痘苗病毒在疫苗释放中的应用

痘苗诱导人体产生免疫力的机理以及以前接触痘苗对非痘苗抗原免疫应答的影响方面资料的缺，阻碍了痘苗载体疫苗的构建。近来的研究讨论了该病毒在人体中诱导的免疫应答以及重组病毒诱导对不同感染途径的不同病原体的免疫力的能力。     

开发艾滋病疫苗的战略和现状

本文就钱塘江大桥公路桥面大修方案，研讨中提出了采用新型的橡胶伸缩缝，使之既能适应三向位移，又能抵抗冲击、振摆，同时争取达到较好的密水性、行车舒适性、改善噪声、延长使用寿命、养护维修方便等预期目标，以供参考。     

用流感病毒和痘苗病毒重组体免疫接种增强对SIV Gag的细胞免疫应答

作者在该研究中从感染猴免疫缺陷病毒(SIV)Gag VabT252-51重组痘苗病毒(rVac／SIV Gag)的Hela细胞中经DNA体外扩增得到SIVmac239Gag序列，并将此序列设计为5个不同的Gag基因片段(SIV Gag no．1     

在未免疫志愿者中抗肝内期恶性疟DNA疫苗及改良痘苗病毒Ankara疫苗的安全性[英]

当今世界面临的最大公共卫生挑战之一就是控制疟疾，因此迫切需要开发能够抵抗恶性疟疾感染的疫苗。小鼠疟疾模型研究已经显示DNA疫苗接种后再用改良痘苗病毒Ankara(MVA)免疫能够诱导强T细胞免疫应答，作者报告了人类志愿者以DNA初免再以MVA加强免疫的安全性与耐受性结果。     

谨慎乐观的艾滋病疫苗前景

20 0 2年 7月在巴塞罗那举行的国际艾滋病会议上 ,专家们对艾滋病疫苗的前景表示谨慎乐观。最新的艾滋病疫苗研究项目 ,ＶａｘＧｅｎ公司对ＡＬＰＳＶＡＸｇｐ12 0的研究结果将于年底公布。在泰国进行的ＡｖｅｎｔｉｓＰａｓｔｅｕｒ公司的金丝雀痘疫苗与ＶａｘＧｅｎ公司的ｇｐ12 0亚基疫苗ＡＬＤＳＶＡＸ Ｂ/Ｅ的Ⅲ期临床试验的进一步细节将在巴塞罗那公布。专家们认为虽然以上两项研究未达到预期治疗水平 ,但将为进行规模的疫苗临床试验提供有用的经验。Ｃｏｒｅｙ博士解释了艾滋病疫苗研究的困难所在。他说 ,在生殖器管分泌液中 ,即检出…     

表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的  构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法  通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果  反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论  重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。     

抗艾滋病病毒疫苗研究现状(摘要)

发现艾滋病病毒(HIV)已有近30年,尽管其他病毒性疾病(如脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎、风疹、乙型病毒性肝炎和流行性感冒等)的疫苗研究都取得了成功,研制有效的抗HIV疫苗却一直未能有所突破。和其他感染性病毒相比,HIV具有一些独特的特性,使其疫苗研发面临更大的挑战。HIV主要感染免疫系统,尤其是特异性地攻击CD4+T淋巴细胞,具有逃避免疫清除的一些机制,同时还可以通过整合到宿主的染色体中建立1种潜伏的贮库。由高突变率和基因重组引起的HIV基因极端多样性则使疫苗研发更具有挑战性。已知HIV有二大类型:HIV-1和HIV-2。目前全球流行的主要是HIV-1;HIV-2则主要流行于非洲西部和中部。至少有2~3种不同猩猩来源的HIV-1引起M,O和N组在人类中的传播。M组又可进一步分为9种不同的亚型和数目众多的流行重组体(CRF)。同一亚型的病毒基因差别可达20%。在非洲一些地方,多种亚型同时流行,HIV包膜蛋白高变区的差异可达38%。事实上,单个HIV患者体内的HIV多样性就可能超过全球流感病毒多样性的总和,后者则需要每年制备新的疫苗以应对当年的流行株。目前HIV感染人数已超过3300万,因此,仅HIV序列多样性一项就对疫苗研制、诊断及治疗构成了巨大的挑战。然而,相信尽管HIV的进化是1种持续的过程,且高变区域(如包膜蛋白编码区域)的变异不断累积,为保持病毒蛋白的功能及病毒的感染性,HIV基因型的数目仍然是有限的。因此,应用针对所有或多数HIV病毒株多种不同的抗HIV的抗体及T细胞免疫反应可发挥广谱的抗HIV作用,并克服HIV序列多样性。为实现这一目的,本研究所研发了一系列的工具,如可产生纯的HIV包膜蛋白重组基因的HIV-env重组系统,生产具有复制活性的SHIV-env病毒系统,可用来筛选分泌具有广谱中和活性抗HIV抗体的杂交瘤细胞的huCD4/huCCR5 B细胞转基因小鼠模型及293TTK/env细胞系以及1种新的可同时诱发体液和细胞免疫反应的HIV疫苗载体系统。希望上述策略将使有效抗HIV疫苗的研制变为可能。     

VZV糖蛋白E表达载体免疫接种：DNA疫苗与重组痘苗病毒诱导的抗体应答的比较

本试验比较了水痘一带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白(gE)在不同免疫载体和免疫途径下诱导的抗体应答，以寻求具有高效保护作用的疫苗及其最佳免疫途径。     

艾滋病疫苗展望

本文作者对于是否需要艾滋病疫苗、疫苗研制的困难、研制疫苗所需的知识以及何时何地可进行疫苗效力试验等问题作了回答.     

