小鼠角膜碱烧伤免疫反应的实验研究

角膜碱烧伤难于避免 ,且往往造成角膜溃疡 ,穿孔乃至失明 ,其治疗历来是眼病治疗中最棘手的问题之一。碱烧伤不仅是局部的现象 ,烧伤区是抗原的来源 ,可导致全身免疫反应。烧伤后2～ 3周 ,角膜形成溃疡乃至穿孔。此时 ,不仅是胶原酶活性高峰 ,中性粒细胞浸润高峰 ,而且与全身免疫反应相关连。本实验在 96只昆明小白鼠右眼上制作了角膜碱烧伤 (1 5ｍｏｌ·Ｌ-1ＮａＯＨ)模型 ,于 2周末用同样方法烧伤每鼠左眼角膜 ,观察了烧伤后角膜穿孔发生的情况 ,检测了各组外周血淋巴细胞分类百分数及循环免疫复合物 (ＣＩＣ)含量的变化、检测了第二烧伤…     

碱烧伤后角膜干细胞活性的实验研究

目的 了解大鼠角膜烧伤后角膜干细胞的活性。方法 对大鼠角膜中央区,上半周及全周３个不同区域分别进行碱性烧灼,于伤后２４小时取材做离体角膜＾３Ｈ－Ｔｄｒ掺５入,计算角膜基底细胞标记率。结果 中央区及上半周烧伤组角膜基底细胞标记率分别为６．７８４和６．００２,与对照组１．２９相比,Ｈ＝３０．５５,Ｐ〈０．００１,有显著性差异,而全周烧伤组未见标记细胞。     

2%双醋瑞因滴眼液结膜囊多次与单次给药的角膜药代动力学差异

目的：对比2%双醋瑞因滴眼液结膜囊多次给药与单次给药在角膜中的药代动力学差异,为临床医师治疗感染性角膜病时多次给药提供实验依据。

方法：以2%双醋瑞因为实验滴眼液,选取健康无眼疾的雄性昆明白小鼠,随机分为多次给药组和单次给药组,双眼结膜囊分别给予双醋瑞因滴眼液。多次给药组间隔2min给药一次,共给药3次; 单次给药组仅给药1次。用高效液相法测定角膜中双醋瑞因的代谢产物(大黄酸)的浓度,多次给药组和单次给药组的时间点均为5、15、30、60、120、180min。将小鼠角膜组织中的药物浓度经药物动力学程序(DAS2.1.1)进行拟合,并计算相关药动学参数。

结果：结膜囊多次给药组和单次给药组各个时间点角膜中均可检测到其活性代谢产物大黄酸; 多次给药组5、15、30、60、120、180min的浓度分别为318.678±40.88、210.02±25.66、188.83±31.74、112.24±11.70、90.28±22.01和57.67±13.71μg/g,单次给药组各时间点浓度分别为145.17±19.29、97.95±10.49、71.18±18.70、39.11±2.44、18.10±2.34和9.08±2.04μg/g。两组小鼠角膜中大黄酸的含量均于给药后5min最高,多次给药组浓度高于单次给药组浓度,差异具有统计学意义(P<0.01)。随时间延长大黄酸的浓度逐渐下降,3h后多次给药组浓度仍高于单次给药组,差异具有统计学意义(P<0.01)。单次给药组半衰期为0.89±0.31h。

结论：结膜囊多次给药与单次给药相比具有药物有效浓度高、维持时间长的优点,双醋瑞因作为一种新的抗菌药物,可以在感染性角膜炎的早期对病程的发展起到抑制作用。多次给药后可以对急性发展期起到较好的治疗效果,而且在夜晚也可维持较高浓度,在保证患者的睡眠休息质量同时又起到了对疾病的治疗作用。     

KGF-2治疗兔角膜中央碱烧伤的实验研究

目的　观察角质细胞生长因子 2 (KGF 2 )对实验性兔角膜中央碱烧伤的治疗效果。方法　将 2 4只兔角膜碱烧伤眼随机分成 4组 ,用KGF 2滴眼液治疗 ,以后行荧光素染色裂隙灯显微镜照相 ,照片经计算机图象系统分析 ,角膜切片HE染色 ,光镜检查。结果　 10 0 μg/mLKGF 2角膜上皮愈合率最高 ,且与剂量呈依赖性 ,各治疗组与对照组之间差异均有显著性意义 ,P <0 0 5。结论　KGF 2能够促进兔角膜碱烧伤上皮的愈合     

