miR-128抑制结肠癌侵袭转移的机制研究

目的分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128mRNA的表达,Westernblot法检测miR-128蛋白的表达。结果转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降（均P＜0.05）,且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降（均P＜0.05）。结论miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用。     

TrkB在结肠癌中的表达及其对LoVo细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨tropomysin相关激酶B(TrkB)在结肠癌中的表达及其对LoVo细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 采用western blot方法检测TrkB在30例结肠癌和相应癌旁组织中的表达水平.分别采用MTT、流式和Transwell小室研究转染TrkB-siRNA对结肠癌细胞LoVo增殖、凋亡和侵袭的作用.结果 TrkB在结肠癌组织中表达上调,特异性siRNA干扰TrkB表达后,转染细胞凋亡率增加,但细胞增殖和侵袭受到抑制.结论 结肠癌中TrkB过表达可能通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭,从而对结肠癌的发生发展具有重要作用.     

SOCS3对肺腺癌细胞株A549迁移和侵袭能力的影响

目的 观察细胞因子信号负调控因子3(suppressors of cytokine signaling,SOCS3)对人肺腺癌细胞株A549迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制.方法 建立SOCS3稳定表达细胞株;Boyden Chamber分析法测定细胞的迁移和侵袭能力;半定量RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)2,9 mRNA表达;明胶酶谱分析法测定MMP2,9蛋白活性水平.结果 SOCS3稳定表达株细胞迁移和侵袭能力显著下降(P＜0.05);半定量RT-PCR和明胶酶谱分析结果显示SOCS3可显著抑制MMP2,9表达和活性(P＜0.05).结论 SOCS3能通过抑制MMP2,9表达和活性明显降低A549的体外迁移和侵袭能力.     

血管紧张素Ⅱ对结肠癌CT26细胞株增殖及侵袭的影响

目的: 研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)及其1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)阻滞剂氯沙坦对结肠癌CT26细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法: 采用免疫荧光法检测AT1R在CT26细胞中的表达;采用CCK8法分别检测不同浓度AngⅡ和氯沙坦作用后细胞的增殖率,选取最适作用浓度的AngⅡ和氯沙坦;将CT26细胞分为对照组(常规培养)、Ang Ⅱ组(1×10-7moL/L)、氯沙坦+Ang Ⅱ组(1×10-6moL/L氯沙坦预处理2 h+1×10-7moL/L Ang Ⅱ);采用侵袭实验检测细胞的侵袭能力;ELISA法检测CT26细胞中TNF α的分泌量;蛋白质印迹法检测AT1R和TNF α蛋白的表达。结果： 免疫荧光结果显示AT1R表达于CT26细胞;与对照组相比,Ang Ⅱ组CT26细胞的增殖、侵袭能力增强,AT1R及TNF α蛋白的表达增加(P均<0.05)。与Ang Ⅱ组对比,氯沙坦+Ang Ⅱ组肿瘤细胞增殖、侵袭能力均减弱,AT1R及TNF α蛋白的表达降低(P均<0.05)。 结论： Ang Ⅱ可促进结肠癌CT26细胞增殖和侵袭,氯沙坦可拮抗Ang Ⅱ的作用。     

胃饥饿素对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响及机制探讨

目的探讨胃饥饿素（Ghrelin）对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制。方法收集90例行手术切除的结肠癌（CRC）组织及癌旁组织,免疫组织化学染色检测组织Ghrelin表达,分析Ghrelin表达与结肠癌患者临床资料、生存预后的关系。按照转染类型将细胞分为3组：空白对照组（WT）、阴性对照组（NC）和sh-Ghrelin转染组。采用短发夹RNA（shRNA）技术抑制结肠癌HT29、SW480 细胞Ghrelin 表达,CCK-8 法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及早期凋亡的情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,Western blot 检测磷脂酰肌醇3- 激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）表达水平。结果结肠癌组织Ghrelin高表达率为64.4%（58/90）,癌旁组织Ghrelin 高表达率为27.8%（25/90）,两者差异有统计学意义（χ2=24.347, P=0.001）。肿瘤直径≥5 cm 组Ghrelin 高表达率高于肿瘤直径<5 cm 组,Ⅲ、Ⅳ期组Ghrelin 高表达率高于Ⅰ、Ⅱ组,淋巴结转移组Ghrelin高表达率高于无淋巴结转移组,组间比较差异有统计学意义（P <0.05）;Ghrelin 表达与性别、年龄及肿瘤分级无关（P >0.05）。生存曲线分析显示,Ghrelin高表达组总生存期和无病生存率均低于Ghrelin低表达组（P <0.05）。在结肠癌HT29和SW480 细胞中,sh-Ghrelin组细胞增殖能力低于NC 组和WT 组,处于S 期比例、早期凋亡比例高于NC 组和WT 组（P <0.05）。处于G0/G1期比例低于NC组和WT 组,差异有统计学意义（P <0.05）。sh-Ghrelin组细胞迁移距离、侵袭细胞数少于NC 组和WT 组（P <0.05）。Western blot检测结果显示,在HT29、SW480细胞中,sh-Ghrelin 组PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白相对表达量低于NC 组和WT组（P <0.05）,NC 组、WT 组间PI3K、Akt、p-Akt、mTOR 及p-mTOR 蛋白相对表达量比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论结肠癌组织Ghrelin 表达上调,并与结肠癌患者生存预后有关。干扰Ghrelin 表达能够抑制结肠癌细胞增殖、侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路有关。     