乙型脑炎减毒活疫苗原液的残余PHK细胞蛋白检测方法的验证

 目的   验证PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）原液的残余PHK细胞蛋白的适用性。 方法   对PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性、精密度、专属性、耐用性和线性进行验证。 结果   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性良好,PHK细胞蛋白标准品的回收率为96.16%~111.44%。该试剂盒在PHK细胞蛋白质量浓度为6.25~200.00 μg/L时呈现良好的线性,决定系数为0.997,最低检测限和最低定量限分别为6.70和22.33 μg/L。该试剂盒检测乙脑疫苗原液中的残余PHK细胞蛋白的专属性良好,而且操作人员、时间和试剂盒批号变化对检测结果没影响（相对标准偏差均≤15%）。 结论   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒适用于乙脑疫苗中的残余PHK细胞蛋白检测。     

测定脑膜炎球菌疫苗C群多糖的双抗体夹心ELISA法的建立

目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法.  方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定.  结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5～20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6％ ～9.1％和87.5％ ～ 100.0％,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准.  结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定.     

Vero细胞HCP试剂盒在冻干乙型脑炎灭活疫苗生产过程中的应用

目的 通过检测冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）生产过程各道工序中的细胞残余蛋白,达到控制疫苗中Vero细胞残余蛋白的目的.方法 采用Vero细胞宿主细胞蛋白（host cell protein,HCP）试剂盒,对2009-2012年共65批冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）在病毒液收获、浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖和半成品配制阶段中的HCP含量进行检测.结果 2009-2012年,病毒液收获阶段Vero细胞HCP含量无明显差异.2010年工艺优化后,2010-2012年的HCP平均值与2009年相比,在浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖、半成品配制阶段分别降低了78.83％、83.42％、78.62％、86.88％、86.40％.结论 通过Vero细胞HCP试剂盒的动态监测,可以对生产过程中Vero细胞的残余蛋白含量实施控制.     

检测脑膜炎球菌多糖疫苗Y群多糖含量和分子大小的双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用

目的建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗（groupsA，C，Y，W135meningococ—calpolysaccharidevaccine，MPV4）Y群多糖含量的双抗体夹心ELISA法。方法采用杂交瘤技术制备抗Y群多糖单克隆抗体，并通过过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体。分别以抗Y群多糖不同位点的单克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗，通过优化反应条件来建立双抗体夹心ELISA法，同时进行方法学验证。结果建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好，未检出与A、C、W135群多糖的交叉反应。Y群多糖在2．5～20．0ng／ml范围的剂量反应曲线呈现最佳线性关系，相关系数〉0．99。该法的试验内和试验间准确度较好，精密度较佳，定量限度为4ng／ml。采用该法测定3批MPV4Y群多糖显示，Y群多糖的含量、多糖分子大小‰值和回收率的结果均与先前的检定结果一致，符合暂行质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4Y群多糖的关键质量指标测定。     

HSV-2包膜糖蛋白与疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)2型是一种主要引起生殖器疱疹的病原体,它可以在宿主体内终身潜伏并增加人们感染HIV的几率.HSV-2有12个已命名的特异性包膜糖蛋白,它们在病毒的复制和致病中起着至关重要的作用,是细胞免疫和体液免疫的主要靶标,也是预防和治疗HSV-2感染的亚单位疫苗、DNA疫苗或多肽疫苗的候选蛋白.此文综述了HSV-2包膜糖蛋白的特性及以这些糖蛋白为基础的疫苗的研究进展.     

不同条件对RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量的影响

目的 探讨RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量可能的影响因素。方法 在不同裂解液浓度、裂解时间、样品稀释浓度和参比品条件下,使用RiboGreen荧光染料法对不同生产工艺的mRNA疫苗的mRNA含量进行检测。结果 在裂解液为0.1%〜2.5% Triton X-100、裂解5〜30 min、样品稀释至mRNA含量0.5〜1.5 μg/ml时,mRNA含量检测结果的差异无统计学意义;不同参比品序列下样品mRNA含量检测结果差异有统计学意义。结论 根据检测样品的mRNA含量的回收率,初步确定了mRNA疫苗中mRNA含量检测的最适条件。     

