miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

ox-LDL刺激的巨噬细胞中circRNAs差异表达及功能预测

目的：探究环状RNAs（circRNAs）在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的巨噬细胞中的差异表达情况及功能预测。方法：采用人单核细胞系THP-1,用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）预处理细胞48 h,随后给予ox-LDL 50 µg/mL刺激单核源巨噬细胞24 h构建巨噬细胞炎症模型。利用microarray芯片筛选出差异表达的circRNAs。通过qRT-PCR实验检测芯片中差异表达的circRNAs。利用CircInteractome、TargetScan和miRecords数据库预测circRNA_0007478潜在的靶基因。结果：芯片筛选结果提示在ox-LDL刺激的巨噬细胞中有5条circRNAs表达显著上调,2条circRNAs表达显著下调。qRT-PCR证实其中4条表达显著上调,2条表达显著下调。生物信息学分析推测,circRNA_0007478可通过结合miRNA-765进而影响下游蛋白的表达,发挥潜在的调控作用。结论：在ox-LDL刺激的巨噬细胞中存在circRNAs的差异性表达,circRNA_0007478可能通过结合miRNA-765调控下游基因参与动脉粥样硬化进程。     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

微RNA-340-5p靶向分化抑制因子3抑制人食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探索miRNA-340-5p对分化抑制因子3(ID3)的调控机制及对食管鳞状细胞癌细胞生物学功能的影响.方法 通过生物信息学分析、qRT-PCR及蛋白质印迹法初步验证人食管鳞状细胞癌Eca109细胞中miRNA-340-5p对ID3表达的影响,并检测12对食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中miRNA-340-5p和ID3的表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-340-5p对ID3的调控作用.采用CCK-8、平板克隆形成实验及Transwell实验考察miRNA-340-5p对Eca109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 通过生物信息学分析及实验验证筛选出11个最有可能与ID3基因结合的miRNA,其中miRNA-340-5p在转录和翻译水平对ID3表达的下调作用最显著.双荧光素酶报告实验结果证实miRNA-340-5p能与ID3基因直接结合.相比癌旁正常组织,miRNA-340-5p在食管鳞状细胞癌组织中低表达、ID3 mRNA高表达(P均<0.01),且在癌组织中miRNA-340-5p与ID3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.71,P<0.01).细胞功能学实验表明,miRNA-340-5p能够抑制Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭(P均<0.01).结论 miRNA-340-5p靶向ID3基因抑制人食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

MicroRNA-101调控人胃癌细胞系增殖、迁移、侵袭的实验研究

目的 通过实验研究miRNA-101在胃癌中的表达水平,以及对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭力和皮下移植瘤的影响,以探讨将miRNA-101用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法 分子克隆技术构建miRNA-101重组腺病毒表达载体,MTT法检测细胞增殖能力,MilliporeTranswell小室法检测细胞迁移能力,Matirgel法检测细胞侵袭能力,q-PCR定量分析各基因表达水平,使用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立胃癌皮下移植瘤模型。结果miRNA-101在胃癌组织中的表达量为（0.661±0.396）,低于所对应的癌旁组织（1.128±0.697）,差异有统计学意义（t=10.091,P＜0.01）。胃正常上皮细胞GES-1中的miRNA-101表达量高于胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、MKN-45和AGS。miRNA-101对MKN-45细胞的增殖能力呈现明显的抑制作用,对胃癌细胞BGC-823、SGC-7901、MKN-45、AGS的迁移和侵袭均有抑制作用。选取MKN-45细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型后5周,Ad-miRNA-101组肿瘤体积为（333.56±46.71）mm3,小于Ad-EGFP组（806.41±51.83）mm3,差异有统计学意义（t=21.431,P＜0.01）。结论在胃组织中,miRNA-101是一个抑制性miRNA,miRNA-101表达水平下调参与胃癌的发生和发展。miRNA-101将有可能成为胃癌生物靶向治疗的新靶点。     

