密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型中泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。

方法：将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞,随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组),无雄激素培养空白组(以下简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。建立干眼症细胞模型。用Trizol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。

结果：密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。

结论：密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加。密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。     

密蒙花总黄酮含药血浆干预干眼症细胞凋亡模型STAT1磷酸化蛋白表达

目的:探讨密蒙花总黄酮含药血浆和雄激素受体阻滞剂对泪腺上皮细胞中STAT1的磷酸化蛋白表达的影响。方法:体外分离及培养泪腺上皮细胞。以H2O2诱导大鼠泪腺上皮细胞凋亡,建立雄激素水平下降所致干眼症的细胞凋亡状态。设立空白血浆组、密蒙花总黄酮含药血浆干预组、丙酸睾酮干预组,分别观察各组STAT1的磷酸化蛋白表达情况;并应用雄激素受体阻滞剂氟他胺,考察密蒙花总黄酮的拟雄激素效应。结果:免疫印迹结果表明,含药血浆干预后,密蒙花总黄酮含药血浆干预组中(0.353±0.494)与丙酸睾酮干预组中STAT1的磷酸化蛋白(0.502±0.036)的表达增强,两组间的差异有统计学意义(P<0.01)。各组加入雄激素受体阻滞剂后,各组间(分别是0.268±0.061,0.283±0.106,0.213±0.071)的STAT1的磷酸化蛋白表达间无差异。结论:密蒙花总黄酮含药血浆可促进STAT1的磷酸化表达,并激活STAT1细胞信号传导通路,而产生与丙酸睾酮相同的雄激素效应。     

密蒙花总黄酮含药血浆干预干眼症细胞凋亡模型AR mRNA表达

目的:探讨密蒙花总黄酮含药血浆对雄激素水平下降所致干眼症的细胞凋亡模型ARmRNA表达的影响,并应用雄激素受体阻滞剂以确定ARmRNA表达与密蒙花总黄酮含药血浆和AR受体的结合效应有关。方法:体外分离及培养泪腺上皮细胞,以H2O2诱导大鼠泪腺上皮细胞凋亡,建立雄激素水平下降所致干眼症的细胞凋亡模型。设立空白血浆组、密蒙花总黄酮含药血浆组、丙酸睾酮组,分别观察各组ARmRNA表达情况;并应用雄激素受体阻滞剂氟他胺,观察密蒙花总黄酮的拟雄激素效应。结果:密蒙花总黄酮含药血浆干预组与丙酸睾酮干预组中ARmRNA的表达增强,两组间的差异有显著性(P<0.05)。各组加入雄激素受体阻滞剂后,组间的ARmRNA表达无差异(P>0.05)。结论:密蒙花总黄酮含药血浆可促进ARmRNA表达,产生与丙酸睾酮相同的雄激素效应。ARmRNA的表达与密蒙花总黄酮含药血浆和AR受体的结合效应有关。     

氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响

目的　探讨过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1）表达的影响。方法　将人ARPE-19细胞系分别用0 μmol·L^-1 H₂O₂（对照组）、50 μmol·L^-1 H₂O₂、100 μmol·L^-1 H₂O₂、200 μmol·L^-1 H₂O₂、400 μmol·L^-1 H₂O₂、600 μmol·L^-1 H₂O₂ 6个浓度梯度处理。采用Live/Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力;采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平。结果　H₂O₂处理6 h后,对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1及600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞死亡率分别为（0.35±0.11）%、（2.03±0.87）%、（3.76±1.41）%、（12.17±1.26）%、（17.69±2.24）%、（25.22±0.59）%,RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高（P<0.05）。H₂O₂作用后对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞生存率分别为（40.72±2.71）%、（37.75±0.62）%、（35.30±0.68）%、（34.10±0.74）%、（33.61±0.71）%、（31.05±1.41）%,RPE细胞增殖明显减少（P<0.05）,具有剂量-效应关系。随着H₂O₂浓度的增加,BAX蛋白表达逐渐上升（P<0.01）,而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降（P<0.01）,BAX/BCL-2比值相比对照组分别升高1.85倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.35倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.86倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、3.97倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、8.50倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）;HINT1在H₂O₂处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降（P<0.01）,分别下降0.78倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.59倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.45倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.42倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.38倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）。结论　H₂O₂氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱,细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高;同时,细胞中HINT1表达下调,表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生,为其药物作用的潜在靶点。     

