miR-335-5p靶向调控Galectin-3调节前列腺癌细胞免疫逃逸的机制研究

目的:探讨miR-335-5p靶向调控半乳糖凝集素-3（Galectin-3）对前列腺癌细胞免疫逃逸的影响。方法:qRT-PCR检测正常前列腺上皮细胞WPMY-1及前列腺癌细胞LNCaP、PC-3、DU145中miR-335-5p的表达;将PC-3细胞分为:NC组、mimics NC组、miR-335-5p mimics组、miR-335-5p mimics+pcDNA组、miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-335-5p表达;western blot检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达。将上述5组细胞分别与自然杀伤细胞NK-92MI共培养后,ELISA法检测共培养细胞上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）水平;CCK-8法检测NK-92MI细胞的免疫杀伤率;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因、RNA下拉、RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验验证miR-335-5p与Galectin-3的靶向关系。结果:与正常前列腺上皮细胞WPMY-1比较,前列腺癌细胞LNCaP、PC-3、DU145中miR-335-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）,且PC-3细胞中miR-335-5p的表达水平最低,因此选用PC-3细胞为后续研究对象;与NC组比较,miR-335-5p mimics组PC-3细胞中miR-335-5p表达水平显著升高,Galectin-3蛋白表达显著降低（P＜0.05）;与NC共培养组比较,miR-335-5p mimics共培养组细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及NK-92MI细胞免疫杀伤率显著升高,NK-92MI细胞凋亡率降低（P＜0.05）;与miR-335-5p mimics组比较,miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3组PC-3细胞中miR-335-5p表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,Galectin-3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与miR-335-5p mimics共培养组比较,miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3共培养组细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及NK-92MI细胞免疫杀伤率显著降低,NK-92MI细胞凋亡率升高（P＜0.05）;miR-335-5p靶向负调控Galectin-3表达。结论:过表达miR-335-5p通过靶向下调Galectin-3表达来抑制PC-3细胞免疫逃逸。     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的机制研究

目的:探讨miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的具体机制。方法:Real-time quantitative PCR检测miR-21-5p、FGF18在人鼻咽癌组织及各鼻咽癌细胞系中的表达情况。对照组转染mimics/inhibitor NC,实验组转染miR-21-5p mimics/inhibitor/siFGF18。利用MTT、细胞克隆形成实验观察miR-21-5p及FGF18对CNE1细胞增殖活力的影响;Luciferase实验验证miR-21-5p和FGF18 3'-UTR的结合;Western blot检测FGF18、PI3K及Akt等的表达情况。结果:RT-PCR检测:人鼻咽癌组织及其细胞系中miR-21-5p及FGF18表达均显著增加（P＜0.05)。MTT及细胞克隆形成实验:CNE1细胞瞬转miR-21-5p inhibitor后活细胞数量明显减少,增殖能力显著下降（P＜0.05);而在miR-21-5p inhibitor+siFGF18组中,这种增殖抑制作用显著增强（P＜0.05）。Luciferase实验:miR-21-5p与FGF18 3'-UTR直接结合。Western blot检测:miR-21-5p inhibitor组FGF18、PI3K及Akt表达显著减少（P＜0.05）。结论:miR-21-5p靶向结合FGF18基因,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进人鼻咽癌组织及CNE1细胞的增殖。     

