雷帕霉素对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的作用

目的：建立哮喘小鼠动物模型并给予吸入雷帕霉素治疗,观察雷帕霉素治疗哮喘的效果及其对CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）比例及扩增能力的影响,探讨雷帕霉素治疗哮喘的相关机制。方法：采用随机数字表法将30只雌性BALB/c 小鼠分成3组,每组10只,分别为：对照组、模型组和雷帕霉素治疗组。采用Underwood方法对小鼠肺组织进行评分;采用流式细胞术观察小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例;不同浓度（50、100 nmol/L）雷帕霉素处理小鼠CD4+ T细胞后,采用流式细胞术和RT-PCR方法分别检测CD4+CD25+Treg细胞形成比例和Foxp3 mRNA表达情况,观察雷帕霉素对小鼠的影响。结果：与模型组相比,雷帕霉素治疗能够显著改善小鼠肺组织病理评分情况;雷帕霉素治疗后,与模型组相比,外周血单个核细胞和肺组织中CD4+CD25+Treg均显著升高（P<0.01）;50、100 mol/L雷帕霉素处理小鼠CD4+T细胞后,CD4+CD25+Treg细胞比例分别为（7.47±1.84）%和（10.93±2.74）%,与对照组［（4.84±0.76）%］相比,雷帕霉素处理可显著促进CD4+CD25+Treg细胞增殖（P<0.01）;RT-PCR结果与流式细胞结果一致,雷帕霉素处理可显著促进CD4+T细胞中Foxp3的表达（P<0.01）。结论：雷帕霉素可能通过促进CD4+CD25+Treg细胞增殖,增加哮喘小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例,进而对小鼠哮喘发挥治疗作用。     

雷帕霉素促进哮喘调节性T细胞分化及功能的机制

目的：探讨雷帕霉素对哮喘调节性T细胞体外分化的作用及机制。方法：采用卵蛋白致敏、激发制备哮喘模型。采用超高速流式细胞分选仪收集哮喘小鼠和正常小鼠的脾CD4⁺CD25^– ?T细胞,进一步分为三组,其中模型对照组予转化生长因子β（TGF-β）、白介素（IL）-2,雷帕霉素组予TGF-β、IL-2的同时用雷帕霉素（终浓度为500?nmol/L）干预。采用流式细胞仪检测调节性T细胞水平和CD4⁺CD25^– ?T细胞增殖情况;采用蛋白质印迹法测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体（mTORC）1/2通路相关蛋白S6、Akt磷酸化水平。结果：与模型对照组比较,雷帕霉素组调节性T细胞比例增加,CD4⁺CD25^– ?T细胞增殖水平降低,mTORC1/2信号通路下游S6、Akt磷酸化水平降低（均P<0.05）。结论：雷帕霉素可促进调节性T细胞的分化及功能,其在一定程度上与抑制mTORC1/2信号通路相关。     

雷帕霉素联合小剂量泼尼松治疗慢性ITP的疗效观察及其机理探讨

目的 探讨雷帕霉素（RAPA）治疗慢性免疫性血小板减少症（ITP）的疗效、安全性及其对治疗前后外周血CD4＋ CD25highCDl27low调节性T细胞（Treg细胞）的影响.方法 应用流式细胞术检测43例ITP患者RAPA治疗前后及20例健康志愿者外周血Treg细胞的表达;ELISA法检测转化生长因子TGF-β、白介素（IL）-4、IL-10水平.结果 RAPA对ITP的近期总有效率为58％;随访≥2年,持续有效率为68％.有效组经RAPA治疗后,外周血Treg细胞明显升高（P＜0.05）,且与TGF-β血清浓度呈正相关（r=0.652,P=0.001）;同时Treg细胞在随访期间未见明显降低.结论 雷帕霉素能够提升ITP患者外周血Treg数量,可能成为治疗慢性ITP的有效药物.     