槲皮素对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导损伤的视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨槲皮素对N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid,NMDA）诱导的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）损伤的保护作用及其机制。方法　将小鼠RGC随机分为对照组,NMDA组,NMDA+1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1槲皮素处理组,槲皮素处理组,NMDA+槲皮素+茴香霉素（anisomycin,ANISO）处理组,NMDA+槲皮素+P79350处理组。NMDA组细胞加入100 μmol·L^-1的NMDA作用24 h,NMDA+1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1槲皮素处理组则在NMDA作用前分别加入相应浓度槲皮素预处理2 h,槲皮素处理组只加入10 μmol·L^-1槲皮素处理,NMDA+槲皮素+ANISO处理组和NMDA+槲皮素+P79350处理组在NMDA和槲皮素处理后分别加入25 μg·L^-1的ANISO和50 μmol·L^-1的P79350处理。随后利用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）试剂盒检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清液中活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和一氧化氮（nitric oxide,NO）水平,RT-PCR检测细胞中神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）mRNA表达,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）和p-JNK蛋白表达水平,Caspase-3活性试剂盒检测Caspase-3活性。结果　与对照组比较,NMDA组细胞活性、SOD、Bcl-2 mRNA表达水平降低,LDH,ROS,MDA,NO,iNOS mRNA、nNOS mRNA、Bax mRNA和蛋白表达水平,Caspase-3活性,p-JNK蛋白表达水平,p-p38 MAPK蛋白表达水平,细胞凋亡率均升高（均为P<0.05）。相比于NMDA组,NMDA+槲皮素处理组则提高细胞活性和SOD水平,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,降低LDH、ROS、MDA和NO,下调iNOS mRNA、nNOS mRNA、Bax mRNA和蛋白,p-JNK蛋白以及p-p38 MAPK蛋白表达,并降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（均为P<0.05）。ANISO和P79350抵消槲皮素的作用。结论　槲皮素通过JNK/p38 MAPK信号通路防止NMDA诱导的RGC损伤。     

转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞增殖中NLRP3炎症小体的表达及意义

目的　探讨转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）刺激下Nod样受体蛋白3（nod-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体在视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）增殖中的表达变化及意义。方法　利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型，随机分为空白对照组（Sham组）和TGF-β诱导RPE细胞增殖组（TGF-β组），TGF-β组再根据浓度（0.5 μg·L^-1、2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1、12.5 μg·L^-1）分组。利用MTT 微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况；Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化；利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素（interleukin，IL)-1β和 IL-18表达情况。结果　与Sham组比较，0.5 μg·L^-1 TGF-β组RPE细胞增殖不明显，差异无统计学意义（P>0.05），但NLRP3、IL-1β和 IL-18表达明显提高（均为P<0.01）；2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖明显，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均提高（均为P<0.05）；与0.5 μg·L^-1 TGF-β组相比，2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖显著增加，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同，两者可能相互调控影响RPE细胞增殖，在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。     

丹参酮ⅡA对人角膜基质细胞纤维化的抑制作用

目的　研究丹参酮ⅡA （tanshinoneⅡA,TSN） 对转化生长因子β1 （transforming growth factor-β1,TGF-β1） 诱导的人角膜基质细胞 （human keratocyte,HK） 纤维化的作用,探索该药物是否具有防治角膜瘢痕的潜能。方法　采用胰蛋白酶消化培养HK,并传代至4-7代用于实验。通过TGF-β1诱导建立HK纤维化模型,并分别用5.0 μg·L^-1 TGF-β1和不同浓度的TSN联合给药方法对HK进行处理。采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）与Vimentin的表达,qPCR检测纤连蛋白 （fibronectin,FN） 和I型胶原（collgen I,COL I） mRNA的表达;利用细胞免疫荧光染色观察HK细胞形态的改变。结果　5.0 μg·L^-1 TGF-β1可以显著上调α-SMA与Vimentin蛋白的表达和胞外基质成分FN mRNA（2.238±0.227）、COL I mRNA（3.554±0.526）的表达。2.5 μmol·L^-1和5.0 μmol·L^-1 TSN均能抑制α-SMA蛋白的表达和FN mRNA（0.619±0.017、0.263±0.006）、COL I mRNA（0.631±0.011、0.275±0.081）的表达。5.0 μg·L^-1 TGF-β1诱导组HK形态呈长梭形,具有两极,细胞呈极性分布;5.0 μmol·L^-1 TSN联合5.0 μg·L^-1 TGF-β1培养HK形态同原始细胞形态,细胞呈三角形或星形。结论　TSN可抑制TGF-β1诱导的HK纤维化,具有抗角膜瘢痕的潜力。     

淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用研究

目的观察淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用。方法随机将80只雄性健康新西兰大耳白兔分为A组(空白组)、B组(手术组)、C组(淫羊藿总黄酮组)、D组(雄激素组),每组20只。A组以生理盐水进行灌胃,B、C、D三组建立干眼症模型后分别以生理盐水灌胃、淫羊藿总黄酮灌胃、丙酸睾酮肌肉注射进行干预。每组根据喂养时间不同又分为A1～D1组(喂养1个月)和A2～D2组(喂养2个月),每组10只。A1～D1组于造模前及造模后2周、4周时,A2～D2组于造模后6周及末次最后一次用药后对雄兔进行泪液分泌实验(SchirmerⅠtest,SIT)和泪膜破裂时间(BUT)检查;A1～D1组和A2～D2组分别在饲养1个月及2个月时处死雄兔,即刻摘取泪腺,应用Western blot检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果 SIT、BUT检查结果显示,B、C、D三组雄兔均在造模1个月后形成干眼症。C1组、C2组及D1组、D2组雄兔泪腺组织中的Bax相对含量均较B1组、B2组低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);C2组Bax相对含量低于C1组,差异有统计学意义(P<...     

不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

甘草查尔酮A对过氧化氢致视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对过氧化氢（H₂O₂）致视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法　体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）、H₂O₂组（培养基中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂）、LCA组（培养基中除加入200 μmol·L^-1 H₂O₂外,还分别加入10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1的LCA溶液）,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果　CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组的细胞存活率分别为（63.7±5.4）%、（78.8±6.3）%和（72.3±6.9）%,与H₂O₂组的（54.3±3.9）%相比,20 μmol·L^-1 LCA组增殖最显著（P＜0.05）。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组细胞凋亡率分别为（21.1±1.9）%、（12.3±1.3）%和（14.8±2.0）%,与H₂O₂组的（29.3±2.0）%比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。ELISA法检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加（均为P＜0.05）。结论　LCA能缓解H₂O₂诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。     

石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用及其可能机制

目的 探讨石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用,并分析其可能机制。方法 取B16F10葡萄膜黑色素瘤细胞株,按石蒜碱浓度为0μmol·L^-1(对照组)、1.560μmol·L^-1、3.125μmol·L^-1、6.250μmol·L^-1、12.500μmol·L^-1、25.000μmol·L^-1进行分组培养,24 h后,CCK-8法检测各组B16F10细胞的存活率;RT-PCR分析各组B16F10细胞VEGF-A mRNA的表达,ELISA检测各组B16F10细胞VEGF-A蛋白表达;流式细胞仪检测各组B16F10细胞的细胞周期及凋亡情况。结果 与对照组相比,1.560μmol·L^-1、3.125μmol·L^-1、6.250μmol·L^-1、12.500μmol·L^-1、25.000μmol·L^-1石蒜碱作用于B16F10细胞24 h后,能够呈浓度依赖性...     

PI3K/Akt信号通路对高糖状态下视网膜Müller细胞的影响

目的探讨PI3K/Akt信号通路对高糖状态下视网膜Müller细胞的影响及机制。方法本实验分两部分,动物实验:雄性SD大鼠随机分成对照组、糖尿病组、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)组、IGF-1+LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)组。后三组采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(50 mg·kg^-1)诱导成为糖尿病模型。模型诱导成功后,IGF-1组给予IGF-1 (80 g·L^-1) 5μL玻璃体内注射给药,IGF-1+LY294002组给予5μL(IGF-1+LY294002)(80μg·L^-1)玻璃体内注射给药。细胞实验:对培养的Müller细胞进行不同处理,分为对照组(空白对照)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、IGF-1组(30 mmol·L^-1葡萄糖+80μg·L^-1 IGF-1)、IGF-1+LY294002组[30 mmol·L^-1...     

地塞米松对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞炎症损伤及NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的探究地塞米松(Dex)对脂多糖(LPS)诱导人视网膜色素上皮(HRPE)细胞炎症损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响。方法体外培养ARPE-19细胞株,MMT法检测不同浓度Dex处理细胞24 h、48 h、74 h对LPS诱导ARPE-19细胞存活率的影响,确定Dex最佳处理浓度和时间。ARPE细胞随机分为:正常对照组(NC组)、LPS组(5 mg·L^-1 LPS)、Dex组(0.20 mol·L^-1 Dex)、Dex+LPS组(0.20 mol·L^-1 Dex+5 mg·L^-1 LPS),RT-qPCR检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量,ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平,Western blot检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平。结果同一时间点,与NC组比较,LPS组ARPE-19细...     