四价流感病毒裂解疫苗生产用毒种传代稳定性研究

目的  研究四价流感病毒裂解疫苗生产用毒种的传代稳定性,确保毒种适用于疫苗生产。方法  将WHO推荐的季节性流感疫苗甲型H1N1和H3N2、乙型BV和BY病毒株（原始种子批）在鸡胚中传代扩增,制备生产用主种子批和工作种子批毒种。按中国药典2015年版三部的要求对毒种进行检定,包括鉴别试验、病毒滴度和血凝滴度测定、外源微生物检查等。将毒种连续传10代,用反转录PCR扩增第2、3、4、5、10代病毒鸡胚尿囊液中的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因片段,并进行序列测定,分析传代过程中HA和NA的核苷酸和氨基酸序列同源性。结果  主种子批和工作种子批毒种的抗原性均与推荐的病毒株一致。各型病毒滴度均>6.5 lg半数鸡胚感染量/ml,血凝滴度均≥1：160。2个种子批的支原体和无菌检查结果均为阴性,主种子批外源性禽白血病病毒和禽腺病毒检查结果亦为阴性。毒种在鸡胚中连续传代后,各型病毒株HA和NA的核苷酸序列同源性均>99%,氨基酸序列同源性均为100%。结论  本研究的四价流感病毒裂解疫苗生产用毒种具有良好的传代稳定性,可用于疫苗生产。     

温脾补肾法联合高效抗逆转录病毒治疗对HIV/AIDS患者免疫功能影响的研究

目的 探讨温脾补肾法联合高效抗逆转录病毒疗法（HAART）对HIV/AIDS患者免疫功能的影响.方法 将30例HIV/AIDS患者分为中西医结合治疗组（治疗组）14例,西医治疗组（对照组）16例.对照组采用HAART疗法,治疗组在此基础上联合以温脾补肾法为组方原则的中药艾可清优化处方治疗,共治疗6个月.监测全部患者治疗前、后的卡洛夫斯基积分、临床症状、外周血T淋巴细胞亚群CD4＋计数及CD4＋/CD8＋比值、血常规及肝肾功能等,并综合比较两组的临床疗效.结果 ①治疗后治疗组、对照组的临床受益率分别100.0％和87.5％,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;②治疗后治疗组卡洛夫斯基积分、体重有所改善（P＜0.05）,在改善中医临床症状乏力、纳呆及总积分方面也优于对照组（P＜0.05）;③治疗后治疗组CD4＋细胞计数、白细胞计数分别为（264.97±52.94）个/mm^3和（6.94±0.97）×109/L,优于对照组的（238.73±50.13）个/mm^3和（5.57±1.29）×10^9/L （P＜0.05）;④两组在治疗期间未出现明显不良反应.结论温脾补肾法联合HAART治疗HIV/AIDS患者可明显地改善临床症状,并能增强机体的免疫功能和提高生活质量,对于实现本病的功能性治愈可起到一定的作用.     

动态浊度法检测23价肺炎链球菌多糖疫苗细菌内毒素的方法确认和应用

 目的  对动态浊度法检测23价肺炎链球菌多糖疫苗（23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23）细菌内毒素进行方法学确认并加以应用。 方法   按照《中华人民共和国药典》2010版三部中的动态浊度法操作,配制系列稀释的细菌内毒素标准品,验证动态浊度法的线性、准确度、重复性和中间精密度。根据2012年和2013年连续20批PPV23成品的细菌内毒素检测结果,分析PPV23对动态浊度法的影响。 结果   动态浊度法的标准曲线具有可靠性,细菌内毒素标准品的回收率为90%~129%,变异系数为6.2%~12.4%,均符合规定的标准,且操作人员（F=4.80,P=0.06）和时间（F=1.01,P=0.34）变化对检测结果没有影响。2012年和2013年各连续20批PPV23成品的细菌内毒素检测结果保持稳定,细菌内毒素均值分别为0.165和0.355 EU/ml,PPV23对动态浊度法没有影响（F=0.00,P=0.97）。 结论   动态浊度法有效可行,可用于PPV23细菌内毒素检测。     

弓形体重组质粒pcDNA_3-SAG1免疫小鼠诱导的细胞免疫应答研究

目的 :用 pc DNA3- SAG1真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察 DNA免疫所诱导的小鼠细胞免疫应答 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :大量制备重组质粒 pc DAN3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内 ,每隔 2 1d接种一次 ,一共免疫三次。用 MTT方法对脾脏的 NK细胞和其淋巴细胞的转化率进行测定 ;采用免疫荧光法对 CD4+、CD8+ 细胞进行测定。结果 :实验组 NK细胞杀伤率为 :70 .0± 3.6 4,而 pc DNA3及空白对照分别为 :48.5± 6 .0 8和 47.0± 5 .93。实验组 NK细胞活性比对照组明显增高 (P<0 .0 5 ) ,而 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;对 T淋巴细胞亚群 CD4+、CD8+进行动态分析 ,可见随着感染时间的延长 ,CD8+的数量逐渐上升 ,CD4+ / CD8+的比率逐渐下降 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照有明显差异 (P<0 .0 5 ) ;Con A刺激小鼠淋巴细胞转化实验 ,能刺激免疫鼠及对照鼠淋巴细胞增生 ,实验组与 pc DNA3质粒及空白对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :重组质粒pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ c小鼠可诱导一定的细胞免疫。