不同病理类型的葡萄膜黑色素瘤中微小RNA差异表达谱分析

背景 目前研究证实微小RNA(miRNA)参与大多数人类肿瘤疾病的发生和发展,其作用类似于抑癌基因或癌基因.葡萄膜黑色素瘤(UM)是成人常见的眼部恶性肿瘤,其发生和转移机制仍未完全阐明.探讨UM组织中miRNA的差异表达情况有望为UM的靶向治疗提供依据. 目的 筛选不同病理类型的UM组织中特异性miRNA表达谱. 方法 收集于2013年3月至2015年10月在北京同仁医院手术局部切除并经常规组织病理学和免疫组织化学检测证实为梭型细胞型UM的标本4例和上皮细胞型UM标本4例,采用miRNA芯片分别检测2种UM组织中miRNA的表达,收集同期死于非肿瘤疾病的8个供体眼的正常葡萄膜组织作为对照,利用组间差异倍数筛选出差异≥2倍差异表达的miRNA;用在线软件预测差异表达miRNA的靶基因,采用生物信息学方法分析靶基因参与的信号功能通路.采用实时定量PCR法验证芯片检测结果.结果 收集的梭形细胞型和上皮细胞型UM标本经组织病理学检查均得到确诊,免疫组织化学检测梭形细胞型及上皮细胞型UM组织中HMB45、黑色素-A和S-100均呈阳性反应.与正常葡萄膜组织比较,在梭形细胞型UM组织中差异表达的miRNA有109个,其中29个上调,80个下调,上调的miRNA包括miR-146a-5p、miR-25-3p和miR-29b-1-5p,下调的miRNA包括miR-126-5 p、miR-183-5p和miR-96-5p;上皮细胞型UM中差异表达的miRNA有50个,其中23个上调,27个下调,上调的miRNA包括miR-155-5p、miR-210和miR-378 a-5p;下调的miRNA包括miR-199a-5p、miR-143-3p和miR-143-5p.在梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中共同上调的miRNA为miR-132-3p、miR-21-5p、miR-34a-5p和miR-34b-5p,共同下调的miRNA为miR-125b-2-3p、miR-126-3p、miR-199a-3p和miR-214-3p.梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中差异表达的miRNA所预测的靶基因分别参与癌症通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Wnt信号通路、细胞间黏附、胞吞作用、前列腺癌通路、结直肠癌通路和细胞黏附通路.结论 与正常葡萄膜组织相比,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织中存在多种miRNA的差异表达,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织之间也存在明显的miRNA差异表达,这些差异表达的miRNA可通过不同的信号转导通路参与调控UM的生物学行为.     

老年性白内障患者外周血环状RNA差异表达谱研究

目的　利用微阵列芯片技术筛选老年性白内障患者外周血中差异性表达的环状 RNA(circular RNAs,circRNAs)进行生物信息学数据预测和分析,以探究外周血circRNAs在老年性白内障发病中的作用。方法　选取成都医学院第一附属医院已诊断为老年性白内障患者3例（试验组）和健康体检者3人（对照组）作为研究对象,运用Arraystar circRNAs基因芯片技术检测两组外周血中circRNAs表达谱及分析两组间差异表达的circRNAs。同时,运用在线生物信息学软件对差异circRNAs进行分析以及对下游相互作用的微小RNA（miRNA）进行预测。结果　与对照组比较,试验组外周血中异常表达的circRNAs共有242个(fold change绝对值≥2.0),其中上调的100个(fold change≥2.0),下调的142个 (fold change≤-2.0);生物信息分析数据提示,差异circRNAs在调节细胞代谢、发育及RNA转录等功能方面高度富集;4个circRNAs与白内障相关的miR-15a-3p、miR-34a-5p等吸附相关miRNA可能具有miRNA海绵吸附作用。结论　试验组与对照组外周血之间存在差异表达的circRNAs,这些circRNAs可能参与老年性白内障的致病调控,未来可能成为老年性白内障新型诊断和治疗的潜在生物学标志物。     

miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障氧化应激的实验研究

目的　探讨miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障的氧化应激。方法　检测年龄相关性白内障患者和正常透明晶状体前囊组织及人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-34a-5p和预测靶基因Nrf2表达及人晶状体上皮细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）活性。将miR-34a-5p模拟物、模拟物对照、miR-34a-5p抑制剂和抑制剂对照分别转染人晶状体上皮细胞，然后用400 μmol·L^-1 H₂O₂作用8 h后检测miR-34a-5p、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达，并检测人晶状体上皮细胞增殖活性。结果　正常晶状体前囊组织中miR-34a-5p的相对表达量为1.03±0.29，Nrf2 mRNA的相对表达量为1.31±0.39；年龄相关性白内障组织中miR-34a-5p的相对表达量为2.69±0.99，Nrf2 mRNA的相对表达量为0.64±0.25。与正常组织相比，年龄相关性白内障晶状体组织中miR-34a-5p表达显著升高，Nrf2表达显著降低。Nrf2蛋白在年龄相关性白内障晶状体组织中表达也显著降低（均为P<0.001）。在人晶状体上皮细胞氧化应激模型中，miR-34a-5p表达显著升高，靶基因Nrf2表达显著降低，内源性ROS水平显著升高（均为P<0.001）。miR-34a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞后，miR-34a-5p表达显著升高，Nrf2表达显著降低，内源性ROS水平显著升高，细胞增殖活性显著降低（均为P<0.001），然而，miR-34a-5p抑制剂转染人晶状体上皮细胞后，miR-34a-5p表达显著降低，Nrf2表达显著升高，内源性ROS水平显著降低，细胞增殖活性显著升高（均为P<0.001）。双荧光素酶报告分析证实，Nrf2是miR-34a-5p的直接靶点。结论　MiR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路增加晶状体上皮细胞氧化应激，抑制晶状体上皮细胞的增殖，从而参与年龄相关性白内障的发生发展过程。     

miR-30b-5p 抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的　探讨miR-30b-5p对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Notch信号通路活化的调控机制及治疗作用。方法　通过Target Scan（http://www.targetscan.org/）对Notch1和Dll4基因与 miR-30b 的关系进行生物信息学预测。将雌性Lewis大鼠随机分为对照组、EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p空载体（miR-30b-5p-N）组。EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠首先诱导EAU模型,miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠分别采用携带miR-30b-5p和miR-30b-5p-N的慢病毒于EAU大鼠脾脏进行注射干预处理,EAU组大鼠于同一部位注射相同体积的生理盐水。处理后12 d,实时荧光定量PCR检测4组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA的表达;免疫组织化学检测4组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达,分析miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的调控作用。结果　生物信息学预测分析结果表明,Notch 信号通路上 Notch1和Dll4基因均为 miR-30b 调控的靶基因。免疫后12 d,相比于对照组,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA水平均升高（均为P<0.05）;经miR-30b-5p干预治疗后,miR-30b-5p组脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA表达均显著降低（均为P<0.05）。免疫组织化学检测结果显示,免疫后12 d,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 蛋白表达均上调（均为P<0.05）;miR-30b-5p干预治疗后,脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白表达均显著下调（均为P<0.05）。结论　miR-30b-5p可明显下调EAU大鼠各组织中Notch1和Dll4等Notch信号通路相关分子的表达进而抑制Notch信号通路活化,从而达到治疗葡萄膜炎的作用。     

MicroRNA-199a-3p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的抑制作用

目的：探讨MicroRNA-199a-3p（miR-199a-3p）对脉络膜黑色素瘤细胞OCM290增殖的影响及机制。 方法：实验研究。首先采用Real-time PCR技术检测miR-199a-3p在正常的脉络膜黑色素细胞UM96和肿瘤细胞OCM290中的表达情况;其次采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的转染方法,将miR- 199a-3p转染入体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞OCM290中过表达作为实验组,将随机序列寡核苷酸链转染入OCM290细胞作为阴性对照组;然后在转染的基础上运用细胞增殖实验法（MTS法）、克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力。流式细胞术检测细胞周期。Western blot法检测与细胞周期相关的信号蛋白如CDK2、CDK4、E2F1等的表达。组间数据比较采用独立样本t检验。结果：miR-199a-3p在UM96中高表达,而在OCM290中表达明显下调（t=13.2,P<0.001）。OCM290细胞转染 miR-199a-3p后,MTS结果显示实验组细胞数为对照组的（23.8±1.7）%,细胞增殖明显被抑制（t=78.1,P<0.001);细胞克隆数减少;细胞周期滞留在G1期（t=-8.5,P=0.001）;Western blot法检测发现miR-199a-3p能下调OCM290中CDK2、CDK4、E2F1等的表达水平（t=10.3,P=0.001;t=9.9,P=0.001; t=10.4,P<0.001）。结论：miR-199a-3p通过下调调控细胞周期进程的关键蛋白,影响细胞周期的进程,从而抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖。     

