miR-155-5P在脓毒症急性肺损伤时调控肺泡巨噬细胞IL-6、MIP-2的表达对中性粒细胞迁移的影响

目的探讨脓毒症急性肺损伤（ALI）时miR-155-5P对肺泡巨噬（MH-S）细胞白介素6、巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）表达的调控作用及中性粒细胞迁移的影响。 方法培养小鼠MH-S细胞并将其分为对照组、脓毒症组和miR-155-5P抑制物组,miR-155-5P抑制物组预先通过miR-155-5P antagomir完成转染,采用脂多糖干预脓毒症组和miR-155-5P抑制物组12 h,应用RT-PCR检测3组MH-S细胞miR-155-5P、白介素6 mRNA和MIP-2 mRNA的表达,酶联免疫吸附实验检测细胞悬液中白介素6和MIP-2的浓度;再次将MH-S分为上述3组培养在transwell板的下室,CFSE荧光染料标记的中性粒细胞培养在上室,脂多糖干预后应用流式细胞术分别检测上室与下室细胞的荧光值,计算中性粒细胞的迁移率。 结果脓毒症组MH-S细胞的miR-155-5P（8.04±0.65）、白介素6 mRNA（57.05±6.88）和MIP-2 mRNA（52.98±2.58）较对照组（1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00）表达明显上调（P<0.05）;白介素6［（50.85±0.12）pg/ml］、MIP-2［（69.96±1.40）pg/ml］的浓度和中性粒细胞迁移率（64.36%）较对照组［（38.58±0.13）pg/ml、（56.00±0.29）pg/ml、30.98%］均显著增加（P<0.05）。而miR-155-5P抑制物组细胞的miR-155-5P表达（0.19±0.35）低于对照组（P<0.05）,白介素6 mRNA（39.66±3.65）、MIP-2 mRNA（31.01±2.88）的表达及白介素6［（42.45±1.08）pg/ml］、MIP-2［（59.01±1.63）pg/ml］的浓度也高于对照组（P<0.05）,而低于脓毒症组（P<0.05）。 结论脓毒症ALI时,肺泡巨噬细胞miR-155-5P基因高度表达,促炎因子白介素6 mRNA、MIP-2mRNA的表达均明显上调,其促进白介素6、MIP-2的产生,使中性粒细胞大量趋化迁移至肺内,造成肺损伤;而抑制miR-155-5P的表达,可以抑制白介素6、MIP-2的产生,从而减少中性粒细胞的趋化迁移,起到肺保护作用。     

趋化因子MCP-1、MIP-2在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的 探讨趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)在急性胰腺炎相关肺损伤早期发病机制中的作用.方法 20只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、急性坏死性胰腺炎(ANP)3 h、6 h、12 h组.采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备ANP动物模型.检测血淀粉酶、肺湿/干重比,观察肺病理组织学改变,采用逆转录实时定量PCR检测肺组织中MCP-1与MIP-2 mRNA的表达,同时经免疫组化检测肺组织中MCP-1与MIP-2蛋白的表达.所有数据以((x)±s)表示,通过SPSS 11.5统计软件处理.组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异具有统计学意义.两变量之间采用直线相关分析.结果 与SO组相比,ANP各组随病变的加重,血清淀粉酶、肺湿/干重比逐渐增加[(5674±587),(7472±1013),(12554±1858);(4.57±0.30),(6.47±0.52),(6.99±0.82),P＜0.01],肺组织中MCP-1与MIP-2 mRNA表达逐渐上调[(0.2545±0.0102),(0.3893±0.0282),(0.6040±0.0343);(0.3997±0.0387),(0.5952±0.0330),(0.8502±0.0598),P＜0.05],且与肺组织病理学改变呈正相关(r=0.86,0.78,P＜0.05).免疫组化也显示肺组织中MCP-1与MIP-2蛋白水平随ANP时间的进展呈不断升高的趋势.结论 趋化因子MCP-1与MIP-2在大鼠急性坏死性胰腺炎早期肺组织中即有表达,MCP-1与MIP-2在急性胰腺炎相关肺损伤早期发病机制中可能具有重要作用.     