烟酰胺-N-甲基转移酶在胃癌中高表达并与预后负相关:基于生物信息学方法

目的 探讨烟酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）在胃癌中的表达、生物学功能和临床病理学意义。方法 运用公共数据库GEO、Oncomine及TCGA分析筛选与胃癌分型和临床预后相关的基因;利用STRING、GSEA、DAVID、Cytoscape等软件分析预测与候选基因相关的分子通路,构建蛋白质相互作用关系网络;通过qRT-PCR分析候选基因在28例胃癌和配对癌旁组织中mRNA的差异表达;CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室细胞运动实验等分析NNMT表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果 NNMT在多个数据库分析中呈高表达且与胃癌预后负相关;通路分析显示,NNMT高表达与细胞外基质受体和细胞黏附分子等细胞粘附相关通路以及细胞因子受体等分子通路相关;而NNMT低表达可能与碱基错配修复和核黄素代谢等生物过程相关。蛋白相互作用分析显示,NNMT可能与AURKA等16个差异表达的蛋白存在相互作用关系,且与TAGLN、PTRF、AKAP12、IGF2BP2蛋白存在较高的共表达趋势。在临床组织标本中,qRT-PCR结果显示,胃癌组织中NNMTmRNA的表达明显高于癌旁组织（P<0.05）。在胃癌细胞系中,NNMT的过表达可显著促进细胞增殖、侵袭和迁移,而NNMT敲除可对细胞增殖、侵袭和迁移产生明显的抑制作用。结论 NNMT在胃癌中异常高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移;NNMT高水平表达与胃癌患者预后呈负相关,提示NNMT可能为胃癌预后相关分子。     

miRNA-191在胃癌组织中的表达

目的 分析胃癌组织中miRNA-191的表达及预测其靶基因.方法选取胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miRNA-191的表达情况,后用2-ΔΔCT方法进行相对定量分析.利用生物信息学软件对miRNA-191进行靶基因预测.结果 miRNA-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P＜0.05),miRNA-191与临床病理参数(性别、年龄、病理分型、淋巴结转移和TNM分期)无明显关系(P＞0.05).对miRNA-191预测得到PLCD1、SOX4等9个靶基因.结论 miRNA-191在胃癌组织中高表达,可能在胃癌的发病中起重要作用.     

HIF-1α信号通路相关分子在胃癌中的表达及其对细胞增殖与侵袭的影响研究

【立论依据】 缺氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)是参与低氧环境中细胞适应性调节的关键转录因子,通过结合于靶基因上游转录调节区的低氧反应原件调控多种分子的表达。HIF-1α的异常增高参与了多种癌症的发生发展,课题组前期研究揭示了胃癌组织中存在着HIF-1α的高表达现象,但是HIF-1α的异常表达通过哪些下游靶基因及信号通路来实现对胃癌细胞的增殖、侵袭的调控尚不清晰。因此,高通量筛选及验证HIF-1α下游靶基因,构建HIF-1α信号网络并进行功能分析,为深入理解以HIF-1α为核心的信号通路相关分子对胃癌细胞增殖与侵袭的影响奠定重要理论基础,同时也为阐明胃癌发生、发展机理,寻找胃癌早期诊断和治疗的靶标提供科学依据。 【设计思路】 本设计旨在前期研究基础上,检测胃癌细胞中HIF-1α的表达变化,结合转录组学及数据库信息绘制与细胞增殖及侵袭相关的HIF-1α调控网络图;利用RNAi技术沉默HIF-1α,检测其靶基因的表达,探讨转染后对肿瘤细胞增殖及侵袭的影响。 【实验内容】 (1)结合转录组及数据库信息,初步构建胃癌中HIF-1α调控网络,RT-qPCR及蛋白质印迹对HIF-1α及靶基因进行验证;(2)siRNA技术对胃癌细胞HIF-1α进行敲除,RT-qPCR、蛋白质印迹检测敲除后HIF-1α 及其靶基因表达;(3)MTT及transwell实验检测有效基因敲除后胃癌细胞株的增殖能力及侵袭性变化。 【材料】 (1)胃癌细胞株SGC-7901,细胞转染相关材料及试剂,HIF-1α及其靶基因引物、抗体,逆转录及实时定量PCR试剂,蛋白质印迹相关试剂。(2)转录组学信息,TRED数据库,cytoscape做图软件等计算机工具。 【可行性】 课题组前期利用外显子芯片、RT-qPCR及蛋白质印迹法证实HIF-1α在胃癌组织中呈高表达,并且结合TRED数据库及胃癌基因表达谱筛选出胃癌中HIF-1α可能的靶基因。以上工作为进一步探索HIF-1α作用的下游靶基因及其对胃癌细胞增殖及侵袭性的影响及机制研究提供了思路及实验基础。此外,项目组具有完成信号调控网络研究的硬件设施及研究基础,为项目的顺利实施奠定基础。 【创新性】 将高通量组学、生物学实验及计算生物学技术紧密联合,探讨HIF-1α信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭性的影响及可能的机制。     