白藜芦醇对碱烧伤小鼠角膜纤维化反应的抑制作用

目的　探索白藜芦醇（RSV）对碱烧伤小鼠角膜纤维化反应的抑制作用。方法　选取SPF级、健康6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠48只,按照随机数字表法分为正常对照组、模型组和RSV组,每组16只。模型组和RSV组小鼠右眼建立角膜碱烧伤模型,左眼不做任何处理。RSV组小鼠用2 g·L^-1RSV溶液滴眼,模型组小鼠用相同剂量的羟丙基-β-环糊精溶液滴眼,连续滴眼 21 d。正常对照组小鼠不做碱烧伤和滴眼干预。碱烧伤后21 d,裂隙灯显微镜观察各组小鼠角膜混浊情况,对角膜混浊程度进行评分;通过HE染色观察各组小鼠角膜组织结构变化;采用免疫荧光染色观察各组小鼠角膜组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅲ型胶原纤维蛋白α1链（COL3A1）的表达;利用Western blot检测各组小鼠角膜组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-SMA、COL3A1蛋白相对表达水平。结果　碱烧伤后21 d,RSV组小鼠角膜混浊评分为（2.25±0.89）分,明显低于模型组［（3.25±0.71）分］,差异有统计学意义（P=0.026）。HE染色结果显示,模型组小鼠角膜基质中细胞增多,给予RSV干预后细胞相对减少。免疫荧光染色结果显示,RSV组小鼠角膜组织中α-SMA和COL3A1的表达均弱于模型组。Western blot检测结果显示,RSV组小鼠角膜组织中TGF-β1（0.60±0.17）、α-SMA（0.27±0.05）、COL3A1（0.49±0.21）蛋白相对表达水平均显著低于模型组［TGF-β1（1.48±0.50)、α-SMA(0.55±0.18)、COL3A1(1.32±0.87）］,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　在小鼠角膜碱烧伤中,RSV可以有效抑制角膜组织中TGF-β1的表达及肌成纤维细胞的活化,减少COL3A1沉积,从而抑制角膜的纤维化反应,进而减轻角膜混浊程度。     

角膜碱烧伤自由基与超氧化物歧化酶实验研究

实验观察兔角膜碱烧伤后角膜组织中脂质过氧化反应与碱烧伤的关系。结果显示，烧伤3天、14天出现角膜中丙二醛含量明显高于正常角膜，P＜0．05。此期内，角膜组织中超氧化物歧化酶活性显著下降，P＜0．01。提示，烧伤后超氧自由基及其代谢产物是造成碱烧伤后组织病理损伤的主要因素之一，超氧化物歧化酶活性相应降低，进一步加重自由基对组织的损伤。     

角膜中央碱烧伤角膜后膜形成的实验研究

目的观察角膜中央碱烧伤角膜后膜的形成过程.方法用浸有0.5N NaOH溶液的8mm直径圆形滤纸片放在兔角膜中央表面1分钟,制备兔角膜碱烧伤模型,用光镜和电镜进行研究.结果伤后20分钟内皮细胞已破坏;72小时,损伤区的周边内皮细胞变形向创面内迁移;第7天后缺损区大部分范围均可见多层梭形细胞覆盖,并形成胶原纤维.结论中央角膜碱性化学伤角膜后膜的形成与伤区邻近角膜内皮细胞向创面迁移并纤维化生有关.     

角膜碱烧伤的免疫学研究

近年来，对角膜碱烧伤的免疫学研究已取得进展。目前虽不能确切阐明角膜碱烧伤免疫反应的机理，但也揭示了角膜局部细胞免疫及体液免疫的参与情况，并通过实验证实了角膜碱烧伤后角膜蛋白变性及刺激机体产生相应抗体的能力。同样，角膜中抗原递呈细胞的增多、ＭＨＣ—Ⅱ类抗原的显著表达，为免疫反应的启动及进展奠定了物质基础。免疫抑制措施的疗效，为更好地阐明免疫参与机制提供了间接依据。     

碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究

目的动态检测大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管和血管的变化,并阐明二者之间的关联。方法制备大鼠角膜碱烧伤模型,于碱烧伤后1周、2周行角膜组织电镜检查,检测角膜新生淋巴管与新生血管。5’核苷酸酶-碱性磷酸酶(5’-nase-alkaline phos-phatase,5’-NA-ALP)双重酶组织化学染色及全角膜免疫荧光染色分别检测碱烧伤后6h、1d、3d、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周的角膜新生淋巴管和新生血管的动态变化,并进行淋巴管计数(lymphatic vessels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC)比较。结果电镜观察结果:角膜碱烧伤后1周,角膜基质层出现新生血管,未见淋巴管;碱烧伤后2周,新生血管和新生淋巴管均出现。酶组织化学染色结果显示:碱烧伤后6h有新生血管,1周时角膜基质层存在新生淋巴管,2周时LVC和BVC均达到高峰,分别为(16.41±1.00)个和(50.40±1.56)个;以后逐渐下降,5周时LVC为(0.33±0.50)个,BVC为(12.52±2.51)个;8周时均为0。碱烧伤后,新生淋巴管和新生血管呈显著性正...     

rhEGF基因治疗角膜碱烧伤的实验研究

目的探讨重组人表皮生长因子（rhEGF）基因缓释型滴眼液对免角膜碱烧伤的基因治疗。方法新西兰白兔75只，分为A（rhEGF-pcDNA3．1-脂质体基因滴眼液）、B（rhEGF衍生物滴眼液）、c（pcDNA3.1空质粒-脂质体对照组）三组分别点眼治疗免角膜碱烧伤。每天观察模型眼眼表、荧光素染色并照相。分别测定hEGFmRNA、hEGF和EGFR在角膜组织中的表达。结果A组眼表结膜充血、分泌物、角膜水肿和角膜混浊程度均比B组和C组轻。角膜荧光素染色显示A组角膜上皮的溃疡面积较B组和C组范围小，21d转为阴性。A组基因在行滴眼24h后在全层角膜细胞内可见hEGFmRNA和蛋白质表达，第3d达高峰，细胞阳性率高达95％，随后逐渐降低，21d仍有弱表达。结论rhEGF-PcDNA3．1-脂质体基因滴眼液能够降低角膜的炎症反应，促进角膜上皮细胞的增生，加速角膜碱烧伤的损伤修复过程。     

Effects of AMD3100 subconjunctival injection on alkali burn induced corneal neovascularization in mice

AIM: To investigate the therapeutic effects of local and systemic administration of AMD3100 for alkali burn induced corneal neovascularization (CNV) in mice. METHODS: CNV was induced in vivo by alkaline burn of cornea in C57BL/6 mice. AMD3100 was administrated topically by subconjunctival injection or systemically by intraperitoneal injection for 7 days; balanced salt solution was administrated topically or systemically as a control respectively. Inflammatory index was evaluated by slit-lamp biomicroscopy and inflammatory cells infiltrated to cornea tissue were detected by histologic analysis at multiple time points. CNV was compared between the local and systemic treated mice 2 weeks after alkali burn, as quantified by CD34 immunostaining. Fluorescence-Activated Cell Sorter Analysis was used to investigate the mobilizing effects of EPC in mice after subconjunctival injected or intraperitoneal injected AMD3100. Immunohistochemistry was used to detect the expression of endothelial progenitor cells (EPC) marker proteins VEGFR2 and CD34. RESULTS: Three days after alkali burn, infiltration of inflammatory cells was found in corneal tissue. At the first 7 days of local injection group, the number of inflammatory cells was significantly lower than that in systemic injection group. CNV could be seen at the 7th day, and at the 14th day reached the peak, then started to decrease. The number of CNV in the subconjunctival injection group was 7.57±1.26 per 0.034mm2, compared to a number of 14.87±2.21 per 0.034mm2 in the control group (P<0.05). On the contrary, the number of CNV in the intraperitoneal injection group was a little higher than that in the control group, 16.34±1.53 per 0.034mm2 vs 13.26±1.87 per 0.034mm2. The research also showed that intraperitoneally, but not subconjunctivally injected AMD3100 could mobilize EPC. On the other hand, subconjunctival, but not intraperitoneally injected AMD3100 could reduce the expression of EPC marker proteins. CONCLUSION: In mice locally administrated AMD3100 can reduce the number of alkali burn induced CNV. The number of inflammatory cells and inflammatory responses in corneal tissue.     

