Survivin和Livin在视网膜母细胞瘤组织中的表达及其诊断价值

目的 探讨视网膜母细胞瘤组织中Survivin和Livin表达在其临床诊断中的价值.方法 Survivin和Livin在97例视网膜母细胞瘤和28例正常视网膜组织中的表达水平采用免疫组化S-P法进行检测,并分析两者在视网膜母细胞瘤诊断中的价值.结果 视网膜母细胞瘤组织中Survivin和Livin的阳性率分别为67.0%(65/97)、62.9%(61/97),高于正常视网膜组织的10.7%(3/28)、17.9%(5/28),差异均有统计学意义(P均<0.05).Survivin和Livin在视网膜母细胞瘤组织中的表达均与其分化程度、临床分期有关(P均<0.05).视网膜母细胞瘤组织中Survivin和Livin的表达呈正相关(r=0.709,P<0.05).结论 Survivin和Livin在视网膜母细胞瘤组织中存在异常高表达,且两者可能具有协同作用,两者联合检测可能对视网膜母细胞瘤的疾病诊断及病情评估具有一定的实际应用价值.     

Survivin基因沉默抑制结肠癌生长的动物实验研究

目的 探究survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体SUR和阴性对照质粒Neg,并将其转染人结肠癌Lovo细胞,分别种植到裸鼠皮下建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化方法检测移植瘤survivin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 移植转染细胞8周,与空白对照组比较,SUR组移植瘤的体积和质量均有显著缩小(P<0.05),体积和质量抑瘤率分别为48.9%和51.2%.与空白对照组比较,SUR组移植瘤survivin表达显著下调,表达指数为31.9%;SUR组肿瘤细胞凋亡显著增加,凋亡指数18.47%(P<0.05).阴性对照Neg组的上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义.结论 Survivin基因沉默能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长.     

Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响

目的:研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响。方法:培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别采用流式细胞术检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞凋亡和细胞周期的影响,应用MTT法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞活性的影响,Western blot法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44 细胞自噬相关蛋白LC3、p62 与mTOR 表达的影响。结果:流式细胞术结果表明,与Control组和GFP组相比,Survivin-shRNA组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;随着作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组（P＜0.05）。MTT结果发现Survivin-shRNA可抑制HXO-RB44细胞增殖活性,与Control组和GFP组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果发现,与对照组相比,LC3表达量显著增加（P＜0.01）;而mTOR表达量降低（P＜0.01）。结论:Survivin-shRNA可促进视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

沉默AFP基因可抑制肝癌HepG2细胞Survivin mRNA的表达

  目的  探讨肝癌HepG2细胞AFP基因沉默对Survivin表达的影响。  方法  通过siRNA技术下调肝癌HepG2细胞中AFP的表达,采用ELISA法测定转染前后上清液AFP浓度,MTT法检测转染前后细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR检测转染前后细胞Survivin mRNA水平。  结果  转染48 h后,实验组上清液中AFP浓度显著下降,肝癌细胞生长活性下降43.1%,凋亡率增加24.3%,HepG2细胞中Survivin mRNA表达降低78.0%。对照组和空白组的上述指标均无明显变化。  结论  沉默肝癌HepG2细胞AFP的表达,能有效抑制肝癌细胞生长、促进细胞凋亡,这一作用可能与细胞内Survivin mRNA水平降低有关。      