雷帕霉素逆转胰岛素抵抗的动物实验

目的探讨新型免疫抑制剂雷帕霉素对胰岛素抵抗的作用及可能机制。方法利用肥胖胰岛素抵抗动物模型(obob小鼠),观察雷帕霉素对小鼠空腹血糖和胰岛素水平的影响,研究雷帕霉素对小鼠胰岛素抵抗的治疗作用及对循环细胞因子IL-1β,IL-6和TNF-α水平的影响,探讨雷帕霉素的可能作用机制。结果雷帕霉素治疗后小鼠的空腹血糖水平明显下降,与对照组比较有统计学意义,空腹胰岛素水平也下降,曲线下面积的比较差异有显著(8.90±0.95vs5.27±0.73,P<0.05);循环中TNF-α[(31.7±3.4)vs(37.7±1.1)pg/ml]和IL-1β[(18.0±3.2)vs(29.5±1.1)pg/ml]水平虽也下降,但差异无显著性,与之对应,IL-6[(46.2±9.8)vs(85.6±5.3)pg/ml]的水平明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素能提高obob小鼠胰岛素敏感性,有治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗的作用。     

血管活性肠肽调控CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的影响

目的探讨血管活性肠肽(vocative intestinal peptide,VIP)调控CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡对防治实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响。方法 60只健康雌性wistar大鼠随机分成正常对照组、EAE对照组、VIP低剂量防治组和VIP高剂量防治组。利用髓鞘碱性蛋白(MBP)~+完全福氏佐剂(CFA)诱导建立EAE模型。自造模当日起,每隔一日分别对VIP低、高剂量防治组大鼠腹腔注射VIP 4nmol/kg(0.2 m L)、16 nmol/kg(0.8 m L),正常对照组及EAE对照组注射0.8 m L生理盐水,连续10 d。观察大鼠发病情况;HE染色观察脑组织基本病理改变;流式细胞仪检测脾组织CD4~+CD25~+Treg、Th17细胞比例;ELISA法检测脑组织中TGF-β1、IL-17A因子含量变化。结果与EAE对照组比较,VIP各剂量防治组大鼠发病潜伏期延长、进展期缩短、发病高峰期神经功能障碍评分(NDS)降低;HE染色显示正常对照组大鼠脑组织中未见炎细胞浸润,VIP各剂量防治组大鼠脑组织中炎细胞浸润程度较EAE组明显下降;与EAE对照组比较,VIP各剂量组大鼠脾组织中CD4~+CD25~+Treg细胞亚群比例升高,Th17细胞亚群比例降低,且各组间存一定的量效关系;VIP各剂量组大鼠脑组织中TGF-β1含量较EAE组明显升高,IL-17A含量较EAE组明显降低,且各组间存在一定剂量依赖关系。结论 VIP通过上调CD4~+CD25~+Treg细胞比例,促进TGF-β1因子分泌,同时下调Th17细胞比例,抑制IL-17A因子表达,从而减轻脑组织炎症细胞的浸润程度,发挥对EAE的防治作用。     

间充质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效和免疫调节机制

目的 观察间充质干细胞(MSC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效并探讨其免疫调节机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)和弗氏完全佐剂诱导建立C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为MSC治疗组和EAE组.分离纯化培养GFP-C57BL/6小鼠骨髓MSC细胞.在EAE诱导后的第15天,MSC治疗组以每只1×106/400 μL的量经尾静脉注射MSC细胞,EAE组尾静脉注射400 μL PBS.采用临床评分和脊髓组织切片评估小鼠的发病情况,ELISA检测小鼠外周血细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素4(IL-4)和转化生长因子p(TGF-β)的含量,流式细胞术分析小鼠脾脏细胞中CD4+ Foxp3+T细胞(Treg)的比例变化和GFP+细胞在受体小鼠体内的比例变化.结果 与EAE组相比,MSC治疗组小鼠的临床评分降低(P＜o.05);脊髓组织切片中T细胞浸润减少;血浆中细胞因子IL-4和TGF-β的含量升高,而IFN-γ和TNF-α降低;脾脏细胞中CD4+Foxp3+T细胞(Treg)的比例明显升高.移植10 d后MSC消失.结论 MSC移植对小鼠EAE疗效显著.MSC通过增加血浆中抗炎因子IL-4和TGF-β的含量,降低促炎因子IFN-γ和TNF-α的含量,从而促使原始T细胞向Treg细胞分化,发挥免疫调节作用,且MSC消失后一段时间仍对EAE有一定治疗作用.     

雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠模型气道炎症的作用

目的探讨雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠气道炎症的作用与机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组：正常对照组、哮喘缓解组、哮喘模型组、地塞米松组和雷帕霉素组,每组10只。采用卵蛋白致敏与激发制备哮喘模型,休息3周后,采用卵蛋白再次激发1周,在小鼠休息期间治疗组采用雷帕霉素或地塞米松干预。采用Buxco无创肺功能仪检测气道高反应性;Luminex测定肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及INF-γ水平;肺组织HE染色评价观察小鼠肺组织气道炎症;Westernblot检测肺组织p-S6、S6、AKT、p-AKT（S473）蛋白含量;流式分析测定肺泡灌洗液CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率。结果与正常组及哮喘缓解组比较：哮喘模型组气道反应性升高（P＜0.01）,灌洗液IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平增加（均P＜0.01）,肺组织气道炎症评分增高（P＜0.01）,肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白增加（P＜0.01）,灌洗液Treg细胞比例上升（P＜0.01）;与模型组比较：雷帕霉素在乙酰甲胆碱浓度为6.25mg/ml时,可降低Penh值（P＜0.01）,同时降低肺泡灌洗液IL-4水平（P＜0.01）,并抑制肺组织炎症细胞浸润（P＜0.01）,而肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白下降（P＜0.01）,但雷帕霉素可降低肺泡灌洗液Treg细胞比例（P＜0.01）。结论在哮喘缓解期应用雷帕霉素,其可通过mTORC1信号通路显著抑制哮喘急性发作时气道炎症;在哮喘缓解期应用雷帕霉素,对控制哮喘再次发作具有积极作用。     

阿维A对硬皮病小鼠的治疗作用及机制研究

目的 研究阿维A （acitretin）对系统性硬皮病（SSc）小鼠皮肤及肺部纤维化的治疗作用,并通过检测小鼠外周血Th 17/Treg相关因子白介素（IL）-17、IL-10、IL-6、转化生长因子（TGF）-β,水平,探讨阿维A治疗硬皮病可能的机制.方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、硬皮病组和阿维A组,硬皮病组和阿维A组给予博莱霉素皮下注射4周,阿维A组同时每天给予6 mg/kg的阿维A灌胃4周.4周后取注射部位皮肤及肺部制作组织病理切片,观察小鼠皮肤厚度及皮肤/肺部炎症.酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清IL-17、IL-10、IL-6、TGF-β1水平.结果 阿维A组皮肤厚度、皮肤炎症评分、肺部炎症评分均明显低于硬皮病组[（140.25 ±20.24） μm比（191.88±40.95）μm,（0.75±0.01）分比（2.00±0.76）分,（1.38±0.52）分比（2.00±0.92）分,P＜0.05].阿维A组血清IL-17、IL-6、IL-10均显著低于硬皮病组[（50.69±11.72）pg/mL比（66.89±16.62）pg/mL,（85.77±12.06）pg/mL比（118.68±22.62）pg/mL,（57.65±21.74）pg/mL比（131.07±22.52）pg/mL,P＜0.05].三组小鼠血清TGF-β1水平差异无统计学意义.结论 阿维A可显著改善硬皮病小鼠皮肤及肺部症状,其作用机制可能与影响Th17/Treg的平衡有关.     

复方参鹿颗粒调节相对低危骨髓增生异常综合征患者TGF-β1介导的Treg/Th17细胞变化的临床研究

目的探讨复方参鹿颗粒对相对低危MDS患者治疗前后外周血TGF-β1、IL-2、IL-6、Treg细胞、Th17细胞、相关转录因子及比值的影响。方法将40例相对低危MDS患者随机分成中药组和对照组，中药组予复方参鹿颗粒联合西药治疗，对照组单用西药治疗。2组均6个月为1个疗程，共治疗1个疗程，观察外周血TGF-β1、IL-2、IL-6、Treg细胞、Th17细胞、相关转录因子及比值变化。结果治疗后中药组TGF-β1、IL-2表达上升，IL-6表达下降；TGF-β1、IL-2/IL-6比率均高于对照组，IL-6表达低于对照组，均有明显差异（P<0.05）。Treg细胞表达、Treg/Th17比值均高于对照组，具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中药组Foxp3mRNA表达、Foxp3/RoRγt比值检测均高于对照组，有明显差异（P<0.05）。结论复方参鹿颗粒可以改善相对低危MDS患者TGF-β1、IL-6、IL-2/IL-6比率、Treg细胞、Treg/Th17比率。提示复方参鹿颗粒改善相对低危MDS患者的造血功能可能通过调整TGF-β1、IL-2/IL-6来调控Treg/Th17比率，进一步改善T细胞免疫功能有关。     