兔角膜碱烧伤后角膜基质注射脐带间充质干细胞的疗效

目的　观察角膜基质注射脐带间充质干细胞（ｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＵＭＳＣｓ）治疗兔角膜碱烧伤的效果。方法　健康新西兰大白兔随机分为３组,每组１２只,每只兔左眼为角膜碱烧伤模型眼。Ａ组兔左眼在碱烧伤２ｄ后角膜基质内注射含有２×１０６个ＵＭＳＣｓ的磷酸盐缓冲液２μＬ,Ｂ组注射相同剂量的磷酸盐缓冲液,Ｃ组为角膜碱烧伤后未进行处理组,在注射后不同时间对角膜混浊程度、新生血管生长情况、角膜上皮缺损情况等进行临床观察并评分,同时进行综合评分。结果　注射后１４ｄＡ组新生血管生长较Ｂ组明显缓慢,Ａ组、Ｂ组注射隧道周围角膜新生血管生长评分分别为０分、２分,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。注射后２ｄ和６ｄＡ组角膜混浊程度较Ｂ组明显轻,注射后２ｄＡ组、Ｂ组角膜混浊程度评分分别为２分、４分,注射后６ｄ评分与２ｄ相同,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。注射后２ｄ、７ｄ角膜上皮荧光素染色评分各组之间差异均无统学意义（均为Ｐ＞０．０５）。结论　碱烧伤后角膜基质注射ＵＭＳＣｓ可减少新生血管的形成,为抑制碱烧伤后角膜血管化提供参考,碱烧伤后角膜基质注射ＵＭＳＣｓ可在一定程度上恢复角膜透明度。     

角膜碱烧伤病理过程中的免疫机制

随着免疫学和碱烧伤研究领域的进展,我们对角膜碱烧伤病理过程的免疫学机制及其重要性逐步加深了认识。本文介绍了角膜碱烧伤病理过程的免疫学机制的研究现状和进展,将深化我们对角膜碱烧伤疾病发病机制的认识,也有利于该病的临床治疗。     

多西环素对碱烧伤大鼠角膜炎症细胞浸润的抑制作用

目的:观察多西环素对碱烧伤大鼠角膜炎症细胞浸润的抑制作用。方法:健康SD大鼠32只,随机分为对照组、多西环素组,每组16只大鼠。建立角膜碱烧伤模型后,多西环素组予3g/L多西环素眼液点眼,对照组予眼液溶媒点眼。分别于碱烧伤后第3,7,14,21d观察计算炎症指数,角膜取材后进行病理切片及炎症细胞计数,行ICAM-1的ELISA检测。结果:多西环素组各时间点结膜充血、角膜水肿较对照组轻,炎症指数均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。多西环素组各时间点炎症细胞计数少于对照组(P<0.05)。多西环素组各时间点大鼠角膜的ICAM-1表达低于对照组(P<0.05)。结论:多西环素可以抑制碱烧伤大鼠角膜的炎症细胞浸润,其机制可能是抑制ICAM-1的表达。     

甘草甜素对小鼠角膜急性碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的：研究甘草甜素(Gly)对小鼠角膜急性碱烧伤后角膜新生血管(CNV)的抑制作用。

方法：采用碱烧伤法制备小鼠碱烧伤模型60只,随机平均分为Gly组和PBS组,分别隔天结膜下注射2g/L Gly溶液或PBS溶液,共14d。裂隙灯显微镜下观察角膜炎症反应和CNV。实验结束后取角膜行HE染色法和免疫组织化学法CD34及髓过氧化物酶(MPO)染色并计算角膜微血管密度(MVD)及中性粒细胞数。

结果：造模后第7、14d Gly组CNV面积分别是4.16±0.00、7.33±0.13mm²,显著低于PBS组(7.58±0.20、9.24±0.08mm²,均P<0.05)。HE病理染色显示正常小鼠角膜结构完整,未见新生血管形成及炎症细胞浸润; Gly组角膜新生血管数量及炎症细胞浸润较少,胶原排列较规则,而PBS组角膜基质中可见大量炎症细胞浸润及新生血管。免疫组织化学CD34染色结果显示Gly组MVD为11.13±1.46条/mm²,显著低于PBS组(34.08±2.46条/mm²,P<0.001); 免疫组织化学MPO染色结果显示Gly组中性粒细胞计数为每200倍视野17.50±1.98个,明显少于PBS组(59.56±4.79个,P<0.001)。

