵数为６８７±４１６．５８５８个）和存活特性（雌性最大寿命为７７ｄ；雄性最大寿命为６３ｄ；雌性平均寿命为３７．４９６３ｄ；雄性平均寿命为２６．８３９８ｄ）。我们也求出了家蝇整个生命中各天的死亡数和产卵数，绘制了家蝇实验种群生命表。我们研究获得的各项结果为家蝇的消灭和开发提供了科学的理论依据。     

微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及应用

目的介绍微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及临床应用.方法根据慢性细菌性前列腺炎的病理特点,在临床实验的基础上,结合生物医学工程技术和现代中医药理论,研制出微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪.试用于治疗慢性细菌性前列腺炎病人600例.结果临床治愈459例(76.5%),显效101例(16.8%),好转40例(6.7%).无任何副作用.结论微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪对慢性细菌性前列腺炎是一种良效、安全、舒适而科学的治疗新途径.     

恶性疟原虫疫苗研究VIPfCMR基因与人白细胞介素-2基因的连接与克隆

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ｐＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点。重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出正向插入的重组载体ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

新生儿心肺功能监护仪的设计与新生儿生理参数的确定

本文介绍了新生儿心肺功能监护仪的软硬件设计,该仪器具有体积小,功能全面,适用性广,操作简单等特点,能可靠地实现对新生儿的监护,用该仪器对新生儿的血氧饱各度和心率这两个最重要的生理参数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率这两个最重要热处理到达数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率都属于正态分布,并依此给出了中国新生婴儿的这两个参数的分布范围。     

医学图像非刚性配准研究进展

医学图像非刚性的配准在医学诊断和治疗计划中起着重要的作用,学者们为此提出了各种非刚性配准算法.本文首先分析了非刚性配准的必要性;接着介绍了近年来提出的典型非刚性配准算法,给出了这些方法的基本原理及研究进展,最后对非刚性配准的发展方向进行了展望.     

中国株庚型肝炎病毒(HGV)感染猕猴的实验研究

应用０．５ｍｌ含中国株庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的血清接种５只猕猴，５只猕猴于接种后１周血清ＨＧＶＲＮＡ均阳转；ＨＧＶＲＮＡ滴度在猴体内可高达１∶１０５，较接种血清中ＨＧＶＲＮＡ滴度（１∶１０２）高出许多，提示ＨＧＶ在猕猴体内复制。其中４只猕猴血清抗－ＨＧＶ阳转；４只出现ＡＬＴ异常。后用其中１只猕猴感染后４５天的血清给另２只猕猴接种，该２只猴也出现血清ＨＧＶＲＮＡ和抗－ＨＧＶ阳转及ＡＬＴ异常。本研究表明，中国猕猴有可能作为ＨＧＶ感染的动物模型。     

丙型肝炎病毒基因型与血清HCV RNA含量关系及与干扰素应答的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与血清ＨＣＶＲＮＡ含量的关系及其对干扰素应答的影响。方法应用定量荧光ＰＣＲ（Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）技术检测了１３５例不同基因型ＨＣＶ感染的慢性丙型肝炎患者血清ＨＣＶＲＮＡ含量，另对其中７７例进行干扰素治疗并随访１２个月以上。结果ＨＣＶ－Ⅱ型感染血清ＨＣＶＲＮＡ水平（１０７．８±３．４拷贝／ｍｌ）显著高于ＨＣＶ－Ⅲ型感染（１０６．３±２．５拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１），Ⅲ型感染的应答率（７／１３，５３．８％）显著高于Ⅱ型感染（２０／６４，３１．３％）（Ｐ＜０．０５）。应答组治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ含量（１０６．８±２．７拷贝／ｍｌ）显著低于无应答组（１０８．３±３．２拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１）。ＨＣＶＲＮＡ含量低于１０６．５拷贝／ｍｌ者，无论何种型别ＨＣＶ感染均应答较好，而ＨＣＶＲＮＡ高于１０８．０拷贝／ｍｌ者则应答极差。结论ＨＣＶ基因型及病毒血症水平是预测干扰素疗效的重要因素，且后者比前者意义更大。Ⅱ型感染病毒血症水平较高可能是影响其疗效的原因之一。     

营养和激素对家蝇卵黄发生的影响

本实验通过对家蝇取食量的测定，对家蝇进行不同饲料饲喂后，对其不同发育期的血淋巴、脂肪体及和卵巢的发育及卵黄蛋白含量进行观察测定，结果表明，取食蛋白组家蝇血淋巴、脂肪体和卵巢卵黄蛋白含量均高于奶粉组和对照组；羽化４８ｈ后的血淋巴和脂肪体中卵黄蛋白含量为７．３μｇ／μｌ、３１．９μｇ／头；卵巢卵黄蛋白含量为５５．０μｇ／头；在羽化后７２ｈ血淋巴和脂肪体中卵黄蛋白含量分别为２．９μｇ／μｌ、３２．０μｇ／头；卵巢卵黄蛋白含量为８０．０μｇ／头；脉冲式饲喂家蝇后，体内卵黄蛋白含量明显高于对照组，说明蛋白质饲料在家蝇卵黄发生中起重要作用。激素处理结果证明，ＪＨＡ单独处理及ＪＨＡ和蜕皮素协同处理均能促进卵黄蛋白的合成和摄取，而蜕皮素单独处理没有促进作用。最后对营养和激素对生殖的调控作用进行了讨论。