miR-142-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-142-5p靶向PTEN-PI3K/Akt信号调控人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的具体机制。方法:Real-time PCR检测miR-142-5p在人卵巢癌组织及各卵巢癌细胞系中的表达情况。利用MTT、细胞克隆形成实验观察miR-142-5p对SKOV3细胞增殖活力的影响;Caspase-3活力检测miR-142-5p对SKOV3细胞凋亡情况;信号通路抑制剂处理及Western blot检测miR-142-5p、PTEN与PI3K/Akt信号通路的关系及PI3K/Akt信号下游基因Akt、FOXO1、cyclin D1等的表达情况;Luciferase实验验证miR-142-5p和PTEN 3' UTR的结合。结果:人上皮性卵巢癌组织及其细胞系中miR-142-5p表达显著增加（P<0.05)。与对照组相比,SKOV3细胞转染miR-142-5p mimics后活细胞数量显著增加,增殖能力显著上升,细胞凋亡下降（P<0.05);与之相反的,转染miR-142-5p inhibitor后SKOV3细胞增殖能力下调,凋亡增加。信号通路抑制剂处理显示miR-142-5p过表达激活PI3K/Akt信号通路。Luciferase实验显示miR-142-5p与PTEN 3' UTR直接结合。与对照组相比,miR-142-5p mimics组PTEN表达显著降低,p-Akt蛋白表达则显著上调（P<0.05）,同时过表达PTEN后p-Akt表达则显著降低（P<0.05）。结论:miR-142-5p通过抑制PTEN基因表达活化PI3K/Akt信号通路,促进人上皮性卵巢癌组织及SKOV3细胞增殖存活,抑制细胞凋亡。     

miR-542-5p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-542-5p mimics和mimics阴性对照 (mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达miR-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低（P<0.05）;Transwell实验和划痕实验显示,过表达miR-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降（P<0.05）;流式细胞术结果显示,过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。结论:过表达miR-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。提示miR-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。     

miR-143-3p通过靶向EZH2 调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨miR-143-3p 通过靶向果蝇zeste 基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2, EZH2）调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法：选用2015 年3 月至2017 年7 月昆明医科大学第一附属医院手术切除的40 例结肠癌患者的癌及癌旁组织标本,以及结肠癌细胞系COLO320、RKO、CL-11 和正常肠黏膜细胞株NCM460,用qPCR 法检测结肠癌组织和细胞系中miR-143-3p 的表达水平。分别将miR-143-3p mimics、miR-143-3p inhibitor、EZH2 shRNA 及阴性对照质粒转染进RKO细胞,用CCK-8 法、Transwell 小室法分别检测miR-143-3p/EZH2 分子轴对RKO细胞增殖、迁移和侵袭的影响,用Western blotting 检测RKO细胞中EZH2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p 和EZH2 的靶向关系。结果：miR-143-3p在结肠癌组织和细胞系中均低表达（均P<0.01）。过表达miR-143-3p 显著抑制RKO 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-143-3p 靶向EZH2。同时敲降miR-143-3p 和EZH2 可逆转敲降EZH2 对RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论：miR-143-3p 通过靶向EZH2并下调其表达水平进而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组（转染miR-125a-3p mimics）、miR-NC组（未转染细胞）、inhibitor-NC组（转染空inhibitor）、miR-125a-3p inhibitor组（转染miR-125a-3p inhibitor）、siPLK4组（转染siPLK4）、miR-125a-3p+Vector组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-125a-3p+PLK4组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染）以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低（P<0.05）;与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低（P<0.05）;PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。     

miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞生物学功能的影响及其可能作用机制

目的:探讨miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞功能的影响及其可能作用的靶基因。方法:采用脂质体介导法将miR-383-3p模拟物（miR-383-3p mimic）、miR-383-3p抑制物（miR-383-3p inhibitor）以及对照模拟物（NC）转染6-10B细胞,MTT 法检测各组6-10B细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组6-10B细胞的凋亡情况,Transwell实验检测各组6-10B细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验确定miR-383-3p与高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)的靶向作用情况,qRT-PCR检测不同鼻咽癌细胞中miR-383-3p及各组6-10B细胞中miR-383-3p和HMGA2 mRNA表达水平,Western blot检测各组6-10B细胞中水通道蛋白5（aquaporins 5,AQP5)、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB)、p-CREB以及HMGA2蛋白表达水平,免疫荧光染色检测各组6-10B细胞中AQP5和核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB)的荧光强度。结果:与NP69细胞相比,miR-383-3p在鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、HONE1、HNE-1、C666-1、6-10B中的表达量均明显下降（P＜0.05或P＜0.001）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组能够显著抑制鼻咽癌6-10B细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组6-10B细胞增殖和迁移能力明显升高,细胞凋亡水平则明显下降（P＜0.05）;HMGA2是miR-383-3p的靶基因,与NC组相比,miR-383-3p mimic 组HMGA2 mRNA 和蛋白的表达水平下降（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显升高（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组AQP5和p-CREB蛋白表达量明显升高（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显下降（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic组AQP5荧光信号较强,而 NF-κB荧光信号较弱,miR-383-3p inhibitor组检测结果与此相反。结论:miR-383-3p可能通过负调控HMGA2的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移,进而促进鼻咽癌细胞凋亡,该作用可能与AQP5/CREB途径的信号通路有关。     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