免疫抑制剂雷帕霉素逆转胰岛素抵抗的研究

目的 探讨新型免疫抑制剂雷帕霉素对胰岛素抵抗的作用及可能机制。方法 利用肥胖胰岛素抵抗动物模型(obob小鼠),观察雷帕霉素对（1）小鼠空腹血糖和胰岛素水平的影响,研究雷帕霉素对小鼠胰岛素抵抗的治疗作用;（2）对循环细胞因子IL-1 IL-6 和 TNF水平的影响,探讨雷帕霉素的可能作用机制。结果 雷帕霉素治疗后（1）小鼠的空腹血糖水平明显下降,与对照组比较有统计学意义,空腹胰岛素的水平也下降,曲线下面积的比较有显著差异（8.900.95 Vs 5.270.73, p<0.05）（2）循环中TNF (31.73.4 Vs37.71.1pg/ml)和IL-1（18.03.2 Vs 29.51.1pg/ml）水平虽也下降,但没有统计学差异,与之对应, IL-6 (46.29.8 Vs85.65.3 pg/ml)的水平明显降低（p<0.05）。结论 雷帕霉素能提高obob小鼠胰岛素敏感性,有治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗的作用。     

雷帕霉素对光诱导下视网膜色素上皮细胞自噬的影响

目的：探讨雷帕霉素对光诱导下视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）自噬的影响。方法：将自噬双标mRFP-eGFP-LC3质粒转染进ARPE-19细胞中获得稳定表达的转染细胞株,随后随机分为6 h对照组、6h模型组、6 h雷帕霉素组;12 h对照组、12 h模型组、12 h雷帕霉素组和24 h对照组、24 h模型组、24 h雷帕霉素组。对照组避光培养,模型组受光照刺激;雷帕霉素组加入10μmol/L雷帕霉素后受光照刺激,光源采用LED冷光灯,在（16 500±500） lx光照强度下照射细胞6、12、24 h。检测转染效率,MTT检测ARPE-19细胞存活率;激光共聚焦显微镜对自噬流变化进行定性分析,透射电镜观察细胞自噬形态;蛋白免疫印迹法对Beclin1、LC3、P62自噬相关蛋白表达量进行检测。结果：与对照组相比,模型组光照6、12、24 h后,细胞存活率显著下降（P<0.001）;雷帕霉素组经光照后细胞存活率高于模型组（P<0.05）。光照6、12、24 h后模型组红色荧光斑点较对照组逐渐增多,绿色荧光斑点也随之增加,Merge图中从光照12 h开始黄色斑点数量增多明显。...     

左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

不同剂量射线对非小细胞肺癌患者mTOR信号通路的影响

目的 探讨不同剂量射线对非小细胞肺癌患者哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响.方法 采用不同剂量的雷帕霉素抑制非小细胞肺癌细胞系A549种的mTOR信号通路;Western Blot检测雷帕霉素作用后下游信号分子的表达.将A549细胞分为空白对照组、雷帕霉素作用的观察组,给予不同剂量的射线作用;用MTT试验(噻唑蓝)、克隆形成能力检测细胞的增殖能力,采用流氏细胞仪检测细胞代谢变化,并进行结果分析.结果(1)雷帕霉素药物浓度不同,mTOR、p70S6K、p-4EBPI及AKT水平随之变化;(2)观察组细胞存活能力低于对照组(P<0.05).结论 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,可提高非小细胞肺癌对放疗的敏感性.     