结论：Gly能减轻小鼠角膜急性碱烧伤模型中的角膜炎症反应,并抑制角膜新生血管形成,这为临床上有效防治角膜新生血管类疾病提供了一种新的思路。     

小环肽CHSDGIC对兔角膜碱烧伤愈合的作用

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活多肽衍生的小环肽CHSDGIC对兔角膜碱烧伤愈合的促进作用,为临床治疗提供新思路。方法制作兔角膜碱烧伤模型。14只新西兰大白兔随机平均分为2组:一组为实验组,碱烧伤后给予小环肽滴眼液滴眼(100μmol.L-1),每天3次,持续21d;另一组为对照组给予生理盐水滴眼。碱烧伤后每天观察眼前段情况,在不同的时间点(碱烧伤后第2、7、14、21天)通过角膜荧光素染色测量角膜着色面积,并在治疗结束后进行角膜组织学检查。结果角膜碱烧伤后在不同时间点(第2、7、14、21天)测量的角膜荧光素染色面积,实验组分别为(1.85±0.10)mm2、(4.56±0.22)mm2、(3.39±0.13)mm2、(0.44±0.10)mm2;对照组分别为(2.33±0.15)mm2、(6.80±0.26)mm2、(9.09±0.24)mm2、(5.03±0.24)mm2,两组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。HE染色检查发现实验组角膜上皮修复较完整,基质层未见明显炎症细胞及少量血管内皮细胞。对照组角膜上皮与基底部结合疏松,可见明显炎性细胞。结论小环肽CHSDGIC能促进碱烧伤后角膜上皮的修复,可能成为恢复角膜完整性及透明性的极有潜力的治疗药物。     

胶原交联对兔角膜碱烧伤后基质融解的影响

目的研究角膜胶原交联治疗对兔角膜碱烧伤后基质融解的影响。方法选取25只新西兰大白兔随机分为正常对照组(5只10眼)、模型对照组(10只10眼)、胶原交联治疗组(10只10眼)。正常对照组不做处理,模型对照组和胶原交联治疗组右眼制备角膜中度碱烧伤模型。造模成功后,胶原交联治疗组采用胶原交联治疗后涂红霉素眼膏,模型对照组滴核黄素眼液30min后涂红霉素眼膏;三组均应用抗生素眼液滴眼。观察角膜融解及混浊等情况,28d后处死动物,对兔角膜进行组织病理学检查和免疫组织化学检测。结果正常对照组未发生变化,模型对照组6眼造模后(14±4)d角膜融解,2眼角膜穿孔;胶原交联治疗组1眼造模后23d角膜融解,无角膜穿孔发生;两组角膜融解发生率间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。病理检查结果显示胶原交联治疗组角膜水肿程度轻,角膜胶原纤维破坏轻,炎性细胞浸润明显少于模型对照组。免疫组织化学结果显示胶原交联治疗组角膜胶原纤维较模型对照组排列整齐,深层角膜组织影响小。结论胶原交联治疗可抑制和延迟兔角膜碱烧伤后角膜融解的发生和发展,减轻角膜胶原纤维的破坏及减少角膜组织中炎性细胞的浸润。     

Research on mouse model of grade II corneal alkali burn

AIM: To choose appropriate concentration of sodium hydroxide (NaOH) solution to establish a stable and consistent corneal alkali burn mouse model in grade II. METHODS: The mice (n=60) were randomly divided into four groups and 15 mice each group. Corneal alkali burns were induced by placing circle filter paper soaked with NaOH solutions on the right central cornea for 30s. The concentrations of NaOH solutions of groups A, B, C, and D were 0.1 mol/L, 0.15 mol/L , 0.2 mol/L, and 1.0 mol/L respectively. Then these corneas were irrigated with 20 mL physiological saline (0.9% NaCl). On day 7 postburn, slit lamp microscope was used to observe corneal opacity, corneal epithelial sodium fluorescein staining positive rate, incidence of corneal ulcer and corneal neovascularization, meanwhile pictures of the anterior eyes were taken. Cirrus spectral domain optical coherence tomography was used to scan cornea to observe corneal epithelial defect and corneal ulcer. RESULTS: Corneal opacity scores (
) were not significantly different between the group A and group B (P=0.097). Incidence of corneal ulcer in group B was significantly higher than that in group A (P=0.035). Incidence of corneal ulcer and perforation rate in group B was lower than that in group C. Group C and D had corneal neovascularization, and incidence of corneal neovascularization in group D was significantly higher than that in group C (P=0.000). CONCLUSION: Using 0.15 mol/L NaOH can establish grade II mouse model of corneal alkali burns.