胃癌组织环状RNA表达谱分析

目的: 研究胃癌组织环状RNA（circular RNAs,circRNAs）表达的变化,以及circRNAs-miRNAs-mRNAs的竞争性内源RNA网络调控的机制。方法: 从GEO（Gene Expression Omnibus）数据库中选出GSE78092、GPL19978（GSE83521和GSE89143）、GSE100170和STAD（未上传）共5个数据集,分析其差异表达circRNAs,并利用Starbase、TargetScan等数据库进行生物信息学分析。结果： 从胃癌组织与癌旁组织共获得734个差异表达的circ-RNAs,根据P＜0.05、差异表达倍数＞1.5倍筛选得到17个circRNAs。用Starbase数据库分析circRNAs和miRNAs的互作关系,共发现354个靶miRNAs,并利用GEO数据库（GSE23739）验证筛选得到46个miRNAs,利用TargetScan数据库分析其靶向的mRNAs。京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）分析和基因本体论（gene ontology,GO）分析表明靶基因主要在转录调控、RNA代谢过程、细胞内信号级联和蛋白质定位等方面促进或者抑制胃癌的发生发展。结论： 差异分析表达的17个circRNAs形成circRNAs-miRNAs-mRNAs的竞争性内源RNA网络,可通过调控转录和RNA代谢等过程调节胃癌的发生发展。     

调控食管胃结合部腺癌增殖、侵袭能力的关键环状RNA分子的筛选与初步鉴定

目的：利用RNA高通量测序和生物信息学分析筛选出调控食管胃结合部腺癌（adenocarcinoma of esophagogastric junc－tion,AEG）增殖、侵袭能力的关键环状RNA分子,并对其作用方式进行初步探究。方法：提取22对食管胃结合部腺癌组织及癌旁正常黏膜组织的RNA。采用RNA高通量测序（测序深度200×）,利用生物信息分析云平台进行差异基因筛选,同时对差异表达的基因构建共表达网络和circRNAs-miRNAs-mRNAs间的内源性RNA竞争机制（ceRNA）网络;利用RNA图谱共表达网络构建和内源性竞争RNA负相关分析,筛选出在AEG发生过程中可能发挥关键作用的circRNAs。并预测可与该circRNA存在ceRNA关系的miRNAs和mRNAs;通过qRT-PCR等方法对该circRNA在胃癌组织、癌旁组织中的表达进行验证。结果：通过RNA高通量测序,共预测得到46 553个circRNAs,对测序数据进行严格质控,得到26个差异表达的circRNAs（fold change≥2或fold change≤0.5,false discovery rate<0.05）,其中10个circRNAs表达上调,16个circRNAs 表达下调。对组织样本进行mRNA和miRNA测序分析,构建circRNAs-miRNAs-mRNAs间的ceRNA网络、RNA图谱共表达网络和内源性竞争RNA负相关分析。结果表明,has_circ_0007766在AEG肿瘤组织中特异性高表达,可能在AEG发生发展过程中起关键作用;同时发现,miR4492与circRNA0007766和MET mRNA均有结合位点。结论：has_circ_0007766可能通过miR4492-circRNA0007766-MET mRNA的ceRNA网调控食管胃结合部腺癌增殖、侵袭,是AEG发生发展的关键circRNA。     

