bcl-2和p53蛋白在食管鳞癌中的表达

研究证实，bcl-2是参与细胞凋亡的主要抑制基因,肿瘤细胞中高表达的bcl-2蛋白可以促进肿瘤生长[1]。因此，bcl-2与肿瘤的发生、发展有着密切关系。本实验应用LSAB免疫组化方法，研究bcl-2蛋白在食管鳞癌中表达，同时结合p53蛋白表达情况，以探讨它们在食管癌中发生、发展的生物学意义。 1　材料与方法 1.1　材料与试剂 　　随机选用我科1996～1999年以来食管鳞癌标本60例，其中Ⅰ级22例，Ⅱ级18例，Ⅲ级20例；另外3组病例分别为：食管不典型增生22例，慢性炎症18例以及16例正常食管粘膜。bcl-2单抗和p53单抗以及LSAB试剂盒均来源于Dako公司。     

p53蛋白与食管鳞癌的预后

ｐ５３蛋白与食管鳞癌的预后王嘉康刘海鹰我们应用免疫组化（ＡＢＣ）法，对２９例食管鳞癌患者进行检测，探讨ｐ５３蛋白的表达与食管鳞癌患者预后的关系。材料与方法２９例食管鳞癌患者手术标本，常规石蜡包埋４μｍ切片，采用ＡＢＣ免疫组化法检测，ｐ５３癌基因蛋白单...     

茯苓酸通过调控AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为

目的：探究茯苓酸（PA）是否通过AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为。方法：常规培养HCT116细胞,并将其分为对照组、MK-2206(AKT抑制剂)组、PA低浓度（PA-L）组、PA高浓度（PA-H）组、PA-H+SC79(AKT激活剂)组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、qPCR法和WB法实验分别检测各组HCT116细胞的增殖活力,克隆形成能力,细胞凋亡,迁移、侵袭能力,E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA表达以及AKT/MDM2/p53通路相关蛋白的表达。结果：PA可明显抑制HCT116细胞的增殖活力（P<0.05）、克隆形成能力（P<0.05）、迁移和侵袭能力（P<0.05）,诱导其凋亡（P<0.05）,抑制N-cadherin、vimentin mRNA的表达（P<0.05）,促进E-cadherin mRNA的表达（P<0.05）,抑制AKT、MDM2的磷酸化水平（P<0.05）,促进p53蛋白的表达（P<0.05）;AKT抑...     

食管鳞癌p16和p53蛋白的表达及其意义

目的 :探讨 p16、p5 3蛋白在食管鳞癌 (ESC)中的表达及其意义。方法 :利用 S- P法检测 5 6例 ESC中 p16和 p5 3蛋白的表达。结果 :5 6例食管鳞癌中 ,p16蛋白表达阳性 2 1例 ,占 37.5 % ,p5 3蛋白表达阳性 35例 ,占 6 2 .5 % ,p16和 p5 3蛋白表达与肿瘤分化程度关系密切 ,随分化程度的降低 ,p16蛋白阳性率逐渐降低 (P<0 .0 2 5 ) ,p5 3蛋白阳性率逐渐增加 (P<0 .0 5 ) ,p16阳性表达组 p5 3表达显著低于 p16阴性组 (P<0 .0 1) ,且与淋巴结转移有一定的关系。结论 :联合检测食管鳞癌组织中 p16和 p5 3蛋白的表达有助于综合判断食管鳞癌的恶性程度和转移潜能。     

食管鳞癌中p53 、p57Kip2和CD68的表达及其临床意义

目的 探讨p53 、p57Kip2和CD68蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌生物学行为的关系。方法 应用免疫组化SP法检测51例食管鳞癌组织中p53 、p57Kip2和CD68蛋白的表达,并分析3种蛋白表达之间及其分别与临床病理特征之间的关系。结果 食管鳞癌组织中p53 、p57Kip2和CD68的阳性表达率分别为64.71％、45.09％和58.82％;p53和CD68表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关（P＜005）;p57Kip2的阳性表达与分化程度和淋巴结转移有关（P＜0.05）,与TNM分期无关（P＞0.05）。p53阳性表达者的p57Kip2阳性表达率为2424％,明显低于p53阴性表达者的8333％（P＜0.05）;CD68阳性表达者的p57Kip2阳性表达率为2000％,亦明显低于p53阴性表达者的8095％（P＜0.05）。结论p57Kip2与CD68、p53在食管鳞癌中的表达呈负相关,3项指标联合检查有助于判断患者的预后。     