人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的 观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法 采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组,同时设置正常对照组,每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射,连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓,观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化,采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群,采用ELISA法检测外周血白细胞介素（interleukin,IL）-17A、干扰素γ（interferon gamma, IFN-γ）、IL-6、IL-10水平。结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降（P＜0.05）,脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低（P＜0.05）,脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低（P＜0.05）,Treg（CD4+CD25+FoxP3+）比例显著升高（P＜0.05）,外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低（P＜0.05）,IL-10水平显著升高（P＜0.05）,人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论 人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润,其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡,抑制炎症细胞因子表达相关。     

慢性牙周炎患者血清RORA的表达水平及其与Th17/Treg细胞平衡的相关性

目的 探讨慢性牙周炎（CP）患者血清维甲酸受体相关孤儿受体A（RORA）的表达水平及其与辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的相关性。方法 选取2019年1月—2021年12月于本院进行检查并接受治疗的90例CP患者作为观察组,并选择同期在本院检查的牙周健康志愿者100例作为对照组,比较两组的年龄、性别、体质指数(BMI)及合并高血压、冠心病、糖尿病等一般临床资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中RORA的相对表达水平;采用流式细胞术检测两组Th17、Treg细胞水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清中转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）及白细胞介素-23（IL-23）的水平;采用Pearson法分析CP患者血清RORA与TGF-β、IL-10、IL-23、IL-23及Th17/Treg细胞比例之间的相关性;Logistic回归分析影响CP发生的因素。结果 两组年龄、性别、BMI及合并高血压、冠心病、糖尿病等指标比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者血清中Th17、IL-17、IL-23水平高于对照组,RORA、Treg、TGF-β、IL-10水平低于对照组,且Th17/Treg细胞比例高于对照组（P＜0.05）。Pearson法分析结果显示,CP患者血清中RORA与TGF-β、IL-10呈正相关（P＜0.05）,与IL-17、IL-23及Th17/Treg细胞比例呈负相关（P＜0.05）。Logistic回归分析结果显示,RORA、TGF-β、IL-10、IL-17、IL-23及Th17/Treg是CP发生的影响因素（P<0.05）。结论 CP患者血清中RORA低表达,Th17/Treg细胞比例失衡,RORA的表达与Th17/Treg细胞比例之间呈负相关,RORA可能通过调节Th17/Treg细胞比例影响CP的发生     

补肾解毒法对多发性硬化小鼠CD4+ T细胞的作用

目的 研究补肾解毒法对多发性硬化小鼠中枢神经炎症及外周血CD4+ T细胞亚群（Th1、Th2、Th17、Treg细胞）的影响。方法 以实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）模型作为多发性硬化动物模型,以C57BL/6小鼠皮下多点注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)的方法复制EAE模型。将小鼠随机分为正常组,模型组,泼尼松组,中药高、中、低剂量组,每组8只小鼠。模型复制后第30天取小鼠脊髓,光镜下观察各组小鼠脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘等病理改变,流式细胞仪检测小鼠脾脏Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群,ELISA法检测脾脏细胞培养上清液中干扰素-γ（interferon gamma, IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）、白细胞介素-17A（interleukin-17A, IL-17A）水平。结果 中药高剂量组、泼尼松组炎症评分和脱髓鞘评分明显低于模型组（P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组、泼尼松组脾细胞培养后上清液中致炎因子IFN-γ、IL-17A降低明显,而抑炎因子IL-4、IL-10升高明显,Treg比例明显升高,Th1和Th17比例明显降低,差异均具有统计学意义（P<0.05)。结论 补肾解毒法能够调节EAE小鼠失衡的CD4+ T细胞亚群,显著抑制EAE模型的炎性反应。     

竹节香附素A对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症的影响及其调控机制研究

目的 探讨竹节香附素A(RA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠炎症的影响及其调控机制。方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE模型组、RA低剂量组、RA中剂量组、RA高剂量组，其中EAE模型组、RA低剂量组、RA中剂量组、RA高剂量组使用MOG35-55多肽复制EAE模型，RA低剂量组、RA中剂量组、RA高剂量组进行药物干预，持续至发病高峰期。观察各组小鼠的临床症状、神经功能缺损评分，HE染色检测脊髓组织炎症细胞浸润情况，Western blotting检测脊髓组织p-NF-κB蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测脊髓组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应检测脊髓组织IL-1β和IL-17 mRNA表达。结果 高剂量组发病潜伏期较RA低剂量组、RA中剂量组、EAE模型组长（P <0.05）,RA中剂量组较RA低剂量组、EAE模型组长（P <0.05）,RA低剂量组较模型组长（P <0.05）。高剂量组疾病进展期较RA低剂量组、RA中剂量组、EAE模型组短（P <0.05）,RA中剂量组较RA低剂量组、EA...     