髓系细胞触发受体2在急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞上的表达

目的：研究髓细胞触发受体2（TREM2）在脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）小鼠肺泡巨噬细胞（AM）上的表达,并探讨其作用机制及意义。方法：采用动物实验,以腹腔注射大剂量LPS诱导ALI模型;以腹腔注射生理盐水作为对照。用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）对AM表达的TREM2mRNA做定量分析。用ELISA对支气管肺泡灌洗液中的肺肿瘤坏死因子（TNF—α）定量检测。结果：AM在正常情况下表达大量的TREM2,在LPS造成急性损伤后表达大幅度下降。TREM2与TNF—α的表达呈负相关（P〈0．001）。结论：TREM2可能在LPS致ALI中起重要的抗炎作用。     

山莨菪碱对急性肺损伤时肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的干预探讨

目的观察山莨菪碱(654-2)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的影响,探讨其对ALI治疗作用的可能机制。方法复制ALI大鼠模型。实验动物随机分为ALI模型组、654-2治疗组、对照组,进行各组大鼠动脉血气、肺湿／干(W／D）值测定及肺组织病理学光镜检查。分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,采用生物活性法进行AM上清液TNF-α、IL-6测定。结果654-2治疗组大鼠AM分泌TNF-α［（38．98±4.51)KU/L］和IL-6［（20．82±6.3)kU/L］的水平明显低于ALI组［TNF-α为(68.27±9.13)kU/L,P＜0.001;IL-6为(33.84±9.02)kU/L,P＜0.01］,并能使血气改善(P＜0.05)、W／D值下降(P＜0.05),肺组织损伤程度减轻。结论654-2对ALI大鼠肺泡巨噬细胞过度活化、分泌TNF-α、IL-6具有显著抑制作用,在一定程度上防止ALI的发生和发展。     

脓毒症后出血诱发急性肺损伤时肺泡巨噬细胞和多形核白细胞的作用

急性肺损伤（ALI）的特征表现为多形核白细胞（PMN）在肺内的趋化和聚集。PMN趋化过程由单核细胞、PMN以及肺内巨噬细胞产生的趋化因子，如巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）、枯否细胞（KC）等诱导。与PMN相比，对肺内巨噬细胞在ALI中的相关作用了解甚少。美国研究人员设想如减少外周血PMN的数量或造成PMN趋化因子信号缺失，可能减轻大鼠失血后脓毒症过程中的炎症反应和ALI。为了验证这一设想，研究者将大鼠分为两组，一组预先给予500μgGrl抗体造成PMN缺失；     

肺泡巨噬细胞亚型与急性肺损伤

巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成部分,其亚型(M1和M2)在特异性免疫应答的诱导与调节以及疾病的发展和恢复中起关键作用。急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是严重的呼吸系统疾病。在ALI中,M1增加并分泌促炎细胞因子,在抵御病原入侵的同时也对肺部产生了急性损伤作用。M2可根据诱导因素的不同及功能的差异再细分为M2a、M2b、M2c等亚型,其中M2a起促进损伤修复的作用,M2b和M2c主要起免疫调节和免疫抑制的作用,M2c也可促进组织修复,有利于肺部损伤组织的愈合。M1与M2可以相互转化。在ALI的病程中,M1和M2需要保持平衡才能有效地清除病原物质,促进损伤的修复,而平衡的失调会导致ALI恶化,甚至进展为ARDS。本文主要针对巨噬细胞各亚型的特点及其与ALI的关系,M1和M2各自的极化和相互转化以及影响各亚型在不同时期平衡的因素作一综述。     