老年性白内障患者circKMT2E表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的　探讨circKMT2E在老年性白内障（ARC）患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响。方法　取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照。使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA。依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件 (v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA（circRNA）进行注释,筛选circRNA差异表达。将体外培养的SRA01-04细胞随机分组,其中,空白对照组:用正常培养液培养,不作特殊处理;miR-control组:转染miR-control无序序列;miR-34a组:转染miR-34a-5p mimics序列;miR-34a+control组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-control空载体;miR-34a+HMGB1组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-HMGB1质粒。采用实时荧光定量PCR与双荧光素酶报告基因检测基因表达情况。 通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达。结果　经生物信息学分析显示,circKMT2E在ARC患者晶状体前囊膜组织中表达上调最为显著。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-34a-5p后circKMT2E-WT报告基因的荧光素酶活性由1.000±0.023降低至0.502±0.057（P<0.05）;而circKMT2E-MUT报告基因的荧光素酶活性由1.005±0.018降低至0.989±0.053（P>0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞凋亡率（23.59%±3.47%）较miR-control组（3.82%±0.41%）增高（P<0.05）,而miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞凋亡率（8.97%±1.20%）较miR-34a-control组（24.59%±4.33 %）降低（P<0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白、Bax蛋白相对表达量较miR-control组均升高,同时Bcl-2蛋白相对表达量则降低（均为P<0.05）;miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白和Bax蛋白相对表达量较miR-34a-control组均降低,同时Bcl-2蛋白相对表达量较miR-34a-control组增加（均为P<0.05）。结论　circKMT2E可通过海绵吸附miR-34a-5p减弱其对下游靶点HMGB1的抑制作用,进而有效地阻止SRA01-04细胞凋亡,在一定程度起到延缓ARC发展的作用。     

miR-17-5p对小梁网细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制

目的　探讨miR-17-5p对小梁网细胞外基质（ECM）蛋白表达的调控作用及其机制。方法　收集原发性开角型青光眼（POAG）患者和正常小梁网组织,利用RT-PCR和Western blot分别检测miR-17-5p和Smad3表达;将人小梁网细胞（HTMCs）分为miR-17-5p mimics和miR-17-5p NC组,分别转染载有miR-17-5p mimics组和miR-17-5p NC的载体,Western blot检测HTMCs中ECM蛋白纤连蛋白（FN）、胶原蛋白I（CoL-I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;靶基因预测库预测miR-17-5p靶基因,荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定靶基因。HTMCs中共转染miR-17-5p mimics和Smad3过表达载体,Western blot检测各转染组细胞中Smad3、FN、CoL-I、α-SMA的蛋白表达。结果　正常小梁网组织中miR-17-5p表达量为1.16±0.11,高于POAG小梁网组织的0.19±0.04,差异有统计学意义（t=10.641,P<0.001）;正常小梁网组织中Smad3蛋白表达量为0.31±0.06,低于POAG小梁网组织的0.86±0.07,差异有统计学意义（t=8.105,P<0.001）。miR-17-5p mimics组HTMCs中FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均低于miR-17-5p NC组,差异均有统计学意义（均为P<0.001）;靶基因预测库预测及荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定证实Smad3为miR-17-5p下游靶基因;miR-17-5p+Smad3转染组HTMCs中Smad3、FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均高于miR-17-5p+vector转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论　miR-17-5p 能抑制HTMCs的ECM蛋白表达,这一过程可能是通过靶向抑制Smad3表达而实现的。     

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的　探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法　收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）含量。结果　ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关（r=-0.935,-0.951,均为P<0.05）。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。应用H₂O₂刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H₂O₂ HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低（均为P<0.05）;而circZNF292 siRNA组+H₂O₂细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H₂O₂均进一步升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低（均为P<0.05）。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转（均为P<0.05）。结论　circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。     