结肠癌microRNA表达谱检测及生物信息学分析

目的 探讨miRNA(microRNA,微小RNA)在结肠癌组织中的表达特征及生物学功能.方法 选取临床特征相似的3对结肠癌组织及其配对正常黏膜组织,应用Exiqon miRNA芯片检测miRNA在结肠癌及其配对组织中差异表达情况;3个差异表达的miRNA被选取进行qPCR验证;生物信息学分析差异表达的miRNA及其靶向基因在结肠癌进展中的作用机制.结果 芯片结果显示,在3对结肠癌组织中有201个miRNA出现上调表达,94个下调表达(差异倍数>2),差异有统计学意义(P<0.05).qPCR结果显示,与对照组织比较,选取的3个miRNA中hsa-miR-18b-3p、hsa-miR-31-5p在结肠癌组织中表达上调,hsa-miR-142-3p表达下调,与芯片结果一致,差异有统计学意义(P<0.05).GO及pathway分析显示差异表达的miRNA涉及结肠癌细胞的分化、迁移、定位、增生及RNA、蛋白合成等功能调控,与细胞粘附、结肠癌发生发展等信号途径的激活相关.结论 结肠癌组织中miRNA存在异常表达,可能涉及结肠癌的发生、发展.     

肝癌干细胞中差异表达miRNAs对肝癌干细胞增殖和转移的影响

目的:探讨肝癌干细胞较卵园细胞中高表达的miRNAs(hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122)对肝癌干细胞增殖和转移的影响。方法:分离培养肝癌干细胞,构建并转染肝癌干细胞中差异表达的miRNAs寡核苷酸,通过MTT实验、裸鼠成瘤实验、裸鼠脾脏转移实验观察干扰hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122的表达后肝癌干细胞增殖和转移能力。结果:采用寡核苷酸干扰hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122的表达后,肝癌干细胞增殖能力较对照组显著减弱,裸鼠成瘤实验中形成的肿瘤显著小于对照组,脾脏肿块及肝转移肿瘤显著小于对照组。结论:hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122能够增强肝癌干细胞增殖,促进其成瘤及转移。     

肝移植术后稳定生存者外周血中差异表达miRNA及其功能预测

目的寻找肝移植术后长期稳定生存者外周血中有意义的生物学标志物。方法纳入肝移植术后稳定存活患者29例（STA
组）,反复排斥反应者10 例（RJ 组）,健康对照者17 例（HC 组）,利用芯片检测各组PBMCs 中microRNAs 的表达谱,并用
Real-time PCR对差异表达的microRNAs进行验证。结果芯片结果显示STA组对比于RJ组共13个microRNA表达明显下调,
经Real-time PCR验证3个microRNA（miR-106b, miR-18b, miR-340）表达下调。结论肝移植患者外周血miR-106b、miR-18b、
miR-340可作为肝移植术后潜在标志物。
     

IL-10对miRNA-125b表达和非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究白细胞介素10(IL-10)对miRNA-125b表达和非小细胞肺癌增殖与凋亡的影响.方法:采用实时荧光定量PCR检测IL-10刺激肺癌细胞系NCI-H460各微小RNA(miRNA)的表达水平变化;利用细胞计数试剂盒(CCK8)比较IL-10刺激后和恢复miRNA-125b表达后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测IL-10刺激后和恢复miRNA-125b表达后对细胞凋亡的影响;荧光定量PCR技术验证miRNA-125b在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达情况.结果:IL-10刺激NCI-H460细胞后,miRNA受到调控的程度不同,所测21种miRNA中,miRNA-125b下调程度最大;miRNA-125b恢复表达后,抑制了由IL-10刺激引起的细胞增殖(P<0.01),促进了细胞凋亡;miRNA-125b在非小细胞肺癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01).结论:在IL-10诱导的细胞增殖中,miRNA-125b起到抑癌的作用,可作为未来治疗非小细胞肺癌的药物研发对象.     