靶向沉默CXCR4基因抑制肝细胞癌侵袭体外研究

目的:采用RNAi技术构建CXCR4shRNA干扰载体,探讨靶向沉默CXCR4基因表达后对人肝细胞癌增殖和侵袭作用的影响及可能机制。方法:通过蛋白质印迹法和RT-PCR,检测不同分化程度的肝癌细胞株CXCR4表达程度。通过RNAi技术,将CXCR4shRNA干扰载体转染CXCR4高表达的肝癌细胞HepG2,并采用G418筛选出稳定表达株,蛋白质印迹法和RT-PCR验证shRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率。以转染空载体细胞为阴性对照组,MTT法检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的增殖能力,Transwell小室侵袭试验检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的侵袭能力,蛋白质印迹法检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,免疫荧光检测MMP-2在细胞内表达。结果:CXCR4靶向沉默的细胞CXCR4表达受到显著抑制。HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞CXCR4蛋白相对表达量分别为0.56±0.07、0.54±0.04和0.14±0.05,F=57.42,P<0.001。正常HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞的CXCR4mRNA相对表达量分别为1.04±0.05、1.05±0.11和0.19±0.03,P<0.001。MTT结果显示,CXCR4基因沉默能明显抑制HepG细胞的增殖。72h时正常HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞的相对增殖速度分别为1.34±0.05,1.32±0.03和1.14±0.03。Transwell试验显示,10%FBS趋化作用下,HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-穿膜细胞数分别为85±13、89±17和23±6,差异有统计学意义,F=63.91,P<0.001;SDF-1趋化作用下,HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-穿膜细胞数分别为168±20、171±24和30±9。蛋白质印迹法显示,相对于正常HepG2细胞(0.83±0.04),HepG2-CXCR4-细胞MMP-2相对表达量(0.31±0.06)明显下降,P<0.001;而HepG2-Vector细胞MMP-2相对表达量(0.85±0.07)改变不明显,P=0.75。HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞MMP-9相对表达量分别为0.35±0.04、0.33±0.07和0.32±0.06,差异无统计学意义,F=0.23,P=0.79。结论:通过RNAi技术成功靶向干扰CXCR4基因表达,可抑制肝癌细胞增殖和侵袭,可能与其抑制侵袭相关分子MMP-2表达有关。     

视网膜母细胞瘤组织中Survivin、P53的表达及其意义

目的 探讨视网膜母细胞瘤组织中survivin、P53表达的变化及其临床价值.方法 采用免疫组化S-P法检测100例视网膜母细胞瘤和30例正常视网膜组织中survivin、P53的表达水平,并分析两者与视网膜母细胞瘤临床病理参数的关系.结果 视网膜母细胞瘤组织中survivin的阳性率为63.0％ (63/100),高于正常视网膜组织的0.0％ (0/30) (P ＜0.05);视网膜母细胞瘤组织中P53的阳性率为51.0％ (51/100),高于正常视网膜组织的3.3％ (1/30) (P ＜0.05).视网膜母细胞瘤组织中survivin、P53的表达均与患者的分化程度、临床分期有关(P＜0.05).视网膜母细胞瘤组织中survivin、P53的表达呈正相关关系(r=0.575,P＜0.05).结论 视网膜母细胞瘤组织中存在survivin、P53的异常表达,且两者可能参与了肿瘤的浸润、转移等疾病进展过程.     

BDNF表达下调抑制HepG2细胞侵袭的相关分子机制研究

目的：应用特异性siRNA下调HepG2细胞中BDNF表达,观察对细胞凋亡和侵袭的影响并探讨相关分子机制。方法：在人HCC细胞系HepG2中,采用Western blot方法检测BDNF的表达,采用ELISA方法检测培养液上清BDNF的分泌水平。特异性BDNF-siRNA转染细胞,采用FITC-phalloidin染色方法检测actin细胞骨架的变化,采用Western blot方法检测细胞内RhoA、Rac1、Cdc42的活化情况。同时,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭能力的变化。结果：HepG2细胞培养上清中BDNF含量为88.56±7.45 pg/ml。在HepG2细胞中,特异性BDNF-siRNA显著抑制BDNF的表达,干扰细胞内actin细胞骨架聚合,RhoA或Rac1活性受到抑制,同时凋亡细胞数增加、细胞侵袭能力下降。结论：干扰BDNF的表达可以显著抑制细胞侵袭能力,这可能与阻断actin细胞骨架聚合、以及RhoA或Rac1活化相关。BDNF/TrkB信号通路可能作为阻断HCC发展演进的新靶点,有待于进一步深入研究。     

沉默survivin基因抑制Lovo细胞生长的体外实验研究

目的 探讨survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞体外生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体质粒,然后转染结肠癌Lovo细胞.用RT-PCR和Western Blot方法检测survivin的Mrna和蛋白的表达情况.MTT实验评价转染后各组细胞的增殖抑制情况.结果 靶向survivin的shRNA能够明显下调survivin Mrna和蛋白质表达(P＜0.05),其抑制率分别是39.59%和42.32%.MTT实验提示转染特异性靶向survivin shRNA的Lovo细胞在转染48小时后出现呈时间依赖性的生长抑制.在转染后72 h,该细胞存活率仅为41.8%.与空白对照组相比有显著性的降低(P＜0.05).结论 靶向survivin的特异性shRNA能够有效地沉默结肠癌Lovo细胞的survivin基因表达,体外实验能显著抑制肿瘤细胞增殖.     