叔丁基对苯二酚对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其机制研究

目的　探讨叔丁基对苯二酚（tert-Butylhydroquinone,tBHQ）对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其机制,为DR防治提供新靶点。方法　18只雄性SD大鼠随机分成3组:正常组、糖尿病组（高脂高糖饮食）和tBHQ干预组（高脂高糖饮食中加入质量分数1%tBHQ）,后两组饮食干预4周后建立糖尿病大鼠模型,饮食干预3个月后处死各组大鼠。采集大鼠空腹血用于测定生化和胰岛素相关指标,HE染色观察大鼠视网膜各层组织变化,使用miRNA表达谱芯片测量大鼠视网膜差异性miRNA,实时定量PCR验证特定miRNA在3组大鼠视网膜的表达水平,分析差异性miRNA的相关通路。结果　tBHQ干预组［（15.073±7.079）mmol·L^-1］较正常组［（7.635±1.421）mmol·L^-1］空腹血糖升高（P<0.05）,较糖尿病组［（22.331±1.824）mmol·L^-1］降低（P<0.05）。tBHQ干预组［（47.961±15.256）μU·L^-1］血清胰岛素较正常组［（78.090±20.974）μU·L^-1］减少,而较糖尿病组［（17.533±3.959）μU·L^-1］增多（均为P<0.01）。HE染色结果示,糖尿病组大鼠视网膜出现严重水肿,各层结构不清,tBHQ干预组视网膜改变相对轻微。与糖尿病组大鼠相比,tBHQ干预组视网膜中miR-325-3p（>2.0倍）和miR-551b-3p（>1.5倍）上调,miR-652-3p（>2.0倍）下调。实时定量PCR验证miR-325-3p和miR-551b-3p为差异性miRNA,靶基因预测分析示miR-325-3p可介导21条信号通路。结论　tBHQ可能通过miR-325-3p介导的信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜起保护作用。     

上调microRNA-27b对血小板衍生因子诱导下的人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

目的　观察过表达的microRNA-27b(miR-27b)对血小板衍生因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导下的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）增殖的抑制作用，探讨miR-27b在ARPE细胞生物学行为中的作用及其调控机制。方法　将miR-27b过表达质粒或空载体转入ARPE-19细胞36 h后，用终浓度为20 μg·L^-1的PDGF预处理ARPE-19细胞5 h。根据转染物不同，将实验分为空白对照组（control组）、miR-27b阴性对照组（miR-27b NC组）、miR-27b模拟物转染组（PDGF+mimics组）和空载体转染组（PDGF+NC组）。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染后各组ARPE-19细胞中miR-27b的表达水平；MTT法测定各组细胞活性；通过流式细胞术评估各组细胞周期的分布变化；Western blot检测各组细胞周期的正向调控因子cyclinD1、CDK4和负向调控因子p21^CIP1和p27^KIP1的表达水平。结果　qRT-PCR检测结果显示:经PDGF处理5 h，与miR-27b NC组相比，PDGF+NC组miR-27b的表达显著降低（P<0.01）；与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的表达增加（P<0.01）。MTT检测结果显示:与miR-27b NC组相比，PDGF+NC组ARPE-19细胞的光密度（D）值增加(P<0.01)；而与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组可明显抑制ARPE-19细胞的D值(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示:与空白对照组和miR-27b NC组相比，PDGF+NC组G0/G1期细胞的百分比显著降低，S期细胞的百分比增加（P<0.05）；而与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的过表达显著增加了G0/G1期细胞的百分比，并抑制了细胞增殖（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示:与PDGF-NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的过表达可显著降低cyclinD1蛋白和CDK4蛋白的表达，同时增强了p21^CIP1蛋白和p27^KIP1蛋白的表达（均为P<0.05）。结论　上调miR-27b表达可抑制PDGF诱导的ARPE细胞增殖。     

Analysis of MicroRNA Expression in Tears of Patients with Herpes Epithelial Keratitis: A Preliminary Study