急性肺损伤患者血浆miR-127及miR-155表达水平及对预后的影响

目的:探讨急性肺损伤(ALI)患者血浆miR-127及miR-155表达水平及其临床意义。方法:选取2016-01—2019-06期间我院收治的ALI患者145例,根据ALI患者生存情况分为存活组(n=91)和死亡组(n=54)。采用急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分标准将ALI患者分为低中危组(n=79)和高危组(n=66)。采用实时荧光定量PCR检测各组血浆miR-127及miR-155表达水平。应用多因素Logistic回归分析ALI患者死亡的危险因素。绘制ROC曲线分析血浆miR-127及miR-155表达水平及APACHEⅡ评分预测ALI患者死亡的价值。结果:死亡组血浆miR-127(3.22±1.04 vs.1.05±0.46)及miR-155(2.46±0.75 vs.0.84±0.32)表达水平均明显高于存活组(P0.01)。高危组血浆miR-127(3.04±0.95 vs.1.31±0.52)、miR-155(2.38±0.71 vs. 0.97±0.38)表达水平及死亡率(60.6%vs. 17.7%)均明显高于低中危组(P0.01)。多因素Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分(OR=2.582,95%CI:1.674～4.105)、血浆miR-127(OR=3.306,95%CI:2.428～6.174)及miR-155(OR=2.804,95%CI:1.903～5.226)表达水平升高是ALI患者死亡的独立危险因素(P0.01)。ROC曲线分析显示,血浆miR-127、miR-155表达水平及APACHEⅡ评分预测ALI患者死亡的最佳截断值分别为2.25、1.64、18.50分,3项联合预测ALI患者死亡的曲线下面积(0.922,95%CI:0.864～0.983)最大,其敏感度(93.7%)和特异度(87.4%)较好。结论:血浆miR-127及miR-155表达水平升高与ALI患者预后不良相关,是ALI患者死亡的独立危险因素,联合APACHEⅡ评分对预测ALI患者死亡具有一定的价值。     

急性肺损伤肺泡巨噬细胞NF-κB激活通路的实验研究

目的　观察急性肺损伤 (ALI)大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)中NF -κB的活化路径 ,探讨ALI可能的分子病理机制。方法　采用ALI大鼠模型 ,伤后 8h处死动物分离、培养PAM ,用原位杂交 (ISH)技术、凝胶电泳迁移率改变 (EMSA)及酶联免疫吸附试验 (ELISA)法 ,观察PAM中IκB激酶 (IKK - β)激活、抑制蛋白 (IκB -α)降解、核因子 (NF) -κB核移位 (活化 )和上清液TNF -α的含量变化。结果　ALI大鼠PAM中IKK - βmRNA表达 (0 118± 0 0 2 6)、NF -κB活性 (0 85 7± 0 0 5 8)、TNF -α的含量 [(3 95 82±87 45 )ng/L]较对照组大鼠明显升高 [分别为 (0 0 42± 0 0 0 5 )、(0 2 5 0± 0 0 12 )、(196 2 6± 2 5 98)ng/L](P均 <0 0 1) ;而I-κB水平(0 40 1± 0 0 19)较对照组 (0 685± 0 0 3 5 )比较则显著降低 (P <0 0 1)。结论　IKK - β激活 /IκB降解 /NF -κB活化 /TNF -α合成的通路效应可能是ALI病理损害的重要机制。IKK - β在NF -κB转导通路介导的ALI中发挥重要作用     

白介素—10和一氧化氮对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子—кB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的：探讨白介素－10和外源性一氧化氮（NO）对内毒素（LPS）诱导肺泡巨噬细胞（PAM）核因子－кB（NF－кB）活化及肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因表达的调节,为临床运用提供理论依据。方法：用支气管肺泡灌洗法收集PAM进行培养,分为正常对照组、LPS组、IL－10＋LPS组和NO＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测核提取物中NF－кB活性和细胞培养上清中TNF－α含量。结果：LPS组NF－кB活性和TNF－α含量在刺激后3显著高于对照组;IL－10＋LPS组和NO＋LPS组NF－кB活性和TNF－α含量均显著低于LPS组。结果：LPS诱导PMAM宾NF－кB活化,导致TNF－α基因表达增强;白介素－10和外源性NO可抑制NF－кB活化而减少TNF－α的释放。     

血清降钙素原、C-反应蛋白和IL-6、IL-10对脓毒症预后意义

目的:探讨血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和IL-6、IL-10对脓毒症预后意义.方法:2008年12月～2009年4月天津医科大学总医院急诊医疗中心符合脓毒症诊断标准病例50例,根据28天生存与否分为生存组和死亡组.于入院后次日、第4日动态观察血清PCT、CRP变化,并记录当日APACHE II评分.并于当日留取脓毒症患者血清,-20℃低温保存,集中测定IL-6、IL-10.结果:死亡组的血清PCT水平高于生存组(P＜0.05),CRP、IL-6、IL-10在两组之间无统计学差异(P＞0.05).血清PCT、IL-6与APACHE Ⅱ评分具有正相关性(r=0.511,P=0.000;r=0.338,P=0.016);生存组的血清PCT逐渐降至正常(P＜0.05),而死亡组PCT水平无明显下降趋势.在预测脓毒症结局方面血清PCT的ROC曲线下面积最大.结论:血清PCT是判断脓毒症预后的一个较好指标,可以反映脓毒症严重程度,其预测价值高于CRP、IL-6、IL-10,动态观察PCT变化可以提高脓毒症患者的死亡风险预测.     