m6A修饰的circ_100367通过调控miR-885-5p轴介导甲状腺乳头状癌免疫逃逸

目的:探讨m6A修饰的circ_100367对甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）免疫逃逸的影响,并阐述其可能的机制。方法:采用qRT-PCR法检测PTC患者癌组织及其癌细胞株中circ_100367和miR-885-5p的表达水平。将circ_100367干扰质粒（si-circ_100367）及其阴性对照干扰质粒（si-NC）、circ_100367过表达质粒（oe-circ_100367）及其阴性对照质粒（oe-NC）和miR-885-5p mimics及其阴性对照NC mimics分别转染至TPC1细胞中,分为Blank组、si-circ_100367组、si-NC组、oe-circ_100367组、oe-NC组、miR-885-5p mimics组和NC mimics组。采用qRT-PCR法检测各组TPC1细胞中circ_100367和miR-885-5p的表达水平;采用双荧光素酶报告系统验证circ_100367可靶向调控miR-885-5p;MeRIP-qPCR法检测circ_100367的m6A甲基化水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞FASL、IDO1、PD-L2和PD-L1表达水平。结果:circ_100367在PTC患者癌组织及其癌细胞株K1、TPC1和IHH4中表达水平明显升高（P＜0.05）,而miR-885-5p表达水平明显降低（P＜0.05）。双荧光素酶报告系统结果说明:circ_100367靶向负调控miR-885-5p。MeRIP试验结果显示:circ_100367含有丰富的m6A甲基化,且与NC mimics比较,miR-885-5p mimics细胞中circ_100367的m6A甲基化水平明显降低（P<0.05）。此外,与Blank或si-NC比较,si-circ_100367细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与Blank或oe-NC比较,oe-circ_100367细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与Blank或NC mimics比较,miR-885-5p mimics细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论:m6A甲基化修饰的circ_100367能诱导PTC细胞侵袭,影响PD-L1的表达进而促进免疫逃逸,其可能与 m6A甲基化修饰的circ_100367和miR-885-5p竞争性结合有关。     

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA 138-5p（miR-138-5p）在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中，TUG1表达上调（P<0.05）而miR-138-5p表达下调（P<0.05）。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p，细胞活力、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明，TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示，降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-199b-3p靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-199b-3p（miR-199b-3p）靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响。方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-199b-3p抑制剂及阴性对照（NC）转染至SW620细胞并分为抑制剂组和NC组,同时以未转染的SW620细胞作对照。采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测3组miR-199b-3p的表达以评价转染效果,MTT法和Annexin Ⅴ-FITC／PI流式细胞术检测转染后的增殖活性及凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组凋亡相关基因（Bax和caspase-3）及SOX6的mRNA和蛋白水平,构建含有野生型及突变型SOX6-3’UTR的荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告实验验证miR-199b-3p对SOX6的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,转染48 h后抑制剂组的miR-199b-3p的表达水平为0.526±0.034,低于未转染组的1.009±0.064和NC组的0.960±0.057,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组相比,抑制剂组转染24、48、72 h后的SW620细胞的增殖活性均降低（P＜0.05）;抑制剂组的凋亡率为（37.533±1.459）％,高于未转染组的（6.101±0.663）％和NC组的（8.753±1.061）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;抑制剂组SW620细胞的SOX6、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均高于未转染组和NC组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明 miR-199b-3p可显著抑制野生型 SOX6-3’UTR的荧光荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论miR-199b-3p可靶向调控SOX6的表达,且下调miR-199b-3p表达可抑制SW620细胞的增殖并诱导凋亡,为结肠癌的治疗提供潜在的分子治疗靶点。