DNMT3B对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨敲减DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3 beta, DNMT3B)对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用Western blot方法检测正常人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞株TPC-1、K1和BCPAP中DNMT3B的表达,以DNMT3B高表达的BCPAP细胞作为后续研究对象,实验分为空白对照组(control组)、阴性对照组(si-NC组,转染阴性siRNA)和敲减DNMT3B组(si-DNMT3B组,转染干扰DNMT3B表达的siRNA)。应用RNA敲减(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染BCPAP细胞,qRT-PCR和Western blot检测各组中DNMT3B、死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase, DAPK)、细胞凋亡调控因子(Bcl-2-associated X protein, Bax)和Ras相关区域家族1A(Ras-associated domain family 1A, RASSF1A)这4个基因的mRNA和...     

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的 常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果 ①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01),呈浓度依赖性.②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P＜0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果.③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少.④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响.结论 常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力.     

IL-13对人结肠癌LS174T细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨细胞因子IL-13对人结肠癌LS174T细胞增殖和侵袭能力的影响?方法:在正常培养的人结肠癌LS174T细胞培养液中加入终浓度为20 ng/ml的重组人IL-13,分别应用MTT法?Transwell小室实验检测肿瘤细胞增殖?侵袭能力的变化?结果:MTT实验显示,IL-13处理组细胞72?96 h的OD值明显高于对照组(P < 0.05)?Transwell小室实验中,IL-13处理组细胞穿过Matrigel胶的细胞数量明显多于对照组(P < 0.05)?结论:一定浓度的重组人IL-13可以诱导人结肠癌LS174T细胞的增殖和侵袭能力增加?     

RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3（Cr-3）对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响。方法：将大肠癌细胞随机分为5组：空白对照组,空载对照组,siRNA转染组（5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组）。将Cr-3小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力。结果：与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性（P〈0.05）,癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关（P〈0.05）。结论：假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点。     

胃泌素促进人大肠癌细胞系Colo320WT侵袭力增加的分子机制探讨

目的 探讨胃泌素促进入大肠癌细胞侵袭力增加的分子机制。方法 脂质体转染表达胃泌素受体（CCK-2R）的pCR3．1／GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆,逆转录PCR和免疫印迹鉴定,转染成功命名为Colo320WT。应用1×10^-8mol／L胃泌素以时间梯度0、1、6、12、24、48h干预Colo320WT细胞,同时应用胃泌素受体拮抗剂L365,260干预Colo320WT细胞30min,再加1×10^-8 mol／L胃泌素干预12h。免疫印迹检测Colo320WT细胞中的磷酸化黏着斑激酶（FAK）Tyr397和总FAK表达。共聚焦显微镜观察磷酸化FAKTyr397在板状伪足的定位表达。免疫共沉淀检测FAK—Src—p130^Cas-Dock180信号复合物的形成。Pull-down测定Rac活性。结果 随着胃泌素干预时间的延长,磷酸化FAKTyr397的表达量呈增加趋势,且12h达最大,但对总的FAK无明显影响,磷酸化的FAKTyr397／FAK比值分别为2．82％、9．28％、22．62％、38．59％、28．41％、14．94％。L365,260阻断后的磷酸化的FAKTyr397／FAK的比值为7．21％。定位在板状伪足上磷酸化的FAKTyr397也呈增加趋势,12h达最大。免疫共沉淀检测发现FAK、Src、p130^Cas和Dock180在胃泌素的干预下形成了信号复合物。Pull—down测定证明胃泌素能活化Rac,但对总Rac表达无影响。胃泌素受体拮抗剂1365,260阻断可胃泌素引起的效应。结论胃泌素能增加大肠癌细胞的侵袭力可能是通过其与受体作用后使FAK发生磷酸化,促进磷酸化FAKTyr397定位在板状伪足、使FAK—Src—p130^Cas-Dock180信号复合物形成以及活化Rac。     

白细胞介素-37在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖、侵袭的作用

目的 探讨白细胞介素-37(IL-37)在结肠癌组织中表达的变化,并通过体外实验探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的作用.方法 收集2017年4月—2019年4月在西安市第四医院手术切除的结肠癌组织及对应的癌旁组织,检测其IL-37的表达量;培养结肠癌HT29细胞,随机分为对照组、转染空白pcDNA3.1质粒的空白质粒组、转...     