皮层肌动蛋白可通过PI3K-AKT通路调控食管鳞癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨皮层肌动蛋白(CTTN)对食管鳞癌增殖和凋亡的影响及潜在的调控机制。方法在EC109、TE1细胞中过表达、敲低CTTN;Western blot检测PCNA、cleaved-PARP、cleaved-Caspase3以及PI3K-AKT通路的关键蛋白;CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞活力和细胞增殖情况;软琼脂克隆形成实验评估细胞在动物体内的成瘤性,同时通过裸鼠皮下成瘤实验观察敲低CTTN对裸鼠EC109细胞皮下种植瘤生长的影响。结果成功构建CTTN稳定过表达或敲低的EC109和TE1细胞株。过表达CTTN不仅能提高PCNA、p-PI3K、p-AKT的表达水平,而且抑制cleaved-Caspase3、cleaved-PARP的表达,同时升高细胞活性,促进克隆形成(均P<0.001);敲低CTTN后PCNA、p-PI3K、p-AKT表达水平降低,cleaved-Caspase3、cleaved-PARP的表达升高,细胞活性降低,克隆形成显著减少,皮下种植瘤生长受到明显抑制(均P<0.001)。结论 CTTN通过上调PI3K-AKT通路促进食管鳞癌细胞的增殖,抑制其...     

p53功能失活在食管鳞癌中的表达及意义

目的：建立一种评价肿瘤生物学特性的新方法--p53功能失活检测法，并探讨p53功能失活与食管鳞癌TNM分期(tumor,nodes,metastasis staging）和组织学分级的关系。方法：采用p53功能测定法对45例新鲜食管鳞癌组织和正常食管组织进行p53功能检测（p53基因突变检测作为对照），将检测结果与患者的TNM分开期和组织学分级进行统计学分析。结果：p53功能失活率为64%，明显高于p53基因突变率49%。p53功能失活和食管鳞癌的TNM分期有关，分期越高，p53功能失活率越高；p53功能失活和食管鳞癌的组织学分级有关，分级越高，p53功能失活率越高。结论：p53功能失活有望成为一种评价食管鳞癌生物学特性的新指标；p53功能失活与食管鳞癌的TNM分期和组织学分级有关。     

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的：探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法：在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列，分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化，Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况，并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组比较，转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05)，转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05)；各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05)；与对照组比较，转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01)，迁移和侵袭能力下降(P<0.01)，细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01)；转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01)，迁移和侵袭能力升高(P<0...     

miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖

目的:探讨微小RNA-409-3p（microRNA-409-3p,miR-409-3p）对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2（LIM-homeobox gene 2,LHX2）的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达。结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）,LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）;miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡（P＜0.05）,并可上调Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）,下调CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达（P＜0.05）;双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关。     

NF-kB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活

目的核转录因子NF-kappaB（NF-kB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究拟通过检测NF-kB信号通路在食管鳞癌细胞系中是否存在，分析NF-kB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用。方法采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中NF-kB亚单位p50和p65，阻遏物IKBα及其上游激酶IKKβ的蛋白表达。并采用EMSA法检测两株食管鳞癌细胞核中NP-kB与DNA的结合活性。结果食管鳞癌细胞中存在激活的NF-kB信号通路，p50、p65、IkBα及其上游激酶IKKβ的蛋白在细胞质中均表达，并且p50／p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论本研究发现NF-kB信号通路在两种食管鳞癌细胞系被激活，提示激活的NF-kB信号通路可能在食管鳞癌发生中起重要作用。     