α-硫辛酸对高糖条件下培养的人晶状体上皮细胞的保护作用

目的　探讨α-硫辛酸（alpha-lipoic acid,ALA）对高糖条件下培养的人晶状体上皮细胞系HLEC-B3的保护作用。方法　将传代培养的HLEC-B3细胞分为正常对照组、高糖组、ALA组。正常对照组不做任何处理,ALA组HLEC-B3经过不同浓度ALA（25 μmol·L^-1、50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1）预处理1 h后,与高糖组一同置于高糖条件下培养48 h。经上述处理后,即刻采用MTT检测各组晶状体上皮细胞的活性,流式细胞仪检测各组细胞内线粒体活性氧（reactive oxygen species,ROS）的变化,Western blot和RT-PCR检测各组细胞内锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）的表达。结果　高糖组HLEC-B3细胞活性为53.60%±4.10%,较正常对照组显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）,25 μmol·L^-1、50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1 ALA组细胞活性分别为65.30%±3.70%、72.70%±4.90%、83.40%±3.60%,均较高糖组显著增高（均为P<0.05）;流式细胞仪检测结果显示,高糖组细胞内ROS水平较正常对照组明显增高（P<0.01）,各浓度ALA组ROS水平分别降低为14.70%±0.70%、8.70%±0.87%、5.20%±0.53%,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。RT-PCR及Western blot检测结果显示,高糖培养后细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量均较正常对照组显著降低（均为P<0.01）;与高糖组相比,不同浓度ALA组细胞内MnSOD mRNA相对表达量分别增高为0.63±0.06、0.71±0.06、0.84±0.04;MnSOD蛋白相对表达量分别增高为0.25±0.03、0.31±0.02、0.45±0.04,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。ALA对高糖诱导的HLEC-B3细胞损伤的保护作用呈一定的浓度依赖性。结论　ALA对高糖条件下培养的HLEC-B3具有一定的保护作用,且该保护作用可能是通过提高细胞内MnSOD的表达水平实现的。     

褪黑素联合锌对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨褪黑素（MT）联合锌（Zn）对H₂O₂诱导的人视网膜色素上皮（ARPE）细胞氧化损伤的保护作用。方法　常规培养ARPE细胞株（ARPE-19）,利用不同浓度H₂O₂处理ARPE-19细胞,将细胞存活率接近50%的H₂O₂浓度作为氧化损伤浓度。将ARPE-19细胞分为:不同浓度MT（10^-5 mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-7mol·L^-1）+ZnCl₂（15 μmol·L^-1）组,ZnCl₂组（采用15 μmol·L^-1 ZnCl₂培养细胞）,H₂O₂组（不添加MT和ZnCl₂培养细胞）,空白对照组（细胞不做任何处理）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用试剂盒测量各组细胞内活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）的含量。ELISA检测各组细胞内白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达量。结果　当H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1时,细胞存活率为(54.31±1.91)%,此时细胞存活率接近50%,后续实验中均选择该浓度作为氧化损伤浓度。ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞凋亡率分别为3.05%、1.17%、1.50%、1.71%,与空白对照组（0）相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.76倍、1.59倍、1.41倍,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.13倍和1.25倍,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组细胞内MDA的含量较空白对照组显著提高 （P<0.05）;ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内MDA的含量均较空白对照组稍增加,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1MT+ZnCl₂组和10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均略高于空白对照组,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　MT联合Zn能有效降低H₂O₂损伤所致ARPE-19细胞内ROS的含量,随之减少细胞内MDA的含量,同时也能抑制IL-6和TNF-α的表达量,从而起到保护RPE细胞的作用。     

急性氧化应激初期人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30抗氧化作用的研究

目的　初步探讨衰老标记蛋白30（senescence marker protein 30，SMP30）的增加对处于急性氧化应激初期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04的保护作用。方法　将处于对数生长期的SRA01/04接种于96孔板，分别使用含150 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、250 μmol·L^-1、300 μmol·L^-1、350 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、450 μmol·L^-1 H₂O₂的培养基作用2 h，CCK-8法选取最佳H₂O₂浓度；使用慢病毒对SRA01/04进行转染建立SMP30高表达模型，实验分3组:SMP30过表达（over expression，OE）组、SMP30过表达相应空载（negative control over expression，NCOE）组及对照（control，CON）组。通过超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）定量检测试剂盒、氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）/总谷胱甘肽（total glutathione,T-GSH）测定试剂盒测量细胞内SOD活力及GSSG/T-GSH比值的变化。结果　经分析，建立模型的最佳H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1。在此浓度下，与CON组（5.783±0.192）U·mg^-1及NCOE组（5.837±0.182）U·mg^-1相比，OE组细胞内SOD活力升高，为（10.251±0.110）U·mg^-1；与CON组（29.943±0.241）及NCOE组（30.037±0.433）相比，OE组细胞内GSSG/T-GSH比值（20.990±0.342）降低；差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　当SRA01/04处于H₂O₂诱导的急性氧化应激初期时，SMP30表达的增加可通过增加SOD活力和降低GSSG/T-GSH比值，加强SRA01/04的抗氧化能力。