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1.
目的 通过研究冷酚与粗糖的混合比例、粗糖提纯时的质量浓度和乳糖保护剂的用量来制备符合规定的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.方法 发酵细菌,提取A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖粗制品,以不同的纯化工艺纯化A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖.将4种纯化的多糖原液按一定比例混合,加入乳糖作为保护剂,冷冻干燥制成ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.结果 通过比较不同纯化工艺制备的多糖,确定最佳提纯条件为多糖与冷酚的体积比为1∶1,粗糖提纯时的质量浓度为6 g/L.检测按此纯化条件制备的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,3批疫苗的水分含量分别为1.7%、2.0%和2.1%,疫苗的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖含量和回收率分别都≥50 μg/剂和80%,符合相关规定的要求.结论 按确定的工艺成功制备ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗. 相似文献
2.
目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌(meningococcus,Men)多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4)多糖含量的火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIE)法。方法 分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果 菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均大于0.98。该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符,均符合质控标准。结论 建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。 相似文献
3.
目的 应用火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)检测W135群脑膜炎球菌(group W135 meningococcus,MenW135)发酵液的多糖含量,来指导MenW135发酵工艺的改进。方法 制备家兔MenW135抗血清,并确定RIEP琼脂糖凝胶中的抗血清浓度。分别以不同发酵条件培养MenW135,并分别在培养2、3、4、5、6 h时取样,用分光光度法检测菌液的吸光度(A),用RIEP检测菌液的多糖含量。结果 检测MenW135多糖的RIEP琼脂糖凝胶中的抗血清浓度确定为0.1%。在MenW135发酵2~5 h期间,MenW135多糖含量与其A值呈正相关性。然而,在MenW135发酵5~6 h期间,菌液的A值不增加,但菌液的多糖含量仍在升高。结论 相对于通过菌液的A值来观察菌液的多糖含量,RIEP检测能直接获得菌液的多糖含量,从而更好地指导MenW135多糖疫苗发酵工艺的优化。 相似文献
4.
目的 研究苯酚提取法对A 群脑膜炎球菌多糖料液中细菌内毒素含量的影响。方法 用苯酚对A 群脑膜炎球菌多糖料液进行提取,比较粗制多糖不同溶解倍数、苯酚提取过程中采用不同搅拌转数、提取次数、提取温度等因素对多糖细菌内毒素含量的影响。 结果 粗制多糖采用4.5%醋酸钠溶液1∶100(质量体积比)溶解后进行苯酚提取的多糖细菌内毒素含量最低。同时,综合考虑多糖料液中蛋白含量、多糖回收率的检定结果,确定用苯酚进行提取的最佳条件为搅拌转数为400 转/min,提取次数为3次,温度为13~15 ℃,可有效降低多糖料液中细菌内毒素的含量。 结论 苯酚提取法可明显降低A 群脑膜炎球菌粗制多糖料液中的细菌内毒素含量。 相似文献
5.
A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。 相似文献
6.
由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述. 相似文献
7.
目的 制备由不同分子大小C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,CPS)与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)共价偶联而成的结合疫苗(CPS-TT),并检测其在小鼠中的免疫原性。 方法 将CPS降解成不同大小的片段,经碳二亚胺(carbodiimide,EDAC)或溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)活化后偶联到TT上制成CPS-TT。NIH小鼠皮下注射制备的不同CPS-TT,用ELISA法测定小鼠血清抗CPS和TT IgG抗体。 结果 EDAC活化的降解CPS的衍化率(3.9%~5.7% )和多糖回收率(11.4%~21.3%)均高于CNBr活化的降解CPS的衍化率(0.4%~1.2%)和回收率(2.4%~11.5%)。EDAC或CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT在小鼠中均具有较强的免疫原性,但EDAC活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠的抗CPS抗体滴度高于CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠。结论 EDAC活化的降解CPS可用于制备C群脑膜炎球菌结合疫苗。 相似文献
8.
由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述. 相似文献
9.
由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述. 相似文献
10.
1969年,美国Gotschlish等采用十六烷基三甲基溴化铵提取脑膜炎球菌的大分子多糖抗原,成功制备荚膜多糖疫苗,证明免疫效果良好.然而,多糖疫苗对婴幼儿的免疫原性较弱,因而人们研制了单价和多价多糖一蛋白结合疫苗,目前部分结合疫苗已进入临床或上市.鉴于B群脑膜炎球菌多糖的免疫原性极弱,人们开发了外膜蛋白疫苗.研究表明,部分外膜蛋白疫苗对婴儿及儿童有较好的免疫原性及安全性.此外,通过基因工程技术研制DNA疫苗也不失为预防脑膜炎球菌感染的一种免疫策略. 相似文献
11.
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗(group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT)中的游离多糖含量.方法 采用1%脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1%DOC处理的样品的PS回收率为90%~104%,TT沉淀率为99%以上,说明1%DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7%和6.4%.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测. 相似文献
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目的 制备以B群脑膜炎球菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)为载体的AC群脑膜炎球菌多糖(polysaccharide,PS)结合疫苗(AC-OMP),并初步研究该制备工艺的稳定性。方法 将以溴化氰活化的A、C群PS分别与B群OMP偶联制成AC-OMP。按《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求对制备的AC-OMP进行检定。以制备的AC-OMP免疫小鼠,用ELISA法检测小鼠血清抗体阳转率。结果 制备的AC-OMP的各项指标均达到质控标准。AC-OMP具有良好的免疫原性,AC-OMP免疫小鼠的血清抗PS抗体阳转率为100%。结论 该工艺适用于AC-OMP制备。 相似文献
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目的 验证用火箭免疫电泳法(rocket immunoelectrophoresis,R1E)检测4价脑膜炎球菌多糖疫苗(tetravalent serogroup A/C/W135/Y meningDcoccal polysaccharide vaccine,MPV4)中C群多糖含量的可靠性。方法 以系列浓度的C群多糖溶液为标准,采用RlE对MPV4中C群多糖含量迸行重复测定。结果 最佳线性范围为30~86 mg/L,相关系数(r)均大于0.985;MPV4与C群多糖参比品的剂量反应曲线之间具有良好的平行性;在精密度试验中,试验内CV为6.08%~8.07%,试验间Cy为7.24%~9.19%;A、W135和Y群多糖及乳糖不引起非特异性免疫反应。结论 本法的线性、精密度和专属性均符合验证要求,可作为定量检测MPV4中C群多糖含量的方法。 相似文献
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目的 建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗(group C meningococcal polysaccharide -tetanus toxoid conjugate vaccine, CPS-TT)中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法。 方法 在不同pH条件下用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证。 结果 DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3%。DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5%。 结论 DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制。 相似文献