Prognostic Significance of Desmoglein 2 and Desmoglein 3 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Objective: Desmogleins (DSGs) are major members among the desmosomal cadherins critically involved incell-cell adhesion and the maintenance of normal tissue architecture in epithelia. Reports exploring links of DSGfamily member expression with cancers are few and vary. The aim of this study was to investigate the ratio ofDSG2 and DSG3 mRNA expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissue to normal tissue (T/Nratio) and evaluate correlations with clinical parameters. Methods: The mRNA expression of DSGs, as well asγ-catenin and desmoplakin, was detected by real-time quantitative RT-PCR in 85 cases of ESCC tissue specimens.Results: The expression level of DSG3 mRNA was significantly higher than that of DSG2 in ESCC specimens (p= 0.000). DSG3 mRNA expression highly correlated with histological grade (p = 0.009), whereas that of DSG2did not significantly relate to any clinicopathologic parameter. Kaplan-Meier survival analysis showed that onlyDSG3 expression had an impact on the survival curve, with negative DSG3 expression indicating worse survival(p = 0.038). Multivariate Cox regression analysis demonstrated DSG3 to be an independent prognostic factorfor survival. Furthermore, correlation analysis demonstrated the mRNA level of DSG3 to highly correlate withthose of γ-catenin and desmoplakin in ESCC samples (p=0.000), implying that the expression of desmosomalcomponents might be regulated by the same upstream regulatory molecules. Conclusions: Our findings suggestthat DSG3 may be involved in the progression of ESCC and serve as a prognostic marker, while expression ofDSG2 cannot be used as a predictor of ESCC patient outcome.     

食管鳞癌中p53、PCNA和EGFR的表达与化疗疗效的关系

目的:探讨p53、PCNA和EGFR在食管鳞癌中的表达情况与化疗疗效的关系。方法:对66例食管鳞癌化疗前的活检标本用免疫组化技术分别检测p53、PCNA、EGFR的表达。结果:p53蛋白积聚阳性组化疗有效率(16.7%)明显低于p53蛋白积聚阴性组(70.8%)(P<0.01),PCNA过表达组化疗有效率(79.4%)高于PCNA弱表达组(31.3%)(P<0.01),EGFR过表达组化疗有效率(30.4%)低于弱表达组(69.8%)(P<0.01)。经Logistic回归分析,3个指标中,PCNA对化疗疗效的预测价值较大(P<0.01)。结论:食管鳞癌中p53、PCNA和EGFR的表达情况对化疗疗效均有一定的预测价值。其中PCNA价值较大。     

ANGPTL3和MMP-2、MMP-9在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨血管生成素样蛋白3(angiopoietin-like protein 3,ANGPTL3)和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases-2,MMP-2) 及MMP-9在食管鳞状细胞癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测52例食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织和正常食管组织中ANGPTL3和MMP-2、MMP-9的表达。结果食管鳞状细胞癌组织中ANGPTL3、MMP-2和MMP-9的表达与癌旁组织和正常食管组织中的比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。结论ANGPTL3和MMP-2、MMP-9在食管鳞状细胞癌中呈高表达,其联合检测有助于判断食管鳞状细胞癌生物学行为。     

siRNA阻断Stat3信号促进食管鳞癌细胞株凋亡

目的：研究RNA干扰技术沉默Stat3基因对食管鳞癌细胞（EC9706）中持续性激活Stat3信号的阻断作用及对细胞凋亡的影响。方法：将化学合成的100nM的Stat3 siRNA转染EC9706细胞,RT-PCR检测转染前后Stat3 mRNA的表达,Western blot检测转染前后细胞中Bcl-2、Stat3及磷酸化Stat3（p-Stat3）蛋白的表达,凝胶电泳迁移率（EMSA）检测转染前后活化Stat3蛋白的DNA结合活性,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡的改变情况。结果：Stat3 siRNA转染细胞48h后细胞形态发生明显的改变,RT-PCR及Western blot结果显示Stat3 siRNA干扰后Stat3mRNA及蛋白表达均受到明显抑制, Stat3信号的激活被阻断,活化Stat3蛋白的核结合活性显著下降。转染后细胞中Bcl-2蛋白的表达明显减少。流式细胞术结果证明Stat3 siRNA可明显促进细胞凋亡。结论：Stat3 siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中Stat3 信号的持续性激活并促进肿瘤细胞凋亡。     

p16蛋白在食管鳞癌中的表达及其意义

目的：研究p16蛋白表达与食管鳞癌生物学行为的关系。方法：应用免疫组化LSAB法检测52例食管鳞癌p16蛋白表达。结果：21例食管鳞癌p16蛋白表达阳性。阳性率为40.4%，随着恶性程度增加及病程进展，p16蛋白阳性率逐渐下降；p16蛋白阳性与淋巴结转移有关。p16蛋白阴性患者死亡率明显高于p16蛋白阳性者，且存活时间短。结论：检测食管鳞癌组织p16蛋白表达，有助于综合判断食管鳞癌恶性程度，转移潜能和预后。     

