人肝组织脱细胞支架的制备

目的探究人肝组织脱细胞支架的制备。方法本研究利用手术切除的人肝血管瘤左外叶组织,经反复冻融,0.01% SDS、
0.1% SDS和1% Triton X-100循环灌注制备人肝组织脱细胞支架,并通过灌注过氧乙酸消毒。将L-02细胞通过门静脉插管种
植于脱细胞支架内进行培养。结果HE、DAPI染色和扫描电镜结果显示脱细胞支架内无细胞成分残留,残余DNA检测为
25.3±14.6 ng/mg干质量,小于新鲜肝脏DNA含量的1%。免疫组化证实支架内保留了Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、弹力蛋白
成分。L-02细胞在支架上生长良好且有增殖,并表达白蛋白及葡萄糖-6-磷酸酶。结论利用手术切除的人肝标本行肝组织脱
细胞支架的制备是可行的,且为构建更适用于临床的组织工程肝脏提供了新思路。
     

藻酸盐凝胶中肝癌HepG2细胞的三维培养

目的 采用藻酸盐凝胶为支架进行肝癌HepG2细胞的体外培养,构建体外肝癌细胞三维培养模型.方法 将HepG2细胞接种于藻酸盐凝胶中进行培养,通过倒置显微镜观察、H-E染色、钙黄绿素-碘化丙啶荧光复染及MTT实验,了解藻酸盐凝胶内细胞的生长情况.结果 在藻酸盐凝胶中HepG2细胞以细胞团的形式生长,增殖活跃.结论 成功建立了肝癌HepG2细胞藻酸盐凝胶培养体系,且该体系有利于HepG2细胞的生长.     

银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响.方法 将银杏叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,MTT法检测其对HepG2细胞增殖的影响,缺口末端核苷标记(TUNNEL)法检测其对HepG2细胞凋亡的影响.结果 银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖效率下降,使凋亡细胞数增加(P<0.01),且呈剂量依赖效应.结论 银杏叶总黄酮对体外培养的人HepG2细胞增殖有抑制作用, 并能诱导细胞凋亡.     

银杏叶槲皮素对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨银杏叶黄酮单体成分槲皮素体外对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响.方法 将银杏叶黄酮单体成分槲皮素作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,MTT法检测其对HepG2细胞增殖的影响,缺口末端核苷标记(TUNNEL)法检测其对HepG2细胞凋亡的影响.结果 银杏叶黄酮单体成分槲皮素使体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖效率下降,使凋亡细胞数增加(P<0.01),两者均呈剂量依赖效应.结论 银杏叶黄酮单体成分槲皮素具有与银杏叶总黄酮相似的作用,对体外培养的人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.     

重组腺病毒介导TIMP-1对人肝癌细胞系体外侵袭的影响

[目的]探讨人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)过表达对人肝癌细胞系HepG2体外侵袭的作用。[方法]构建携载hTIMP-1全长cDNA的重组腺病毒AdhTIMP-1,转染HepG2细胞,利用MTT、细胞生长曲线及BoydenChamber检测hTIMP-1对HepG2细胞体外增殖和侵袭能力的影响。[结果]成功构建重组腺病毒并实现体外表达,转染HepG2细胞,对其体外增殖及侵袭有明显抑制作用,细胞增殖率为49%,穿膜细胞相对百分率为(8.4±1.2)%(P<0.01)。[结论]hTIMP-1的过表达能有效抑制人肝癌细胞系HepG2的体外侵袭,可望用于肝癌基因治疗的研究。     

脱细胞血管基质的生物相容性研究

目的评估Triton X-100和胰蛋白酶方法制备的猪脱细胞血管基质的生物相容性。方法分别采用体外细胞毒性试验(直接接触法和MTT法)检测脱细胞血管基质的细胞毒性,采用皮下植入试验来评估经脱细胞血管基质的免疫排斥反应。结果L929细胞在预铺脱细胞血管基质的培养板内及不同浓度脱细胞基质浸提液内均生长良好,皮下植入试验显示2周后脱细胞血管基质的炎性反应明显减轻。结论经Triton X-100和胰蛋白酶方法制备的猪脱细胞血管基质具有良好的生物相容性。     

晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用

目的 在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用.方法 用含浓度为400 μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型.向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生.采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬.用...     

2种去细胞方法制备大鼠脱细胞脊髓支架效果的对比研究

目的比较脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶2种脱细胞方法制备脱细胞的同种异体脊髓支架的效果。方法取成年SD大鼠胸段脊髓2 cm,运用冻融+化学萃取的组织工程学方法(脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶)处理大鼠脊髓组织,对处理后的脊髓支架分别进行HE染色,髓鞘染色和扫描电镜观察。结果2种方法均较为完全地脱去了细胞和髓鞘成分,脊髓横断面上呈网状结构,未见细胞成分存留,纵切面上呈互相交错的管状通路;未见轴突、髓鞘和细胞核。结论采用冻融+化学萃取的2种组织工程学方法均可制备出理想的天然脊髓支架,该支架与脊髓三维组织结构具有高度相似性,有望作为脊髓损伤后桥接物和神经组织工程种子细胞的支架。     

早期自噬在非酒精性脂肪肝中的保护作用

目的 探讨非酒精性脂肪肝细胞模型中早期自噬的发生及作用.方法 用含浓度为400μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型.向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生.采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬.Calcein A...     