miRNA-3679抑制下游ZADH2-靶基因促进肝癌细胞增殖的机制研究

  目的   寻找miRNA-3679与肝癌细胞系之间的关系,并验证其下游靶基因。   方法   通过PCR检测miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达,使用ENCORI、miRDB、TargetScan数据库预测miRNA-3679的下游靶基因;通过qPCR检测（空白对照组、转染组及转染阴性对照组）转染靶基因表达水平确定靶基因为含锌结合醇脱氢酶结构域-2（ZADH2）;Western blot检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2蛋白表达;EdU染色检测转染miRNA-3679抑制剂及同时转染miRNA-3679、ZADH2抑制剂后对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡。   结果   miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达水平均高于正常人肝细胞株（P<0.05）,数据库中共筛选出6个在肝癌中下调的基因:GLUD1、B3GAT1、SLC46A3、MAP2K3、ATF5、ZADH2;qPCR检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2表达升高（P<0.01）;转染miR-3679抑制剂后荧光素酶活性升高（P<0.01）;Western blot检测miR-3679 inhibitor组中的ZADH2蛋白表达高于NC组（P<0.01）;EdU分析检测miRNA-3679 inhibitor组阳性细胞数低于NC组及Inhibitor NC组（P<0.05）;miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组克隆计数多于miR-3679 inhibitor组（P<0.01）;流式细胞术检测提示miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组细胞凋亡数目低于miR-3679 inhibitor组（P<0.01）。   结论   miRNA-3679在肝癌细胞中显著高表达,可直接作用于ZADH2基因并影响其表达,且通过抑制ZADH2发挥促进HCC细胞的增殖及抑制其凋亡。      

FSCN1与钌配合物在抗胃癌中的作用及相关性研究

目的 探讨 FSCN1 在胃癌增殖中的作用,并研究FSCN1与钌配合物在胃癌中的相互作用. 方法 通过荧光定量PCR及Western blot法检测胃癌组织中FSCN1 的表达水平;MTT、EdU法检测干扰FSCN1后细胞增殖能力变化;用钌配合物处理SGC-7901后检测FSCN1 mRNA、蛋白表达水平及细胞的增殖能力;siRNA 抑制 FSCN1 的表达,过表达FSCN1后检测钌配合物对细胞的增殖能力影响. 结果 荧光定量PCR及Western blot法均显示胃癌组织中FSCN1 表达水平显著高于癌旁组织;MTT与EdU法结果显示,与siNC组比较,干扰 FSCN1 后细胞的增殖受到明显抑制( P <0. 01);钌配合物处理SGC-7901 后,定量PCR结果显示,与siNC组比较,FSCN1表达水平受到抑制(P<0. 01),MTT法结果显示,与siNC组比较,细胞增殖受到抑制( P<0. 01 );MMT法结果显示过表达FSCN1后抑制钌配合物对细胞增殖能力的影响. 结论 FSCN1具有促进胃癌细胞增殖的能力,钌配合物通过抑制FSCN1的表达起抑癌作用.     

microRNA-29a在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨microRNA-29a（miR-29a）在结直肠癌组织中的表达,以及miR-29a反义寡核苷酸对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 选取行手术治疗的初诊结直肠癌患者195例,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测结直肠癌和癌旁组织中miR-29a表达,培养人结直肠癌LoVo细胞,随机分为ASO-miR-29a组、ASO-对照序列组和空白对照组,检测各组细胞中miR-29a表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 结直肠癌组织miR-29a相对表达量为（1.93±0.19）,癌旁组织为（1.26±0.12）,两者比较差异有统计学意义（P?<0.05）;结直肠癌组织中miR-29a相对表达量与TNM分期和淋巴结转移有关（P?<0.05）,多元线性回归分析结果显示,TNM分期和淋巴结转移是影响结直肠癌组织中miR-29a表达的因素（P?<0.05）;ASO-miR-29a组细胞中miR-29a相对表达量低于ASO-对照序列组和空白对照组（P?<0.05）;MTT实验结果显示,ASO-miR-29a组与ASO-对照序列组和空白对照组相比吸光度值降低（P?<0.05）;与ASO-对照序列组和空白对照组比较,ASO-miR-29a 组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少（P?<0.05）。结论 miR-29a在结直肠癌组织中呈高表达,参与结直肠癌发生、进展过程,特异性抑制结直肠癌细胞中miR-29a表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。