EZH2和H3K27me3在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 分析EZH2和H3K27me3在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）组织中的表达及与食管鳞状细胞癌临床病理指标之间的关系,并评价其表达对食管鳞状细胞癌患者预后的意义。方法 利用免疫组织化学法检测65例ESCC患者癌组织及相应的癌旁组织中EZH2及H3K27me3的蛋白表达,分析两者表达与ESCC患者临床病理学指标之间的相关性,并分析两者之间表达的相关性。利用Kaplan-Meier方法及Log rank检验分析两者表达与食管癌生存率之间的关系。结果 癌旁组织中EZH2和H3K27me3蛋白阳性表达率分别为44.6%和26.2%,ESCC组织中分别为70.8%和47.7%,EZH2和H3K27me3蛋白表达均与ESCC患者的组织学分级及淋巴结转移状态呈正相关关系,且EZH2和H3K27me3蛋白表达之间存在正相关关系。EZH2和H3K27me3表达阳性的ESCC患者五年总生存率均明显低于EZH2和H3K27me3表达阴性的患者;EZH2和H3K27me3双阳性的ESCC患者五年总生存率明显低于EZH2和H3K27me3单阳性和双阴性的ESCC患者。Cox回归结果显示,淋巴结转移、组织学分级、EZH2和H3K27me3表达是ESCC患者的独立预后因素。结论 EZH2和H3K27me3在ESCC中均高表达,并与ESCC患者的组织学分级和淋巴结转移状态相关,可能是ESCC患者的不良预后因子。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

Expression and Clinical Significance of REPS2 in Human Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Objective: REPS2 plays important roles in inhibiting cell proliferation, migration and in inducing apoptosisof cancer cells, now being identified as a useful biomarker for favorable prognosis in prostate and breast cancers.The purpose of this study was to assess REPS2 expression and to explore its role in esophageal squamous cellcarcinoma (ESCC). Methods: Protein expression of REPS2 in ESCCs and adjacent non-cancerous tissues from 120patients was analyzed by immunohistochemistry and correlated with clinicopathological parameters and patientoutcome. Additionally, thirty paired ESCC tissues and four ESCC cell lines and one normal human esophagealepithelial cell line were evaluated for REPS2 mRNA and protein expression levels by quantitative RT-PCR andWestern blotting. Results: REPS2 mRNA and protein expression levels were down-regulated in ESCC tissuesand cell lines. Low protein levels were significantly associated with primary tumour, TNM stage, lymph nodemetastasis and recurrence (all, P < 0.05). Survival analysis demonstrated that decreased REPS2 expression wassignificantly associated with shorter overall survival and disease-free survival (both, P < 0.001), especially inearly stage ESCC patients. When REPS2 expression and lymph node metastasis status were combined, patientswith low REPS2 expression/lymph node (+) had both poorer overall and disease-free survival than others (both,P < 0.001). Cox multivariate regression analysis further revealed REPS2 to be an independent prognostic factorfor ESCC patients. Conclusions: Our findings demonstrate that downregulation of REPS2 may contribute tomalignant progression of ESCC and represent a novel prognostic marker and a potential therapeutic target forESCC patients.     

新疆哈萨克族食管鳞癌中p16蛋白的表达及其意义

目的研究p16蛋白表达与新疆哈萨克族食管鳞癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测30例食管鳞癌和60例正常食管组织中p16蛋白的表达。结果60例正常组织中p16蛋白阳性表达率为88.33%(53/60);30例食管鳞癌组织中p16蛋白表达阳性率为46.67%（14/30）。随着恶性程度增加及病程进展,p16蛋白阳性率逐渐下降,p16在高分化鳞癌组阳性表达率(75%)显著高于低分化鳞癌组(25%)(P<0.05)。结论p16蛋白表达缺失可能与哈萨克族食管癌的发生发展有关。