白细胞介素-6和白细胞介素-10在急性小鼠巨细胞病毒性心肌炎中的表达

目的研究IL-6和IL-10在小鼠巨细胞病毒性(MCMV)心肌炎中的表达和在心肌保护中的作用。方法60只4周龄BALB/C小鼠随机分为2组:实验组[36只小鼠,腹腔注射巨细胞病毒(MCMV)]和对照组(24只小鼠,注射3T3细胞裂解液)。应用免疫组化方法检测IL-6和IL-10在心肌组织中的表达,用病理切片观察心肌的病变。结果心肌病理结果显示,心肌组织出现灶性或弥散性炎性细胞浸润、心肌细胞的变性和坏死。心肌病理积分显示MCMV心肌炎属轻度炎症。免疫组化技术结果显示,在实验组,IL-6和IL-10蛋白主要表达在炎性浸润细胞、变性或坏死的心肌细胞,而在对照组,仅有IL-6和IL-10蛋白微量表达。结论IL-6和IL-10蛋白在MCMV心肌炎心肌组织中表达,并可能在病毒性心肌炎中起保护心肌作用。     

Effect of interleukin-10 (IL-10) on experimental LPS-induced acute lung injury

The purpose of this study was to clarify the role of interleukin-10 (IL-10) during the development of acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) in a mouse model. When LPS was given to nude mice, the mortality rate was 100% at 48 h of the observation period. However, mortality was reduced to 30% when IL-10 was added concomitantly (P < 0.01). In the IL-10 group, a significant reduction of inflammatory change in lung tissue was observed. It was also found that peripheral neutrophils increased when IL-10 was added. When LPS and IL-10 were given concomitantly, the level of tumor necrosis factor (TNF)-α in both serum and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) decreased significantly (P < 0.05). In-vitro observations were made concerning the influence of human neutrophils. Both neutrophil superoxide (O₂ ⁻) and elas-tase production were increased by TNF-α stimulation, while significant inhibition was seen with the concomitant dosing of IL-10 (P < 0.05). TNF-α stimulation increased the occurrence of adhesion molecules for neutrophil surface, lymphocyte function-associated antigen-1 (LFA-1), and macrophage antigen-1 (Mac-1). LPS stimulation greatly increased the occurrence of neutrophil surface 55-kDa TNF-receptor [TNF-R (p55)], when observation was made under laser microscopy. However, no significant occurrence was seen with IL-10 concomitant dosing. The above results suggested that IL-10 inhibited TNF-α production and neutrophil activity in LPS-induced acute lung injury, which led to a reduction of the lung tissue injury. Received: February 18, 1999 / Accepted: December 20, 1999     

多发性创伤后血清TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10变化的连续观察

目的 探讨创伤患者TNF－α、IL－1β、IL－6及IL－10血清浓度的变化及临床意义。方法 25例多发性创伤患者分别在受伤后第2、3、5、10及15天测定外周血清TNF－α、IL－1β、IL－6及IL－10的变化，并与正常对照组进行对比分析。血清TNF－α浓度采用放免法测定，IL－1β、IL－6、IL－10浓度采用酶联免疫吸附法测定。结果 TNF－α、IL－1β、IL－6及IL－10血清浓度在多发性创伤后均较正常对照显著增高，IL－1β及TNF－α于2周后恢复正常，而IL-6、IL-10增高持续至2周后。结论 TNF－α、IL－1β、IL－6及IL－10参与了多发性创伤病理生理过程，动态观察可能和病情程度有关。     

白细胞介素-10对内毒素诱导急性肺损伤大鼠炎症因子的影响

目的研究白细胞介素-10(IL-10)对内毒素诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织炎症因子mRNA表达的影响,探讨IL-10对急性肺损伤的保护作用。方法24只SD大鼠随机分为3组:对照组,实验组,治疗组。实验组于尾静脉注射内毒素,治疗组注射内毒素和IL10,对照组注射生理盐水。测定各组肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)mRNA表达和血浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平,观察各组大鼠肺组织的病理改变。结果TNF-α、IL-1β和IL6mRNA的表达:实验组、治疗组高于对照组,P<0.01;实验组高于治疗组,P<0.05。血浆TNF-α、IL1-β、IL-6:实验组高于治疗组对照组,P<0.05。肺组织病理改变:治疗组明显轻于实验组。结论IL10能抑制内毒素诱导ALI大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和IL6mRNA的表达,降低血浆炎症因子水平,减轻肺组织的病理损害,能起到治疗ALI的作用。     