PurposeHerpes epithelial keratitis (HEK) is the most common form of herpes simplex virus (HSV) eye involvement, and understanding the molecular mechanisms underlying HEK is important. We investigated the expression of microRNAs (miRNAs) in the tears of patients with HEK.MethodsTear samples from eight patients with HEK and seven age-matched controls were evaluated. Clinical ophthalmologic evaluation was performed, and an anterior segment photograph was obtained after fluorescence staining. Dendritic or geographic ulcer areas were measured using ImageJ software. The expression of 43 different miRNAs in tears was measured using real-time polymerase chain reaction and compared between patients with HEK and controls. Differences in miRNA expression between the dendritic and geographic ulcer groups and correlations involving miRNA expression and ulcer area were evaluated.ResultsOf the 43 miRNAs, 23 were upregulated in patients with HEK compared to normal controls. MiR-15b-5p, miR-16-5p, miR-20b-5p, miR-21-5p, miR-23b-3p, miR-25-3p, miR-29a-3p, miR-30a-3p, miR-30d-5p, miR-92a-3p, miR-124-3p, miR-127-3p, miR-132-3p, miR-142-3p, miR-145-5p, miR-146a-5p, miR-146b-5p, miR-155-5p, miR-182-5p, miR-183-5p, miR-221-3p, miR-223-3p, and miR-338-5p were significantly upregulated in patients with HEK. MiR-29a-3p exhibited significant differences between the dendritic and geographic ulcer groups. All 23 miRNAs with significant differences between patients with HEK and the control group were not significantly correlated with ulcer area.ConclusionsTwenty-three miRNAs were significantly upregulated in the tears of patients with HEK, and the expression of miRNAs may play important roles in herpes infection in relation to host immunity.     

Altered microRNA expression profiles in retinas with diabetic retinopathy

Rats with streptozotocin (STZ)-induced diabetes were studied in order to identify abnormal microRNA (miRNA) expression profiles in diabetic retinopathy (DR) and to ascertain miRNAs associated with DR. Histopathologically, we observed characteristic features of DR in rats at 10 weeks after STZ injection. Investigation of miRNA expression profiles in the retinas of control and diabetic rats using miRNA microarrays revealed that many miRNAs were abnormally expressed in DR. On the basis of their fold changes and probability values, a total of 37 miRNAs were selected for further validation by real-time PCR analysis. The results showed that 11 miRNAs were significantly upregulated and 6 miRNAs were notably downregulated in DR. Furthermore, these changes in retinal miRNA expression levels paralleled the course of DR. Levels of miR-182, miR-96, miR-183, miR-211, miR-204, and miR-124 were significantly increased during the progress of DR, whereas miR-10b, miR-10a, miR-219-2-3p, miR-144, miR-338, and miR-199a-3p were significantly decreased. Our data indicate that the aberrant miRNA expression profiles in DR are associated with the development of DR. Modulation of retinal miRNA expression levels may provide a potential therapeutic strategy for DRs.     

糖尿病视网膜病变患者血清微核糖核酸表达谱的初步研究

目的本研究旨在探讨血清微核糖核酸(miRNA)成为糖尿病视网膜病变(DR)生物标志物的可能性。 方法队列研究。2014年11月至2015年6月,招募中国医科大学附属盛京医院眼科和内分泌科患者69例作为研究对象。其中,单纯糖尿病患者30例作为单纯糖尿病组,DR患者39例作为DR组。两组采用数字表法各随机选取3例患者,应用miRNA芯片技术检测血清miRNA的表达水平;使用分层聚类分析,获得DR患者的血清miRNA表达谱;利用生物信息学方法,分析特异性表达的血清miRNA的靶基因及其相关信号通路。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术,检测两组患者血清中特异性miRNA的表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线),评价血清中特异性miRNA对DR的诊断效能。 结果miRNA芯片技术检测表明,在3100种成熟的miRNA中,共筛选出19种差异miRNA。其中,13种表达上调;6种表达下调。结果表明,在DR患者血清中存在特异性表达的miRNA。qRT-PCR检测表明,DR组miR-19b、miR-221和miR-18b表达均上调,差异有统计学意义(U＝256.027,125.515,254.017;P<0.05),并且与miRNA芯片筛选的结果相符。受试者工作特征曲线结果表明,miR-19b(曲线下面积＝0.78,95%CI＝0.66~0.90)、miR-221(曲线下面积＝0.89,95%CI＝0.81~0.97)和miR-18b(曲线下面积＝0.78,95%CI＝0.67~0.90)对DR均有较高的诊断效能,其中miR-221诊断效能最高。 结论DR患者血清中存在特异性miRNA表达谱,这些差异性表达的miRNA可能作为调控因子,通过调节靶基因调控DR的发生和发展,其中miR-221最有望成为DR的生物标志物。     