应用siRNA技术下调Survivin抑制胃癌细胞SGC7901生长的研究

目的研究小干扰RNA对人胃癌SGC7901细胞Survivin表达及细胞生长的抑制作用。方法：将小干扰RNA转染给胃癌SGC7901细胞来敲除Survivin的表达。用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和Westernblotting测定SurvivinmRNA和蛋白的表达。用甲基噻唑基四唑（MTT）来分析Survivin小干扰RNA对癌细胞的生长抑制作用。用流式细胞术检测Survivin siRNA对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：小干扰RNA能有效而稳定地抑制胃癌SGc7901中Survivin表达,下调Survivin可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长,在转染后24、48和72h,转染Survivin特异性siRNA组生长抑制率显著高于对照组,用特异性SurvivinsiRNA处理后,凋亡率为13．56％,并出现G0／G1期阻滞。结论：下调Survivin可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长,抑制Survivin的表达可以诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,Survivin特异性siRNA的运用作为一种治疗癌症的新途径值得进一步研究。     

Survivin-shRNA对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用及其机制

目的:研究Survivin-shRNA对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用,并探讨其与凋亡及PI3K/Akt信号通路之间的关系。方法:重组腺病毒Survivin-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞,以1∶5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,GFP组和CON组为阴性对照组。采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型50只,每3天用卡尺测量肿瘤体积;颈椎脱臼法处死裸鼠,称取骨肉瘤标本的重量;免疫组织化学法检测磷酸化Akt（p-Akt）、生存素（Survivin)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白的表达。结果:骨肉瘤生长曲线显示,与CON组和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,差异有统计学意义（P＜0.05）;肿瘤的重量结果显示, CON组、GFP组及Survivin-shRNA组分别为（2.13±0.32） g、（1.94±0.27） g及（1.42±0.19） g,差异有统计学意义（P＜0.01）;免疫组织化学结果显示,p-Akt及Survivin的表达在Survivin-shRNA组中明显低于CON组和GFP组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而Caspase-3高表达。结论:Survivin-shRNA可抑制裸鼠骨肉瘤的生长,其机制可能是通过调节PI3K/Akt信号通路及Survivin、Caspase-3的表达来实现。     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响

目的：探讨应用RNAi技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法：构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivinmRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝（Myr）检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：SKOV3-siRNA组细胞survivinmRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低（P〈0．05）。结论：下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

沉默EMMPRIN对肾透明细胞癌增殖的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在肾透明细胞癌增殖中的作用。方法:利用免疫组化、实时定量PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)等方法检测肾癌组织与肾透明细胞癌细胞株中EMMPRIN的表达情况。通过小分子干扰核糖核酸（siRNA）EMMPRIN在786-O细胞中的表达,研究EMMPRIN下调后对786-O肾癌细胞株生物学功能的影响。结果:EMMPRIN在肾癌组织中高表达,肾癌细胞系中EMMPRIN的表达高于正常的肾小管上皮细胞。通过小干扰RNA来敲除EMMPRIN的表达,并影响肾透明细胞癌的增殖。结论:EMMPRIN在肾肿瘤组织和肾癌细胞株中皆呈现出过表达的状态。下调其表达可以降低肾细胞癌的增殖水平,表明EMMPRIN的高表达可能是肾细胞癌患者预后较差的指标,可被视为肾癌治疗的潜在靶点。     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法：构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果：靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强（P＜0.05）.结论：利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.     