选择适宜的灌注去细胞方法应用于全肝脏去细胞支架的制备

目的：对比低浓度十二烷基硫酸钠（SDS）和1％ Triton X-100对制备大鼠肝脏去细胞支架（DLBS）的影响,建立一种简单且适宜的DLBS的制备方法。方法将低浓度SDS（0．25％、0．50％）和1％ Triton X-100分别加入大鼠肝脏去细胞流程,通过免疫荧光及扫描电子显微镜观察支架结构,并对支架内成分进行定量分析,再通过四氮唑盐比色法（MTT ,Assay）观察支架对C3A的细胞毒性。结果 0．25％ SDS和0．50％ SDS处理组的DNA定量均小于50 ng／mg干质量,并且糖胺聚糖在0．25％SDS和1％ T riton X-100处理组的定量要高于0．50％ SDS处理组。同时,M T T 实验表明3种方法处理后的去细胞支架对于C3A细胞的生长无毒性作用。结论应用0．25％ SDS在5 mL／min灌注流速下去细胞能够制备更为理想且有效的DLBS ,从而为器官再生打下基础。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

组织工程猪膀胱无细胞基质的制备

目的探讨猪膀胱无细胞基质制备的方法及其作为生物支架材料应用于组织工程膀胱构建的可行性。方法分别采用酶消化法和去污剂洗涤法对新鲜猪膀胱进行脱细胞处理并进行HE染色及电镜检查。应用MTT法进行细胞毒性测定。对5只新西兰兔行大部分膀胱切除术后,采用异种膀胱无细胞基质修补,6周后取材观察修复组织再生情况。结果两种方法均能去除膀胱中细胞成分,光镜及电镜观察无细胞成分残留,细胞毒性测定为1级,细胞相容性好。兔膀胱修补后6周支架材料上有移行上皮及肌肉组织生长。结论经脱细胞处理的猪膀胱无细胞基质具有良好的组织相容性,有作为组织工程膀胱支架材料的应用前景。     

SPK/S1P信号途径对人肝癌细胞增殖、凋亡的作用

目的探讨鞘氨醇激酶/1 磷酸鞘氨醇信号途径（SPK/S1P）对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,观察5～20?μmoL/L浓度范围鞘氨醇激酶的特异性抑制剂N,N′ 二甲基鞘氨鞍醇（DMS）对HepG2细胞增殖、凋亡的影响。结果MTT实验结果显示,5～20?μmoL/L浓度范围的DMS对细胞增殖均有抑制作用,透射电镜观察对照组细胞可见细胞凋亡的变化,TUNEL标记法检测处理组阳性细胞表达百分数较对照组明显增多（P＜0.01）。结论DMS对HepG2细胞的生长增殖具有抑制作用,并促其发生凋亡。     

反义细胞周期素D1基因对肝癌细胞的作用

目的研究反义基因封闭技术体外抑制细胞周期素D1（cyclin D1）表达后对肝癌细胞增殖的影响。方法肝癌HepG2细胞被转染表达cyclinD1反义互补脱氧核苷酸（AScDNA）的质粒后，观察其cyclinD1表达及体外增殖活性的改变。结果cyclinD1反义cDNA可特异性地抑制肝癌细胞，cyclinD1蛋白的表达。从而调控细胞周期，抑制肝癌细胞增殖。结论利用cyclin D1反义cDNA进行细胞周期干预对肝癌的治疗具有潜在的意义。     

新型脱细胞脑组织修复支架的制备及其细胞相容性

 【目的】研制天然脱细胞脑组织修复支架,并对其形态结构、主要成分和细胞相容性进行分析,为研制出理想的脑损伤修复支架提供初步的实验依据。【方法】取成年Sprague-Dawley （SD）大鼠脑皮质,运用冻融、Triton X-100、脱氧胆酸钠、DNA/RNA酶等进行脱细胞处理并予京尼平（Genipin,GP）交联,对处理后的支架材料进行形态结构观察、主要成分分析和细胞相容性观察。【结果】经脱细胞处理后,脑组织细胞成分已去除,形态上具有高度仿生的三维立体空间网状结构。经GP交联后脱细胞支架空间网状结构变得更为明显,无菌保留3个月未见明显降解。平均孔径（14.9±2.5）μm,孔隙率达（90.4±2.2）％。脱细胞支架细胞外基质成分层粘连蛋白(Laminin,LN)强阳性表达、纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）和Ⅳ型胶原（Collagen Ⅳ,Col Ⅳ）弱阳性表达。神经干细胞与脱细胞支架共培养,HE可见细胞外基质支架间大量细胞粘附; SEM下可见大量神经干细胞粘附在支架材料表面,部分细胞表面有突起。【结论】初步研制的脱细胞脑组织支架呈立体空间网状结构,部分保留了细胞外基质成分,并具有良好的细胞相容性。     

拓扑替康体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的 探讨拓扑替康(topotecan，TPT)对肝癌细胞增殖和凋亡的生物学效应及机制。方法 采用HE染色、MTT实验、克隆形成试验、流式细胞仪、DNA电泳、透射电镜观察等方法，对TPT在HepG2细胞株的作用进行体外研究。结果 TPT对HepG2细胞产生明显的生长抑制作用，并可诱导HepG2细胞凋亡，与细胞周期被阻滞于S期有关。结论 TPT对肝癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用，提示TPT是治疗肝癌潜在的分子药物。