Plasma miR-26a-5p is a biomarker for retinal neurodegeneration of early diabetic retinopathy

PurposeRetinal neurodegeneration is an early pathological change in diabetic retinopathy (DR). Early-stage retinal neurodegeneration is usually asymptomatic. This study aims to identify circulating microRNAs (miRNAs) as sensitive biomarkers for early retinal neurodegeneration.MethodsWe profiled the plasma miRNA expression in three mild nonproliferative diabetic retinopathy (NPDR) cases and three matched non-DR patients using RNA sequencing. The differential miRNAs were validated with qRT-PCR. The retinal nerve fibre layer (RNFL) thickness of the eyes was measured using spectral-domain Optical coherence tomography (SD-OCT). The association between differential miRNAs and RNFL thickness was analysed using the Pearson correlation analysis. Bioinformatics tools were used to predict potential targets of miRNA associated with RNFL thickness and investigate the functions of the potential target genes.ResultsRNA sequencing identified 69 differential miRNAs and eight of them were reported to be associated with DR. The qRT-PCR for these eight miRNAs validated the down-regulation of circulating miR-26a-5p and miR-126-5p in a larger validating cohort. A positive correlation between plasma miR-26a-5p level and the RNFL thickness of the superior quadrant of both eyes was identified in another cohort, including 33 mild NPDR cases, 33 matched non-DR patients and 20 healthy controls. Furthermore, 367 candidate targets of miR-26a-5p were predicted. The functional studies revealed that these target genes are profoundly involved in various cellular functions and signalling pathways.ConclusionsCirculating miR-26a-5p is a potential biomarker for early-stage retinal neurodegeneration and it may be involved in the development of DR via profoundly influencing the functions of retinal cells.Subject terms: Retina, Prognostic markers     

circRNA＿0051079通过靶向miR-26a-5p/PTEN轴诱导视网膜神经变性的分子机制

目的 探讨circ＿0051079对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的视网膜神经变性的影响及机制。方法 从C57BL/6J乳鼠眼球中分离视网膜神经节细胞(RGC),随机分为对照组、siRNA组(转染阴性siRNA)、si＿circ＿0051079组(转染si-circ-0051079干扰RNA)、模拟物对照组(转染Scr mimic)、miR-26a-5p组(转染miR-26a-5p mimic)、miR-26a-5p+vector组(转染pcDNA 3.1)、miR-26a-5p+PTEN组(转染pcDNA 3.1-PTEN),分别在正常、缺氧(体积分数1%O₂暴露)或氧化应激(50μmol·L^-1H₂O₂暴露)条件下培养24 h,进行RT-qPCR、CCK-8、TUNEL、RNA免疫沉淀(RIP)等检测。于15只C57BL/6小鼠左眼中建立I/R损伤模型,对侧眼保持正常眼压作为对照,I/R损伤后0 d、3 d和7 d各取5只小鼠收集视网膜检测circ＿0051079表达。另取20只C57BL/6小...     

miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的 探讨miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 将ARPE-19细胞分为4组：对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、miR-34a-5p过表达组与复合干预组,对照组与TGF-β1组采用Lipofectamine 2000转染试剂转染对照模拟物,miR-34a-5p过表达组与复合干预组转染miR-34a-5p模拟物,培养24 h后采用无血清培养基饥饿培养12 h, TGF-β1组与miR-34a-5p过表达组均添加10 mg·L^-1的TGF-β1,复合干预组添加10 mg·L^-1的TGF-β1与10μmol·L^-1的TGF-β通路激活剂SRI-011381,各组细胞继续培养24 h,测定细胞增殖、迁移与EMT。采用Western blot检测细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达水平,Ki67荧光染色检测细胞增殖情况,免疫荧光染色测定细胞EMT相关蛋白表达情况,划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 ...