颅脑外伤患者脑脊液及血液中IL-6的表达

目的研究颅脑外伤患者脑脊液及血液中IL-6的表达,探讨IL-6水平与颅脑外伤的病情程度和预后是否有关。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。测定36例颅脑外伤患者脑脊液和血清IL-6含量。患者分为两组,A组（轻中型颅脑损伤组）16例,GCS〉8分;B组（重型颅脑损伤组）20例,GCS≤〈8分。结果IL-6在脑脊液和血液中浓度,第3天达到高峰,第7天开始下降。脑脊液中IL-6水平与颅脑外伤的严重程度呈正相关,损伤程度重者IL-6含量明显增高,且持续时间较长。血清IL-6水平与临床病情和炎症反应变化呈平行关系,脑脊液中IL-6在伤后明显高于血清中IL-6值。结论颅脑损伤患者脑脊液及血清存在1L-6的过量表达,且脑脊液表达较明显。IL-6的检测可作为反映脑损伤严重程度及预后转归的指标。     

基质金属蛋白酶2,9在高氧所致急性肺损伤实验中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,MMP-9)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用.方法将54只小鼠置于密闭的氧气室暴露于＞95%的高氧,另取18只小鼠置于呼吸室内(空气)作为对照组.分别于24,48和72 h取出小鼠评价肺损伤程度,以基质金属蛋白酶谱分析调查支气管肺泡灌洗液中MMP-2及MMP-9的释放及活性.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法测定肺组织MMP-2及MMP-9的表达及组织分布.结果高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺泡灌洗液MMP-2及MMP-9释放及活性增加,RT-PCR结果显示高氧组动物肺组织MMP-2及MMP-9的mRNA表达增高,免疫组织化学研究显示MMP-2和MMP-9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高.结论基质金属蛋白酶2,9在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.     

急性移植物抗宿主病病人血清IL-2、IL-8、IL-10及TNF-α水平变化的研究

为了探讨细胞因子IL-2、TNF—α、IL-10、IL-8在异基因造血干细胞移植后aGVHD发病中的作用，观察33例Allo-HSCT患者aGVHD的发病情况。aGVHD的诊断主要依据临床表现，部分病例还依据皮肤、肠粘膜活检的病理学变化。移植前后定期采集患者血清，采用放射免疫法检测细胞因子IL-2、TNF—α、IL-10、IL-8的浓度的变化。结果发现，异基因造血干细胞移植后33例患者均获得造血功能重建，13例发生aGVHD，其中8例Ⅰ度aGVHD，5例Ⅱ-Ⅳ度aGVHD。IL-2、TNF—α水平在aGVHD阳性组明显高于aGVHD阴性组，而IL-10的水平在aGVHD阳性组明显低于aGVHD阴性组，IL-8水平的变化无统计学意义。结论：细胞因子IL-2、TNF—α在临床aGVHD的发病中起重要的正向调节作用，定期检测患者血清的IL-2、TNF—α水平有助于预测aGVHD的发生。     

急性颅脑损伤后血清IL-10和IL-18的含量变化及临床意义

目的探讨急性颅脑损伤后血清白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL—18）的含量变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定60例急性颅脑损伤患者伤后1d、3d．7d和10d血清IL-10和IL-18的含量,观察IL—10和IL-18血清含量的变化规律,分析颅脑损伤程度与IL-10和IL-18含量之间的关系。结果IL—10在伤后早期即明显升高,于伤后1d即达到高峰,至10d下降明显,但仍高于对照组（P〈0．05）;IL-18含量在伤后呈逐渐升高趋势,并在10d达到高峰。重型颅脑损伤组在伤后各个时间点的血清IL—10和IL-18含量较轻、中型组明显升高（P〈0．05）。结论急性颅脑损伤后血清IL—10和IL-18含量明显升高,与颅脑损伤程度呈正相关;IL-10和IL-18参与了急性颅脑损伤后的炎性反应过程,在继发性脑损害中起重要作用。