葛根素抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用

  目的  探索葛根素（Puerarin）治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的作用和机制。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组、Puerarin处理EAE组（Puerarin组）。从诱导EAE当日开始，Puerarin组用葛根素（80 mg/kg）灌胃，其余2组用同体积生理盐水灌胃，每日1次。每天记录神经功能评分及体重变化；劳克坚劳蓝（luxol fast bBlue，LFB）髓鞘染色检测脊髓脱髓鞘情况；ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-22和TGF-β的水平；Western 印迹法检测脊髓组织NF-κB、IκBα、IL-17、Foxp3等蛋白表达。  结果  Puerarin组小鼠神经功能评分及平均分均较EAE组明显降低（P < 0.01），而体重明显增加（P < 0.01）。应用葛根素后，EAE小鼠脱髓鞘面积（P < 0.01）及病理评分（P < 0.05）均明显下降。Puerarin组小鼠促炎因子IL-6、IL-17和IL-22水平显著降低（P < 0.01），抑炎因子IL-10和TGF-β显著增加（P < 0.05）。应用葛根素后:NF-κB及IL-17表达明显减少（P < 0.05）；IκBα及Foxp3表达显著增加（P < 0.01）。  结论  葛根素可缓解EAE小鼠症状，减少脱髓鞘。作用机制是抑制NF-κB通路，调节IL17/Tregs平衡，实现对免疫功能的调节。     

雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态和分泌功能的影响

目的 探讨雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态、分泌功能的影响,阐明雷帕霉素引起高脂血症的可能机制.方法 体外培养前脂肪细胞3T3-L1细胞株,分成对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组.用油红O染色(定性)及高效液相色谱法(定量)检测3T3-L1细胞内胆固醇水平,酶联免疫吸附实验分析瘦素、脂联素的分泌量,实时荧光定量PCR法及Western blot法检测3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA和蛋白的表达.结果 油红O染色显示雷帕霉素组脂肪细胞脂滴数量较对照组明显减少;对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组细胞内游离胆固醇含量分别为(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39 ±0.46)和(8.61 ±0.34) mg/ml,与对照组相比,雷帕霉素能抑制3T3-L1前脂肪细胞内胆固醇的蓄积(P＜0.05).对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组瘦素分泌量分别为(19.02±0.52)、(16.98±0.01)、(15.62±0.01)和(13.84±0.66)ng/ml,与对照组相比,雷帕霉素能减少成熟后3T3-LI脂肪细胞瘦素的分泌水平(P＜0.05).雷帕霉素50、100及200 nmol/L组PPARγ mRNA表达量分别为对照组的94％、62％和47％,均显著低于对照组(P＜0.05);PPARγ蛋白表达量分别为对照组的80％、74％和61％,均显著低于对照组(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,检测PPARγmRNA的表达分别为对照组的(0.60±0.14)、(0.67 ±0.03)和(1.30±0.14)倍,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05); PPARγ蛋白表达与mRNA的表达变化趋势相似,差异具有统计学意义(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,ELISA检测各处理组瘦素表达量分别为(19.02 ±0.52)、(15.62 ±0.10)、(14.45±1.01)和(18.07 ±0.66) ng/ml,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 雷帕霉素通过下调PPARγ的表达减少脂肪细胞内的脂质蓄积,并且抑制其瘦素分泌,这为临床上雷帕霉素引起的高脂血症提供了一个可能的解释.     

豆蔻明对肺纤维化的治疗作用及机制

目的 观察豆蔻明（Cardamonin,CDN）对肺纤维化小鼠的作用,并探究其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/smad信号通路的影响。方法 将小鼠随机分为生理盐水（Sham）组、博莱霉素（Bleomycin,BLM）组、豆蔻明低剂量（low dose of Cardamonin,CDN-L）组、豆蔻明中剂量（medium dose of Cardamonin,CDN-M）组、豆蔻明高剂量（high dose of Cardamonin,CDN-H）组、地塞米松（dexamethasone,DXM）组;单次气管注射BLM诱导肺纤维化,计算肺指数;酶联免疫吸附法测血清肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;试剂盒测肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量,苏木精-伊红、马松染色观察肺炎症程度及纤维化情况,RT-PCR法检测肺组织TGF-β1/smad信号通路相关基因表达情况。结果 与Sham组相比,BLM组小鼠肺指数、Szapiel评分、Ashcroft评分明显升高（...