胃癌细胞中Cullin1基因表达与肿瘤细胞凋亡的关系

目的:探讨胃癌组织及细胞中Cullin1基因表达水平及其对凋亡的影响及其机制。方法:在TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库下载胃癌数据,分析胃癌组织与正常组织中Cullin1表达差异。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测36例胃癌及正常组织中Cullin1基因表达。合成小干扰RNA（Cullin1-siRNA）转染胃癌细胞系AGS,抑制Cullin1表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的增殖活性;流式细胞仪实验检测细胞凋亡率;qRT-PCR和蛋白印迹（Western blot）检测转染各组细胞Cullin1、Bcl2、Bax和Survivin、Livin基因mRNA和蛋白表达。结果:生物信息学结果显示,Cullin1基因在胃癌组织中表达水平明显高于正常组织（P＜0.01）;不同T分期的胃癌组织中Cullin1基因表达存在差异（P=0.026）。qRT-PCR结果显示验证结果与生物信息学结果符合。Cullin1-siRNA能有效沉默AGS细胞Cullin1基因的表达;有效抑制AGS细胞Cullin1表达后,转染组细胞的活性明显低于NS-siRNA组和空白对照组;凋亡率在Cullin1-siRNA组明显高于NS-siRNA组、空白对照组。Cullin1-siRNA转染后AGS中Cullin1和Bcl2、Survivin、Livin基因和蛋白表达下调,而Bax基因和蛋白表达上调(P＜0.05)。结论:Cullin1基因在胃癌中表达增强且与肿瘤浸润深度有关,该基因可能通过抑制胃癌细胞凋亡而发挥作用。     

染料木黄酮和顺铂对耐药卵巢癌细胞SKOV-3中survivin表达的影响

目的：观察不同浓度的染料木黄酮和顺铂对耐药卵巢癌细胞系SKOV-3中survivin表达的影响。方法：采用RT-PCR和免疫细胞化学方法，检测不同浓度顺铂和染料木黄酮作用于SKOV-3细胞后survivin mRNA及蛋白表达的变化。结果：与对照组相比，顺铂组survivin mRNA及蛋白表达增强，染料木黄酮组及联合用药组survivin mRNA及蛋白表达减弱（P〈0．05）。结论：染料木黄酮能够降低SKOV-3细胞中survivin mRNA及蛋白的表达，并抑制顺铂诱导的survivin过高表达。这一作用可能是其增加SKOV-3细胞对顺铂敏感性的重要机制之一。     

High Expression of the RECK Gene in Breast Cancer Cells is Related to Low Invasive Capacity

OBJECTIVE To investigate the expression of the RECK gene in human breast (cancer) cell lines, and to determine the relationship between RECK gene expression and the invasive capacity of the breast cancer cell lines. METHODS The invasive capacity of breast (cancer) cell lines including HBL-100, MCF-7 and MDA-MB-435S were determined by the Tran-swell method. The protein expression levels of RECK, MMP-2 and MMP-9 genes in these three cell lines were measured by immunocytochemical methods. The expressions of the RECK gene and protein level were measured by RT-PCR and Western blots in the cell lines respectively. RESULTS The order of the invasive capacity of the breast (cancer) cell lines was MDA-MB-435S, being the highest, and HBL-100, being the lowest. The invasive capacity difference between any two groups among the three groups was significant (P<0.01). The protein expression level of the RECK gene in the HBL-100 cell line was highest, and no expression was detected in MDA-MB-435S cells. Moreover, the expression of the RECK gene was negatively correlated with the expression of the MMP-2 and MMP-9 genes. The mRNA level of the RECK gene in HBL-100 cells was the highest, but no expression was found in the MDA-MB-435S cells (P<0.001). CONCLUSION There was a significant negative correlation between the expression level of the RECK gene and invasive capacity in vitro, and the RECK gene expression showed an inverse proportion to that of the MMP-2, MMP-9 genes.     

shRNA沉默Survivin基因对人骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响

目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制.方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染.细胞以1:5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,Survivin-shRNA组为Survivin-shRNA转染的细胞,GFP组和CON组为阴性对照组.每3天用卡尺测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线.颈椎脱臼法处死裸鼠,取骨肉瘤标本称重.Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达.结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质.骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长.肿瘤的重量结果显示,Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤重量的增加.Western blot结果显示,SUV、VEGF的表达在Survivin-shRNA组中明显低于对照组,而CAS-3表达相反.结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖及成瘤能力,其机制可能是通过调节SUV、VEGF、CAS-3的表达及抑制肿瘤新生血管形成等来实现的.