微小RNA对结肠癌调控机制的研究进展

【摘要】 结肠癌是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一,发病率与死亡率仅次于肺癌,严重威胁人类的健康。相关研究表明,微小RNA对肿瘤细胞的分化、增殖具有调控作用,且微小RNA的异常表达与结肠癌的进展密切相关。因此,本文就微小RNA对结肠癌调控机制的研究进展进行综述。     

NRAGE对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用机制

目的 研究神经营养蛋白受体相互作用的同源物(NRAGE)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和侵袭能力的作用机制。方法 选取84例CRC患者的临床病理材料,应用荧光定量PCR(qPCR)及免疫印迹实验检测CRC组织及癌旁正常组织中NRAGE的表达,分析癌组织中NRAGE的表达与临床病理特征的关系。RT-PCR及免疫印迹实验检测CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO及结直肠正常细胞系FHC中NRAGE mRNA及蛋白表达。MTT实验、Transwell迁移实验观察NC组、过表达NRAGE组及NRAGE敲低组肿瘤细胞增殖及迁移能力。qPCR及免疫印迹实验检测各组AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。结果 与癌旁组织相比,CRC癌组织中NRAGE的mRNA及蛋白表达明显升高。癌组织中NRAGE的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(P<0.05)。与FHC细胞相比,CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达较高(P<0.05)。...     

JAK2/STAT3通路在表皮生长因子诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨JAK2/STAT3通路在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,分为对照组、表皮生长因子处理组(EGF组)、表皮生长因子与JAK2激酶抑制剂AG490共处理组(EGF+AG490组)。采用免疫荧光和Western blot检测各组LoVo细胞E钙粘素蛋白、磷酸化STAT3表达水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果细胞划痕实验对照组细胞划痕闭合约38%,EGF+AG490组细胞划痕闭合约40%,而EGF组闭合约80%。EGF组显著高于另2组(P<0.05);体外侵袭实验显示对照组透膜细胞数为(21.24±2.65)/视野,EGF+AG490组为(23.19±3.50)/视野,EGF组为(55.08±2.14)/视野。EGF组显著高于另2组(P<0.05);与EGF+AG490组结肠癌LoVo细胞相比,EGF组细胞P-STAT3表达增加72.4%,E-cadherin蛋白表达降低68.5%(P<0.05);免疫荧光显示EGF组细胞E-cadherin向细胞质内移位...     

基于microRNA-125b靶向信号传导转录激活因子3调控皮肤鳞状细胞癌的增殖和侵袭

目的 观察microRNA-125b(miR-125b)和信号传导转录激活因子3(STAT3)在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的表达,并探讨miR-125b靶向STAT3进而调控CSCC发生发展的分子机制。方法 采用qRT-PCR法和Western Blot检测32例CSCC组织及其周围正常皮肤组织中以及CSCC细胞系(A431、SCC13和SCL-1)和正常皮肤细胞系HaCaT中miR-125b和STAT3的表达。荧光素酶报告基因实验被用于验证miR-125b对STAT3的靶向作用。采用MTT法和流式细胞术检测miR-125b mimic或STAT3 shRNA对CSCC细胞系(A431、SCC13和SCL-1)细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。采用克隆形成实验、细胞转移和侵袭实验观察miR-125b mimic对CSCC细胞系A431细胞的增殖、转移和侵袭能力的影响。结果 与正常皮肤组织和细胞相比,CSCC组织和细胞中miR-125b表达显著下降,而STAT3的表达则显著上调。miR-125b靶向STAT3的3′-UTR发挥对其表达的调控作用。miR-125b mimic或STAT3 shRNA转染后,A431、SCC13和SCL-1细胞的增殖明显受抑制,G0/G1期细胞比例明显增加,并且促进了细胞凋亡。miR-125b mimic能明显抑制A431细胞的克隆形成、细胞转移和侵袭的能力。结论 miR-125b/STAT3的表达异常通过影响细胞的增殖、凋亡和侵袭参与了CSCC的发生发展。二者可成为CSCC新的诊断和治疗靶点。     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。     

miR-454-3p在结肠癌中的表达及其对结肠癌增殖、侵袭及肝转移能力的影响

目的研究miR-454-3p在结肠癌中的表达及其对结肠癌增殖、侵袭及肝转移能力的影响。方法收集20例结直肠癌患者 的肿瘤组织,癌旁组织作为正常对照。应用原位杂交检测结肠癌组织和正常结肠组织中miR-454-3p的表达水平。在结肠癌细 胞株SW480中,运用慢病毒转染技术过表达miR-454-3p。应用Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 和细胞克隆形成实验检测结肠癌 细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测结肠癌细胞侵袭能力的变化。脾脏注射结肠癌细胞构建小鼠结肠癌肝转移模型,研究 过表达miR-454-3p对结肠癌肝转移的影响。结果原位杂交结果显示miR-454-3p在结肠癌组织中的表达水平显著高于正常结 肠组织,差异有统计学意义（P<0.05）;在人结肠癌细胞SW480中上调miR-454-3p表达能够显著促进肿瘤细胞的增殖和侵袭（P< 0.05）。小鼠过表达miR-454-3p组中肝转移结节较对照组显著增多（P<0.05）。结论miR-454-3p在结直肠癌患者肿瘤组织中表 达显著上调,miR-454-3p 可能通过促进结肠癌细胞增殖和侵袭进而促进肿瘤的肝脏转移,从而参与了结直肠癌的发展进程。 miR-454-3p有望成为结直肠癌诊断和预后评估的一个新的潜在标志物。